Meymunçiçəyi virusu ilə bağlı ultrasəs tətbiqləri
Ultrasəslə emal analitik nümunələrdən meymunçiçəyi virusunun (MPXV) təcrid edilməsi, virus DNT-sinin fraqmentləşdirilməsi, həmçinin meymunçiçəyi vaksinlərinin istehsalı üçün mühüm emal üsuludur. Diaqnostika və analizdən (PCR, ELISA və s.) əvvəl nümunələrin hazırlanması zamanı meymunçiçəyi virusunu hüceyrənin daxilindən azad etmək və / və ya DNT-ni fraqmentləşdirmək məqsədilə hüceyrələrin lizisi üçün ultrasəslə emaldan istifadə olunur. Vaksin istehsalında tətbiqlər virus hissəciklərinin / DNT-nin hazırlanmasını, dərman daşıyıcılarında kapsullaşdırılmasını və inokulumların formulə edilməsini əhatə edir.
Aşağıda meymunçiçəyi virusu nümunələrinin ultrasəslə hazırlanması, həmçinin ultrasəsin köməyi ilə MPXV vaksinlərinin istehsalı haqqında ətraflı məlumat tapa bilərsiniz.
Bu səhifədə tapa biləcəyiniz məlumatlar:
- Meymunçiçəyi virusunun ekstraksiyası üçün ultrasəs lizisi
- Meymunçiçəyi virusunun DNT-sinin ultrasəslə fraqmentləşdirilməsi
- MPXV vaksinlərinin istehsalında ultrasəs tətbiqləri
Fasiləsiz axın rejimində işləmək üçün nəzərdə tutulmuş 2x 1kW ultrasəs cihazından ibarət bu sistem vaksin istehsalı müəssisəsində quraşdırılıb.
Polimeraza zəncirvari reaksiyasından (PCR) əvvəl ultrasəs lizisi və DNT-nin fraqmentləşdirilməsi
Meymunçiçəyi virusu infeksiyası virus DNT-sinin unikal ardıcıllıqlarını aşkar etmək üçün real vaxt rejimində və ya adi polimeraza zəncirvari reaksiyasından (PCR) istifadə etməklə nuklein turşularının amplifikasiyası testi (NAAT) vasitəsilə aşkar edilir. Nümunədə (məsələn, nazofaringeal yaxmadan və ya dəri biopsiyalarından alınmış nümunədə) virus hüceyrələrin daxilində olur.
Analiz üçün virus hüceyrələrdən azad edilməli, virus DNT-si isə PCR üçün fraqmentləşdirilməlidir.
Ultrasəs lizisi:
Hüceyrələrin ultrasəslə parçalanması / lizisi hüceyrə nümunələrindən virusları təcrid etmək üçün etibarlı və səmərəli üsuldur və buna görə də hüceyrə lizisini və DNT-nin azad edilməsini təmin etmək üçün alternativ olaraq istifadə olunan lizozim, proteinaza K və müxtəlif detergentlər kimi kimyəvi vasitələrdən daha üstün texnikadır.
Lakin belə kimyəvi reagentlərdən istifadə PCR reaksiyasının inhibisiyasının qarşısını almaq üçün PCR analizindən əvvəl nümunələrin bir neçə mərhələdə, vaxt aparan şəkildə hazırlanmasını tələb edir. PCR inhibitorları amplifikasiyanın səmərəliliyinə təsir etdiyindən, kənarlaşdırılmamış inhibitorların miqdarındakı kiçik dəyişikliklər PCR məhsulunun amplifikasiyasında böyük dəyişikliklərə səbəb ola bilər (Diaco, 1995).
Lizis üçün ultrasəslə emalın üstünlüyü ondadır ki, lizis reagentlərinə və vaxt aparan nümunə hazırlığına ehtiyac olmadan hüceyrə strukturlarının tam parçalanması və DNT-nin azad edilməsi arzuolunandır. (bax: Fykse et al., 2003)
DNT-nin ultrasəslə fraqmentləşdirilməsi:
DNT-nin ultrasəslə fraqmentləşdirilməsi sadə və etibarlıdır, çünki uzunluğu tənzimlənə bilən DNT fraqmentləri (əsas cütləri, bp) əmələ gətirir. Ultrasəsdən istifadə etməklə DNT-ni hədəflənən DNT uzunluğunadək səmərəli şəkildə fraqmentləşdirmək mümkündür. Ultrasəs parametrlərinə dəqiq nəzarət və təkmil soyutma imkanları DNT-nin deqradasiyasının qarşısını alır.
DNT-nin ultrasəslə fraqmentləşdirilməsi haqqında daha çox oxuyun!
Meymunçiçəyi virusuna qarşı vaksində ultrasəs tətbiqləri
Meymunçiçəyi virusuna qarşı istifadə olunan vaksinlər hazırda canlı virus vaksinləridir. Yeni hazırlanmış vaksinlər DNT-yə əsaslanan kimi digər platformalardan istifadə edə bilər… Hazırda tərkibində modifikasiya edilmiş Vaccinia Ankara virusu, zəiflədilmiş, replikasiya etməyən ortopoksvirus var. Tərkibində həmçinin Tris (tris-aminometan) və natrium xlorid var. Vaksinin tərkibində vaksin virusunu yetişdirmək üçün istifadə olunan toyuq embrionu fibroblast hüceyrələrindən az miqdarda DNT və zülal, benzonaza, həmçinin gentamisin və siprofloksasin kimi antibiotik birləşmələri də ola bilər.
Ultrasəs homogenləşdirməsi canlı zəiflədilmiş virus vaksinlərinin, DNT vaksinlərinin, çoxvalentli DNT kokteyllərinin, mRNT vaksinlərinin, rekombinant zülal vaksinlərinin, virusabənzər hissəcik vaksinlərinin və s. istehsalında istifadə olunur.
- virus hissəciklərinin və maddələrin dispersiyası
- emulsiyalaşdırma
- virusların inaktivasiyası
- dərman daşıyıcılarının formulə edilməsi (NLC, SLN)
- kapsullaşdırma
- maddələrin həll edilməsi
- adyuvantların hazırlanması
- qazsızlaşdırma / havanın çıxarılması
Meymunçiçəyi virusunun ultrasəslə təcrid edilməsi protokolu
Stittelaarın tədqiqat qrupu (2005) meymunçiçəyi virusunu həm onun yetişdirildiyi sahib hüceyrə kulturasından, həm də yoluxmuş primatlardan boğaz yaxmaları vasitəsilə alınmış hüceyrələrdən azad etmək üçün ultrasəs lizisindən istifadə etmişdir.
Meymunçiçəyi vaksininin hazırlanması:
Monkeypox virusları spesifik patogensiz toyuq embrionunun fibroblast hüceyrələrində yetişdirilmişdir. 1-2 gün inkubasiyadan sonra virus-hüceyrə süspansiyonu bir dövrə dondurularaq əridilmiş və sonra sentrifuqa ilə konsentratlaşdırılmışdır. Pelet yenidən dayandırıldı və bir neçə tur ultrasəs homogenləşdirməyə məruz qaldı.
Peyvənd edilmiş makakalardan meymunçiçəyi virusunun təcrid edilməsi:
Nümunələr üç dəfə dondurulub əridilmiş və ultrasəs CupHorn cihazında ultrasəslə işlənmişdir. Altı quyucuqlu lövhələrdəki Vero hüceyrələrinin birqatlı kulturlarını yoluxdurmaq üçün 1% fetal buzov serumu əlavə edilmiş nəqliyyat mühitində hazırlanmış iki durulaşdırmadan (1:10 və 1:100) istifadə edilmişdir. 37°C temperaturda 1 h inkubasiyadan sonra inokulumlar çıxarılmış və 1% fetal buzov serumu əlavə edilmiş kultura mühiti ilə əvəz edilmişdir. Birqatlı hüceyrə kulturları 37°C temperaturda 5 gün becərilmiş və kristal violet məhlulu ilə boyanmışdır.
(cf. Stittelaar et al., 2005)
Virus analizi və vaksin istehsalı üçün ultrasəs cihazları
Hielscher Ultrasonics şirkətinin geniş məhsul çeşidi tədqiqat və analitik laboratoriyalar, həmçinin sənaye miqyasında vaksin istehsalı üçün ideal ultrasəs cihazını təklif edir.
Hielscher Ultrasonics tədqiqat və analitik laboratoriyalarda istifadə, həmçinin sənaye miqyasında vaksin istehsalında tətbiq üçün yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs cihazlarının və ultrasəs bioreaktorlarının layihələndirilməsi, istehsalı və satışı üzrə ixtisaslaşıb (məsələn, vaksinlər, aktiv əczaçılıq inqrediyentləri).
Ultrasəslə emal açıq qablarda, qapalı, fasiləsiz qarışdırılan reaktorlarda və fasiləsiz axınlı reaktorlarda tətbiq edilə bilər. Ultrasəs sistemlərinin maye mühitlə təmasda olan bütün hissələri paslanmayan poladdan, titandan və ya şüşədən hazırlanır. Avtoklavlana bilən hissələr və sanitariya tələblərinə uyğun birləşdirici elementlər istehsalın əczaçılıq standartlarına uyğun şəraitdə aparılmasını təmin edir.
Məlumatların avtomatik qeydə alınması: İntellektual proqram təminatı ultrasəslə emal prosesinin parametrlərini inteqrasiya edilmiş SD yaddaş kartına avtomatik qeydə alır. Bütün proses parametrlərinə dəqiq nəzarət təkrarlana bilməni, istehsalın standartlaşdırılmasını təmin edir və əczaçılıq məhsullarının təhlükəsizlik standartlarına riayət edilməsini asanlaşdırır.
Hielscher Ultrasonics şirkətinin ultrasəs prosessorları yüksək dərəcədə etibarlıdır və onlara dəqiq nəzarət etmək mümkündür. Bütün sənaye ultrasəs cihazları aşağıdan çox yüksəyədək tam amplituda diapazonunu təmin etmək üçün tənzimlənə bilər. Hielscher şirkətinin ultrasəs sistemlərinin möhkəmliyi yüksək yüklənmə altında və tələbkar mühitlərdə 24/7 işləməyə imkan verir.
Aşağıdakı cədvəl ultrasəs cihazlarımızın təxmini emal gücü haqqında təsəvvür yaradır:
| Partiyanın həcmi | Axın sürəti | Tövsiyə olunan cihazlar |
|---|---|---|
| çoxquyulu / mikrotitr lövhələri | n/a | UIP400MTP |
| 1–500mL | 10–200mL/min | UP100H |
| 10–2000mL | 20–400mL/min | UP200Ht, UP400St |
| 0,1–20L | 0,2–4L/min | UIP2000hdT |
| 10–100L | 2–10L/min | UIP4000hdT |
| n/a | 10–100L/min | UIP16000 |
| n/a | daha yüksək | cihazlar qrupu: UIP16000 |
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizə sual verin!
DNT-nin ultrasəslə kəsilməsi
CC-BY-SA.03 lisenziyası əsasında Jkwchui materialından uyğunlaşdırılıb
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Bilməyə dəyər faktlar
Meymunçiçəyi virusu
Meymunçiçəyi (MPV, MPXV və ya hMPXV) virus mənşəli zoonoz xəstəliyə səbəb olan iki zəncirli DNT virusunun bir növüdür. Bu xəstəlik meymunçiçəyi infeksiyası kimi tanınır və insanlarda və heyvanlarda baş verə bilər. O, Poxviridae fəsiləsinin Orthopoxvirus cinsinə aiddir. Meymunçiçəyi virusu variola (VARV), inəkçiçəyi (CPX) və vaccinia (VACV) virusları ilə birlikdə insan ortopoksviruslarından biridir. Ortopoksviruslar təxminən 200.000 bp uzunluğunda iki zəncirli DNT genomunu ehtiva edən iri, kərpicşəkilli virus hissəcikləri ilə xarakterizə olunur.
ELISA analizi
ELISA fermentlə əlaqəli immunosorbent analiz deməkdir və immunoanalizlərin qızıl standartı hesab olunan nişanlanmış immunoanalizdir. ELISA yüksək diaqnostik həssaslığına görə qiymətləndirilən immunoloji testdir və anticisimlər, antigenlər, zülallar, qlikoproteinlər və hormonlar daxil olmaqla molekulları aşkar etmək və onların miqdarını müəyyənləşdirmək üçün istifadə olunur. ELISA prinsipi antigen–anticisim qarşılıqlı təsirinə əsaslanır. Bu antigen–anticisim qarşılıqlı təsiri nəticəsində spesifik anticisimlər öz hədəf antigeninə bağlanır. Yalnız qarşılıqlı təsir baş verdikdə substrat fermentə bağlana və sonrakı substrat çevrilməsi müşahidə oluna bilər ki, bu da müsbət nəticənin əldə edildiyini göstərir.
Hielscher Ultrasonics yüksək məhsuldarlıqlı ultrasəs homogenizatorlarını laboratoriya ölçüsündən sənaye ölçüsünədək istehsal edir.