Замініть зіскрібок клітин на високопродуктивний сонікатор UIP400MTP

Відокремлення та вилучення адгезивних клітинних ліній з багатолункових пластин для мультиомічного аналізу є щоденним завданням у лабораторіях. Високопродуктивне відшарування клітин за допомогою багатолункового пластинчастого фонікатора UIP400MTP замінює ручне зіскрібок клітин, що призводить до підвищення виходу РНК, загальних ліпідів і загальних полярних метаболітів. Новий метод об'єднує UIP400MTP ультразвуковик Hielscher з робочою станцією обробки рідин Beckman Coulter i7, забезпечуючи високопродуктивну, відтворювану та ефективну обробку клітин для екстракції РНК, метаболітів та ліпідів. Представлений метод перевершує традиційні ручні методи зішкрібання клітин, досягаючи чудової відтворюваності та виходу в різних типах клітин та експериментальних умовах.

Оптимізуйте відшарування клітин за допомогою мікропланшетного сонника UIP400MTP

Прилиплі системи клітинних культур відіграють важливу роль у токсикологічних та біомедичних дослідженнях. У цьому контексті Cruchley-Fuge et al. (2024) розглянули значну проблему в проєкті PrecisionTox, зосередженому на використанні технологій оміки для оцінки хімічної небезпеки. Проект був спрямований на високопродуктивний аналіз тисяч зразків, оброблених різноманітними хімічними речовинами. Щоб задовольнити цей попит, дослідники розробили автоматизований робочий процес, який поєднує UIP400MTP ультразвуковик із встановленими протоколами двофазної екстракції для аналізу рідинної хроматографії-мас-спектрометрії (LC-MS). У їхньому дослідженні оцінюється ефективність UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator у видаленні прилиплих клітин у порівнянні з ручним вишкрібанням та іншими традиційними методами.

Оптимізація мультиоміки: автоматизоване вилучення адгезивних клітин за допомогою UIP400MTP

Команда дослідників Лори Крачлі-Фуге з Бірмінгемського університету використовувала три клітинні лінії людини: HepG2 (клітини раку печінки), HepaRG (диференційовані гепатоцитоподібні клітини) і H295R (клітини раку надниркових залоз). Ці клітини культивували в 24-лункових і 96-лункових планшетах і піддавали впливу тестових хімічних речовин, таких як афлатоксин В1 і форсколін.

Експериментальна конструкція:

• Етап 1: Оптимізація налаштувань потужності UIP400MTP ультразвукорежисера та порівняння з ручним зішкрібком клітин та звуковими водяними ваннами. Клітини HepG2 були використані для оцінки відновлення РНК, метаболітів та ліпідів.
• Етап 2: Інтеграція UIP400MTP в двофазний робочий процес екстракції за допомогою системи Beckman Coulter i7. Валідацію проводили з використанням клітин HepaRG та H295R.

Робочий процес екстракції: Робочий процес включав хімічний вплив у багатолункових пластинах, відшарування клітин за допомогою UIP400MTP та двофазну екстракцію за допомогою Блай & Даєр (Б&Г) метод. LC-MS аналіз проводили з використанням Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 для ліпофільних та полярних сполук. Розділ Б&Метод D, золотий стандарт кількісного визначення ліпідів, передбачає двоетапну екстракцію з метанолом, хлороформом і водою з подальшим кількісним визначенням ліпідів у фазі хлороформу.

UIP400MTP мікропланшетний ультразвуковий апарат сприяє від'єднанню прилиплих клітинних ліній від багатолункових пластин і чашок Петрі

Результатів:

• Етап 1: Оптимальні умови ультразвукового звуку були виявлені при 60% потужності.
  Цей UIP400MTP забезпечив найвище відновлення РНК з винятковою відтворюваністю порівняно з ручним зішкрібком і звуковими ваннами.
  Відновлення полярних метаболітів було послідовним у різних методах, тоді як відновлення ліпідів було помітно кращим за UIP400MTP.
• Етап 2: Валідація на клітинах HepaRG та H295R продемонструвала високу відтворюваність даних ліпідоміки та метаболоміки, про що свідчать тісно кластеризовані бали РСА.
  Лікування афлатоксином В1 та форсколіном було ефективно відрізняти від контрольних, що підкреслює чутливість та надійність методу.

“Апарат для UIP400MTP ультразвуку Hielscher забезпечує високоякісний і відтворюваний альтернативний підхід до «золотого стандарту» ручного зіскрібка клітин, що призводить до більш високих виходів РНК, загальних ліпідів і загальних полярних метаболітів.” (Cruchley-Fuge та ін., 2024)

Cruchley-Fuge та співавтори виділяють переваги UIP400MTP ультразвукового апарату для адгезивної обробки клітин. Замінюючи ручне зішкрібання, цей метод підвищує відтворюваність, пропускну здатність і вихід, що робить його безцінним інструментом для великомасштабних досліджень, таких як PrecisionTox. Інтеграція UIP400MTP в автоматизовані робочі процеси не тільки зменшує варіативність, але й оптимізує трудомісткі процеси, забезпечуючи високоякісний збір даних з мультиомікою.

Робота Cruchley-Fuge et al. (2024) полегшує та оптимізує обробку прилиплих клітинних культур для мультиомного аналізу. Інтеграція UIP400MTP ультразвукового апарату з автоматизованими робочими процесами забезпечує послідовну та ефективну підготовку зразків, що робить його ідеальним для високопродуктивних токсикологічних досліджень.
 

Проектування, виробництво та консалтинг – Якість зроблено в Німеччині

Ультразвукові апарати Hielscher добре відомі своїми найвищими стандартами якості та дизайну. Надійність і простота експлуатації дозволяють плавно інтегрувати наші ультразвукові апарати в промислові об'єкти. З важкими умовами та вимогливими умовами легко справляються ультразвукові апарати Hielscher.

Hielscher Ultrasonics є компанією, сертифікованою ISO, і приділяє особливу увагу високопродуктивним ультразвуковим системам, які відрізняються найсучаснішими технологіями та зручністю у використанні. Звичайно, ультразвукові апарати Hielscher відповідають вимогам CE та відповідають вимогам UL, CSA та RoHs.