Yüksək Verimli Sonikasiyadan istifadə edərək Antikor Elüsyonu

Yaxınlıq xromatoqrafiyası zülalların təmizlənməsi üçün güclü texnikadır və ultrasəs köməyi ilə qeyri-spesifik elüsyon, yaxınlıq xromatoqrafiyasından antikor əldə etmək üçün etibarlı nümunə hazırlama üsuludur. Yaxınlıq matrislərinə bağlanan hədəf antikorların səmərəli və təkrarlana bilən elüsyonu sonikasiya ilə əhəmiyyətli dərəcədə yaxşılaşdırılır. UIP400MTP yüksək ötürmə qabiliyyətinə malik plitə-sonikator 96 quyulu, mikrotitrli və çoxqulu plitələrdə yüksək nümunə nömrələrini ayırmaq üçün optimal şəkildə uyğun gəlir və yaxınlıq xromatoqrafiyasında anticisimlərin bərpasını asanlaşdırır.

Sonication Elüsyonu necə asanlaşdırır?

Ultrasəslə gücləndirilmiş qeyri-spesifik elüsyondan istifadə edərək, laboratoriya işçiləri və alimlər yaxınlıq xromatoqrafiya sütunlarından təmizlənmiş antikorları səmərəli şəkildə bərpa edə bilərlər. Bu təmizlənmiş antikorlar immunologiya, biotexnologiya və tibbi diaqnostika kimi müxtəlif sahələrdə aşağı axın tətbiqləri vasitəsilə idarə olunur.

Elüsyon, Yaxınlıq Xromatoqrafiyası üçün adətən istifadə edilən nümunə hazırlama mərhələsidir: Yaxınlıq Xromatoqrafiyası hədəf molekul (məsələn, antikor) və xromatoqrafiya matrisində immobilizasiya edilmiş liqand arasındakı yüksək spesifik qarşılıqlı təsirlərdən istifadə edir. Bu, molekulların, məsələn, antikorların xüsusi bağlanma yaxınlığından istifadə edərək, hədəf molekulun mürəkkəb qarışıqdan seçici təmizlənməsinə imkan verir.
Antikorların spesifik bağlanması: Antikorlar tez-tez yaxınlıq xromatoqrafiyasından istifadə edərək təmizlənir, burada onlar seçici olaraq xromatoqrafiya qatranı üzərində hərəkətsizləşdirilmiş bir liqandla bağlanırlar. Bu, antigen, protein A/G və ya xüsusi olaraq maraq göstərən antikorla qarşılıqlı əlaqədə olan hər hansı digər molekul ola bilər.
Elüsyon: Hədəf antikoru matrisə bağladıqdan sonra növbəti addım bağlanmış antikorun qatrandan çıxarılmasını (və ya yuyulmasını) əhatə edir. Bu elüsyon addımı adətən antikor və liqand arasında xüsusi bağlanmanın pozulmasını əhatə edir. Bu addım sonikasiya ilə asanlaşdırıla bilər.
Ultrasəslə Yardımlı Qeyri-Spesifik Elüsyon: Yalnız antikor-liqand qarşılıqlı təsirini pozan spesifik elüsiya üsullarından fərqli olaraq, qeyri-spesifik elüsiya üsulları qeyri-spesifik olanlar da daxil olmaqla, rezin üzərindəki bütün qarşılıqlı təsirləri pozur. Bu, təmizlənmə prosesinə mane ola biləcək güclü birləşmiş çirkləndiricilərlə işləyərkən faydalı ola bilər. Budur, sonikasiya oyuna daxil olur! Ultrasəs dalğaları elüsyon tamponunda kavitasiya baloncukları yaratmaq üçün istifadə olunur. Bu qabarcıqlar qatran matrisinin yaxınlığında çökdükdə, intensiv lokallaşdırılmış kəsmə qüvvələri və mikro axın əmələ gətirir. Bu mexaniki pozulma, antikor və liqand arasında qeyri-spesifik qarşılıqlı əlaqəni pozmağa kömək edir, bağlanmış antikorun matrisdən çıxarılmasını asanlaşdırır.

Sonication istifadə edərək ultrasəs elüsyonunun üstünlükləri

Ultrasəs elüsyonu, xüsusən yaxınlıq xromatoqrafiyası kimi zülalların təmizlənməsi üsulları kontekstində bir sıra üstünlüklər təklif edir.
Məsələn, sonikasiya zülal bütövlüyü, bərpası, təmizliyi, çox yönlüliyi və səmərəliliyi baxımından alternativ üsullardan üstündür. Bu üstünlüklər ultrasəs elüsyonunu zülalların təmizlənməsi prosesləri üçün üstünlük təşkil edir, xüsusən də zülal strukturunun və fəaliyyətinin saxlanmasının vacib olduğu tətbiqlərdə. Bundan əlavə, ultrasəs elüsyonu sadəliyi, səmərəliliyi, çox yönlüliyi və geniş çeşidli zülallar və yaxınlıq matrisləri ilə uyğunluğu ilə seçilir. Zülal-matris qarşılıqlı əlaqəni pozmaq üçün ultrasəs dalğalarını tətbiq edərək, ultrasəs elüsyonu zülalların təmizlənməsi üçün yumşaq və sürətli üsul təklif edir, yüksək bərpa sürətini təmin edir və aşağı axın tətbiqləri üçün zülal bütövlüyünü qoruyur.

Protein Strukturu üzrə Yumşaq: Aşağı pH elüsyonu, hədəf zülal (məsələn, antikorlar) və yaxınlıq matrisi arasındakı əlaqəni pozmaq üçün asidik tamponların istifadəsini nəzərdə tutur. Bununla belə, aşağı pH-a məruz qalma zülalları denatürasiya edə bilər və potensial olaraq onların strukturunu və bioloji aktivliyini poza bilər. Bunun əksinə olaraq, ultrasəs elüsyonu ilk növbədə kimyəvi denaturasiyadan daha çox mexaniki pozulmaya əsaslanır və onu zülal strukturunda daha yumşaq edir. Bu, pH dəyişikliklərinə həssas olan zərif zülalları və ya antikorları təmizləyərkən xüsusilə faydalıdır.

• Azaldılmış birləşmə riski: Aşağı pH elüsyonu zülalların açılması və hidrofobik bölgələrin məruz qalması səbəbindən zülalların yığılması riskini artıra bilər. Aqreqasiya zülal fəaliyyətinin itirilməsinə və aşağı axın emalında çətinliklərə səbəb ola bilər. Ultrasəs elüsyonu, müqayisə üçün, zülalın yerli uyğunlaşmasını əhəmiyyətli dərəcədə dəyişdirmədən zülal və yaxınlıq matrisi arasında qarşılıqlı əlaqəni pozmaq üçün mexaniki qüvvələrdən istifadə edərək birləşmə riskini minimuma endirir.
• Təkmilləşdirilmiş bərpa və təmizlik: Ultrasəs elüsyonu alternativ elüsiya üsulları ilə müqayisədə daha yüksək bərpa dərəcələri və təmizlik səviyyələrinə nail ola bilər. Ultrasonication tərəfindən təmin edilən mexaniki pozulma, qeyri-spesifik qarşılıqlı təsirləri minimuma endirərkən, əlaqəli zülalları yaxınlıq matrisindən effektiv şəkildə azad edir. Bu, qeyri-spesifik bağlanmış molekullardan çirklənmənin azaldılması ilə hədəf zülalın gücləndirilmiş bərpası ilə nəticələnir və bu, ayrılan fraksiyanın daha yüksək saflığına kömək edir.
• Yüksək məhsuldarlıqlı emal: Hielscher Ultrasonics, ultrasəslə zülalların təmizlənməsi, elüsyon və biopanning üçün müxtəlif sonikatorlar təklif edir. Mikrotitr plitə-sonikator UIP400MTP 96 quyu və digər çoxqulu plitələrdə nümunələrin kütləvi emalına imkan verir. VialTweeter eyni şəraitdə Eppendorf flakonları kimi 10-a qədər borunun əngəlsiz, eyni vaxtda sonikasiyası üçün idealdır. CupHorn bir neçə boru, kiçik stəkanlar və digər gəmilər üçün ideal olan çox yönlü sonikatordur. Və əlbəttə ki, mikrotipli klassik zond tipli sonikatorlar nümunə hazırlamaq üçün yaxşı qurulmuş laboratoriya alətidir. Hielscher Ultrasonics məhsul çeşidi təcrübə quraşdırmanız və nümunə ölçüləriniz üçün ideal sonikatora malikdir.
• Çox yönlülük və uyğunluq: Ultrasəs elüsyonu təmizləyici tətbiqlərdə çox yönlülük təklif edən geniş çeşidli zülallar və yaxınlıq matrisləri ilə uyğun gəlir. Bunun əksinə olaraq, aşağı pH elüsyonu asidik şəraitə həssas olan müəyyən zülallar və ya aşağı pH-da deqradasiyaya və ya yuyulmağa meylli olan yaxınlıq matrisləri üçün uyğun olmaya bilər. Ultrasəs elüsyonu zülalın bütövlüyünə və ya matrisin sabitliyinə xələl gətirmədən xüsusi təmizləmə ehtiyaclarına uyğunlaşdırıla bilən yumşaq və universal tətbiq olunan alternativ təqdim edir.
• Vaxt və Effektivlik: Ultrasəs elüsyonu adətən digər elüsiya üsulları ilə müqayisədə daha qısa elüsyon vaxtlarını tələb edir. Ultrasonikasiya ilə asanlaşdırılan bağlı zülalların sürətli və səmərəli buraxılması emal vaxtını azaldır və ümumi təmizləmə səmərəliliyini artırır, yüksək məhsuldarlıq tətbiqləri üçün və ya zamana həssas nəticələr tələb olunduqda onu cəlbedici seçim edir.

Ultrasonik Yardımlı Biopanning

Biopanning antikorların təmizlənməsində kritik bir texnikadır, xüsusən tədqiqat və ya tibbi diaqnostika üçün yüksək spesifik antikorlar əldə edilməli olduqda. Biopanning, antikorların antikorların qarışığından, sözdə antikor kitabxanasından təcrid olunduğu prosesdir.

Ultrasonik Biopanning necə işləyir?

Bu, müxtəlif antikorların qarışığı olan antikorların kitabxanası ilə başlayır. Hər bir antikor özünəməxsus forması və spesifikliyi ilə xarakterizə olunur. Təhlil və terapevtik tədbirlər üçün virus və ya xərçəng hüceyrəsi kimi müəyyən bir hədəfi tanıyan xüsusi antikorlar təcrid olunmalıdır. Biopanning istifadə edərək, bu spesifik antikorları təcrid etmək olar. Ultrasonication biopanning prosesini asanlaşdırmağa kömək edir, antikorların təmizlənməsini daha səmərəli edir.

Antikor kitabxanasından başlayaraq, antikorlar adətən bakteriofaq, maya hüceyrəsi və ya digər ekran sisteminin səthində göstərilir. Bu kitabxana müxtəlif növ antikorları təmsil edir.
İlk addımda bu kitabxana hədəf molekulunuza məruz qalır. Hədəflə bağlanan antikorlar yapışacaq, digərləri isə yuyulacaq. Bağlanmamış antikorları çıxarmaq üçün nümunələr bir neçə dəfə tampon məhlulu ilə yuyulur.

İndi, yalnız bağlı antikorları ehtiva edən nümunələrimiz var. Bununla belə, bu o deməkdir ki, antikorlar hələ də onların ekran sisteminə bağlıdır. Onları azad etmək üçün antikor-liqand qarşılıqlı əlaqəsi pozulmalıdır. Bu mərhələ elüsyon kimi tanınır. Nümunələr bağlanmanı pozan məhluldan istifadə etməklə, məsələn, xüsusi elüsyon tamponundan istifadə etməklə, xaotropik, pH dəyərini aşağı salmaq, istilik tətbiq etmək və s. istifadə etməklə elüsiya edilə bilər. Bu elüsiya üsulları antikor-liqand bağlanmasını məhv edir, həm də antikorların özlərini pisləşdirə bilər. Buna görə sonikasiya antikorları hədəfindən yumşaq bir şəkildə çıxarmaq üçün alternativ üsul kimi istifadə olunur.

Elüsyon mərhələsini yekunlaşdırdıqdan sonra tədqiqat, diaqnostika və ya terapiyada istifadəyə hazır olan təmizlənmiş antikorları əldə edirik.

Biopanning antikorların təmizlənməsində güclü bir texnikadır və ultrasəs elüsyonu effektivliyi asanlaşdırır və gücləndirir. – nəticədə yüksək təmizlənmiş, zədələnməmiş antikorlar yaranır. Ultrasonik biopanning, alimlərə kompleks nümunələrdən yüksək spesifik antikorları təcrid etməyə imkan verir, geniş tətbiq sahəsinə qapılar açır.

Antikorların təmizlənməsi üçün sonikatorlar

Hielscher sonicators dünyanın ən yaxşı tədqiqat obyektlərində istifadə olunan yaxşı qurulmuş alətlərdir. Ən müasir dizaynı və üstün performansı ilə qiymətləndirilən Hielscher sonikatorları biotexnologiya və molekulyar biologiya sahələrində əvəzolunmaz laboratoriya alətləri hesab olunur. Hielscher Ultrasonics, antikorların səmərəli təmizlənməsini və hədəfə bağlı molekulların elüsyonunu asanlaşdıran və xüsusi antikorları dəqiq və sürətlə təcrid etmək üçün səmərəli biopanning etməyə imkan verən tək nümunə üçün sonikatorlar, eləcə də yüksək məhsuldarlıqlı nümunə hazırlanması təklif edir.
Antikorların təmizlənməsi kontekstində Hielscher sonikatorları, hədəfə bağlı komplekslərin bütövlüyünü qoruyarkən, bağlanmamış antikorları effektiv şəkildə aradan qaldıraraq yuyulma və elüsyon mərhələlərini asanlaşdırmaqda üstündür. Onların dəqiq nəzarəti və miqyası uyğunlaşdırılmış emal şərtlərinə imkan verir, geniş nümunə həcmləri və mürəkkəblikləri arasında optimal təmizləmə nəticələrini təmin edir.
Hielscher sonicators ultrasəs emalında texnoloji yeniliyi təmsil edir, antikorların təmizlənməsi, elüsyonu və biopanning üçün misilsiz imkanlar təklif edir. Dəqiqliyi, etibarlılığı və əməliyyat asanlığı ilə müxtəlif ultrasəs sistemləri biofarmasevtik tədqiqatlar, diaqnostika və terapiya üçün optimal effektivlik və çox yönlülük təklif edir.
Antikorların təmizlənməsi, elüsyonu və biopanning üçün Hielscher sonikatorları haqqında daha çox öyrənmək üçün indi bizimlə əlaqə saxlayın! Təcrübəli texniki heyətimiz antikorla bağlı tətbiqinizi müzakirə etməkdən məmnundur!

Dizayn, İstehsalat və Konsaltinq – Keyfiyyətli Almaniya istehsalı

Hielscher ultrasəs cihazları ən yüksək keyfiyyət və dizayn standartları ilə tanınır. Sağlamlıq və asan əməliyyat ultrasəs aparatlarımızın sənaye obyektlərinə rahat inteqrasiyasına imkan verir. Kobud şərtlər və tələbkar mühitlər Hielscher ultrasəs cihazları tərəfindən asanlıqla idarə olunur.

Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikatlı bir şirkətdir və ən müasir texnologiya və istifadəçi dostu olan yüksək performanslı ultrasəs cihazlarına xüsusi diqqət yetirir. Əlbəttə ki, Hielscher ultrasəs cihazları CE-yə uyğundur və UL, CSA və RoHs tələblərinə cavab verir.

Ultrasonik Elüsyonun Ənənəvi Elüsyon Texnikaları ilə Müqayisəsi

1. Gradient Elüsyonu: Qradiyent elüsyonda hədəf zülal və yaxınlıq matrisi arasında bağlanma gücü elüsyon tamponunun tərkibini dəyişdirməklə tədricən azalır. Bu, pH, duz konsentrasiyası və ya rəqabət aparan liqandların konsentrasiyası kimi amilləri dəyişdirə bilər. Qradient elüsyon, qeyri-spesifik bağlanmanı minimuma endirməklə yanaşı, hədəf zülalın seçici şəkildə sərbəst buraxılması üçün elüsyon şərtlərinin dəqiq tənzimlənməsinə imkan verir.
   Ultrasonik Elüsyonun üstünlükləri: Ultrasəs elüsyonu gradient elüsiya ilə müqayisədə bağlı zülalların daha sürətli və vahid buraxılmasını təklif edir. Gradient elüsyon elüsyon şəraitinin diqqətli optimallaşdırılmasını və monitorinqini tələb etsə də, ultrasəs elüsyonu zülalın bərpası üçün daha sadə və daha səmərəli üsul təqdim edir.
2. Rəqabətli Elüsyon: Rəqabətli elüsyonda hədəf zülal və yaxınlıq matrisi arasındakı əlaqəni pozmaq üçün elüsyon tamponuna rəqabətli liqandın yüksək konsentrasiyası daxil edilir. Rəqabət edən liqand, matrisdə bağlanan yerlər üçün hədəf zülal ilə rəqabət aparır və bununla da zülalın yerini dəyişdirir və onu eluata buraxır.
   Ultrasonik Elüsyonun üstünlükləri: Ultrasəs elüsyonu rəqabətli elüsiyaya daha yumşaq və daha çox yönlü alternativ təklif edir. Rəqabətli elüsyon yüksək konsentrasiyalı xaotrop maddələrin (yəni su molekulları arasında hidrogen əlaqə şəbəkəsini pozan və hidrofobik effekti zəiflədərək zülalların yerli vəziyyətinin dayanıqlığını azaldan birgə həlledici) və ya təsir göstərə bilən sərt kimyəvi maddələrin istifadəsini tələb edə bilər. protein sabitliyi və aktivliyi. Bunun əksinə olaraq, ultrasəs elüsyonu əlavə kimyəvi maddələrə ehtiyac olmadan mexaniki pozulma təmin edir, zülalın bütövlüyünü qoruyur və yüksək bərpa sürətini təmin edir.
3. Temperaturun səbəb olduğu elüsyon: Temperaturun yaratdığı elüsyon hədəf zülal və yaxınlıq matrisi arasında bağlanmanı pozmaq üçün elüsyon tamponunun temperaturunun dəyişdirilməsini nəzərdə tutur. Buna xüsusi zülal-matris qarşılıqlı təsirindən asılı olaraq temperaturu artırmaq və ya azaltmaqla nail olmaq olar.
   Ultrasonik Elüsyonun üstünlükləri: Ultrasonik elüsyon, temperaturun səbəb olduğu üsullarla müqayisədə protein elüsyonu üçün daha sürətli və idarə olunan üsul təklif edir. Temperaturdan qaynaqlanan elüsyon temperatur gradientlərinin dəqiq nəzarətini və daha uzun tarazlıq vaxtlarını tələb edə bilsə də, ultrasəs elüsyonu dərhal mexaniki pozulma təmin edir, nəticədə daha qısa elüsyon vaxtları və səmərəliliyi artırılır.
4. Enzimatik elüsyon: Enzimatik elüsyon hədəf zülal və yaxınlıq matrisi arasındakı bağları parçalayan xüsusi fermentlərdən istifadə edir və zülalı eluata buraxır. Bu üsul matrisə sıx bağlı olan zülallar üçün və ya elüsyon şərtlərinə dəqiq nəzarət tələb edən tətbiqlər üçün xüsusilə faydalıdır.
   Ultrasonik Elüsyonun üstünlükləri: Ultrasonik elüsyon fermentativ elüsyona qeyri-enzimatik və kimyəvi tərkibsiz alternativ təklif edir. Enzimatik elüsyon ferment konsentrasiyasının, inkubasiya vaxtının və pH şəraitinin optimallaşdırılmasını tələb edə bilsə də, ultrasəs elüsyonu əlavə reagentlərə və ya xüsusi avadanlıqlara ehtiyac olmadan zülalların bərpası üçün sadə və universal tətbiq olunan metodu təmin edir.