To'qimalar va hujayra madaniyatlaridan ultratovushli oqsil ekstraktsiyasi
- Protein ekstraktsiyasi proteomikada namuna tayyorlashning muhim bosqichidir.
- Proteinlarni o'simlik va hayvon to'qimalaridan, xamirturush va mikroorganizmlardan olish mumkin.
- Sonication - bu qisqa vaqt ichida yuqori protein hosildorligini ta'minlaydigan ishonchli, samarali oqsil olish usuli.
To'qimalar va hujayralardan protein ekstraktsiyasi
To'qimalardan va o'stirilgan hujayralardan oqsil olish namunani tayyorlashning muhim bosqichi bo'lib, ELISA, PAGE, Western blotting, massa spektrometriyasi yoki oqsillarni tozalash kabi ko'plab biokimyoviy va analitik usullarda amalga oshiriladi. Ultrasonik hujayra buzilishi, lizis va ekstraktsiyasi oqsillarning yuqori hosildorligini ta'minlash uchun aniq boshqariladigan, issiqlik bo'lmagan texnikadir.
Hujayralardan oqsil olish ultratovushli probi UP200St
- Tez
- yuqori hosildorlik
- Yuqori samarali
- Parametrlar ustidan aniq nazorat
- takrorlanadigan natijalar
- chiziqli miqyoslilik
Ultrasonik lizis va oqsillarni olish uchun umumiy ko'rsatmalar
- Harorat nazorati: Termik denatürasyonsiz yuqori protein hosilini ta'minlash uchun ekstraktsiya paytida haroratni nazorat qilish kerak. Hielscherning zamonaviy ultratovushli homogenizatorlari – ultratovushli disintegrator yoki ultrasonikator deb ham ataladi – aniq nazorat qilinadi. Ular ulanadigan harorat sensori bilan birga keladi. Ultrasonik gomogenizatorni sozlash variantlarida maksimal haroratni o'rnatish mumkin. Ushbu maksimal haroratga erishilganda, ultratovush qurilmasi namuna sovib ketguncha avtomatik ravishda to'xtaydi.
- Bufer: Tegishli buferni tanlash va to'g'ri hajmdagi bufer to'qimalardan to'qimalarga o'zgarib turadi va ularni sinov va xato sinovlari orqali aniqlash kerak.
- Izolyatsiya / tozalash: Protein lizatlari DNK yoki uglevodlar kabi ortiqcha biomolekulalarni o'z ichiga olishi mumkin, ular oqsil cho'kmasi (deoksixolat-trikloroatsetik kislota) yoki bufer almashinuvi orqali olib tashlanishi mumkin.
Chittapalo va Noomhorm (2009) o'z tadqiqotlarida sonikatsiya yordamida oqsil hosildorligi ortganligini va ultratovushli to'qimalarni homogenlash va lizis jarayoni mavjud ekstraksiya jarayonlarini sezilarli darajada yaxshilashi mumkinligini ma'lum qildi. – yangi tijoriy qazib olish imkoniyatlarini yaratish.
Ultrasonik kubok oqsil izolyatsiyasi va DNK parchalanishi uchun bir xil sharoitlarda bir nechta namunalardan bir vaqtning o'zida yuqori samarali namuna tayyorlash uchun.
Hayvonlar to'qimasidan oqsil olish
To'liq o'lchamdagi to'qimalarni (masalan, buyraklar, yurak, o'pka, mushak va boshqalar) tayyorlash uchun to'qimalarni toza asboblar bilan juda kichik bo'laklarga, afzalroq muz ustida va proteazlar tomonidan parchalanishini oldini olish uchun imkon qadar tezroq ajratish kerak (masalan,). RIPA kabi lizis buferi yoki proteaza va fosfataza inhibitori kokteylini o'z ichiga olgan gipotonik lizis buferi). Dissektsiyadan so'ng, namuna tezda muzlatish uchun suyuq azotga botiriladi. Namuna keyinroq foydalanish uchun -80 ° C da saqlanishi yoki darhol homogenlash uchun muz ustida saqlanishi mumkin. Ultrasonik ekstraktsiyadan oldin darhol muzli lizis buferi (proteaz inhibitörleri DTT, leupeptin va aprotinin bilan) tezda namuna trubasiga qo'shiladi (har bir ~10 mg to'qima uchun taxminan ~600 mkl bufer tavsiya etiladi). Taxminan Namuna naychasiga 20-60 mg to'qima tavsiya etiladi.
Ultrasonik gomogenizatsiya, lizis va ekstraktsiya mikro-uchli sonotrod bilan jihozlangan UP100H yoki UP200Ht kabi ultratovushli homogenizator bilan amalga oshiriladi. Sonikatsiya davomiyligi 60-90 sek. 15 soniyali ultratovushli tsikl rejimida. sonikatsiya va 10 sek. dam olish vaqti. Namuna har doim muzda saqlanishi kerak.
Ultrasonik gomogenizatsiya / ekstraktsiyadan so'ng, lizat taxminan 27,000 g santrifüj qilinadi. 20 min. Keyin supernatent yig'iladi, shuning uchun oqsil kontsentratsiyasini Pirs protein tahlili BCA kabi protein tahlili bilan aniqlash mumkin.
Qon zardobidan oqsil olish
Sarum va fosfat tamponining bir hil aralashmasi uchun namuna ultratovushli hujayra parchalanishidan oldin birinchi bo'lib vortekslanadi. Ultrasonik lizis uchun namuna UP100H kabi ultratovushli laboratoriya gomogenizatori bilan 20% amplituda 8 sikl uchun, har 5 sekund yoqilgan va 15 soniya o'chirilgan holda soniklanadi. Protein ekstraktsiyasi tsikllarda sonikatsiya qilish (pulsatsiya rejimi) va namunaning haddan tashqari qizishi va termal degradatsiyasining oldini olish uchun namunani muzga qo'yish orqali amalga oshiriladi. Sarumda IEF paytida past molekulyar og'irlikdagi oqsillarni ajratishga xalaqit beradigan ko'p miqdordagi yuqori molekulyar og'irlikdagi oqsillar (masalan, albumin, a1-antitripsin, transferrin, haptoglobulin, immunoglobulin G va immunoglobulin A) mavjud bo'lganligi sababli ularni yo'q qilish tavsiya etiladi. sarumdan tükenme ustuni yordamida.
O'simlik to'qimasidan oqsil olish
Yangi, yumshoq o'simlik to'qimalari, masalan, mox va boshqalar, oddiygina tug'ralgan namuna materialini sonikatsiya uchun lizis buferiga joylashtirish orqali osongina buzilishi mumkin. Qattiq, o'simlik to'qimalari, masalan, urug'lar, archa ignalari va boshqalar quruq bo'lishi kerak. Ba'zi qattiq, yog'ochli o'simlik materiallari sonikatsiya yordamida ekstraksiya qilishdan oldin suyuq azotda muzlatilishi va maydalanishi kerak. O'simlik hujayra madaniyati suspenziyalari uchun liziz tamponida 30 dan 150 soniyagacha bo'lgan ultratovushli ishlov berish asosan etarli. Qovoq urug'lari kabi qattiqroq material quyida tavsiflanganidek, yanada kuchli sonikatsiyani talab qiladi.
Qovoq urug'idan albuminni ultratovush yordamida olish protokoli
Yupqa maydalangan qovoq urug'i kukunidan albuminni ultratovushli oqsil olish uchun 250 ml shisha stakanga erituvchi sifatida 10 g yog'sizlangan qovoq urug'i kukuni va 100 ml deionizatsiyalangan suv qo'shiladi. Proteinni olish ikki bosqichdan iborat: Birinchidan, namuna sonikatsiya qilinadi sonotrode S24d7 bilan jihozlangan prob tipidagi ultrasonikator UP400St (400W, 24kHz). Ultrasonik gomogenizatsiya paytida shisha stakan sovuq suvli hammomga joylashtiriladi. UP400St ultratovush qurilmasining o'rnatilgan harorat sensori va haroratni nazorat qilish sozlamalari namuna harorati har doim 30 ° C dan past bo'lishini ta'minlaydi. Sonikatsiya paytida haroratni aniq nazorat qilish bilan albuminning denatüratsiyasining oldini oladi. Ikkinchidan, ekstraktsiya mikser bilan 200 aylanish tezligida va 30 ° C da amalga oshirildi. Shundan so'ng stakan termostatik silkitgichga o'tkaziladi. Globulin distillangan suv bilan dializ orqali chiqariladi. Globulin olib tashlangandan so'ng, protein ekstrakti albumin profilini aniqlash uchun namuna olinishi mumkin va keyinchalik albumin koagulyatsiyasi uchun 0,1 M HCl yordamida pI = 3,0 ga o'rnatiladi. Qattiq faza 5000 g, 20°C da sentrifugalash orqali ajratiladi va deionizatsiyalangan suvda qayta eritiladi. Albumin kontsentratida oqsil nisbatini oshirish uchun albumin koagulyatsiyasi ikki marta amalga oshiriladi.
Guruch kepagidan oqsil kontsentratini tayyorlash uchun ultratovushli gidroksidi protein ekstraktsiyasi shuni ko'rsatadiki, ultratovushli davolash natijasida sezilarli darajada qisqaroq ekstraksiya vaqtida yuqori protein hosil bo'ladi. – an'anaviy ekstraktsiya usullari bilan solishtirganda.
Funktsional iNOS fermenti uchun namuna tayyorlash protokoli
To'liq ishlaydigan iNOS fermentini olish uchun (masalan, dori skriningi uchun) quyidagi protokol tavsiya etiladi: Hujayra suspenziyasi muz ustiga qo'yilishi va 5 sek sikl rejimida 10 mikron amplitudada UP100H bilan sonikatsiya qilinishi kerak. sonikatsiya va 25 sek. muz ustida dam oling. Jarayon taxminan takrorlanishi kerak. 3 marta. Sonikatsiya davrlari orasidagi dam olish vaqti harorat ko'tarilishini kamaytiradi va shuning uchun denatürasyon xavfini kamaytiradi.
ultratovushli oqsillarni eritish
Sonikatsiya odatda bir necha soat talab qiladigan oqsillarni eritish jarayonini tezlashtirishi mumkin. Namuna haddan tashqari qizib ketmaslik va oqsil parchalanishini va karbamid o'z ichiga olgan eritmalarda modifikatsiyani oldini olish uchun ultratovush portlashlari bir necha soniyadan ko'proq davom etmasligi kerak.
Ultrasonikator UP200Ht kichik namunalarni sonikatsiya qilish uchun 2 mm mikrotipli S26d2 bilan.
Protein ekstraktsiyasi uchun ultratovushli uskunalar
Hielscher Ultrasonics hujayralarni, to'qimalarni, bakteriyalarni, mikroorganizmlarni, xamirturushlarni va sporalarni parchalash uchun ultratovushli gomogenizatorlarning keng doirasini taklif qiladi.
Hielscher laboratoriya ultrasonikatorlari kuchli va oson ishlaydi. 24/7 ishlash uchun qurilgan ular mustahkam va samarali laboratoriya va dastgoh qurilmalari sifatida ishlab chiqilgan. Barcha qurilmalar uchun energiya chiqishi va amplitudani aniq nazorat qilish mumkin. Aksessuarlarning keng assortimenti qo'shimcha sozlash imkoniyatlarini ochadi. VialTweeter, UP200Ht, UP200St va UP400St kabi raqamli ultrasonikatorlar o'rnatilgan haroratni nazorat qilish va avtomatik ma'lumotlarni yozib olish uchun o'rnatilgan SD kartaga ega.
Bir nechta namunalarni bilvosita, o'zaro ifloslanishsiz va bir vaqtning o'zida sonikatsiya qilish uchun biz VialTweeter yoki ultrasonik CupHornni taklif qilamiz.
Quyidagi jadvalda namuna tayyorlash, hujayra buzilishi va ekstraksiya qilish uchun ultrasonikatorlarimiz haqida umumiy ma'lumot berilgan. Har bir ultratovushli gomogenizator haqida ko'proq ma'lumot olish uchun qurilma turini bosing. Bizning yaxshi o'qitilgan va ko'p yillik tajribaga ega texnik xodimlarimiz sizga namuna tayyorlash uchun eng mos ultratovushni tanlashda yordam berishdan xursand bo'lishadi!
| To'plam hajmi | Oqim darajasi | Tavsiya etilgan qurilmalar |
|---|---|---|
| 10 flakon yoki naychagacha | na | VialTweeter |
| ko'p teshikli / mikrotitrli plitalar | na | UIP400MTP |
| bir nechta naychalar / tomirlar | na | chashka |
| 1 dan 500 ml gacha | 10 dan 200 ml / min | UP100H |
| 10 dan 1000 ml gacha | 20-200 ml/min | UP200Ht, UP200St |
| 10 dan 2000 ml gacha | 20 dan 400 ml / min | UP400St |
Ilova, material va namuna hajmiga qarab, biz sizga namuna tayyorlash uchun eng mos sozlashni tavsiya qilamiz. Bugun biz bilan bog'laning!
Biz bilan bog'lanish! / Bizdan so'rang!
Hielscher raqamli ultrasonikatorlari brauzer masofadan boshqarish pulti va o'rnatilgan SD-kartada avtomatik ma'lumotlarni protokollash xususiyatiga ega.
VialTweeter bilvosita sonication uchun.
Bilishga arziydigan faktlar
proteomika
Proteomika - bu oqsillar va proteomalarni o'rganadigan tadqiqot sohasi. Proteinlar organizmlar ichida juda ko'p hayotiy funktsiyalarni bajaradi. Proteoma ma'lum bir vaqtda genom, hujayra, to'qima yoki organizm tomonidan ifodalangan oqsillarning butun to'plamidir. Proteoma vaqt va hujayra yoki organizm boshdan kechiradigan aniq talablar yoki stresslarga qarab o'zgaradi. Aniqroq aytganda, bu ma'lum bir turdagi hujayra yoki organizmda, ma'lum bir vaqtda, ma'lum sharoitlarda ifodalangan oqsillar to'plamidir. Bu atama oqsillar va genomlarning aralashmasidir. Proteomika - bu proteomani o'rganish.
oqsil
Proteinlar katta biomolekulalar bo'lib, ular makromolekulalar deb ataladi – aminokislotalar qoldiqlarining bir yoki bir nechta uzun zanjirlaridan tashkil topgan. Proteinlar o'simlik va hayvonlarning barcha organizmlarida mavjud bo'lib, ular biologik funktsiyalarning aksariyati uchun hal qiluvchi ahamiyatga ega. Proteinlar juda ko'p biologik ma'lumotlarni o'z ichiga olganligi sababli, ular analitik maqsadlarda, masalan, proteomik tadqiqotlar uchun olinadi. Oqsillar bajaradigan eng muhim funktsiyaga metabolik reaktsiyalarning katalizi, DNK replikatsiyasi, stimullarga javob berish va molekulalarni bir joydan ikkinchi joyga ko'chirish kiradi. Proteinlar bir-biridan birinchi navbatda aminokislotalarning ketma-ketligi bilan farqlanadi, bu ularning genlarining nukleotidlar ketma-ketligi bilan belgilanadi va bu odatda oqsilning faolligini aniqlaydigan uch o'lchovli strukturaga buklanishiga olib keladi. Proteinlar – peptidlardan tashqari – oziq-ovqatning asosiy tarkibiy qismlaridan biri. Shuning uchun proteomika oziq-ovqat fanida jarayonlarni optimallashtirish, oziq-ovqat xavfsizligi va ovqatlanishni baholash uchun kuchli vositadir.
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction analitik moddalarni ajratish va oldindan kontsentsiyalash uchun analitikdan oldingi protsedura. Ultrasonikatsiya bilan birgalikda bulutli nuqta ekstraktsiyasi jarayonni yanada samarali, tezroq va atrof-muhitga zarar etkazishi mumkin. Ultrasonikatsiya bilan bulutli nuqta ekstraktsiyasi analitni tayyorlashning sezilarli darajada samarali usuli hisoblanadi. Ultratovush yordamida bulutli nuqta ekstraktsiyasi haqida ko'proq o'qing!Jel elektroforezi
Jel elektroforezi DNK, RNK va oqsillar kabi makromolekulalarni, shuningdek ularning o'lchamlari va zaryadiga qarab ularning qismlarini ajratish va tahlil qilishning asosiy usuli hisoblanadi. Klinik kimyoda oqsillarni zaryadi va/yoki hajmi bo'yicha ajratish uchun (IEF agaroza, asosan o'lchamiga bog'liq emas) va biokimyo, molekulyar biologiya va proteomikada DNK va RNK fragmentlarining aralash populyatsiyasini uzunligi bo'yicha ajratish, DNK hajmini baholash uchun ishlatiladi. va RNK fragmentlari yoki oqsillarni zaryad bilan ajratish uchun.
hujayra madaniyati
Hujayra madaniyati - bu boshqariladigan o'sish jarayoni bo'lib, hujayralar boshqariladigan sharoitlarda etishtiriladi. Hujayra madaniyati sharoitlari har bir hujayra turi uchun farq qiladi. Umuman olganda, hujayra madaniyati muhiti zarur oziq moddalar (aminokislotalar, uglevodlar, vitaminlar, minerallar), o'sish omillari, gormonlar va gazlar (CO2, O2), va fizik-kimyoviy muhitni (pH buferi, osmotik bosim, harorat) tartibga soladi. Aksariyat hujayralar sirt yoki sun'iy substratga muhtoj, boshqa hujayra madaniyatlari esa madaniyat muhitida erkin suzuvchi holda o'stirilishi mumkin (suspenziya madaniyati, hujayra suspenziyasi).
Hayvonlarning hujayra liniyalarining ommaviy madaniyati virusli vaktsinalar va boshqa biotexnologik olingan mahsulotlarni sanoat ishlab chiqarishda qo'llaniladi. Inson ildiz hujayralari hujayralar sonini kengaytirish va transplantatsiya maqsadlarida hujayralarni turli somatik hujayralar turlariga ajratish uchun o'stiriladi.
To'qimalar namunalari
To'qima atamasi hujayrali oraliq mahsulotni tavsiflaydi, bu erda hujayra moddasi hujayralar va to'liq organ o'rtasida tashkiliy darajada bo'ladi. To'qimalarda bir xil kelib chiqishi bo'lgan, birgalikda ma'lum bir funktsiyani bajaradigan o'xshash hujayralar yig'iladi. Ko'p to'qimalarning funktsional guruhlanishi bilan organlarning murakkab tuzilmalari hosil bo'ladi.
To'qimalar biologiya, gistologiya/gistopatologiya, parazitologiya, biokimyo, immunohistokimyo bo'yicha tadqiqotlar, shuningdek, DNKni etishtirish va ekstraksiya qilish uchun namuna olinadi. Uni hayvon (boʻlinma: sutemizuvchilar toʻqimasi) va oʻsimlik toʻqimalari oʻrtasida farqlash mumkin. Hayvon to'qimalari biriktiruvchi, mushak, asab va epiteliy to'qimalarining to'rtta asosiy turiga birlashtirilgan. O'simlik to'qimasi quyidagi uchta to'qima tizimiga bo'linadi: epidermis, tuproq to'qimalari va qon tomir to'qimalar.
To'qimalar namunalari hayvon yoki o'simlik qismlaridan, masalan, suyak, mushak, barglar va boshqalardan tayyorlanishi mumkin.
Tana suyuqliklari
Qon, zardob, plazma, miya omurilik suyuqligi, tupurik va sinovial suyuqlik tana suyuqliklari bo'lib, ular diagnostik ahamiyatga ega bo'lgan ma'lumotlarning ajoyib manbaidir. Shuning uchun tahlil qilish uchun tana suyuqligi namunalarini murakkab tayyorlash muhimdir. Birinchi qiyinchilik tana suyuqliklarida mavjud bo'lgan komponentlarning keng dinamik diapazoni bilan bog'liq.
Protein kontsentratsiyasini aniqlash
Bredford tahlili, Lowry tahlili va bitsinxonin kislotasi (BCA) tahlili oqsillar kontsentratsiyasini aniqlash uchun keng tarqalgan tahlillardir. Sigir zardobidagi albumin (BSA) eng ko'p ishlatiladigan protein standartlaridan biridir.
lizis buferi
Lizis buferi hujayra materiali yoki to'qimalariga (to'qima madaniyati, o'simlik, bakteriyalar, zamburug'lar va boshqalar) va hujayralar tuzilishga va strukturaning turiga qarab tanlanishi kerak. Proteinlarni, membranalarni va organellalarni olish uchun liziz tamponlarining keng assortimenti bir yoki bir nechta yuvish vositalaridan iborat. Yuvish vositasi odatda sinov va xato sinovlari orqali tanlanadi yoki – agar mavjud bo'lsa – mavjud bo'lgan protein ekstraktsiyasi protokoliga muvofiq. Yuvish vositasi to'qimalar manbai va oqsillarga mos kelishi kerak. Umuman olganda, ma'lum bir to'qima / oqsil uchun ishlaydigan eng yumshoq yuvish vositasi, ekstraktning maksimal funksionalligini saqlab qolish uchun tanlanadi. Bundan tashqari, membranalar va organellalar ekstraksiya qilingan taqdirda, yumshoq yuvish vositasi membranani buzilmasdan saqlaydi. Lizis buferlarida tez-tez ishlatiladigan yuvish vositalari asosan noionik yoki zvitterionikdir, masalan, CHAPS, deoksixolat, Triton™ X-100, NP40 va Tween 20.
Masalan, miya, jigar, ichak, buyrak, taloq va boshqalar kabi to'qimalarni RIPA bilan oddiygina tamponlash mumkin. – ammo proteaz inhibitörleri va DTT (masalan, gel elektroforez uchun) kiritilishi kerak.
Skelet mushak to'qimalari uchun lizis buferi (muz sovuq): 20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1 % Triton X-100, 10 % (w/v) glitserin, 1 mM EDTA , 1 mM ditiotreitol bilan to'ldirilgan proteaz va fosfataza inhibitori kokteyli
Umumiy tamponlar jadvali va ularning pH diapazoni. Umuman olganda, bu tamponlar odatda 20-50 mM konsentratsiyalarda qo'llaniladi.
| bufer | pH diapazoni |
|---|---|
| Limon kislotasi – NaOH | 2.2 – 6.5 |
| Natriy sitrat – Limon kislotasi | 3.0 – 6.2 |
| Natriy asetat – sirka kislotasi | 3.6 – 5.6 |
| Kakodil kislotasi natriy tuzi – HCl | 5.0 – 7.4 |
| MES – NaOH | 5.6 – 6.8 |
| Natriy dihidrogen fosfat – disodium vodorod fosfat | 5.8 – 8.0 |
| imidazol – HCl | 6.2 – 7.8 |
| MOPS – KOH | 6.6 – 7.8 |
| Trietanolamin gidroxloridi – NaOH | 6.8 – 8.8 |
| Tris – HCl | 7.0 – 9.0 |
| HEPES – NaOH | 7.2 – 8.2 |
| Trisin – NaOH | 7.6 – 8.6 |
| Natriy tetraborat – borik kislotasi | 7.6 – 9.2 |
| Bicin – NaOH | 7.7 – 8.9 |
| glitsin – NaOH | 8.6 – 10.6 |
Aksariyat tamponlar haroratga bog'liq pH ni ko'rsatadi. Bu, ayniqsa, Tris buferlari uchun to'g'ri keladi. pKa 25 ° C da 8,06 dan 0 ° C da 8,85 gacha o'zgaradi.
(Buferning pH va pKa: pH suvli eritmadagi vodorod ionlarining kontsentratsiyasini o'lchaydi. pKa (= kislota dissotsiatsiyasi konstantasi) o'zaro bog'liq, ammo aniqroq o'lchovdir, chunki u molekulaning o'ziga xos ta'sirida qanday harakat qilishini taxmin qilishga yordam beradi. pH qiymati.)
TRIzol
TRIzol - bu guanidinium tiosiyanat-fenol-xloroform ekstraktsiyasi paytida RNK/DNK/oqsil olish uchun ishlatiladigan kimyoviy eritma. Ultratovush yordamida TRIzol ekstraktsiyasidan foydalanish bir xil namunadan yuqori DNK, RNK va oqsil hosil bo'lishiga olib keladi va shu bilan boshqa ekstraksiya usullaridan ustun turadi.
Adabiyot/Adabiyotlar
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.