Замініть зіскрібання клітин високопродуктивним ультразвуковим пристроєм UIP400MTP

Відокремлення та екстракція адгезивних клітинних ліній із багатолункових планшетів для мультиомного аналізу – щоденне завдання в лабораторіях. Високопродуктивне відокремлення клітин за допомогою ультразвукового пристрою для багатолункових планшетів UIP400MTP замінює ручне зіскрібання клітин, забезпечуючи вищий вихід РНК, загальних ліпідів і загальних полярних метаболітів. Новий метод поєднує ультразвуковий пристрій Hielscher UIP400MTP з автоматизованою станцією для роботи з рідинами Beckman Coulter i7, забезпечуючи високопродуктивну, відтворювану й ефективну обробку клітин для екстракції РНК, метаболітів і ліпідів. Представлений метод перевершує традиційні методи ручного зіскрібання клітин, забезпечуючи кращу відтворюваність і вищий вихід для різних типів клітин та експериментальних умов.

Спростіть відокремлення клітин за допомогою ультразвукового пристрою для мікропланшетів UIP400MTP

Системи культивування адгезивних клітин відіграють вирішальну роль у токсикологічних і біомедичних дослідженнях. У цьому контексті Cruchley-Fuge та співавт. (2024) розв’язували важливе завдання в межах проєкту PrecisionTox, спрямованого на застосування оміксних технологій для оцінювання небезпеки хімічних речовин. Метою проєкту був високопродуктивний аналіз тисяч зразків, оброблених різними хімічними речовинами. Для задоволення цієї потреби дослідники розробили автоматизований робочий процес, що поєднує ультразвуковий пристрій UIP400MTP з усталеними протоколами двофазної екстракції для аналізу методом рідинної хроматографії з мас-спектрометрією (LC-MS). У їхньому дослідженні оцінюється ефективність ультразвукового пристрою для багатолункових планшетів UIP400MTP у відокремленні адгезивних клітин порівняно з ручним зіскрібанням та іншими традиційними методами.

Оптимізація мультиомного аналізу: автоматизована екстракція адгезивних клітин за допомогою UIP400MTP

Дослідницька група Лаури Крачлі-Ф’юдж з Бірмінгемського університету використовувала три клітинні лінії людини: HepG2 (клітини раку печінки), HepaRG (диференційовані гепатоцитоподібні клітини) та H295R (клітини раку надниркових залоз). Ці клітини культивували у 24-лункових і 96-лункових планшетах та піддавали впливу досліджуваних хімічних речовин, зокрема афлатоксину B1 і форсколіну.

Дизайн експерименту:

• Етап 1: Оптимізація налаштувань потужності ультразвукового пристрою UIP400MTP та порівняння з ручним зіскрібанням клітин і водяними ультразвуковими ваннами. Для оцінювання виходу РНК, метаболітів і ліпідів використовували клітини HepG2.
• Етап 2: Інтеграція UIP400MTP у робочий процес двофазної екстракції з використанням системи Beckman Coulter i7. Валідацію проводили на клітинах HepaRG і H295R.

Робочий процес екстракції: Робочий процес охоплював вплив хімічних речовин у багатолункових планшетах, відокремлення клітин за допомогою UIP400MTP та двофазну екстракцію за методом Bligh & Dyer (B&D). Аналіз ліпофільних і полярних сполук методом LC-MS виконували за допомогою Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120. Метод B&D, золотий стандарт кількісного визначення ліпідів, передбачає двоетапну екстракцію з метанолом, хлороформом і водою з подальшим кількісним визначенням ліпідів у хлороформній фазі.

Ультразвуковий пристрій для мікропланшетів UIP400MTP полегшує відокремлення адгезивних клітинних ліній від багатолункових планшетів і чашок Петрі

Результати:

• Етап 1: Оптимальні умови ультразвукової обробки було визначено за потужності 60%.
  UIP400MTP забезпечив найвищий вихід РНК із винятковою відтворюваністю порівняно з ручним зіскрібанням та ультразвуковими ваннами.
  Вихід полярних метаболітів був однаковим для всіх методів, тоді як вихід ліпідів був помітно вищим за використання UIP400MTP.
• Етап 2: Валідація на клітинах HepaRG і H295R продемонструвала високу відтворюваність ліпідомних і метаболомних даних, про що свідчило щільне групування значень головних компонентів (PCA).
  Зразки, оброблені афлатоксином B1 і форсколіном, ефективно відрізнялися від контрольних, що підкреслює чутливість і надійність методу.

«Ультразвуковий пристрій Hielscher UIP400MTP забезпечує високоякісний і відтворюваний альтернативний підхід до “золотого стандарту” ручного зіскрібання клітин, що дає вищий вихід РНК, загальних ліпідів і загальних полярних метаболітів». (Cruchley-Fuge et al., 2024)

Cruchley-Fuge та співавт. підкреслюють переваги ультразвукового пристрою UIP400MTP для обробки адгезивних клітин. Замінюючи ручне зіскрібання, цей метод підвищує відтворюваність, пропускну здатність і вихід, що робить його неоціненним інструментом для масштабних досліджень, таких як PrecisionTox. Інтеграція UIP400MTP в автоматизовані робочі процеси не лише зменшує варіабельність, а й спрощує трудомісткі процеси, забезпечуючи отримання високоякісних мультиомних даних.

Робота Cruchley-Fuge та співавт. (2024) полегшує та спрощує обробку адгезивних клітинних культур для мультиомного аналізу. Інтеграція ультразвукового пристрою UIP400MTP в автоматизовані робочі процеси забезпечує стабільну й ефективну підготовку зразків, завдяки чому він ідеально підходить для високопродуктивних токсикологічних досліджень.
 

Проєктування, виробництво та консультування – якість із Німеччини

Ультразвукові пристрої Hielscher добре відомі найвищими стандартами якості та проєктування. Міцність і простота експлуатації забезпечують безперешкодну інтеграцію наших ультразвукових пристроїв у промислові об’єкти. Ультразвукові пристрої Hielscher легко працюють у суворих умовах і складних середовищах.

Hielscher Ultrasonics – компанія, сертифікована за ISO, яка приділяє особливу увагу високопродуктивним ультразвуковим пристроям із найсучаснішими технологіями та зручністю користування. Звісно, ультразвукові пристрої Hielscher відповідають нормам CE та вимогам UL, CSA і RoHs.