Екстракція позаклітинного матриксу за допомогою 96-лункового сонника UIP400MTP

Традиційні методи екстракції позаклітинного матриксу (ЕМ) часто включають кілька етапів для руйнування матриксу біоплівки. Однак ці методи можуть зайняти багато часу та бути непослідовними, що призводить до варіативності результатів. За допомогою 96-лункового пластинчастого сонника UIP400MTP значно полегшується процес екстракції ЕМ, забезпечуючи високоефективне, точне та рівномірне руйнування біоплівки у форматах з високою пропускною здатністю. UIP400MTP використовує сфокусований ультразвук для генерації контрольованої кавітації, ефективно руйнуючи матрикс біоплівки, зберігаючи при цьому життєздатність і цілісність клітин, вбудованих у біоплівку. Використання UIP400MTP підвищує відтворюваність і точність подальших аналізів, таких як метаболомічний і протеомний аналізи, тести на життєздатність і дослідження чутливості до протимікробних препаратів. Оптимізуючи екстракцію ЕМ, UIP400MTP дозволяє дослідникам досягати стабільних і високоякісних результатів, пропонуючи більш глибоке розуміння динаміки біоплівки та взаємодії із зовнішніми агентами.

екстракція позаклітинного матриксу

Позаклітинний матрикс (ЕМ) є критично важливим компонентом біоплівок, утворених такими мікроорганізмами, як Candida albicans. Складаючись з полісахаридів, білків, ліпідів і позаклітинної ДНК, ЕМ забезпечує структурну цілісність, опосередковує адгезію до поверхонь і значно сприяє антимікробній резистентності. Вилучення та аналіз ЕМ має важливе значення для розуміння біології біоплівки, з'ясування механізмів лікарської стійкості та виявлення нових терапевтичних цілей.

Протокол екстракції позаклітинного матриксу (ЕМ) з біоплівок Candida albicans за допомогою UIP400MTP

Цей протокол зосереджений на екстракції позаклітинного матриксу (ЕМ) статичних біоплівок Candida albicans. Інтеграція UIP400MTP ультразвукового апарату для заміни традиційних етапів зішкрібання або ензимних процедур для підвищення ефективності та відтворюваності.

Необхідні матеріали

Покрокова інструкція по екстракції ЕМ

1. Формування статичної біоплівки
   Для статичних біоплівок інокулюють C. albicans у лунки 96-лункової пластини за допомогою середовища RPMI-1640. Кожна лунка повинна містити постійний об'єм інокуляту (наприклад, 200 мкл на лунку).
   Інкубуйте пластину при температурі 37 ° C в статичних умовах протягом 24 годин, щоб забезпечити утворення біоплівки на поверхнях лунки.
2. Підготовка біоплівки до екстракції
   Після інкубації обережно проведіть аспірацію та викиньте відпрацьоване середовище з кожної лунки, не порушуючи біоплівку.
   Ретельно промийте кожну добре стерильним PBS (наприклад, 200 мкл), щоб видалити нещільно прикріплені клітини та залишки планктону. Повторіть цей крок двічі.
   Додайте свіжий PBS або екстракційний буфер (наприклад, 200 мкл) у кожну лунку для підготовки до ультразвуку.
3. Ультразвукове дослідження при UIP400MTP
   Помістіть 96-лункову пластину, що містить PBS або екстракційний буфер, у лоток UIP400MTP ультразвукового пристрою. Щоб правильно розмістити багатолункову плиту, дотримуйтесь інструкцій інструкції.
   Проводять ультразвуковий апарат протягом 5-6 хвилин в щадному режимі (амплітуда 60%, імпульсний режим), забезпечуючи рівномірне порушення структури біоплівки і вивільнення компонентів ЕМ.
   Використовуйте контроль температури UIP400MTP звукорежисера (датчик температури та налаштування), щоб уникнути надмірного нагрівання або пошкодження зразка.
4. Обробка катіонообмінною смолою (CER)
   Перенесіть ультразвукову рідину з кожної свердловини на нову 96-лункову плиту.
   Додайте подвійний об'єм суспензії CER (приготовленої в PBS або буфері) у кожну свердловину (наприклад, загальний об'єм 400 мкл на свердловину).
   Закрийте пластину та інкубуйте її на шейкері або ротаторі при 400 об/хв протягом 3 годин, щоб забезпечити зв'язування та ізоляцію компонентів ЕМ.
5. Сепарація та фільтрація
   Центрифугуйте пластину при дозі 2000 × г протягом 10 хвилин, щоб відокремити смолу та клітини від супернатанту.
   Обережно перенесіть супернатант, що містить ЕМ, з кожної свердловини на нову 96-лункову плиту.
   Відфільтруйте супернатант через фільтр 0,22 мкм за допомогою системи вакуумного колектора на основі пластини або еквівалента, щоб отримати чистий екстракт ЕМ.
6. Аналіз ЕМ
   Використовуйте такі методи, як UPLC-Q-TOF-MS для профілювання нецільових метаболітів, або використовуйте специфічні аналізи (наприклад, BCA для білків, тригліцеридів і наборів кількісного визначення вуглеводів) для характеристики компонентів ЕМ.

Високопродуктивна екстракція позаклітинного матриксу

Висока ефективність екстракції позаклітинного матриксу (ЕМ) за допомогою UIP400MTP ультразвукового апарату зробила революцію в підготовці зразків для аналізів, що вимагають точного аналізу властивостей біоплівки. UIP400MTP використовує ультразвукові хвилі для точного та рівномірного руйнування матриксу біоплівки, забезпечуючи ефективне вивільнення ЕМ-компонентів, зберігаючи життєздатність та цілісність клітин. Цей підхід значно підвищує надійність таких аналізів, як тести на життєздатність біоплівки, протеомні та метаболомічні дослідження, а також оцінка чутливості до антимікробних препаратів.

Для аналізів відновлення біоплівки, таких як підрахунок колонієутворюючих одиниць (КУО), екстракція ЕМ за допомогою UIP400MTP забезпечує безперешкодний доступ реагентів до клітин, вбудованих у біоплівку. Аналогічним чином, протеомні та метаболомічні аналізи, такі як UPLC-Q-TOF-MS, виграють від виділення білків, ліпідів та метаболітів з високим виходом. UIP400MTP також підтримує точні тести на чутливість до протимікробних препаратів, що дозволяє точно визначати показники біоплівки MIC та MBEC. Крім того, ефективна екстракція, якій сприяє UIP400MTP допомагає в аналізі активності ферментів, кількісній оцінці компонентів та структурних дослідженнях, пропонуючи цінну інформацію про роль позаклітинних матриць у архітектурі біоплівки, механізмах адгезії та резистентності.

Цей високопродуктивний, відтворюваний метод екстракції оптимізує отримання ЕМ, забезпечуючи чудові результати в ряді аналізів, пов'язаних з біоплівкою.