Hielscher ultratovush texnologiyasi

Sonikasyon lizisi: hujayraning uzilishi & Ekstraksiya

Hujayra parchalanishi yoki liziz biotexnik laboratoriyalarda kunlik namunalarni tayyorlashning keng tarqalgan qismi hisoblanadi. Lizstning maqsadi biologik molekulalarni chiqarish uchun hujayra devorining yoki to'liq hujayraning qismlarini buzishdir. Lizat deb ataladigan plazmid, retseptorlari tahlili, oqsillar, DNK, RNK va boshqalardan iborat bo'lishi mumkin. Lizisning keyingi bosqichlari fraksiyonasyon, organelle izolyatsiya qilish va / yoki oqsillarni ajratish va tozalashdir. Ekstraksiya qilingan material (= lizat) ajralib turishi kerak va undan keyingi tadqiqotlarni yoki ilovalarni, masalan, proteomik tadqiqotlarni o'tkazish kerak. Ultrasonik homogenizatorlar muvaffaqiyatli hujayrali liziz uchun keng tarqalgan vositadir. Jarayon parametrlarini sozlash orqali ultratovush intensivligi tekislanishi mumkinligi sababli, juda yumshoq va juda qiyin bo'lgan eng yaxshi sonikatsiya zichligi har bir modda va vosita uchun maxsus dastur talablarini qondirish uchun alohida o'rnatilishi mumkin.

Uyali aloqa tuzilmasi

Hujayralar bir phospho-lipid ikki tomonlama qatlamlarida (ham oqsil-lipid qatlamlik; hidrofob lipidlar va ichki oqsil molekulalarining bilan hidrofil fosfor molekulalar tomonidan tashkil) iborat bir yarim-geçirgen plazma membrana bilan himoya qilinadi va hujayra ichki o'rtasida to'siq (sitoplazma) yaratadi va g'ayrihujayraviy atrof-muhit. O'simlik hujayralari va prokaryotik hujayralar hujayra devori bilan o'ralgan bo'ladi. Tufayli bir necha qatlamlari tsellyuloza qalin hujayra devori uchun, o'simlik hujayralari hayvon hujayralarining nisbatan Liz qiyin bo'ladi. Bunday organellerin, yadro, mitoxondriyalarga sifatida hujayra ichki, hujayra çatısının tomonidan barqarorlashadi.
hujayralarni lysing qasamki, qazib olish va organel proteinlar, DNK, mRNA yoki boshqa biyomoleküllerin ajratib qaratilgan.

Sonikatsiya odatda hujayra moddalarini namunaviy tayyorlash uchun ishlatiladi.

Shakl 1: hujayralardan ultrasonik ekstraksiya: Yalpiz apikal ildizining (Mentha piperita) mikroskopik transvers qismi (Vagon) hujayralardan ultrasonik ekstraksiya qilish paytida ta'sir mexanizmini ko'rsatadi (2000x magnification) [resurs: Vilkhu va boshq. 2011]

usullari

Mexanik va kimyoviy usullarga bo'linadigan, ya'ni detarjen yoki erituvchilarni ishlatish, yuqori bosimni qo'llash yoki boncuk tegirmonini yoki frantsuz matbuotidan foydalanishga imkon beradigan hujayralarni lizatlashning bir necha usullari mavjud. Ushbu usullarning eng muammoli kamchiliklari protsess parametrlarining murakkab nazorat va sozlashlari va shuning uchun ta'sir ko'rsatadi.
Umumiy liziz usullarining asosiy kamchiliklari:

Turli xil lizis usullari

Jadval: hujayra lizisine oqsaydi usullari asosiy kamchiliklari bor

Aksincha, ultrasonik tebranish ultrasonik tebranish parametrlari ustidan to'liq nazorat qilish uchun imkon beradi Uyali qulatilgan uchun juda samarali va ishonchli vositasi hisoblanadi. Bu materiallari ozod va mahsulot poklik yuqori seçicilik ta'minlaydi. [Balasundaram boshq. 2009] Bu barcha hujayra turlari uchun mos va kichik va katta hajmdagi osonlik qo'llaniladi. Ultrasonicators tozalash oson. An ultratovush Gomogenizator har doim toza-in-joy (CIP) va sterillash-in-joy (SIP) funktsiyasi xususiyatlari. sonotrode artib yoki (ish muhiti qarab) suv yoki hal qiluvchi yuvish mumkin bo'lgan katta titan shox iborat. ultrasonicators ta'minlash deyarli neglectable o'z chidamliligi bilan bog'liq.

parchalanishiga

Parchalanishiga nozik jarayon. parchalash davomida hujayra membranasi himoya ega unphysiological muhitda (pH-qiymati og'ish) tomonidan qazib oqsillarning Biroq inaktivasyonu, denatürasyon va buzilishi oldini olish kerak, yo'q qilinadi. Shuning uchun, umuman parchalash bir bufer eritma amalga oshiriladi. Eng qiyinchiliklar barcha hujayra ichidagi moddiy yoki / va maqsadli mahsulot denatürasyon bir hedefsiz ozod natijada nazoratsiz hujayra uzilishi kelib chiqadi.

Ultratovush hujayra parchalanishiga laboratoriyada namuna tayyorlash va katta hajmdagi ishlab chiqarish uchun foydalanish mumkin. Kattalashtirish uchun bosing!

1-shakl:. 200 vatt kuchli ultratovush Gomogenizator Uf200 ः t ishonchli va tekrarlanabilir hujayra lizisine uchun raqamli nazorat va avtomatik ma'lumotlar, ro'yxatdan o'tishingiz.

ultratovush erishi

Odatda, laboratoriyada namunalarni lizislash 15 soniyadan 2 daqiqagacha davom etadi. Sonicationning intensivligi amplitudani sozlash bilan sonikatsiya vaqtini sozlash va o'ng uskunani tanlash bilan juda oson bo'lgani uchun hujayra tuzilishiga va lizizlash maqsadiga qarab hujayra membranalarini juda yumshoq yoki o'ta keskin tarzda buzish mumkin ( Masalan, DNKni ekstraktsiyalash yumshoq ultrasonga talab qiladi, bakteriyalarning to'liq oqsillarni ekstraktsiyalashishi yanada qizg'in ultratovushli davolashni talab qiladi). Jarayon davomida haroratni integratsiya qilingan harorat sensori bilan kuzatish mumkin va sovutish (muzli hammom yoki sovutish ko'ylagi bilan oqim kameralari) yoki pulsli rejimda sonikatsiya orqali osongina nazorat qilinishi mumkin. Pulse-rejimidagi sonikatsiya vaqtida 1-15 sekundlik qisqa sonikatsiya burilishining davrlari issiqlik tarqalishiga va uzoqroq intervalgacha davrlarda sovutishga imkon beradi.
Barcha ultratovush yuritmali jarayonlar butunlay qayta qo'lga olingan va Liniya ölçeklenebilir.

10 Probirkalarning bir vaqtning o'zida namuna tayyorlash uchun ultratovush Gomogenizator VialTweeter. (Kattalashtirish uchun bosing!)

ultratovush qurilma VialTweeter Xuddi shu jarayon sharoitlarda 10 shisha idishga bir vaqtning o'zida namuna tayyorlash uchun imkon beradi.

ultratovush homoje

turli xil ultratovush qurilmalar namuna tayyorlash maqsadga muvofiq deb imkonini beradi va foydalanuvchi do'sti va operatsiya qulayliklar ta'minlash uchun. Tekshirish-turi ultrasonicators laboratoriya eng keng tarqalgan qurilmalar mavjud. Ular 1000ml gacha 0.1 ml hajmi bilan kichik va o'rta kattalikdagi namunalarini tayyorlash uchun eng mos bo'lgan. Turli elektr registri va sonotrodes namuna hajmi va eng samarali va samarali sonicating natijalar uchun kemaga ultrasonicator moslashtirish imkonini beradi. Yagona namunalari tayyor bo'lishi kerak bo'lsa, ultratovush tekshirish qurilma, eng yaxshi tanlov.

Agar ko'proq namunalar tayyorlanadigan bo'lsa, masalan, hujayra eritmasidan 8 ta vials, VialTweeter yoki ultratovushli kupa kabi qurilmalar liziz uchun eng mos homogenizator hisoblanadi. Bir nechta shisha idishlar bir vaqtning o'zida, bir xil kuchda, soniklanadi. Bu nafaqat vaqtni tejaydi, balki natijalarni namunalar orasida ishonchli va taqqoslanadigan holga keltiradigan barcha namunalarni bir xil usulda ta'minlaydi. Bundan tashqari, ultrasonik sonotrode (ultrasonik prob, shox, uchi yoki barmoq deb ham nomlanadi) batırılarak o'zaro faoliyat kontaminasyondan qochish kerak. Shisha idishidan foydalanilganda, idishlarni tozalash uchun vaqt sarflaydigan tozalash va namunadir yo'qolishi mumkin emas.
yuqori hajmi uchun, masalan, Uyali aloqa ekstraktlar tijorat ishlab chiqarish uchun, oqim hujayra reaktori bilan uzluksiz ultratovush tizimlari eng MUMKIN. qayta materiallar uzluksiz va hatto oqimi ham sonication ishontiradi. ultratovush bo'linish jarayonining barcha parametrlarini optimallashtirish va qo'llash va maxsus hujayra materiallar talablariga moslash mumkin.

bakterial hujayralar ultratovush lysing uchun namunaviy tartibi:

  • Uyali aloqa to'xtatib tayyorlash: Uyali aloqa granulalar butunlay (quyidagi tahlil qilish, masalan, muayyan xromatografiya usuli bilan mos sizning bufer eritma tanlash) homojenleştirici tomonidan bufer eritma holida kerak. kerak bo'lsa lysozymes va / yoki boshqa qo'shimchalarni qo'shish, (ular ajratish / tozalash vositalari bilan ham mos bo'lishi kerak). / Aralashtiring to'liq to'xtatib turish erishiladi qadar yumshoq sonikasyon ostida sekin hal homojenize.
  • Ultratovush parchalanishiga: bir muz hammom ichida namunasi qo'ying. Uyali aloqa uzilishi uchun, (sizning ultrasonicator ning puls rejimi yordamida) 60-90 ikkinchi portlashlari da to'xtatib tovush to'lqinlarining ta'sir.
  • (. Masalan, 10 min 10000 da x g; 4degC da): ajratish lizat santrifüj. diqqat hujayra pelletini süpernatant ajrating. Süpernatan jami hujayra lizatı hisoblanadi. süpernatan filtrlash so'ng, eruvchan hujayra oqsili bir aniqlanishi suyuqlik olish.

biologiya va biotexnologiya ultrasonicators uchun eng keng tarqalgan dasturlar:

  • Uyali aloqa ko'chirma tayyorlash
  • buzilish xamirturush, bakteriyalar, o'simlik hujayralari, yumshoq & qattiq Uyali to'qima, nuklein moddiy
  • Protein qazib olish
  • Tayyorlash va fermentlar izolyatsiya
  • antijenlerin ishlab chiqarish
  • va / yoki maqsadli bo'linishi DNK qazib olish
  • lipozom tayyorlash
UIP1000hd kabi yuqori elektr ultratovush homojenizatör punktir yoki doimiy oqimi-da rejimida Uyali izdan va qazib olish uchun ishlatiladi. (Kattalashtirish uchun bosing!)

kabi ultratovush fen tizimlari UIP1000hd (1 kVt soat uchun) biologik materiallar katta hajmda qayta ishlash mumkin.

biotexnologiya, biyomühendislik, mikrobiologiya, molekulyar biologiya, biokimyo, immunologiya, bakteriologiya, virusologiya, proteomik, genetika, fiziologiya, uyali biologiya, Gematologiya va botanika tarmoqlari amalga ultratovush filiallari manifold ilovalar.

mijozlar ilovalar baholash va optimallashtirish uchun, Hielscher ultratovush to'liq jihozlangan taklif etadi Ultratovush jarayoni Laboratoriya. Qo'shimcha ma'lumot olish uchun bizga murojaat qiling!

Adabiyotlar / manbalar

  • Balasundaram, B .; Harrison, S .; Bracewell, D. G. (2009): mahsulot relizlar strategiyasi va Biologiya qadam dizayn ta'siri rivojlangan. Biotexnologiya 27/8, 2009 pp. 477-485 tendentsiyalari.
  • Vilkhu, K .; Manashe, R .; Mawson, R .; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonik Recovery va oziq-ovqat moddalari va shakl. In: Feng / Barbosa-Canovas / Vayss (2011): oziq-ovqat va Bioprocessing uchun ultratovush Technologies. Nyu-York: Springer, 2011 pp 345-368..

Biz bilan bog'laning / Qo'shimcha ma'lumot so'rang

Sizning ishlash talablari haqida bizga gapiring. Biz sizning loyiha uchun eng munosib o'rnatish va qayta ishlash parametrlarini tavsiya qiladi.





Iltimos, bizning e'tibor bering Maxfiylik siyosati.