Toʻqimalar va hujayra kulturalaridan ultratovush yordamida oqsil ekstraksiyasi
- Oqsil ekstraksiyasi proteomikada namuna tayyorlashning muhim bosqichidir.
- Oqsillarni oʻsimlik va hayvon toʻqimalaridan, achitqilar va mikroorganizmlardan ekstraksiya qilish mumkin.
- Ultratovush bilan ishlov berish qisqa ekstraksiya vaqtida yuqori oqsil unumini taʼminlaydigan ishonchli va samarali oqsil ekstraksiyasi usulidir.
Toʻqimalar va hujayralardan oqsil ekstraksiyasi
Toʻqimalar va oʻstirilgan hujayralardan oqsil ekstraksiyasi ELISA, PAGE, Western blotting, mass-spektrometriya yoki oqsilni tozalash kabi koʻplab biokimyoviy va tahliliy usullar davomida bajariladigan muhim namuna tayyorlash bosqichidir. Hujayralarni ultratovush yordamida parchalash, lizis va ekstraksiya oqsillarning yuqori unumini taʼminlaydigan, aniq boshqariladigan, issiqlikka asoslanmagan usuldir.
Hujayralardan oqsilni UP200St ultratovushli zondi yordamida ekstraksiya qilish
- Tezkor
- Yuqori unum
- Yuqori samaradorlik
- Parametrlarni aniq boshqarish
- Takrorlanadigan natijalar
- Chiziqli masshtablash imkoniyati
Ultratovushli lizis va oqsil ekstraksiyasi boʻyicha umumiy koʻrsatmalar
- Haroratni nazorat qilish: Issiqlik denaturatsiyasisiz yuqori oqsil unumini taʼminlash uchun ekstraksiya davomida harorat nazorat qilinishi kerak. Hielscher kompaniyasining eng zamonaviy ultratovushli gomogenizatorlari – ultratovushli dezintegrator yoki ultrasonifikator deb ham ataladi – aniq boshqariladi. Ular ulanadigan harorat sensori bilan jihozlangan. Ultratovushli gomogenizatorning sozlash parametrlarida maksimal haroratni belgilash mumkin. Ushbu maksimal haroratga yetilganda ultratovush qurilmasi namuna soviguncha avtomatik ravishda toʻxtaydi.
- Bufer: Mos buferni va uning toʻgʻri hajmini tanlash har bir toʻqima uchun farq qiladi va sinab koʻrish hamda xatolarni aniqlash orqali belgilanishi kerak.
- Ajratib olish / tozalash: Oqsil lizatlari tarkibida DNA yoki uglevodlar kabi biomolekulalar ortiqcha miqdorda boʻlishi mumkin; ularni oqsilni choʻktirish (dezoksixolat–trixlorsirka kislotasi) yoki buferni almashtirish orqali olib tashlash mumkin.
Chittapalo va Noomhorm (2009) oʻz tadqiqotlarida ultratovush bilan ishlov berish oqsil unumini oshirganini va toʻqimalarni ultratovush yordamida gomogenizatsiya qilish hamda lizis jarayoni mavjud ekstraksiya jarayonlarini sezilarli darajada yaxshilashi mumkinligini – shu tariqa yangi tijoriy ekstraksiya imkoniyatlarini yaratishini – qayd etganlar.
Ultratovushli CupHorn oqsilni ajratib olish va DNA fragmentatsiyasi uchun bir nechta namunani bir xil sharoitlarda bir vaqtda, yuqori samaradorlik bilan tayyorlash uchun.
Hayvon toʻqimasidan oqsil ekstraksiyasi
Butun toʻqimani (masalan, buyrak, yurak, oʻpka, mushak va boshqalarni) tayyorlash uchun proteazalar taʼsirida parchalanishning oldini olish maqsadida toʻqima toza asboblar bilan, imkon qadar muz ustida va iloji boricha tezroq juda mayda boʻlaklarga ajratilishi kerak (masalan, RIPA kabi lizis buferi yoki proteaza va fosfataza ingibitorlari aralashmasini oʻz ichiga olgan gipotonik lizis buferi). Boʻlaklarga ajratilgach, namuna tez muzlatish uchun suyuq azotga botiriladi. Namunani keyinchalik ishlatish uchun -80°C da saqlash yoki darhol gomogenizatsiya qilish uchun muz ustida ushlab turish mumkin. Ultratovushli ekstraksiyadan bevosita oldin namuna probirkasiga muzdek lizis buferi (DTT, ley peptin va aprotinin proteaza ingibitorlari bilan) tezda qoʻshiladi (har ~10 mg toʻqima uchun taxminan ~600 μL bufer tavsiya etiladi). Har bir namuna probirkasi uchun taxminan 20–60mg toʻqima tavsiya etiladi.
Ultratovushli gomogenizatsiya, lizis va ekstraksiya mikro uchli sonotrod bilan jihozlangan UP100H yoki UP200Ht kabi ultratovushli gomogenizator yordamida bajariladi. Ultratovush bilan ishlov berish davomiyligi 60–90 sec. boʻlib, ultratovushli sikl rejimida 15 sec. ultratovush bilan ishlov berish va 10 sec. tanaffus qoʻllanadi. Namuna butun vaqt davomida muzda saqlanishi kerak.
Ultratovushli gomogenizatsiya / ekstraksiyadan soʻng lizat 27 000g da taxminan 20 min. sentrifugalanadi. Keyin supernatant yigʻib olinadi, shunda oqsil konsentratsiyasini Pierce BCA oqsil tahlili kabi oqsilni aniqlash tahlili yordamida belgilash mumkin.
Qon zardobidan oqsil ekstraksiyasi
Zardob va fosfat buferining bir jinsli aralashmasini olish uchun ultratovushli hujayra lizisidan oldin namuna dastlab vorteks yordamida aralashtiriladi. Ultratovushli lizis uchun namunaga UP100H kabi ultratovushli laboratoriya gomogenizatori bilan 20% amplitudada 8 sikl davomida ishlov beriladi; har bir siklda qurilma 5 soniya yoqiladi va 15 soniya oʻchiriladi. Namunaning haddan tashqari qizishi va issiqlik taʼsirida parchalanishining oldini olish uchun oqsil ekstraksiyasi sikllarda ultratovush bilan ishlov berish (pulsatsiya rejimi) va namunani muz ustiga qoʻyish orqali amalga oshiriladi. Zardob tarkibida IEF davomida past molekulyar massali oqsillarni ajratishga xalaqit beradigan yuqori molekulyar massali oqsillar (masalan, albumin, α1-antitripsin, transferrin, haptoglobulin, immunoglobulin G va immunoglobulin A) koʻp boʻlgani uchun ularni kamaytirish kolonkasi yordamida zardobdan chiqarib tashlash tavsiya etiladi.
Oʻsimlik toʻqimasidan oqsil ekstraksiyasi
Yangi, yumshoq oʻsimlik toʻqimasini, masalan, yoʻsin va boshqalarni, maydalangan namuna materialini ultratovush bilan ishlov berish uchun lizis buferiga joylashtirishning oʻzi bilan oson parchalash mumkin. Urugʻlar, pixta ignabarglari va boshqalar kabi qattiq, yogʻochlashgan oʻsimlik toʻqimalari quruq holda maydalanishi kerak. Ayrim qattiq, yogʻochsimon oʻsimlik materiallari ultratovush bilan ekstraksiya qilinishidan oldin suyuq azotda muzlatilishi va maydalanishi kerak. Oʻsimlik hujayra kulturalari suspenziyalari uchun lizis buferida 30 dan 150 soniyagacha ultratovush bilan ishlov berish odatda yetarli boʻladi. Qovoq urugʻlari kabi qattiqroq materiallar quyida bayon qilinganidek yanada intensiv ultratovushli ishlovni talab qiladi.
Qovoq urugʻlaridan albuminni ultratovush yordamida ekstraksiya qilish protokoli
Mayin maydalangan qovoq urugʻi kukunidan albumin oqsilini ultratovush yordamida ekstraksiya qilish uchun 250mL shisha stakanga 10 g yogʻsizlantirilgan qovoq urugʻi kukuni va erituvchi sifatida 100 mL deionizatsiyalangan suv qoʻshiladi. Oqsil ekstraksiyasi ikki bosqichdan iborat: birinchi bosqichda namunaga S24d7 sonotrodi bilan jihozlangan zond turidagi UP400St (400W, 24kHz) ultratovush qurilmasi yordamida ultratovush bilan ishlov beriladi. Ultratovushli gomogenizatsiya davomida shisha stakan sovuq suvli hammomga joylashtiriladi. UP400St ultratovush qurilmasining ulanadigan harorat sensori va haroratni nazorat qilish sozlamalari namuna haroratining doimo 30°C dan past saqlanishini taʼminlaydi. Ultratovush bilan ishlov berish davomida haroratni aniq nazorat qilish albumin denaturatsiyasining oldini oladi. Ikkinchi bosqichda ekstraksiya aralashtirgich yordamida 200 rpm tezlikda va 30°C da bajarilgan. Shundan keyin stakan termostatik chayqatgichga oʻtkaziladi. Globulin distillangan suv bilan dializ orqali olib tashlanadi. Globulin olib tashlangach, albumin profilini aniqlash uchun oqsil ekstraktidan namuna olish mumkin; keyinchalik albuminni koagulyatsiya qilish uchun u 0,1 M HCl yordamida pI=3,0 gacha sozlanadi. Qattiq faza 5000g, 20°C da sentrifugalash orqali ajratiladi va deionizatsiyalangan suvda qayta eritiladi. Albumin konsentratidagi oqsil ulushini oshirish uchun albumin koagulyatsiyasi ikki marta bajariladi.
Guruch kepagidan oqsil konsentratini tayyorlash uchun ultratovushli ishqoriy oqsil ekstraksiyasi shuni koʻrsatadiki, ultratovush bilan ishlov berish anʼanaviy ekstraksiya usullariga nisbatan sezilarli darajada qisqaroq ekstraksiya vaqtida yuqoriroq oqsil unumini beradi.
Faol iNOS fermenti uchun namuna tayyorlash protokoli
Toʻliq faol iNOS fermentini olish uchun (masalan, dori vositalari skriningi uchun) quyidagi protokol tavsiya etiladi: hujayra suspenziyasi muz ustiga joylashtirilishi va UP100H bilan 10µm amplitudada, 5 sec. ultratovush bilan ishlov berish hamda muz ustida 25 sec. tanaffusdan iborat sikl rejimida ishlov berilishi kerak. Jarayon taxminan 3 marta takrorlanishi kerak. Ultratovush bilan ishlov berish sikllari orasidagi tanaffus harorat koʻtarilishini kamaytiradi va shu sababli denaturatsiya xavfini pasaytiradi.
Oqsilni ultratovush yordamida solyubilizatsiya qilish
Ultratovush bilan ishlov berish odatda bir necha soat talab qiladigan oqsil solyubilizatsiyasi jarayonini tezlashtirishi mumkin. Namunani haddan tashqari qizdirmaslik hamda mochevina saqlovchi eritmalarda oqsilning parchalanishi va modifikatsiyalarining oldini olish uchun ultratovush impulslari bir necha soniyadan uzoq davom etmasligi kerak.
UP200Ht ultratovush qurilmasi kichik namunalarga ultratovush bilan ishlov berish uchun 2mm S26d2 mikro uchi bilan.
Oqsil ekstraksiyasi uchun ultratovush uskunalari
Hielscher Ultrasonics hujayralar, toʻqimalar, bakteriyalar, mikroorganizmlar, achitqilar va sporalarni parchalash uchun ultratovushli gomogenizatorlarning keng assortimentini taklif etadi.
Hielscher laboratoriya ultratovush qurilmalari kuchli va ishlatish uchun qulay. 24/7 ishlash uchun yaratilgan ushbu qurilmalar mustahkam va samarali laboratoriya hamda stol usti qurilmalari sifatida ishlab chiqilgan. Barcha qurilmalarda chiqish energiyasi va amplitudani aniq boshqarish mumkin. Aksessuarlarning keng assortimenti uskunani sozlash uchun qoʻshimcha imkoniyatlar yaratadi. VialTweeter, UP200Ht, UP200St va UP400St kabi raqamli ultratovush qurilmalarida integratsiyalangan harorat nazorati va maʼlumotlarni avtomatik qayd etish uchun ichki SD karta mavjud.
Bir nechta namunaga bilvosita, oʻzaro ifloslanishsiz va bir vaqtda ultratovush bilan ishlov berish uchun biz VialTweeter yoki ultratovushli CupHorn ni taklif etamiz.
Quyidagi jadval namuna tayyorlash, hujayralarni parchalash va ekstraksiya uchun ultratovush qurilmalarimiz haqida umumiy maʼlumot beradi. Har bir ultratovushli gomogenizator haqida batafsil maʼlumot olish uchun qurilma turini bosing. Yaxshi tayyorgarlikdan oʻtgan va koʻp yillik tajribaga ega texnik xodimlarimiz namuna tayyorlash vazifangiz uchun eng mos ultratovush qurilmasini tanlashda sizga mamnuniyat bilan yordam beradilar!
| Partiya hajmi | Hajmiy oqim tezligi | Tavsiya etiladigan qurilmalar |
|---|---|---|
| 10 tagacha flakon yoki probirka | n.a. | VialTweeter |
| koʻp chuqurchali / mikrotitr plastinkalari | n.a. | UIP400MTP |
| bir nechta probirka / idish | n.a. | CupHorn |
| 1 dan 500mL gacha | 10 dan 200mL/min gacha | UP100H |
| 10 dan 1000mL gacha | 20 dan 200mL/min gacha | UP200Ht, UP200St |
| 10 dan 2000mL gacha | 20 dan 400mL/min gacha | UP400St |
Qoʻllanilish sohasi, material va namuna hajmiga qarab, namuna tayyorlashingiz uchun eng mos konfiguratsiyani tavsiya qilamiz. Bugunoq biz bilan bogʻlaning!
Biz bilan bogʻlaning! / Bizdan soʻrang!
Hielscher raqamli ultratovush qurilmalari brauzer orqali masofadan boshqarish va integratsiyalangan SD kartaga maʼlumotlarni avtomatik qayd etish funksiyalariga ega.
VialTweeter bilvosita ultratovush bilan ishlov berish uchun.
Bilish foydali boʻlgan maʼlumotlar
Proteomika
Proteomika oqsillar va proteomni oʻrganadigan tadqiqot sohasidir. Oqsillar organizmlarda juda koʻp turdagi hayotiy muhim vazifalarni bajaradi. Proteom maʼlum bir vaqtda genom, hujayra, toʻqima yoki organizm tomonidan ekspressiya qilinadigan oqsillarning toʻliq toʻplamidir. Proteom vaqt oʻtishi hamda hujayra yoki organizm duch keladigan turli talablar yoki stresslarga qarab oʻzgaradi. Aniqroq aytganda, u maʼlum bir hujayra yoki organizm turida, maʼlum bir vaqtda, belgilangan sharoitlarda ekspressiya qilinadigan oqsillar toʻplamidir. Atama oqsillar va genom soʻzlarining birikmasidan hosil boʻlgan. Proteomika proteomni oʻrganishdir.
Oqsil
Oqsillar bir yoki bir nechta uzun aminokislota qoldiqlari zanjirlaridan tashkil topgan yirik biomolekulalar – makromolekulalar deb ataladigan molekulalardir. Oqsillar ham oʻsimlik, ham hayvon kelib chiqishiga ega barcha organizmlarda mavjud va biologik funksiyalarning aksariyati uchun juda muhimdir. Oqsillar koʻp biologik maʼlumotni oʻz ichiga olgani sababli ular tahliliy maqsadlarda, masalan, proteomik tadqiqotlar uchun ekstraksiya qilinadi. Oqsillar bajaradigan eng muhim funksiyalarga metabolik reaksiyalarni katalizlash, DNA replikatsiyasi, taʼsirlarga javob berish va molekulalarni bir joydan boshqa joyga tashish kiradi. Oqsillar bir-biridan, avvalo, aminokislotalar ketma-ketligi bilan farqlanadi; bu ketma-ketlik ularning genlaridagi nukleotidlar ketma-ketligi bilan belgilanadi va odatda oqsilning uning faolligini belgilaydigan oʻziga xos uch oʻlchamli tuzilishga buklanishiga olib keladi. Oqsillar – peptidlar bilan bir qatorda – oziq-ovqatning asosiy tarkibiy qismlaridan biridir. Shu sababli proteomika oziq-ovqat fanida jarayonlarni, oziq-ovqat xavfsizligini va oziqlanish qiymatini baholashni optimallashtirish uchun kuchli vositadir.
Cloud Point Extraction
Cloud Point Extraction analitlarni ajratish va oldindan konsentrlash uchun tahlildan oldingi jarayondir. Ultratovush bilan ishlov berish bilan birga qoʻllanganda bulutlanish nuqtasida ekstraksiyani jadallashtirish mumkin, bu esa jarayonni samaraliroq, tezroq va ekologik jihatdan qulayroq qiladi. Ultratovush bilan ishlov berish qoʻllanganda bulutlanish nuqtasida ekstraksiya analitlarni tayyorlashning sezilarli darajada samaraliroq usuliga aylanadi. Ultratovush yordamida jadallashtirilgan bulutlanish nuqtasida ekstraksiya haqida koʻproq oʻqing!
Gel elektroforezi
Gel elektroforezi DNA, RNA va oqsillar kabi makromolekulalarni, shuningdek ularning fragmentlarini oʻlchami va zaryadiga asoslanib ajratish hamda tahlil qilishning asosiy usulidir. U klinik kimyoda oqsillarni zaryadi va/yoki oʻlchami boʻyicha ajratish uchun (IEF agaroza, asosan oʻlchamga bogʻliq emas), biokimyo, molekulyar biologiya va proteomikada esa DNA va RNA fragmentlarining aralash populyatsiyasini uzunligi boʻyicha ajratish, DNA va RNA fragmentlarining oʻlchamini baholash yoki oqsillarni zaryadi boʻyicha ajratish uchun qoʻllanadi.
Hujayra kulturalari
Hujayra kulturasi hujayralar nazorat qilinadigan sharoitlarda oʻstiriladigan boshqariladigan oʻstirish jarayonidir. Hujayra kulturasi sharoitlari har bir hujayra turi uchun farq qiladi. Umuman olganda, hujayra kulturasi muhiti zarur oziq moddalar (aminokislotalar, uglevodlar, vitaminlar, minerallar), oʻsish omillari, gormonlar va gazlarni (CO2, O2) yetkazib beradigan va fizik-kimyoviy muhitni (pH buferi, osmotik bosim, harorat) tartibga soladigan substrat yoki muhitga ega mos idishdan (masalan, Petri kosachasi) iborat. Koʻpchilik hujayralarga sirt yoki sunʼiy substrat kerak boʻladi, boshqa hujayra kulturalarini esa kultura muhitida erkin suzuvchi holatda oʻstirish mumkin (suspenzion kultura, hujayra suspenziyasi).
Hayvon hujayra liniyalarining ommaviy kulturalari virusli vaksinalar va biotexnologiya orqali olinadigan boshqa mahsulotlarni sanoat miqyosida ishlab chiqarishda qoʻllanadi. Inson ildiz hujayralari hujayralar sonini koʻpaytirish va transplantatsiya maqsadlari uchun ularni turli somatik hujayra turlariga differensiatsiya qilish uchun oʻstiriladi.
Toʻqima namunalari
Toʻqima atamasi hujayraviy oraliq tuzilmani ifodalaydi; bunda hujayraviy material tashkiliy daraja jihatidan hujayralar bilan yaxlit organ oʻrtasida joylashadi. Toʻqimada bir xil kelib chiqishga ega, birgalikda muayyan funksiyani bajaradigan oʻxshash hujayralar birlashadi. Bir nechta toʻqimaning funksional birlashishi orqali organlarning murakkab tuzilmalari hosil boʻladi.
Toʻqima biologiya, gistologiya/gistopatologiya, parazitologiya, biokimyo, immunogistokimyo sohalaridagi tadqiqotlar, shuningdek oʻstirish va DNA ekstraksiyasi uchun namuna sifatida olinadi. Hayvon toʻqimasi (kichik boʻlim: sutemizuvchilar toʻqimasi) va oʻsimlik toʻqimasini farqlash mumkin. Hayvon toʻqimalari toʻrtta asosiy turga boʻlinadi: biriktiruvchi, mushak, nerv va epiteliy toʻqimalari. Oʻsimlik toʻqimasi quyidagi uchta toʻqima tizimiga boʻlinadi: epidermis, asosiy toʻqima va oʻtkazuvchi toʻqima.
Toʻqima namunalarini hayvon yoki oʻsimlik qismlaridan, masalan, suyak, mushak, barglar va boshqalardan tayyorlash mumkin.
Organizm suyuqliklari
Qon, zardob, plazma, orqa miya suyuqligi, soʻlak va sinovial suyuqlik diagnostika uchun ahamiyatli maʼlumotlarning boy manbai boʻlgan organizm suyuqliklaridir. Shu sababli organizm suyuqliklari namunalarini tahlil uchun puxta tayyorlash muhimdir. Birinchi qiyinchilik organizm suyuqliklaridagi tarkibiy qismlarning keng dinamik diapazoni bilan bogʻliq.
Oqsil konsentratsiyasini aniqlash
Bradford tahlili, Lowry tahlili va bitsinxonin kislotasi (BCA) tahlili oqsillar konsentratsiyasini aniqlash uchun keng qoʻllanadigan tahlillardir. Qoramol zardobi albumini (BSA) eng koʻp ishlatiladigan oqsil standartlaridan biridir.
Lizis buferi
Lizis buferi hujayraviy material yoki toʻqimaga (toʻqima kulturasi, oʻsimlik, bakteriyalar, zamburugʻlar va boshqalar), shuningdek hujayralarning biror tuzilma tarkibida ekanligiga va tuzilma turiga qarab tanlanishi kerak. Oqsillar, membranalar va organellalarni ekstraksiya qilish uchun lizis buferlarining keng assortimenti bir yoki bir nechta detergent bilan tayyorlanadi. Detergent odatda sinab koʻrish va xatolarni aniqlash orqali yoki – mavjud boʻlsa – mavjud oqsil ekstraksiyasi protokoliga muvofiq tanlanadi. Detergent toʻqima manbai va oqsillarga mos boʻlishi kerak. Umuman olganda, ekstraktning maksimal funksionalligini saqlash uchun muayyan toʻqima / oqsilga taʼsir qiladigan eng yumshoq detergent tanlanadi. Bundan tashqari, membranalar va organellalarni ekstraksiya qilishda yumshoq detergent membrananing butunligini saqlaydi. Lizis buferlarida keng qoʻllanadigan detergentlar asosan noionogen yoki svitterionli boʻladi, masalan, CHAPS, dezoksixolat, Triton™ X-100, NP40 va Tween 20.
Masalan, miya, jigar, ichak, buyrak, taloq va boshqa toʻqimalarni oddiygina RIPA bilan buferlash mumkin – biroq proteaza ingibitorlari va DTT (masalan, gel elektroforezi uchun) qoʻshilishi kerak.
Skelet mushagi toʻqimasi uchun lizis buferi (muzdek): 20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1 % Triton X-100, 10 % (w/v) glitserol, 1 mM EDTA, proteaza va fosfataza ingibitorlari aralashmasi qoʻshilgan 1 mM ditiotreitol
Keng qoʻllanadigan buferlar va ularning pH diapazoni jadvali. Umuman olganda, bu buferlar odatda 20–50 mM konsentratsiyalarda ishlatiladi.
| Bufer | pH diapazoni |
|---|---|
| Limon kislotasi – NaOH | 2,2 – 6,5 |
| Natriy sitrat – limon kislotasi | 3,0 – 6,2 |
| Natriy asetat – sirka kislotasi | 3,6 – 5,6 |
| Kakodil kislotasining natriy tuzi – HCl | 5,0 – 7,4 |
| MES – NaOH | 5,6 – 6,8 |
| Natriy digidrogenfosfat – dinatriy gidrogenfosfat | 5,8 – 8,0 |
| Imidazol – HCl | 6,2 – 7,8 |
| MOPS – KOH | 6,6 – 7,8 |
| Trietanolamin gidroxlorid – NaOH | 6,8 – 8,8 |
| Tris – HCl | 7,0 – 9,0 |
| HEPES – NaOH | 7,2 – 8,2 |
| Tritsin – NaOH | 7,6 – 8,6 |
| Natriy tetraborat – bor kislotasi | 7,6 – 9,2 |
| Bitsin – NaOH | 7,7 – 8,9 |
| Glitsin – NaOH | 8,6 – 10,6 |
Koʻpchilik buferlarda pH haroratga bogʻliq boʻladi. Bu ayniqsa Tris buferlariga xosdir. pKa 25°C da 8,06 dan 0°C da 8,85 gacha oʻzgaradi.
(Buferning pH va pKa qiymatlari: pH suvli eritmadagi vodorod ionlari konsentratsiyasini oʻlchaydi. pKa (= kislotaning dissotsiatsiya konstantasi) unga bogʻliq, ammo aniqroq oʻlchov boʻlib, molekulaning muayyan pH qiymatida qanday tutishini oldindan taxmin qilishga yordam beradi.)
TRIzol
TRIzol guanidiniy tiotsianat–fenol–xloroform ekstraksiyasi davomida RNA/DNA/oqsilni ekstraksiya qilish uchun ishlatiladigan kimyoviy eritmadir. Ultratovush yordamida jadallashtirilgan TRIzol ekstraksiyasi bir xil namunadan yuqori DNA, RNA va oqsil unumlarini beradi va shu jihatdan boshqa ekstraksiya usullaridan ustun turadi.
Adabiyotlar/Manbalar
- Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonic assisted alkali extraction of protein from defatted rice bran and properties of the protein concentrates. Int J Food Sci Technol 44: 1843–1849.
- Simões, André E.S:; Pereira, Diane M.; Amaral, Joana D.; Nunes, Ana F.; Gomes, Sofia E.; Rodrigues, Pedro M.; Lo, Adrian C.; D’Hooge, Rudi; Steer, Clifford J.; Thibodeau, Stephen N.; Borralho, Pedro M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Efficient recovery of proteins from multiple source samples after trizol or trizol LS RNA extraction and long-term storage. BMC Genomics 2013, 14:181.