Протокол ASTM E2799-22 для оцінки антимікробних препаратів

Hielscher UIP400MTP - це потужний і ефективний багатолунковий пластинчастий звуковий апарат, розроблений для оптимізації етапу ультразвуку в протоколі ASTM E2799-22. Доставляючи рівномірну ультразвукову енергію по всій мікротитровій пластині, UIP400MTP забезпечує послідовне та надійне від'єднання біоплівок від кришок без пошкодження клітин та порушення цілісності зразка. Його висока пропускна здатність і зручна експлуатація значно скорочують час обробки, одночасно підвищуючи відтворюваність, що робить його ідеальним рішенням для лабораторій, які проводять аналізи життєздатності біоплівки та тестування антимікробної ефективності.

ASTM E2799

ASTM E2799 — це стандартизований метод тестування, призначений для оцінки ефективності антимікробних агентів проти біоплівок, особливо зосереджуючись на Pseudomonas aeruginosa. Біоплівки — це складні мікробні спільноти, які прилипають до поверхонь і демонструють підвищену стійкість до антимікробної обробки, що робить їх значною проблемою в охороні здоров'я, промисловості та навколишньому середовищі. Цей метод використовує аналіз мінімальної концентрації ерадикації біоплівки (MBEC) для забезпечення надійної та відтворюваної основи для тестування дезінфікуючих засобів у реалістичних умовах біоплівки.

Як ультразвукове дослідження сприяє виникненню ASTM E2799?

Ультразвукова діагностика відіграє важливу роль у протоколі ASTM E2799, полегшуючи відокремлення біоплівок від тестових поверхонь, забезпечуючи точну оцінку життєздатності мікроорганізмів після лікування. Використовуючи контрольовану ультразвукову енергію, протокол досягає ефективного та послідовного руйнування біоплівки без пошкодження клітин, забезпечуючи точні та відтворювані результати. Це робить ASTM E2799 важливим інструментом для просування досліджень біоплівки та розробки ефективних антимікробних стратегій.

Як провести аналіз MBEC відповідно до ASTM E2799-22

Протокол ASTM E2799-22 описує етапи оцінки ефективності антимікробних засобів проти біоплівок. При використанні ультразвукового апарату з мікротитровими пластинами Hielscher UIP400MTP протокол може бути адаптований для включення цього передового методу ультразвуку для відшарування біоплівки. Нижче наведено опис кроків, призначених для використання мікропланшетного ультразвукового апарату UIP400MTP:

1. Приготування біоплівок
   Підготуйте стерильну 96-лункову пластинку для мікротитру зі знімними кришками-пегами.
   Інокулюйте лунки стандартизованою бактеріальною суспензією у відповідному живильному середовищі.
   Помістіть кришку від кілочків на тарілку, переконавшись, що кілочки повністю занурені в бактеріальну суспензію.
   Інкубуйте пластину в контрольованих умовах (наприклад, температура та час), щоб забезпечити утворення біоплівки на кілочках.
2. Лікування протимікробними засобами
   Після утворення біоплівки замініть середовище на свіже середовище, що містить тестові антимікробні агенти в різних концентраціях.
   Знову прикріпіть кришку з кілочками та інкубуйте в умовах, зазначених у тестовому дизайні.
3. Підготовка до відшарування біоплівки
   Після обробки промийте кришку, зануривши її в стерильний розчин для полоскання, щоб видалити залишки антимікробних засобів і нещільно прилиплі планктонні клітини.
4. Відшарування біоплівки за допомогою UIP400MTP Sonicator
   Підготуйте свіжу 96-лункову мікротитрову пластину, що містить середовище для відновлення (наприклад, нейтралізуючий бульйон).
   Від'єднайте біоплівки, помістивши кришку з кілочками в лунки пластини середовища відновлення.
   Вставте пластину в UIP400MTP ультразвук, переконавшись, що кришка та пластина правильно вирівняні.
   Встановіть ультразвуковий апарат на амплітуду 70%-80% і проводьте ультразвукове дослідження протягом 3-4 хвилин у режимі циклу, щоб забезпечити стабільне відшарування біоплівки без лізису клітин.
5. Оцінка життєздатності біоплівки
   Після ультразвуку обробіть середовище відновлення, що містить відшаровані клітини біоплівки, використовуючи стандартні мікробіологічні або аналітичні методи, такі як:
   • Підрахунок колонієутворюючих одиниць (КУО): виконайте послідовні розведення та нанесіть пластину на агар для перерахування життєздатних клітин.
   • Вимірювання оптичної густини (OD): використовуйте спектрофотометричний аналіз для оцінки щільності клітин.
   • Аналіз життєздатності на основі флуоресценції: кількісно оцінюйте живі та мертві клітини за допомогою флуоресцентних барвників.
6. Аналіз даних
   Порівняйте дані життєздатності оброблених і необроблених біоплівок для визначення ефективності антимікробних засобів.
   Розрахуйте мінімальну концентрацію ерадикації біоплівки (MBEC) на основі концентрації, необхідної для видалення життєздатних клітин біоплівки.
7. Контроль якості
   Забезпечте стабільні умови ультразвукової діагностики, регулярно калібруючи UIP400MTP та перевіряючи, що процес відшарування біоплівки не призводить до значного лізису або руйнування клітин.
   Включіть відповідні засоби контролю, такі як необроблені біоплівки та пробіли лише для середовища, щоб перевірити результати.

Клітини біоплівки, що утворилися на штифтах, витісняли методом ультразвуку (Hielscher Ultrasound Technology, Тельтов, Німеччина, UIP250MTP) протягом 5 хв у 96-лункових пластинах, що містили свіже живильне середовище для відновлення клітин.
(Малюнок і дослідження: ©de Oliveira et al., 2016)

Завдяки інтеграції UIP400MTP в робочий процес ASTM E2799-22 процес від'єднання біоплівки оптимізується для послідовності, ефективності та високої пропускної здатності.