To'qima, hujayra madaniyati ultratovush Protein ekstraksiya

  • Proteomlarni ajratib olish proteomiklarda muhim namuna tayyorlash bosqichidir.
  • Proteinlarni o'simlik va hayvon to'qimasidan, maya va mikroorganizmlardan ajratish mumkin.
  • Sonikasyon, qisqa vaqt ichida yuqori oqsil rentabellikga ega bo'lgan ishonchli, samarali oqsil chiqarish usuli hisoblanadi.

To'qimalar va hujayralardan oqsil olish

To'qimalardan va o'stirilgan hujayralardan oqsil olish namunani tayyorlashning muhim bosqichi bo'lib, ELISA, PAGE, Western blotting, massa spektrometriyasi yoki oqsillarni tozalash kabi ko'plab biokimyoviy va analitik usullarda amalga oshiriladi. Ultrasonik hujayra buzilishi, lizis va ekstraktsiyasi oqsillarning yuqori hosildorligini ta'minlash uchun aniq boshqariladigan, issiqlik bo'lmagan texnikadir.

Ma'lumot so'rovini




Bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.


UP200St kabi prob tipidagi ultrasonikatorlar ishonchli to'qimalar homogenizatorlari bo'lib, genetik va proteomik tadqiqotlarda namuna tayyorlash uchun keng qo'llaniladi.

Hujayralardan oqsil olish ultratovushli probi UP200St

Ultrasonik lizis va oqsil ekstraktsiyasining afzalliklari
 

  • tez
  • yuqori hosil
  • yuqori samarali
  • Parametrlarni aniq nazorat qilish
  • tekrarlanabilir natijalar
  • chiziqli kengayuvchanlik

Ultrasonik lizis va oqsillarni olish uchun umumiy ko'rsatmalar

  • Harorat nazorat qilish: Termal denatürasyonsuz yuqori oqsil rentabellikga erishish uchun ekstraksiyon paytida harorat nazorat qilinishi kerak. Hielscherning zamonaviy ultratovushli homogenizatorlar – ultratovushli disintegrator yoki ultrasonikator deb ham ataladi – aniq nazorat qilinadi. Ular ekvivalent harorat sensori bilan birga keladi. Ultrasonik homojenizatorni sozlash variantlarida maksimal harorat sozlanishi. Ushbu haroratga maksimal erishilganda, ultrasonikator namunadir sovib ketguncha avtomatik tarzda to'xtaydi.
  • bufer: Tegishli buferning tanlovi va buferning to'g'ri hajmlari to'qimadan to'qimaga o'zgarib turadi va sinov-va-xato sinovlari yordamida aniqlanishi kerak.
  • Izolyatsiya / tozalash: Proteinli lizatlar DNK yoki uglevodlar kabi ko'p miqdorda biomolekulyar moddalarni o'z ichiga olishi mumkin, bular oqsillar yog'inlari (deoksikolat-trichloroacetic acid) yoki bufer almashinuvi bilan olib tashlanishi mumkin.

Chittapalo va Noomhorm (2009) o'z tadqiqotlarida sonikatsiya yordamida oqsil hosildorligi ortganligi va ultratovushli to'qimalarni homogenlashtirish va lizis jarayoni mavjud ekstraksiya jarayonlarini sezilarli darajada yaxshilashi mumkinligini ma'lum qildi. – yangi tijorat maqsadlarida qazib olish imkoniyatlarini yaratishga imkon beradi.
 

Protein izolyatsiyasi va DNK parchalanishi uchun bir xil sharoitlarda bir nechta namunalarni bir vaqtning o'zida tayyorlash uchun ultrasonik CupHorn.

ultratovush cuphorn oqsil izolyatsiyasi va DNK parchalanishi uchun bir xil sharoitda bir nechta namunalarning bir vaqtning o'zida yuqori samarali namunalarini tayyorlash uchun.

Hayvon to'qimasidan oqsil olish

Ultrasonicator UP100H ko'pincha hujayra madaniyati plitalarining namunalarini tayyorlash uchun ishlatiladigan laboratoriya gomogenizatoridir.To'liq to'qimalarni tayyorlash uchun (masalan, buyrak, yurak, o'pka, mushak va boshqalar) to'qimalarni juda oz bo'laklarga toza vositalar, muzda afzalroq va eng qisqa vaqt ichida proteazlarning degradatsiyasini oldini olish uchun ajratish kerak (masalan, RIPA kabi liziz bufferi yoki proteaz va fosfataz inhibitör kokteyli o'z ichiga olgan hipotonik lizis tamponu). Dissizatsiyadan so'ng, namunalar tezroq muzlatish uchun suyuq azotga botiriladi. Namuna keyinroq foydalanish uchun -80 ° C da saqlanishi mumkin yoki darhol homogenlash uchun muzga tushishi mumkin. Ultrasonik ekstraksiyondan oldin, namlik tüpüne tezlik bilan ilova qilingan (muzqaymoq soğutucu tamponu (proteaz inhibitörleri DTT, leupeptin va aprotinin bilan) (~ 10 mg to'qimalarining taxminan 600 mL tampon tavsiya qilinadi). Taxminan. Namuna naychasidan 20-60 mg to'qimalar tavsiya etiladi.
Ultrasonik gomogenizatsiya, lizis va ekstraktsiya mikro-uchli sonotrod bilan jihozlangan UP100H yoki UP200Ht kabi ultratovushli homogenizator bilan amalga oshiriladi. Sonikatsiya davomiyligi 60-90 sek. 15 soniyali ultratovushli tsikl rejimida. sonication va 10 sek. dam olish vaqti. Namuna har doim muzda saqlanishi kerak.
Ultrasonik homogenlash / ekstraksiyadan so'ng, lizat taxminan 27,000 g ga santrifüjlanadi. 20 min. Keyinchalik supernatant yig'iladi, shuning uchun protein konsentratsiyasi Pirs protein tekshiruvi BCA kabi bir protein tekshiruvi bilan aniqlanishi mumkin.

Qon zardobidan oqsil olish

Sarum va fosfat tamponining bir hil aralashmasi uchun namuna ultratovushli hujayra parchalanishidan oldin birinchi bo'lib vortekslanadi. Ultrasonik lizis uchun namuna UP100H kabi ultratovushli laboratoriya gomogenizatori bilan 20% amplituda 8 sikl uchun, har 5 sekund yoqilgan va 15 soniya o'chirilgan davrlar uchun sonikatsiya qilinadi. Protein ekstraktsiyasi tsikllarda sonikatsiya qilish (pulsatsiya rejimi) va namunaning haddan tashqari qizishi va termal degradatsiyasining oldini olish uchun namunani muz ustiga qo'yish orqali amalga oshiriladi. Sarumda IEF paytida past molekulyar og'irlikdagi oqsillarni ajratishga xalaqit beradigan ko'p miqdordagi yuqori molekulyar og'irlikdagi oqsillar (masalan, albumin, a1-antitripsin, transferrin, haptoglobulin, immunoglobulin G va immunoglobulin A) mavjud bo'lganligi sababli ularni yo'q qilish tavsiya etiladi. sarumdan tükenme ustuni yordamida.

O'simlik to'qimasidan olingan oqsil

Yangi, yumshoq o'simlik to'qimasini, masalan, mox va hokazo, osonlik bilan chopishdagi namunani materialni sonizlash uchun liziz tamponiga joylashtirish yo'li bilan osonlikcha buzish mumkin. Zaharli o'simliklar o'simlik to'qimalari, masalan, urug'lar, shpil ignalari va boshqalar quruq bo'lishi kerak. Ba'zi qattiq, yog'ochli o'simlik materiallari muzlatilib, suyuq azotda ultrafiltratsiyadan oldin chiqarilishi kerak. O'simlik hujayrasi madaniyati suspenziyalari uchun lizis tamponida 30 dan 150 soniyagacha ultrasonik davolash ko'pincha etarli. Qovoq urug'i kabi qattiq materiallar quyida ta'riflanganidek, yanada qizg'in sonikatsiyani talab qiladi.
 

Ushbu qo'llanmada laboratoriyalarda liziz, hujayra buzilishi, oqsil izolyatsiyasi, DNK va RNK parchalanishi, tahlil va tadqiqotlar kabi namuna tayyorlash vazifalaringiz uchun qaysi turdagi sonikator eng yaxshi ekanligini tushuntiradi. Ilovangiz, namuna hajmi, namuna raqami va o'tkazish qobiliyati uchun ideal sonikator turini tanlang. Hielscher Ultrasonics siz uchun ideal ultratovushli homogenizatorga ega!

Fan va tahlilda hujayra buzilishi va oqsil olish uchun mukammal sonikatorni qanday topish mumkin

Video eskizi

 

Albomni qovoq urug'idan ultratovush chiqarish uchun protokol

Ultrasonik to'qimalarining homogenizatori UP400S S24d40 bilan - o'simlik va hayvon to'qimasidan oqsillarni ajratish uchun (kengaytirish uchun bosing!)Yupqa maydalangan qovoq urug'i kukunidan albuminni ultratovushli oqsil olish uchun 250 ml shisha stakanga erituvchi sifatida 10 g yog'sizlangan qovoq urug'i kukuni va 100 ml deionizatsiyalangan suv qo'shiladi. Proteinni olish ikki bosqichdan iborat: Birinchidan, namuna sonikatsiya qilinadi sonotrode S24d7 bilan jihozlangan prob tipidagi ultrasonikator UP400St (400W, 24kHz). Ultrasonik gomogenizatsiya paytida shisha stakan sovuq suvli hammomga joylashtiriladi. UP400St ultratovush qurilmasining ulanadigan harorat sensori va haroratni nazorat qilish sozlamalari namuna harorati har doim 30 ° C dan past bo'lishini ta'minlaydi. Sonikatsiya paytida haroratni aniq nazorat qilish bilan albuminning denatüratsiyasining oldini oladi. Ikkinchidan, ekstraktsiya mikser bilan 200 aylanish tezligida va 30 ° C da amalga oshirildi. Shundan so'ng stakan termostatik silkitgichga o'tkaziladi. Globulin distillangan suv bilan dializ orqali chiqariladi. Globulin olib tashlangandan so'ng, protein ekstrakti albumin profilini aniqlash uchun namuna olinishi mumkin va keyinchalik albumin koagulyatsiyasi uchun 0,1 M HCl yordamida pI = 3,0 ga o'rnatiladi. Qattiq faza 5000 g, 20°C da sentrifugalash orqali ajratiladi va deionizatsiyalangan suvda qayta eritiladi. Albumin kontsentratida oqsil nisbatini oshirish uchun albumin koagulyatsiyasi ikki marta amalga oshiriladi.

Guruch kubigidan oqsil konsentrati tayyorlash uchun ultratovushli gidroksidi protein ekstrakti ultratovushli davolash ancha yuqori qisqartirish muddatida yuqori protein hosil bo'lishiga olib keladi – an'anaviy ekstraksiyon usullari bilan solishtirganda.

Ushbu videoklip Hielscher ultratovushli gomogenizator UP100H, laboratoriyalarda namuna tayyorlash uchun keng qo'llaniladigan ultratovush qurilmasini ko'rsatadi.

Ultrasonik gomogenizator UP100H

Video eskizi

Funktsional iNOS fermenti uchun namuna tayyorlash protokoli

To'liq ishlaydigan iNOS fermentini olish uchun (masalan, dori skriningi uchun) quyidagi protokol tavsiya etiladi: Hujayra suspenziyasi muz ustiga qo'yilishi va 5 sek sikl rejimida 10 mikron amplitudada UP100H bilan sonikatsiya qilinishi kerak. sonication va 25 sek. muz ustida dam oling. Jarayon taxminan takrorlanishi kerak. 3 marta. Sonikatsiya davrlari orasidagi dam olish vaqti harorat ko'tarilishini kamaytiradi va shuning uchun denatürasyon xavfini kamaytiradi.

Ultrasonik Proteinni Chiqarish

Sonikasyon, odatda, bir necha soat talab qiladigan protein çözündürme jarayonini tezlashtirishi mumkin. Namunani haddan tashqari qizdirmaslik va karbamid o'z ichiga olgan probirkaga protein degradatsiyasi va modifikatsiyasini oldini olish uchun, ultrasonik portlashlar bir necha sekunddan ortiq davom etmasligi kerak.

VialTweeter noyob ultratovush tizim bo'lib, xuddi shu sharoitda 10 ta flakonni o'zaro bir xil ifloslanishlarsiz bir vaqtning o'zida o'g'irlab ketishga imkon beradi.

UP200St yopiq flakonlarni sonikatsiyasi uchun VialTweeter bilan

Video eskizi

Ultrasonikator UP200Ht mikrotipli S26d2 biologik namunalarning ultratovushli lizisi uchun.

Ultrasonikator UP200Ht kichik namunalarni sonikatsiya qilish uchun 2 mm mikrotipli S26d2 bilan.

Protein ekstrakti uchun ultrasonik uskunalar

Hielscher ultratovush tekshiruvi hujayralar, to'qimalar, bakteriyalar, mikroorganizmlar, xamirturushlar va sporlar tarqalishi uchun ultratovushli homogenizatorlarning keng spektrini taklif etadi.
Hielscher laboratoriya ultrasonikatorlari kuchli va oson ishlaydi. 24/7 ishlash uchun qurilgan ular mustahkam va samarali laboratoriya va dastgoh qurilmalari sifatida ishlab chiqilgan. Barcha qurilmalar uchun energiya chiqishi va amplitudani aniq nazorat qilish mumkin. Aksessuarlarning keng assortimenti qo'shimcha sozlash imkoniyatlarini ochadi. VialTweeter, UP200Ht, UP200St va UP400St kabi raqamli ultrasonikatorlar o'rnatilgan haroratni nazorat qilish va avtomatik ma'lumotlarni yozib olish uchun o'rnatilgan SD-kartaga ega.
Bir nechta namunalarni bilvosita, o'zaro ifloslanishsiz va bir vaqtning o'zida sonikatsiya qilish uchun biz VialTweeter yoki ultrasonik CupHornni taklif qilamiz.
Quyidagi jadvalda namuna tayyorlash, hujayra buzilishi va ekstraksiya qilish uchun ultrasonikatorlarimiz haqida umumiy ma'lumot berilgan. Har bir ultratovushli gomogenizator haqida ko'proq ma'lumot olish uchun qurilma turini bosing. Bizning yaxshi o'qitilgan va ko'p yillik tajribaga ega texnik xodimlarimiz sizga namuna tayyorlash uchun eng mos ultratovushni tanlashda yordam berishdan xursand bo'lishadi!
 

Buyurtma miqdori Oqim darajasi Tavsiya Qurilmalar
10 flakon yoki naychagacha ga VialTweeter
ko'p teshikli / mikrotitrli plitalar ga UIP400MTP
bir nechta naychalar / tomirlar ga Cuphorn
1 500ml uchun 10 200ml / min uchun UP100H
10 dan 1000 ml gacha 20-200 ml/min Uf200 ः t, UP200St
10 2000mL uchun 20 400ml / min uchun UP400St

Arizangizga, materialingizga va namunaviy hajmiga qarab, biz sizga namunaviy tayyorgarlik uchun sizga eng qulay moslama taklif qilamiz. Bugun biz bilan bog'laning!

Biz bilan bog'lanish! Bizdan so'rang!

Qo'shimcha ma'lumotni so'rang

Iltimos, ultratovushli gomogenizatorlar, biotexnologiya va proteomikadagi ilovalar hamda narxlar haqida qoʻshimcha maʼlumot soʻrash uchun quyidagi shakldan foydalaning. Biz siz bilan hujayraning buzilishi va oqsillarni ajratib olish jarayonini muhokama qilishdan va sizning talablaringizga javob beradigan ultratovush apparatini taklif qilishdan mamnun bo'lamiz!









Iltimos, bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.


 

Videoda UIP400MTP ultratovush namunalarini tayyorlash tizimi ko'rsatilgan, bu yuqori intensivlikdagi ultratovush yordamida har qanday standart ko'p quduqli plitalarning ishonchli namunalarini tayyorlash imkonini beradi. UIP400MTP ning odatiy ilovalari hujayra lizisini, DNK, RNK va xromatinni kesish, shuningdek, oqsillarni ajratib olishni o'z ichiga oladi.

Ultrasonikator UIP400MTP ko'p quduqli plastinka sonikatsiyasi uchun

Video eskizi

Hielscher ultrasonikatorlari brauzer nazorati orqali masofadan boshqarilishi mumkin. Sonication parametrlari kuzatilishi va jarayon talablariga aniq moslashtirilishi mumkin.

Hielscher raqamli ultrasonikatorlari brauzer masofadan boshqarish pulti va o'rnatilgan SD-kartada avtomatik ma'lumotlarni protokollash xususiyatiga ega.

Ultrasonik qurilma VialTweeter to'qimalar namunasidan oqsillarni ajratish uchun (kengaytirish uchun bosing!)

VialTweeter bilvosita Sonikasyon.



Bilishingiz kerak bo'lgan dalillar

Proteomika

Proteomiklar oqsillarni va proteomni tadqiq qiluvchi tadqiqot sohasi. Proteinlar organizmlar ichida juda muhim vazifalarni bajaradi. Proteom - ma'lum bir vaqtda genom, hujayra, to'qima yoki organizm tomonidan ifodalangan oqsillarni to'plamidir. Proteom vaqt va har xil talablarga, yoki stress yoki hujayra yoki organizmga o'tishi bilan farq qiladi. Keyinchalik ma'lumki, muayyan vaqt ichida, muayyan shartlar ostida, muayyan turdagi hujayra yoki organizmda ma'lum proteynlar majmui. Terim oqsil va genom aralashmasi. Proteomikalar - bu proteomni o'rganishdir.

Protein

Proteinlar makromolekulyar deb ataladigan katta biomolekullardir – bir yoki bir necha uzun zanjirli amino kislotalar qoldiqlaridan tashkil topgan. Proteinlar o'simlik va hayvonlarning barcha organizmlarida mavjud va ular biologik funktsiyalarning aksariyati uchun juda muhimdir. Proteinlar ko'plab biologik ma'lumotlarga ega bo'lganligi sababli ular analitik maqsadlar uchun, masalan proteomik tadqiqotlar uchun olinadi. Proteinlar tomonidan bajariladigan eng muhim funktsiyaga metabolik reaktsiyalar, DNKning replikatsiyasi, ogohlantirishlarga javob berish va molekulalarni bir joydan ikkinchi joyga ko'chirish kiradi. Proteinlar bir-biridan birinchi navbatda ularning genlarining nukleotid ketma-ketligi bilan belgilanadigan amino kislotalar ketma-ketligida farqlanadi va bu odatda uning tarkibini belgilaydigan o'ziga xos uch o'lchovli tuzilishga oqsil hosil bo'lishiga olib keladi. Proteinlar bor – peptidlardan tashqari – oziq-ovqatning asosiy tarkibiy qismlaridan biri hisoblanadi. Shu bois, proteomiklar oziq-ovqat fani jarayonlarini optimallashtirish, oziq-ovqat xavfsizligi va ozuqaviy baholash uchun kuchli vositadir.

Cloud Point Extraction

Cloud Point Extraction analitik moddalarni ajratish va oldindan kontsentsiyalash uchun analitikdan oldingi protsedura. Ultrasonikatsiya bilan birgalikda, bulutli nuqta ekstraktsiyasi jarayonni yanada samarali, tezroq va atrof-muhitga zarar etkazishi mumkin. Ultrasonikatsiya bilan bulutli nuqta ekstraktsiyasi analitni tayyorlashning sezilarli darajada samarali usuli hisoblanadi. Ultratovush yordamida bulutli nuqta ekstraktsiyasi haqida ko'proq o'qing!

Jel elektroforez

Jel elektroforez - DNK, RNK va oqsil kabi makromolekulyarlarni ajratish va tahlil qilishning asosiy usuli va ularning qismlari va ularning zaryadlari asosida. Klinik kimyada DNK va RNK fragmentlarining aralashgan populyatsiyasini uzunligi bo'yicha ajratish uchun zaryadlangan va / yoki kattalikdagi (IEF agaroz, asosan o'lchamsiz) va biokimyoda, molekulyar biologiya va proteomikalarda ajratish uchun DNKning o'lchamini aniqlash uchun ishlatiladi va RNK fragmentlarini yoki oqsillarni zaryad bilan ajratish.

Hujayra madaniyati

Hujayra madaniyati nazorat qilinadigan sharoitda hujayralar etishtiriladigan nazorat qilinadigan o'sishi jarayonidir. Har bir hujayra turi uchun hujayra madaniyati shartlari o'zgaradi. Umuman olganda, hujayra madaniyatining muhiti asosiy oziq moddalar (aminokislotalar, uglevodlar, vitaminlar, minerallar), o'sish omillari, gormonlar va gazlarni etkazib beruvchi substrat yoki vosita bilan mos bo'lgan idishni (masalan, Petr idishidan) iborat (CO2,2) va fiziologik-kimyoviy muhitni (pH buferi, osmotik bosim, harorat) tartibga soladi. Aksariyat hujayralar sirt yoki sun'iy substratga muhtoj, boshqa hujayra madaniyatlari esa madaniy muhitda erkin siltab chiqarilishi mumkin (suspenziya madaniyati, hujayra suspenziyasi).
Hayvon hujayralarining massa massalari virusli vaktsinalar va boshqa biotexnologik mahsulotlardan sanoat mahsulotlarini ishlab chiqarishda qo'llaniladi. Insonning ildiz hujayralari hujayralar sonini kengaytirish va transplantatsiya maqsadlarida hujayralarni turli xil badandagi hujayra turlariga ajratish uchun madaniyatga ega.

To'qimalarining namunalari

Teri atamasi hujayra tarkibidagi hujayralar va organlar o'rtasida tashkiliy darajada bo'lgan hujayrali qidiruv mahsulotni tasvirlaydi. To'qimada, xuddi shu funktsiyani birgalikda bajaradigan bir xil turdagi hujayralar to'planadi. Ko'p to'qimalarni ishlab guruhlash orqali organlarning murakkab tuzilmalari shakllantiriladi.
To'qimachilik biologiyasi, gistologiya / histopatologiya, parazitologiya, biokimyo, immunohistokimyoviy tadqiqotlar, shuningdek, DNKni ishlab chiqish va olish uchun namuna olingan. U hayvon (ajratib: sutemizuvchilar to'qimasi) va o'simlik to'qimasidan ajralib turishi mumkin. Hayvonlarning to'qimalari birlashtiruvchi, mushak, asab va epiteliya to'qimalarining to'rtta asosiy turiga bo'linadi. O'simlik to'qimasi quyidagi uchta to'qimalarga bo'linadi: epidermis, tuproq to'qimasi va qon tomir to'qimasi.
To'qimalarning namunalari hayvon yoki o'simlik qismlaridan, masalan, suyak, mushak, barg va boshqalardan tayyorlanishi mumkin.

Tana suyuqligi

Qon, sarum, plazma, miya omurilik suyuqligi, tupurik va sinovial suyuqlik tana suyuqligi bo'lib, ular diagnostik jihatdan muhim ma'lumotni ta'minlaydi. Shuning uchun, tahlil qilish uchun tana suyuqligi namunalarini murakkab tayyorlash muhim ahamiyatga ega. Birinchi qiyinchilik tana suyuqliklarida mavjud komponentlarning keng dinamik doirasiga bog'liq.

Protein kontsentratsiyasini aniqlash

Bradford assay, Lowry assay va bicinchoninic acid (BCA) assay oqsillarni konsentratsiyasini aniqlash uchun keng tarqalgan tajribalardir. Sigir sarum albumin (BSA), eng ko'p ishlatiladigan protein me'yorlaridan biri hisoblanadi.

Lizish bufferi

Lizot tamponu hujayra moddani yoki to'qimasini (to'qima madaniyati, o'simlik, bakteriyalar, qo'ziqorinlar va boshqalar) muvofiq tanlanishi va hujayralar tarkibida va tuzilish turida bo'lsin. Proteinlar, membranalar va organellarni ekstraktsiyalash uchun liziz buferlarining keng doirasi bir yoki bir necha deterjan bilan formuladan qilingan. Detarjan odatda sinov-va-xato sinovlari yoki tanlangan – agar mavjud bo'lsa – mavjud oqsillarni ajratish protokoli bo'yicha. Detarjan to'qimalar manbai va oqsillar bilan mos bo'lishi kerak. Umumiy holda, ma'lum bir to'qimaga / proteinga ishlaydigan engil detarjen ekstrakti maksimal funktsiyasini saqlab qolish uchun tanlanadi. Bundan tashqari, membranani va organellarni ajratib olishda yumshoq detarjen membranani mustahkam saqlaydi. Lizot tamponlarida tez-tez ishlatiladigan yuvish vositalari ko'pincha nonionik yoki zvitterionikdir, masalan, CHAPS, deoksikolat, Triton X-100, NP40 va Tween 20.
Misol uchun, miya, jigar, ichak, buyrak, taloq va boshqalar kabi to'qimalarni oddiygina RIPA – Biroq, proteaz inhibitörleri va DTT (masalan, jel elektroforez uchun), shu jumladan qilinadi.
Skelet mushak to'qimalari uchun muzlatuvchi tampon (muzli sovuq): 20 mM Tris (pH 7.8), 137 mm NaCl, 2.7 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (A / A) gliserol, 1 mM EDTA , 1 mM ditiotreitol proteaz va fosfataz inhibitör kokteyl bilan to'ldiriladi
Umumiy buferlar jadvali va ularning pH oralig'i. Umumiy holda, bu tamponlar odatda 20-50 mm kontsentratsiyalarda ishlatiladi.
 

Bufer pH oralig'i
Limon kislotasi – NaOH 2,2 – 6,5
Natriy sitrat – Limon kislotasi 3.0 – 6,2
Natriy asetat – asatik kislota 3,6 – 5,6
Cakodlik kislota natriy tuzi – HCl 5.0 – 7,4
Hik – NaOH 5,6 – 6,8
Natriy dihidrogen fosfat – disodyum vodorod fosfat 5,8 – 8,0
Imidazol – HCl 6,2 – 7,8
MOPS – KOH 6,6 – 7,8
Triethanolamin gidroxloridi – NaOH 6,8 – 8,8
tris – HCl 7,0 – 9,0
HES – NaOH 7,2 – 8,2
Tricin – NaOH 7,6 – 8,6
Natriy tetraborat – Borik kislota 7,6 – 9,2
Bikini – NaOH 7,7 – 8,9
Glitsin – NaOH 8,6 – 10.6

Ko'pgina tamponlar harorat bilan pH ga bog'liqligini ko'rsatadi. Bu, ayniqsa, Tris tamponlari uchun to'g'ri keladi. PKa 8,06 dan 25 ° C dan 8,85 ga 0 ° C gacha o'zgaradi.
(pH va pKa buferning pH qiymati: suvli eritmada vodorod ionlarining konsentratsiyasini o'lchaydi, pKa (= kislotani ajratish sobit) - bu o'ziga xos, ammo o'ziga xos o'lchovdir, buning natijasida molekula qanday ta'sir qiladi? pH qiymati.)

TRIzol

TRIzol - guanidinyum tiosiyanat-fenol-xloroform ekstraktsiyasida RNK / DNK / oqsilni olish uchun ishlatiladigan kimyoviy eritma. Ultrasonik yordam TRIzol ekstraktsiyasini qo'llash yuqori DNK, RNK va oqsillarni bir xil namunadan hosil qiladi va shuning uchun boshqa ekstraksiya usullarini oshiradi.

Adabiyotlar / manbalar

Jarayoningizni muhokama qilishdan mamnun bo'lamiz.

Keling, aloqaga chiqamiz.