C. Elegans namunalarini ultratovush yordamida tayyorlash
C. elegans , nematoda qurti biologiyada keng qo'llaniladigan model organizmdir. Tahlil qilishdan oldin namunani tayyorlash liziz, oqsil va lipid ekstraktsiyasini, shuningdek, sonikatsiya orqali ishonchli bajarilishi mumkin bo'lgan RNK parchalanishini talab qiladi. Ultrasonik hujayra buzuvchilari C. elegans namunalarini tez tayyorlash uchun ishonchli, murakkab va ishlatish uchun qulay qurilmalardir.
C. Elegans namunalarini ultratovush yordamida tayyorlash
C. elegans - yumaloq qurtlar bo'lib, genomika, rivojlanish biologiyasi va kasalliklarni tekshirish uchun tadqiqot laboratoriyalarida keng qo'llaniladi. C. elegans genomidagi ko'plab genlar odamlarda funktsional o'xshashlarga ega. Shunday qilib, nematod qurti inson kasalliklari uchun juda foydali modeldir. C. elegansni keng qo'llashning boshqa afzalliklari orasida bakteriyalar (masalan, E. coli) bo'lgan plastinkalarda oson va arzon o'stirish, shaffofligi, qulay ishlov berish, shuningdek, qurtlarni muzlatish va uzoqroq vaqt saqlash imkoniyati mavjud.
Protein va lipidlarni tahlil qilish laboratoriyalarda muntazam ravishda olib boriladigan protsedura bo'lib, ultratovush yordamida namuna tayyorlash har bir rivojlanish bosqichida (ya'ni, embrionlar, L1-L4 lichinkalari, kattalar) C. elegans nematodalarini lize qilishning belgilangan usuli hisoblanadi. C. elegans maqsadli oqsillarni haddan tashqari ifodalash uchun protein ekspresyon tizimi sifatida ham qo'llanilganligi sababli, yuqori protein hosildorligini ta'minlaydigan ishonchli, takrorlanadigan lizis va oqsillarni ekstraktsiyalash usuli talab qilinadi. Ultrasonik hujayra buzilishi va ekstraktsiya tizimlari prob tipidagi homogenizatorlar va ko'p namunali ultrasonikatorlar sifatida mavjud. Qulay namunalarni tayyorlash va barcha turdagi namuna o'lchamlarini ta'minlash uchun Hielscher Ultrasonics sizning laboratoriya protsedurangiz uchun ideal ultratovushli hujayra buzilishiga ega.
- Chuvalchang gomogenatlarini tayyorlash
- protein ekstraktsiyasi
- lipid ekstraktsiyasi
- Protein miqdorini aniqlash
- Immunitetning pasayishi
- Western Blotting
- RNK ekstraktsiyasi
- Enzimatik tahlillar

VialTweeter 10 ta probirkani bir vaqtning o'zida sonikatsiya qilish uchun ko'p namunali tayyorlash moslamasi.
C. Elegans buzilishi va lizis uchun ultratovush protokollari
C. elegansning ultratovushli gomogenizatsiyasi va lizisi va undan keyingi oqsil va lipid ekstraktsiyasi turli xil gomogenizatsiya va lizis buferlari va hokazolar yordamida turli xil protseduralar yordamida amalga oshirilishi mumkin. Barcha liziz protokollarining umumiy tomoni shundaki, oqsil parchalanishining oldini olish uchun namunalar doimiy ravishda muz ustida saqlanishi kerak. Quyida biz sizga yuqori sifatli protein yoki lipid o'z ichiga olgan C. elegans namunalarini tayyorlash uchun ishonchli va tezkor ultratovushli liziz va ekstraksiya protokollarini taqdim etamiz.
Ultrasonik C. elegans Lysisning afzalliklari
- ishonchli
- Qayta tiklanadigan
- aniq harorat nazorati ostida
- ishonchli jarayon nazorati
- yumshoq usul
- qo'llash oson
- xavfsiz
C. elegans namunalaridan ultratovushli protein ekstraktsiyasi
C. elegans qurtlarining ultratovushli lizis va oqsil ekstraktsiyasi turli protokollar yordamida amalga oshirilishi mumkin. Quyida biz sizga oqsillarni qayta ishlab chiqarish natijalari uchun bir nechta ishonchli va tezkor lizis protokollarini taqdim etamiz.
C. elegans qurtlaridan sitozolik ekstraktni ultratovush orqali tez tayyorlash
Quyidagi protokol yordamida siz C. elegans lizatlarini 30 daqiqadan kamroq vaqt ichida tayyorlashingiz mumkin.
C. elegans to'plami
Kerakli C. elegans qurtlarini 1,5 ml fosfatli buferli sho'r suvga (PBS) tanlang yoki ularni 1,5 ml PBS bilan plastinkadan yuving. Pellet hosil qilish uchun 2000 rpm tezlikda 1 daqiqa santrifüj qiling. Namunalarni doimo muz ustida saqlang.
Keyin, qurtlarni PBS bilan ikki marta yuving.
Shundan so'ng, qurtlarni ikki marta ddH bilan yuving2O.
Qurtlarni kamida 500ul gomogenizatsiya tamponida (HB) qayta to'ldiring. Qurt namunalari endi ultratovushli lizizga tayyor.
Protein ekstraktining yuqori sifati uchun siz qurtlarni har birini 5 daqiqa davomida PBS va steril, o'ta toza suvda (ddH) yuvish orqali bakterial ifloslanishni kamaytirishni xohlashingiz mumkin.2O) yoki saxaroza floatatsiyasini bajaring. Chuvalchang namunalarini doimiy ravishda muz ustida saqlang.
Ultrasonik C. elegans Lizis protokoli
- Ultrasonik gomogenizator foydalanishga tayyor bo'lishi uchun ultrasonikatorni oldindan tayyorlaganingizga ishonch hosil qiling (zond o'rnatilgan, sonikatsiya dasturi oldindan o'rnatilgan).
- UP200St yoki UP200Ht bilan C. elegans lizis uchun ultratovush mikrotip (masalan, 2 mm S26d2 probi; chap rasmga qarang) yordamida 40% amplitudada 1 soniya davomida 30 soniyali pauza bilan amalga oshirilishi kerak. Har 1 soniya uchun 30 soniyali pauzalar bilan 5 ta sonikatsiya davri C. elegans lizisi uchun idealdir. Agar siz lizisni birinchi marta amalga oshirsangiz, mikroskop yordamida har bir pulsdan keyin namunaning kichik alikvotlarida lizis rivojlanishini tekshirishingiz mumkin.
- Qurtlar buzilganda lizis muvaffaqiyatli yakunlanadi. Haddan tashqari sonikatsiya yadrolarning parchalanishiga olib keladi va namuna yopishqoq yoki ko'pikli bo'lganda ko'rinadi. Namuna degradatsiyasini oldini olish uchun, agar kerak bo'lsa, ko'proq pulslardan foydalaning. Yuqori sifatli oqsil ekstraktlarini olish uchun har bir ultratovush puls siklining vaqtini oshirmang.
- Ultrasonik lizizlangan qurtlarni 4ºC da 10 daqiqa davomida 14000 rpm tezlikda santrifüj qilish orqali hujayra lizatini tozalang.
- Keyin, supernatantni yangi naychaga o'tkazing va immunopresipitasyon yoki boshqa tahlillarga tayyorlang.
Agar ultratovush qurilmangiz stendga o'rnatilgan bo'lsa, muzli vannani namuna naychalari bilan ultratovush tekshiruvi ostiga qo'ying va ultratovushli probni 1,5 ml trubkaga joylashtiring.
Gomogenizatsiya buferi uchun eslatma: Yuqoridagi ultratovushli lizis protokoli uchun gomogenizatsiya buferini quyidagicha tayyorlang:
- 15 mM Hepes pH 7,6 – 15 ml 0,5 M
- 10 mM KCl – 2,5 ml 2 M
- 1,5 mM MgCl2 – 0.75 ml 1 M
- 0.1 mM EDTA – 100 ul 0,5 M
- 0.5 mM EGTA – 2,5 ml 0,1 M
- 44 mM saxaroza – 14,7 ml 50%
- Ishlatishdan oldin darhol qo'shing: 1mM DTT – 1M dan 1000x
- Bundan tashqari, proteaz inhibitori
UIP400MTP plastinka sonikatoridan foydalangan holda 96-quduqli plastinalarda C. elegansning yuqori mahsuldorlikdagi lizisi
C. elegans Lysis (kattalar nematodalari)
UIP400MTP 80% amplituda, 20 tsikl (har bir sonikatsiya davri: 30 sek ON, 30 sek OFF)
Lizis buferi:
- Variant 1) 4% SDS, 0,1 M Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
- Variant 2) Co-immunoprecipitation (co-IP): 10 mM Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,5 % NP-40 (To'liq proteinaz inhibitori kokteyli)
Yuqori samarali DNKning parchalanishi
C. elegans (kattalar nematodalari) DNK 200-300bp: UIP400MTP plastinka sonikatori – 80% amplituda, 30 impulsni o'rnating – har 30 soniyada yoqiladi, 30 soniya o'chiriladi

UIP400MTP plastinka sonikatori yuqori mahsuldorlikka ega namunalarni tayyorlash uchun ko'p quduqli, mikrotitrli plitalar va 96 quduqli plitalardagi namunalarni bir xilda sonikatsiya qiladi.
Miqdoriy yaqinlikni tozalash tahlillari uchun C. elegansning ultratovushli lizisi
C. elegans embrionlari (har bir replikatda ~2 million) yosh gravid germafroditlarni oqartirish yo'li bilan biologik uch nusxada yangi yig'ib olindi va muzda ultratovush qilindi (tsikl: 0,5 s, amplituda: 40-45%, 5 zarba/sessiya, 5 seans, seanslar orasidagi interval : 30 s; UP200S ultratovushli protsessor mikro-uchli S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) lizis tamponida (umumiy hajmi: ~600 mkl; 50 mm Tris-HCl, pH 7,4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTTly, 10%rol , proteaz inhibitörleri aralashmasi, 0,1% Nonidet P-40 o'rnini bosuvchi). Sonikatsiyadan so'ng, Nonidet P-40 o'rnini bosuvchi 1% gacha qo'shildi va lizatlar 30 daqiqa davomida 4 ° C da bosh aylanishi bilan inkübe qilindi, so'ngra 4 ° C da 20 daqiqa davomida 20,000 × g santrifüjlash. Keyin tozalangan lizat yuqori lipid qatlamini buzmasdan aspiratsiya qilindi va anti-GFP agaroza boncuklariga yoki bloklangan nazorat boncuklariga (40-50 mkl) yarmiga bo'lindi. 60-90 daqiqa davomida 4 ° C da dumi ustida aylantirilgandan so'ng, boncuklar bir marta 0,1% Nonidet P-40 o'rnini bosuvchi lizis buferi bilan yuvildi, so'ngra bufer I (25 mm Tris-HCl, pH) da ikki marta yuvildi. 7,4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) yoki bufer II (1 mm) Tris-HCl, pH 7,4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) yoki ikkalasi. GFP:MBK-2 pull-downs uchun turli xil yuvish shartlari yordamida ikkita alohida tajriba o'tkazildi. Proteinlar xona haroratida 50 mkl 6 m karbamid/2 M tiokarbamidda orbital chayqatish orqali elutsiya qilindi. MBK-1 :: GFP pastga tushirish tajribalari uchun oqsillar ikki marta 50 mkl 8 m guanidinyum xloridda 90 ° C da silkitib, so'ngra etanol cho'kmasi bilan elutsiya qilindi. Elutlangan oqsil namunalari keyin eritmada hazm qilindi.
(qarang. Chen va boshqalar, 2016)
Ultrasonik qurtlarni homogenlash va liziz
C.elegans lizisi va oqsillarni ekstraksiya qilish jarayoni uchun har bir namunada tegishli bosqichning 30 000 nemotodi to'plangan va muzli sovuq S-bazalda yuvilgan, 2 minut davomida 1500 aylanish tezligida santrifüjlash orqali konsentrlangan, muzli S- bilan olti marta yuvilgan. qoldiq bakteriyalarni olib tashlash uchun bazal, so'ngra foydalanishga tayyor bo'lgunga qadar muzda saqlanadi. Proteinni olish uchun gravid-kattalar qurtlari oxirgi S-bazal yuvishdan keyin ixcham pellet hosil qilishiga ruxsat berildi. Keyin qurt granulalari 1 ml muzli sovuq ekstraksiya tamponida [20 mM kaliy fosfat, pH 7,4, 2 mm EDTA, 1% Triton-X-100, proteaz inhibitörleri (Sigma P2714)] qayta suspenziya qilindi va darhol qayta ishlandi.
30 000 ta katta yoshli qurtlar (~100 mg nam vaznga to'g'ri keladi) zond tipidagi ultratovush apparati (masalan, MS2 mikrotipli UP50H) yordamida 40% amplituda 3 sek dan 10 tsikl davomida, 30 dyuymda ultratovushli ultratovush yordamida muz ustida ultratovush qilindi. 1 ml muzdek sovuq ekstraksiya bufer. (qarang. Baskharan va boshq. 2012)
C. elegans dan ultratovushli lipid ekstraktsiyasi
Metabolomikaning bir tarmog'i bo'lgan lipidomikada biologik tizimlarning lipid komplementi tavsiflanadi va tahlil qilinadi. C. elegans lipidomikada metabolik lipidlarning o'zaro ta'sirini va ularning salomatlik va umr ko'rishga ta'sirini o'rganish uchun keng qo'llaniladi.
Ultrasonik lizis va ekstraktsiya C. elegans embrionlari, lichinkalar va kattalar qurtlaridan sfingolipidlar kabi lipidlarni chiqarish uchun ishlatiladi. Ultrasonikatsiya qurt gomogenatlarini tayyorlash va keyinchalik namunadan lipidlarni olish uchun ishlatiladi.
C. elegans dan ultratovushli lipid olish protokoli
C. elegans pelletini muz ustida eritib oling va 0,5 ml ultrasuv bilan qayta suspenziya qiling. C. elegans namunalarini 1,5 ml lik probirkalarda sonicate qiling, shu bilan birga namunalarni muz ustida doimiy ravishda saqlang.
Sonikatsiya prob-ultrasonikator yordamida amalga oshirilishi mumkin, masalan UP200Ht, ultratovush namunasini tayyorlash birligi VialTweeter (bir vaqtning o'zida 10 ta namunani sonikatsiya qilish) yoki UIP400MTP (96-quduqli plitalar kabi ko'p quduqli plitalarning sonikatsiyasi uchun). UP200Ht bilan ultratovushli liziz uchun S26d2 mikro uchidan foydalaning. Raqamli menyuda ultratovushli tsikl rejimini oldindan o'rnating. Amplitudani 10% ga o'rnating va 30 sek pauza bilan 20 tsikldan iborat 2 soniya pulsli sonication tsikli rejimini o'rnating. har bir ultrasonik pulsatsiya portlashi o'rtasida.
Supernatantlarni vintli qopqoqli shisha naychalarga o'tkazing. Har bir shisha naychaga 1 ml ultrasuv qo'shib, so'ngra har bir shisha naychaga 6 ml xloroform/metanol (nisbat = 2:1) aralashmasi qo'shib Folch ekstraktsiyasini bajaring.
Har bir shisha naychani 30 soniya davomida 4 marta aylantiring. Fazalarni ajratishni yanada kuchaytirish uchun naychalarni 1258 xg da 15 daqiqa davomida santrifüj qiling (Eppendorf, 5810 R). Pasteur pipetkasi yordamida pastki hidrofobik fraktsiyani toza shisha naychaga o'tkazing. Pastki hidrofobik fraksiyani azotli evaporatatorda azot oqimi ostida quriting. Quritilgan pelletni ishlatilgunga qadar -80 °C muzlatgichda saqlang.
Qurt lizatlarini ultratovush yordamida tayyorlash
Qurt lizati: L4 bosqichidagi qurtlar yig'ib olindi va M9 buferi (42,26 mM Na) bilan uch marta yuvildi.2HPO4, 22,04 mM KH2PO4, 85,56 mM NaCl va 0,87 mM MgSO4) barcha bakteriyalarni yo'q qilish uchun. M9 buferini iloji boricha olib tashlangandan so'ng, qurtlar lizis buferida qayta suspenziya qilindi: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM fosfat b-glitserin, 0,1% (v/v) triton, 50 mM natriy ftorid, 1 mM natriy ortovanadat, 5 mM natriy pirofosfat, 0,2 mM fenilmetansülfonilflorid va proteaz inhibitori. Qurtlar suyuq azotda muzlatilgan va 37 ° C da uch marta eritilgan, so'ngra 10 ta namunali naychalarni tayyorlash uchun ultratovushli VialTweeter qurilmasi bilan qurtlar quruq muzda ultratovushli ultratovush yordamida ultratovush bilan ishlov berilgan. Sonikatsiya 50% amplituda 2 soniyadan 10 tsiklda amalga oshirildi. sonication portlashlari orasida 30 soniya pauza bilan. Shundan so'ng, namunalar 12000 rpm tezlikda 4 ° C da 15 daqiqa davomida santrifüj qilindi. Supernatant to'plangan va -70 ° C da saqlanadi. Bredford tahlili orqali oqsil miqdorini aniqlash uchun alikot ishlatilgan.
Umumiy glutation, GSH va GSSG ni aniqlash: Glutation miqdorini aniqlash uchun lizatlar va aniqlash o'sha kuni amalga oshirildi. Glyukoza bilan oziqlangan va nazorat L4 lichinkalari yig'ib olingan va M9 buferi bilan uch marta yuvilgan. M9 buferini iloji boricha olib tashlaganingizdan so'ng, qurtlar muzdek sovuq metafosfor kislotasida (5% w/v) qayta suspenziya qilindi, so'ngra qurtlar 2 soniyalik o'nta sonikatsiya tsiklida 50% amplituda ultratovushli VialTweeter bilan muzda ultratovush qilindi. 30 soniya bilan. har bir tsikl o'rtasida pauza. Keyin 12000 rpm tezlikda 4 ̊C da 15 daqiqa davomida santrifüjlanadi.
(Qarang: Alkantar-Fernandez va boshq., 2018)
C. elegans Immunoprecipitation va Western Blotting oldidan namuna tayyorlash
Qisqacha aytganda, embrion ekstraktlari uchun C. elegans L1 lichinkalari katta miqyosdagi suyuq S-o'rta kulturalarda o'stirildi. Embrionlar standart oqartirish usuli yordamida to'plangan va lizis buferida (50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7% glitserin, 0,05% NP-40, 1 tailaza va Prohibiaza) to'xtatilgan. 1⏰ Fosfataza inhibitori kokteyli I va II), suyuq azotda tez muzlatiladi va mikrotipli ultratovushli ultratovush yordamida hujayraning ultratovush parchalanishi bilan parchalanadi. UP200Ht S26d2 bilan 30% amplitudada 10 soniya davomida 10 ta impuls uchun. Agar ko'proq namunalar ultratovushni tayyorlash kerak bo'lsa VialTweeter yoki quduqli plitalar uchun MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP tavsiya etiladi. Sonikatsiyadan so'ng, ekstraktlar 4 ° C da 20 daqiqa davomida 30 000 g da santrifüjlash orqali oldindan tozalandi. Oldindan tozalangan ekstrakt (300 mkg umumiy protein) A-agaroz oqsili bilan o'zaro bog'langan 40 µg anti-CDC-25,1 yaqinlik bilan tozalangan antikor (ushbu tadqiqot) yoki nazorat sifatida xuddi shunday miqdordagi quyon immunoglobulini bilan inkubatsiya qilindi. A-agaroz oqsili bilan o'zaro bog'langan (Ig)G umumiy hajmda 200 µl ishlatilgan. 1% NP-40 ni o'z ichiga olgan lizis buferi, uning kiritilishi oqsillarning matritsaga o'ziga xos bo'lmagan ulanishini kamaytiradi. Namunalar 1 soat davomida 4 ° C da aylantirildi, boncuklar uch marta lizis buferi bilan yuvildi va 30 µl glisin / HCl va 200 mM NaCl, pH 2.2 bilan elutildi. Immunopresipitatsiyadan so'ng, elyuatlar 30µl SDS namunasi buferida suyultirildi, 4 daqiqa davomida 95 ° C ga qadar qizdirildi va odatda kirish uchun umumiy miqdorning 3% va eluatlar uchun 30% SDS-PAGE ga qo'llanildi, so'ngra antiseptik bilan Western blotting amalga oshirildi. -CDC-25.1 (1:400), anti-LIN-23 (1:750), anti-ubiquitin (1:1000), anti-GSK3 (1:500) yoki anti-b-aktin (1:2000) antikorlari. Ekstraktlar immunopresipitatsiyaga duchor etilmagan bo'lsa, bu ekstraktlardan olingan umumiy oqsilning bir xil miqdori SDS namunasi buferida qayta suspenziya qilindi, 95 ° C ga qadar qizdirildi va keyin to'g'ridan-to'g'ri SDS-PAGE ga qo'llanildi va Western blotting orqali tahlil qilindi. (qarang. Segref va boshq. 2020)

Ultrasonik hujayra buzuvchisi UP200St lizis va oqsillarni olish uchun mikro-uchli S26d2 bilan
Aniq harorat nazorati ostida ultratovushli lizis
Biologik namunalar bilan ishlashda haroratni aniq va ishonchli nazorat qilish juda muhimdir. Yuqori haroratlar namunalarda termal sabab bo'lgan protein degradatsiyasini boshlaydi.
Namuna tayyorlashning barcha mexanik usullari singari, sonikatsiya issiqlik hosil qiladi. Biroq, VialTweeter-dan foydalanganda namunalarning harorati yaxshi nazorat qilinishi mumkin. Biz sizga VialTweeter va VialPress yordamida namunalaringiz haroratini kuzatish va nazorat qilish uchun turli xil variantlarni taqdim etamiz.
- Namuna haroratini kuzatish: VialTweeter-ni boshqaradigan ultratovushli protsessor UP200St aqlli dasturiy ta'minot va ulanadigan harorat sensori bilan jihozlangan. Harorat sensorini UP200St ga ulang va harorat sensori uchini namuna naychalaridan biriga joylashtiring. Raqamli rangli sensorli displey orqali siz UP200St menyusida namunaviy sonikatsiya uchun ma'lum bir harorat oralig'ini o'rnatishingiz mumkin. Ultrasonikator maksimal haroratga erishilganda avtomatik ravishda to'xtaydi va namuna harorati belgilangan harorat ∆ pastki qiymatiga tushguncha pauza qiladi. Keyin sonication yana avtomatik ravishda boshlanadi. Bu aqlli xususiyat issiqlikdan kelib chiqadigan buzilishning oldini oladi.
- VialTweeter bloki oldindan sovutilishi mumkin. Titan blokini oldindan sovutish uchun VialTweeter blokini (faqat transdusersiz sonotrod!) muzlatgichga yoki muzlatgichga qo'ying, namunadagi harorat ko'tarilishini kechiktirishga yordam beradi. Iloji bo'lsa, namunaning o'zi ham oldindan sovutilishi mumkin.
- Sonikatsiya paytida sovutish uchun quruq muzdan foydalaning. Quruq muz bilan to'ldirilgan sayoz patnisdan foydalaning va issiqlik tez tarqalishi uchun VialTweeterni quruq muz ustiga qo'ying.
Lizis ilovangiz uchun optimal ultratovushli hujayra buzilishini toping
Hielscher Ultrasonics - bu laboratoriyalar, dastgoh va sanoat miqyosidagi tizimlar uchun yuqori samarali ultratovushli hujayra buzuvchilar va gomogenizatorlarning uzoq vaqtdan beri tajribali ishlab chiqaruvchisi. Sizning bakterial hujayra madaniyati hajmi, tadqiqot yoki ishlab chiqarish maqsadingiz va soatiga yoki kuniga qayta ishlanadigan hujayra hajmi sizning ilovangiz uchun to'g'ri ultratovush hujayra buzuvchisini topish uchun muhim omillardir.
Hielscher Ultrasonics bir vaqtning o'zida ko'p namunali (10 flakongacha), shuningdek, ommaviy namunalarni (ya'ni, mikrotitr plitalari / 96 quduqli plitalar), 50 dan 50 gacha turli quvvat darajalariga ega klassik zond tipidagi laboratoriya ultrasonikatorini bir vaqtning o'zida sonication uchun turli xil echimlarni taklif qiladi. 400 vattdan to'liq sanoat ultratovushli protsessorlarga, tijorat hujayra uchun bir birlik uchun 16000 vattgacha katta ishlab chiqarishda buzilish va oqsillarni ekstraktsiya qilish. Barcha Hielscher ultrasonikatorlari to'liq yuk ostida 24/7/365 ishlashi uchun qurilgan. Mustahkamlik va ishonchlilik ultratovush qurilmalarimizning asosiy xususiyatlari hisoblanadi.
Barcha raqamli ultratovushli gomogenizatorlar aqlli dasturiy ta'minot, rangli sensorli displey va avtomatik ma'lumotlar protokoli bilan jihozlangan, bu ultratovush qurilmasini laboratoriya va ishlab chiqarish korxonalarida qulay ish vositasiga aylantiradi.
Biologik namunalaringizni qanday hujayralar, qanday hajmda, qaysi chastotada va qaysi maqsadda qayta ishlashingiz kerakligini bizga xabar bering. Biz sizga jarayon talablaringiz uchun eng mos ultratovushli hujayra buzilishini tavsiya qilamiz.
Quyidagi jadval ixcham qo'lda ushlab turiladigan gomogenizatorlar va MultiSample Ultrasonikatorlardan tijorat ilovalari uchun sanoat ultratovushli protsessorlarigacha bo'lgan ultratovush tizimlarimizning taxminiy qayta ishlash quvvati haqida ma'lumot beradi:
To'plam hajmi | Oqim darajasi | Tavsiya etilgan qurilmalar |
---|---|---|
96-quduqli / mikrotitrli plitalar | na | UIP400MTP |
0,5 dan 1,5 ml gacha bo'lgan 10 flakon | na | VialTweeter da UP200St |
0.01 dan 250 ml gacha | 5 dan 100 ml / min | UP50H |
0.01 dan 500 ml gacha | 10 dan 200 ml / min | UP100H |
10 dan 2000 ml gacha | 20 dan 400 ml / min | UP200Ht, UP400St |
0.1 dan 20 L gacha | 0.2 dan 4L/min gacha | UIP2000hdT |
10 dan 100 l gacha | 2 dan 10 l / min | UIP4000hdT |
na | 10 dan 100 l / min | UIP16000 |
na | kattaroq | ning klasteri UIP16000 |
Biz bilan bog'lanish! / Bizdan so'rang!
Adabiyot / Adabiyotlar
- Chen J.-X; Cipriani P.G.; Mecenas D.; Polanowska J.; Piano F.; Gunsalus K.C.; Selbach M. (2016): In Vivo Interaction Proteomics in Caenorhabditis elegans Embryos Provides New Insights into P Granule Dynamics. Molecular & Cellular Proteomics 15.5; 2016. 1642-1657.
- Jonathan Alcántar-Fernández, Rosa E. Navarro, Ana María Salazar-Martínez, Martha Elva Pérez-Andrade, Juan Miranda-Ríos (2018): Caenorhabditis elegans respond to high-glucose diets through a network of stress-responsive transcription factors. PLoS One 13(7); 2018.
- Segref, A.; Cabello, J.; Clucas, C.; Schnabel, R.; Johnstone I.L. (2010): Fate Specification and Tissue-specific Cell Cycle Control of the Caenorhabditis elegans Intestine. Molecular Biology of the Cell Vol. 21, 2010. 725–738.
- Henderson S.T., Bonafe M., Johnson T.E. (2006): daf-16 protects the nematode Caenorhabditis elegans during food deprivation. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2006; 61:444–60.
Bilishga arziydigan faktlar
Caenorhabditis elegans
C. elegans uzunligi taxminan 1 mm boʻlgan erkin yashovchi shaffof nematoda (yumaloq qurt) boʻlib, bakteriyalar (masalan, E. coli) bilan oziqlanadi va nisbatan qisqa hayot davriga ega. 20 ° C da, C. elegans (N2) ning laboratoriya shtammi o'rtacha umr ko'rish muddati taxminan 2-3 hafta va avlod vaqti 3 dan 4 kungacha. C. elegans aniq nazorat ostida laboratoriya sharoitida osonlik bilan amalga oshirilishi mumkin bo'lgan ko'p miqdorda o'stirilganda, ular yangi dori vositalarining ishlash printsipi, shuningdek, inson kasalliklaridagi murakkab molekulyar jarayonlardagi ta'siri va o'zaro ta'siri uchun osongina tekshirilishi mumkin. Qisqa genom, qisqa hayot aylanishi va laboratoriya sharoitida oddiy ishlov berish C. elegansni genomika, proteomika, rivojlanish biologiyasi, kasalliklarni tadqiq qilish, dori ishlab chiqish va boshqalar kabi tadqiqotlar uchun ideal model organizmga aylantiradi.
Caenorhabditis elegans qurtlari erkak yoki germafrodit bo'lishi mumkin. Germafroditlarda erkak va ayol jinsiy organlari mavjud. Biroq, ayol qurtlari mavjud emas. Germafroditlar o'z-o'zidan urug'lantirishi mumkin yoki erkak qurtlar bilan ham ko'payishi mumkin. C. elegans har kuni 1000 dan ortiq tuxum ishlab chiqarishi mumkin.
C. elegans asab tizimiga ega boʻlgan eng oddiy organizmlardan biri boʻlganligi uchun nematoda qurti 1963 yildan tadqiqot uchun namunali organizm sifatida foydalaniladi. Neyronlar harakat potentsialini o'tga chiqarmaydi va hech qanday kuchlanish bilan bog'langan natriy kanallarini ifodalamaydi. Germafroditda bu tizim 302 neyronni o'z ichiga oladi, ularning namunasi har tomonlama xaritada ko'rsatilgan, bu konnektom deb ataladi.
C. elegans genomidagi ko'pgina genlar odamlarda funktsional o'xshashlarga ega bo'lib, u inson kasalliklari uchun juda foydali model bo'lib, masalan, rivojlanish biologiyasi, qarish va uzoq umr ko'rishga ta'sir qiluvchi omillarni o'rganish uchun ishlatiladi. Bundan tashqari, C. elegans mutantlari insonning ko'plab kasalliklari, jumladan, nevrologik kasalliklar (masalan, Altsgeymer), tug'ma yurak kasalligi va buyrak kasalliklari uchun modellar beradi.
Bu omillar C. elegansni ko'plab tadqiqot sohalari uchun juda qimmatli modelga aylantirdi. Binobarin, C. elegans butun genom ketma-ketligiga ega boʻlgan birinchi koʻp hujayrali organizm boʻldi. Genomda taxminan 20 470 ta protein kodlovchi gen mavjud. C. elegans genlarining 35% ga yaqini inson gomologlariga ega. Shunisi e'tiborga loyiqki, inson genlari C. elegansga kiritilganda o'zlarining C. elegans gomologlarini almashtirishi bir necha bor ko'rsatilgan. Aksincha, koʻp C. elegans genlari sutemizuvchilar genlari bilan oʻxshash faoliyat koʻrsatishi mumkin.
C. elegansning umri taxminan. 3 hafta va oltita hayot bosqichidan iborat: embriogenez (tuxum bosqichi), to'rtta lichinka bosqichi (L1 dan L4 gacha) va kattalar bosqichi. Nematodalar tuxumdan L1 lichinkalari 560 hujayradan iborat bo'lib chiqadi. Lichinkaning har bir bosqichida o'sish hujayra bo'linishi va hujayra gipertrofiyasi bilan sodir bo'ladi. Kutikulyar eritish har bir lichinka bosqichini aniqlaydi. Atrof-muhitning og'ir sharoitlari rivojlanayotgan qurtga sharoitlar kattalar unumdorligini qo'llab-quvvatlamasligi haqida signal bersa, C. elegans uning rivojlanishini o'zgartirib, muqobil L3 lichinka bosqichini hosil qilishi mumkin, bu erda lichinkalar dauer bosqichiga o'tadi. Bunday holatda hayvonlar stressga juda chidamli va uzoq umr ko'rishadi va uch oydan to'qqiz oygacha yashashi mumkin. Dauer lichinkalari og'iz va anal bo'shliqlarini muhrlab, ichaklarini kichraytirib, daf-16/FOXO ga bog'liq bo'lgan genetik dasturni ishga tushirish orqali o'zlarini qiyinchiliklardan ajratib turadilar, bu boshqa narsalar qatori dauerga xos kesikulaning namoyon bo'lishiga olib keladi. (Qarang: Henderson va boshqalar, 2006)
C. elegans Dauer lichinkalari
Dauer lichinkalari - bu muqobil rivojlanish bosqichiga kirgan nematoda lichinkalari uchun atama. "Dauer lichinkalari" atamasi, ayniqsa, rabditidlar oilasining qurtlari, shu jumladan Caenorhabditis elegans uchun ishlatiladi. "Dauer" so'zi nemischa bo'lib, "davomiylik" degan ma'noni anglatadi” ma'nosida “vaqt davri”. Dauer lichinkalari turg'unlik turiga kiradi va og'ir sharoitlarda omon qolishi mumkin. Lichinkaning dauer bosqichiga qachon va qachon kirishi atrof-muhit sharoitlariga bog'liq. Dauer lichinkalari biologiyada keng o'rganiladi, chunki lichinkalar og'ir muhitda omon qolish va uzoq vaqt yashash uchun ajoyib qobiliyatni namoyish etadi. Misol uchun, C. elegans dauer lichinkalari normal reproduktiv rivojlanish davridagi o'rtacha uch haftalik umridan ancha uzoqroq, to'rt oygacha yashashi mumkin.
C. elegans hayot aylanishiga umumiy nuqtai
C. elegans qulay muhitda rivojlanishi:
Caenorhabditis elegans (C. elegans) qulay va noqulay ekologik sharoitlarda turli xil rivojlanish progressiyani ko'rsatadi.
C. elegans Qulay sharoitlarga javob:
Qulay sharoitlarda mikroskopik yumaloq chuvalchang Caenorhabditis elegans (C. elegans) aniq belgilangan rivojlanish yo'lidan boradi. Nematoda odatda atrof-muhit sharoitlari maqbul bo'lganda, odatda 15 ° C dan 20 ° C gacha bo'lgan haroratlarda o'zining hayot aylanishini juda tez o'tadi.
- Reproduktiv rivojlanish: C. elegans o'zining hayot aylanishini embrion sifatida boshlaydi. Keyin u L1 dan L4 gacha qisqartirilgan to'rtta lichinka bosqichidan o'tadi.
- Kattalar bosqichi: Toʻrt lichinka bosqichini tugatgandan soʻng, C. elegans atigi 3-5 kun ichida kattalar bosqichiga etadi. Ushbu bosqichda ular ko'payish qobiliyatiga ega va atrof-muhit omillariga qarab yana 2 dan 3 haftagacha yashashni davom ettiradilar.
C. elegans Noqulay sharoitlarga javob:
Biroq, C. elegans chidamli organizm bo'lib, dauer shakllanishi deb ataladigan jarayon orqali noqulay sharoitlarga moslasha oladi.
- Dauer shakllanishi: Atrof-muhit sharoitlari noqulay bo'lganda, masalan, to'lib-toshgan, cheklangan oziq-ovqat yoki yuqori haroratlarda, C. elegans favqulodda uchinchi lichinka bosqichiga o'tishi mumkin. “dauer,” L3d sifatida qisqartiriladi.
- Dauerning omon qolishi: Dauer lichinkalari og'ir sharoitlarda omon qolish uchun maxsus moslashtirilgan. Ular energiyani tejash va qiyin muhitlarga bardosh berib, bu bosqichda bir necha oy yashashlari mumkin.
Qulay muhitda tiklanish:
C. elegansning diqqatga sazovor jihati sharoitlar yaxshilanganda normal hayot aylanishiga qaytish qobiliyatidir.
- Qulay shartlarga qaytish: C. elegans dauer lichinkalari yana qulay sharoitlarga, masalan, oziq-ovqatning ko'pligi, aholi zichligining pastligi va mos haroratga duch kelganida, ular atrof-muhitning o'zgarishini sezadilar.
- Qayta tiklash va ko'paytirish: Ushbu yaxshilangan sharoitlarga javoban, dauer lichinkalari chaqirilgan jarayondan o'tadi “tiklanish.” Qayta tiklanish davrida ular lichinka bosqichiga o'tadi va oxir-oqibat normal umr ko'radigan reproduktiv kattalarga aylanadi.
Atrof-muhit sharoitlariga javoban rivojlanish bosqichlari o'rtasida almashinish qobiliyati C. elegans biologiyasining alohida jihati hisoblanadi. Bu ularga turli xil sharoitlarda samarali yashash va ko'payish imkonini beradi, bu ularni ilmiy tadqiqotlar uchun, ayniqsa rivojlanish, genetika va qarishni o'rganishda qimmatli namunali organizmga aylantiradi.