MonkeyPox Virusunda Ultrasəs Tətbiqləri
Ultrasəsləmə meymun çiçəyi virusunun (MPXV) analitik nümunələrdən təcrid edilməsi, virus DNT-nin parçalanması, eləcə də meymun çiçəyi vaksinin istehsalında mühüm emal üsuludur. Diaqnostika və analizdən əvvəl nümunənin hazırlanması üçün (PCR, ELISA və s.) ultrasəsləmə meymun çiçəyi virusunu hüceyrə daxilindən azad etmək və/və ya DNT-ni parçalamaq üçün hüceyrələri lizis etmək üçün istifadə olunur. Peyvənd istehsalında tətbiqlər virus hissəciklərinin/DNT-nin hazırlanması, dərman daşıyıcılarında kapsulyasiya və inokulanın formalaşdırılmasından ibarətdir.
Aşağıda siz ultrasəs meymun çiçəyi virusu nümunəsinin hazırlanması, eləcə də ultrasəs köməyi ilə MPXV peyvəndi istehsalı haqqında ətraflı məlumat tapa bilərsiniz.
Bu səhifədə nə tapa bilərsiniz:
- Monkeypox Virusunun çıxarılması üçün ultrasəs lizis
- Monkeypox Virus DNT-nin Ultrasonik Parçalanması
- MPXV peyvəndi istehsalında ultrasəs tətbiqləri
Davamlı axın əməliyyatı üçün 2x 1 kVt-lıq ultrasəs cihazından ibarət bu sistem vaksin istehsalı müəssisəsində quraşdırılmışdır.
Polimeraza Zəncir Reaksiyasından (PZR) əvvəl ultrasəs lizis və DNT fraqmentasiyası
Meymun çiçəyi virusu infeksiyası, virus DNT-nin unikal ardıcıllığını aşkar etmək üçün real vaxt rejimində və ya ənənəvi polimeraza zəncirvari reaksiyadan (PZR) istifadə edərək, nuklein turşusunun gücləndirilməsi testi (NAAT) ilə aşkar edilir. Nümunə (məsələn, nazofarengeal dəyişdirmə və ya dəri biopsiyalarından) hüceyrələrdə virus ehtiva edir.
Təhlil üçün virus hüceyrələrdən buraxılmalı və virus DNT-si PCR üçün parçalanmalıdır.
Ultrasonik Lizis:
Hüceyrələrin ultrasəs pozulması/lizisi virusları hüceyrə nümunələrindən təcrid etmək üçün etibarlı və səmərəli üsuldur və bununla da hüceyrə lizisi və DNT-nin sərbəst buraxılmasına nail olmaq üçün alternativ olaraq istifadə edilən lizozim, proteinaz K və müxtəlif yuyucu vasitələr kimi kimyəvi agentlərə nisbətən üstünlük verilən üsuldur.
Bununla belə, bu cür kimyəvi reagentlərin istifadəsi PCR reaksiyasının qarşısını almaq üçün PCR analizindən əvvəl bir neçə mərhələdə vaxt aparan nümunənin hazırlanmasını tələb edir. PCR inhibitorları gücləndirmənin effektivliyinə təsir göstərdiyindən, çıxarılmayan inhibitorların miqdarının kiçik dəyişiklikləri PCR məhsulunun gücləndirilməsində böyük dəyişikliklərə səbəb ola bilər (Diaco, 1995).
Lizis üçün ultrasəsləşdirmənin üstünlüyü ondan ibarətdir ki, hüceyrə strukturlarının tam pozulması və lizinq reagentlərinə və vaxt aparan nümunənin hazırlanmasına ehtiyac olmadan DNT-nin sərbəst buraxılması arzu edilir. (bax. Fykse və başqaları, 2003)
Ultrasonik DNT fraqmentasiyası:
Ultrasəs DNT fraqmentasiyası sadə və etibarlıdır, çünki uzunluğu tənzimlənə bilən DNT fraqmentləri yaradır (basepairs, bp). Ultrasəsdən istifadə edərək, DNT hədəflənmiş DNT uzunluğuna effektiv şəkildə parçalana bilər. Ultrasəs parametrləri üzərində dəqiq nəzarət və mürəkkəb soyutma variantları DNT deqradasiyasının qarşısını alır.
Ultrasəs DNT fraqmentasiyası haqqında daha çox oxuyun!
Monkeypox Virus Peyvəndində Ultrasəs Tətbiqləri
Meymun çiçəyi virusuna qarşı istifadə edilən vaksinlər hazırda canlı virus peyvəndləridir. Yeni hazırlanmış vaksinlər DNT əsaslı kimi digər platformalardan istifadə edə bilər. Hal-hazırda modifikasiya edilmiş Vaccinia Ankara viurs, zəifləmiş, təkrarlanmayan ortopoksvirus var. Tərkibində həmçinin Tris (tris-aminometan) və natrium xlorid var. Peyvənd həmçinin vaksin virusunu, benzonazı və gentamisin və siprofloksasin kimi antibiotik birləşmələrini yetişdirmək üçün istifadə edilən Toyuq Embrionunun Fibroblast hüceyrələrindən az miqdarda DNT və protein ehtiva edə bilər.
Ultrasonik homojenləşdirmə canlı zəifləmiş virus peyvəndlərinin, DNT vaksinlərinin, çoxvalentli DNT kokteyllərinin, mRNT vaksinlərinin, rekombinant zülal vaksinlərinin, virusa bənzər hissəciklərin vaksinlərinin və s. istehsalında istifadə olunur.
- virus hissəciklərinin və agentlərinin yayılması
- emulsifikasiya
- virusların inaktivasiyası
- narkotik daşıyıcı formul (NLC, SLN)
- inkapsulyasiya
- agentlərin həlli
- köməkçi maddələrin hazırlanması
- Deqazasiya / De-Aerasiya
Monkeypox Virusunun Ultrasonik İzolyasiyası Protokolu
Stittelaarın (2005) tədqiqat qrupu meymun çiçəyi virusunu inkişaf edən ana hüceyrə mədəniyyətindən, həmçinin yoluxmuş primatlardan boğaz dəyişdirmə yolu ilə əldə edilən hüceyrələrdən azad etmək üçün ultrasəs lizisindən istifadə etdi.
Meymun çiçəyi peyvəndinin hazırlanması:
Monkeypox virusları spesifik patogensiz toyuq embrionunun fibroblast hüceyrələrində yetişdirilmişdir. 1-2 gün inkubasiyadan sonra virus-hüceyrə süspansiyonu bir dövrə dondurularaq əridilmiş və sonra sentrifuqa ilə konsentratlaşdırılmışdır. Pelet yenidən dayandırıldı və bir neçə tur ultrasəs homogenləşdirməyə məruz qaldı.
Peyvənd edilmiş makakalardan meymun çiçəyi virusunun təcrid edilməsi:
Nümunələr üç dəfə dondurularaq əridildi və ultrasəs kubokunda səsə çevrildi. Vero hüceyrə monolaylarını altı quyu boşqablara aşılamaq üçün 1% fetal iribuynuzlu zərdab ilə əlavə edilmiş nəqliyyat mühitində iki seyreltmə (1:10 və 1:100) istifadə edilmişdir. 37°C-də 1 saat inkubasiyadan sonra peyvənd çıxarıldı və 1% fetal iribuynuzlu zərdab əlavə edilmiş mədəniyyət mühiti ilə əvəz edildi. Tək qatlar 5 gün ərzində 37°C-də becərilmiş və kristal bənövşəyi məhlulu ilə boyanmışdır.
(müq. Stittelaar və başqaları, 2005)
Virus Təhlili və Peyvənd İstehsalı üçün Ultrasonikatorlar
Hielscher Ultrasonics geniş məhsul portfeli tədqiqat və analitik laboratoriyalar, eləcə də sənaye vaksin istehsalı üçün ideal ultrasəs cihazı təklif edir.
Hielscher Ultrasonics elmi-tədqiqat və analitik laboratoriyalarda istifadə üçün, eləcə də sənaye vaksin istehsalında tətbiq etmək üçün yüksək performanslı ultrasəs cihazları və sono-bioreaktorların dizaynı, istehsalı və paylanması üzrə ixtisaslaşmışdır (məs. vaksinlər, API-lər).
Sonication açıq gəmilərə, qapalı davamlı qarışdırılan reaktorlara və davamlı axın reaktorlarına tətbiq edilə bilər. Ultrasəs sistemlərinin maye mühitlə təmasda olan bütün hissələri paslanmayan poladdan, titandan və ya şüşədən hazırlanır. Avtoklavlanan hissələr və sanitar armaturlar altında istehsalı təmin edir əczaçılıq səviyyəli şərtlər.
Avtomatik məlumat qeydi: İntellektual proqram avtomatik olaraq inteqrasiya olunmuş SD yaddaş kartında sonikasiya prosesinin parametrlərini qeyd edir. Bütün proses parametrlərinə dəqiq nəzarət təmin edir reproduktivlik, istehsalın standartlaşdırılması, və əczaçılıq məhsullarının təhlükəsizlik standartlarının yerinə yetirilməsini asanlaşdırır.
Hielscher Ultrasonics’ ultrasəs prosessorları yüksək etibarlıdır və dəqiq idarə oluna bilir. Bütün sənaye ultrasəs cihazları aşağıdan çox yüksək amplitüdlərə qədər tam diapazonu çatdırmaq üçün tənzimlənə bilər. Hielscher-in ultrasəs sistemlərinin möhkəmliyi ağır yük altında və tələbkar mühitlərdə 24/7 işləməyə imkan verir.
Aşağıdakı cədvəl ultrasəs cihazlarımızın təxmini emal qabiliyyətinin göstəricisini verir:
| Partiya Həcmi | Axın | Tövsiyə olunan Cihazlar |
|---|---|---|
| çox quyulu / mikrotitr plitələr | yox | UIP400MTP |
| 1 ilə 500 ml | 10-200 ml/dəq | UP100H |
| 10 ilə 2000 ml | 20 - 400 ml/dəq | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 - 20L | 0.2 ilə 4L/dəq | UIP2000hdT |
| 10-100 l | 2 ilə 10 L / dəq | UIP4000hdT |
| yox | 10-100 l/dəq | UIP16000 |
| yox | daha böyük | klaster UIP16000 |
Bizimlə əlaqə saxlayın! / Bizdən soruşun!
Ultrasonik DNT kəsimi
CC-BY-SA.03 altında Jkwchui-dən uyğunlaşdırılmışdır
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Bilməyə Dəyər Faktlar
meymun çiçəyi virusu
Meymun çiçəyi (MPV, MPXV və ya hMPXV) viral zoonoz xəstəliyə səbəb olan ikiqat zəncirli DNT virusunun bir növüdür. Bu xəstəlik meymun infeksiyası kimi tanınır və insanlarda və heyvanlarda baş verə bilər. Poxviridae ailəsinin Orthopoxvirus cinsinə aiddir. Monkeypox virusu variola (VARV), inək çiçəyi (CPX) və vaccinia (VACV) virusları ilə birlikdə insan ortopoxviruslarından biridir. Ortopoxviruslar, təxminən 200.000 bp-lik ikiqat zəncirli DNT genomunu ehtiva edən iri kərpic formalı virus hissəcikləri ilə xarakterizə olunur.
ELISA analizi
ELISA, Fermentlə Bağlı İmmunoSorbent Təhlili deməkdir və immunoassayların qızıl standartı hesab edilən etiketli immunoanalizdir. ELISA yüksək diaqnostik həssaslığına görə qiymətləndirilən immunoloji testdir, antikorlar, antigenlər, zülallar, qlikoproteinlər və hormonlar daxil olmaqla molekulları aşkar etmək və kəmiyyətini müəyyən etmək üçün istifadə olunur. ELISA prinsipi antigen-antikor qarşılıqlı təsirinə əsaslanır. Bu antigen-antikor qarşılıqlı təsiri ilə spesifik antikorlar onun hədəf antigeninə bağlanır. Yalnız qarşılıqlı təsir baş verdikdə, substrat fermentə bağlana bilər və sonradan substratın çevrilməsi müşahidə edilə bilər, bu da müsbət nəticənin əldə edilməsi deməkdir.
Hielscher Ultrasonics yüksək performanslı ultrasəs homogenizatorları istehsal edir laboratoriya üçün sənaye ölçüsü.