Hielscher Ultrasonics
เรายินดีที่จะพูดคุยเกี่ยวกับกระบวนการของคุณ
โทรหาเรา: +49 3328 437-420
ส่งอีเมลถึงเรา: [email protected]

การสลายเซลล์ยีสต์ในไมโครเพลตโดยใช้การโซนิคความเข้มสูง

นักจุลชีววิทยาและนักวิจัยด้านวิทยาศาสตร์ชีวภาพที่ทำงานกับ Saccharomyces cerevisiae, ปิเชีย บาทหลวง / โคมาเกทาเอลลา ฟาฟฟีและระบบยีสต์อื่นๆ รู้ดีถึงความท้าทายนี้: เซลล์ยีสต์มีความทนทาน การทำให้เซลล์แตกตัวเพื่อสกัดสารพันธุกรรมอย่างสม่ำเสมออาจทำได้ยาก และการทำลายตัวอย่างด้วยวิธีแมนนวลจะกลายเป็นข้อจำกัดอย่างรวดเร็วเมื่อต้องคัดกรองสายพันธุ์ ต้นกำเนิดโคลน สภาพการเพาะเลี้ยง หรือโครงสร้างการแสดงออกจำนวนมาก

การสลายเซลล์ยีสต์แบบปริมาณมากสำหรับการวิจัยจุลชีววิทยา ชีววิทยาระดับโมเลกุล และการวิเคราะห์โปรตีน

เครื่องโซนิคไมโครเพลทของ Hielscher เช่น UIP400MTP (400 วัตต์) และ UIP550MTP (550 วัตต์) มอบโซลูชันที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการแตกเซลล์ยีสต์เชิงกลโดยตรงในไมโครเพลท แทนที่จะทำการประมวลผลตัวอย่างทีละตัวอย่างด้วยโพรบ สามารถทำการโซนิคทั้งไมโครเพลทภายใต้สภาวะที่สม่ำเสมอได้ ซึ่งทำให้การสลายยีสต์ด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงเร็วขึ้น ทำซ้ำได้มากขึ้น และง่ายต่อการผสานเข้ากับกระบวนการทำงานทางจุลชีววิทยาสมัยใหม่ การแสดงโปรตีน การคัดกรองเอนไซม์ และงานวิจัยด้านโอมิกส์
ไม่ว่าคุณต้องการปล่อยโปรตีนรีคอมบิแนนท์จาก P. pastoris, เตรียมเยสต์ไลเสตสำหรับการทดสอบเอนไซม์, ทำลายเซลล์ S. cerevisiae สำหรับการวิเคราะห์โปรตีน, หรือคัดกรองโคลนเยสต์หลายสิบตัวพร้อมกัน, เครื่องโซนิเคเตอร์ไมโครเพลทของ Hielscher มอบการทำลายเซลล์ด้วยแรงดันคาวิเทชันที่ทรงพลังพร้อมการควบคุมกระบวนการที่แม่นยำ

เพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการสลายยีสต์ของคุณ
ต้องการการทำลายเซลล์ที่สามารถทำซ้ำได้ของ ยีสต์ขนมปัง, พระบิดา ผู้เลี้ยงดูหรือสายพันธุ์ยีสต์อื่น ๆ ในไมโครเพลตใช่หรือไม่? โปรดแจ้งรูปแบบเพลต ปริมาตรตัวอย่าง ความหนาแน่นของเซลล์ และสารเป้าหมายที่ต้องการวิเคราะห์ให้เราทราบ เราจะช่วยให้คุณกำหนดพารามิเตอร์การโซนิคที่เหมาะสมสำหรับกระบวนการทำงานของคุณด้วย UIP400MTP หรือ UIP550MTP

การขอข้อมูล



เครื่องโซนิเคเตอร์แบบหลายหลุมของ Hielscher สำหรับการแตกตัวของยีสต์

เครื่องโซนิเคเตอร์แบบหลายหลุมของ Hielscher สำหรับการแตกตัวของยีสต์ – การเตรียมตัวอย่างสำหรับการประมวลผลแบบปริมาณมาก

ทำไมเซลล์ยีสต์ต้องการการสลายตัวทางกลที่มีประสิทธิภาพ

เซลล์ยีสต์มีความยากลำบากในการแตกตัวมากกว่าเซลล์แบคทีเรียหรือเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายชนิด เนื่องจากเซลล์ยีสต์ได้รับการปกป้องโดยผนังเซลล์ที่แข็งแรงซึ่งประกอบด้วยโพลีแซ็กคาไรด์ กลูแคน แมนโนโปรตีน และไคตินเป็นส่วนใหญ่ ผนังเซลล์นี้ให้ความมั่นคงทางกลไก แต่ก็จำกัดการปล่อยโปรตีนภายในเซลล์ กรดนิวคลีอิก เมตาโบไลต์ และเอนไซม์ออกสู่ภายนอกด้วย
วิธีการสลายยีสต์แบบดั้งเดิม ได้แก่ การบดด้วยลูกปัด การย่อยด้วยเอนไซม์ การแช่แข็งและละลายซ้ำ การสลายด้วยสารเคมี และการสั่นด้วยหัวโพรบ วิธีการเหล่านี้สามารถให้ประสิทธิภาพที่ดี แต่ก็มีข้อจำกัดเช่นกัน การทุบเม็ดอาจทำให้เกิดเศษวัสดุและการเกิดความร้อน การย่อยด้วยเอนไซม์อาจเพิ่มต้นทุนและความแปรปรวน และการใช้หัววัดแบบตัวอย่างเดียวในการทำโซนิเคชันใช้เวลานานเมื่อต้องประมวลผลตัวอย่างจำนวนมาก
การสลายตัวด้วยคลื่นเสียงความเข้มสูงและมุ่งเน้นเฉพาะจุดสามารถเอาชนะข้อจำกัดเหล่านี้ได้โดยการนำแรงเฉือนเชิงกลที่รุนแรง การเปลี่ยนแปลงความดัน และกระแสไหลเวียนขนาดเล็กมาประยุกต์ใช้กับสารแขวนลอยของยีสต์ ผลลัพธ์คือการแตกตัวของผนังเซลล์และเยื่อหุ้มเซลล์อย่างรวดเร็ว การปลดปล่อยสารภายในเซลล์ที่ดีขึ้น และการเตรียมตัวอย่างที่แม่นยำและทำซ้ำได้สูงในรูปแบบแผ่น

 

เครื่องโซนิคเตอร์แบบ Multi-Well-Plate สําหรับการเตรียมตัวอย่างที่มีปริมาณงานสูง - UIP400MTP โดย Hielscherการออกแบบขั้นสูงของ UIP400MTP ช่วยให้มั่นใจได้ว่าการสั่นสะเทือนของอัลตราโซนิกจะถูกส่งไปยังทุกหลุมในแผ่นด้วยความสม่ําเสมอสูงสุดเท่าที่จะเป็นไปได้ส่งผลให้เกิดผลลัพธ์ sonication ที่เหมือนกันในทุกหลุม
การออกแบบขั้นสูงของ UIP400MTP ช่วยให้มั่นใจได้ว่าการสั่นสะเทือนของอัลตราโซนิกจะถูกส่งไปยังทุกหลุมในแผ่นด้วยความสม่ําเสมอสูงสุดเท่าที่จะเป็นไปได้ส่งผลให้เกิดผลลัพธ์ sonication ที่เหมือนกันในทุกหลุม

 

การสั่นด้วยคลื่นเสียงในไมโครเพลทสำหรับการเตรียมตัวอย่างยีสต์แบบขนาน

เครื่อง Hielscher UIP400MTP และ UIP550MTP ได้รับการออกแบบมาสำหรับการโซนิคอย่างสม่ำเสมอของไมโครเพลต, พลาตหลายหลุม, พลาต PCR และชั้นวางตัวอย่างที่เหมาะสม ต่างจากการโซนิคด้วยโพรบ ตัวอย่างไม่จำเป็นต้องได้รับการบำบัดเป็นรายบุคคล แผ่นเพลททั้งหมดจะถูกสัมผัสกับพลังงานอัลตราโซนิกที่ควบคุมได้ ทำให้กระบวนการทำงานเหมาะสมอย่างยิ่งสำหรับการประมวลผลตัวอย่างแบบขนาน

นี่มีประโยชน์เป็นพิเศษสำหรับ:

  • การคัดกรอง ยีสต์ขนมปัง มิวแทนต์ หรือสายพันธุ์การแสดงออก
  • การสลายของ พระบิดา ผู้เลี้ยงดู / เค. ฟาฟฟี โคลนหลังการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนท์
  • การเตรียมสารสกัดจากยีสต์สำหรับการทดสอบเอนไซม์
  • การสกัดโปรตีนสำหรับการวิเคราะห์ SDS-PAGE, Western blot, ELISA, LC-MS/MS หรือการทดสอบกิจกรรม
  • การปล่อยสารเมแทบอไลต์ภายในเซลล์เพื่อการวิเคราะห์เมแทบอโลมิกส์
  • การเตรียมตัวอย่าง DNA และ RNA หลังการทำให้บริสุทธิ์ที่เหมาะสมในขั้นตอนถัดไป
  • การเพิ่มประสิทธิภาพแบบผ่านปริมาณมากของบัฟเฟอร์การแตกตัว, สารเติมแต่ง, และเงื่อนไขการสกัด

วิธีการที่คลื่นเสียงอัลตราโซนิกทำลายเซลล์ยีสต์

ระหว่างการสั่นสะเทือนด้วยคลื่นเสียงความเข้มสูง คลื่นเสียงความเข้มสูงที่มุ่งเน้นจะสร้างวงจรการบีบอัดและการขยายตัวสลับกันในตัวอย่างของเหลว เมื่อมีความเข้มเพียงพอ ความผันผวนของความดันเหล่านี้จะสร้างการเกิดโพรงเสียงในของเหลว ฟองอากาศโพรงเสียงจะก่อตัว สั่นสะเทือน และยุบตัวลง ส่งผลให้เกิดแรงเฉือนเฉพาะจุด ไมโครเจ็ต ความปั่นป่วน และความชันของความดันที่รุนแรง
ในสารแขวนลอยของยีสต์ ผลกระทบทางกลเหล่านี้ทำให้ผนังเซลล์และเยื่อหุ้มเซลล์อ่อนแอและแตกออก โปรตีนภายในเซลล์ เอนไซม์ กรดนิวคลีอิก และเมตาบอไลต์จะถูกปล่อยออกมาในบัฟเฟอร์ที่ใช้ในการสลายเซลล์ เนื่องจากกระบวนการนี้เป็นเชิงกล จึงสามารถใช้กับระบบบัฟเฟอร์ที่หลากหลายและสามารถรวมกับสารยับยั้งโปรตีเอส สารรีดิวซ์ สารลดแรงตึงผิว เกลือ หรือการบำบัดด้วยเอนไซม์อ่อนๆ ได้

ระเบียบปฏิบัติทั่วไป: การสลายเซลล์ยีสต์ในไมโครเพลต

โปรโตคอลต่อไปนี้ให้จุดเริ่มต้นที่เป็นประโยชน์สำหรับการสลายเซลล์ยีสต์โดยใช้เครื่องโซนิคไมโครเพลท Hielscher UIP400MTP หรือ UIP550MTP ควรปรับค่าพารามิเตอร์ให้เหมาะสมตามสายพันธุ์ของยีสต์ ความหนาแน่นของเซลล์ โมเลกุลเป้าหมาย องค์ประกอบของบัฟเฟอร์ ประเภทของเพลท และการทดสอบในขั้นตอนต่อไป

1. เก็บเกี่ยวและล้างเซลล์ยีสต์

เพาะเลี้ยง Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Debaryomyces หรือสายพันธุ์ยีสต์อื่นภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงที่ต้องการ เก็บเกี่ยวเซลล์โดยการปั่นเหวี่ยงและกำจัดอาหารเลี้ยงเชื้อออก ล้างเพลาต์ด้วยน้ำกลั่นเย็น PBS หรือบัฟเฟอร์ไลซิสที่เลือกไว้เพื่อกำจัดส่วนประกอบของอาหารเลี้ยงเชื้อที่อาจรบกวนการวิเคราะห์ในขั้นตอนต่อไป
สำหรับการสกัดโปรตีน ให้เก็บตัวอย่างไว้ในที่เย็นและทำงานอย่างรวดเร็ว หากมีความกังวลเกี่ยวกับโปรตีเอส ให้ทำเย็นบัฟเฟอร์และวัสดุสิ้นเปลืองทั้งหมดก่อน

2. ละลายเซลล์เพล็ต

ละลายก้อนยีสต์ในบัฟเฟอร์ลิสซิสเย็นที่เหมาะสม สำหรับการปลดปล่อยโปรตีนอย่างมีประสิทธิภาพ ความหนาแน่นของเซลล์สูงมักเป็นประโยชน์ จุดเริ่มต้นควรใช้ก้อนเซลล์เปียกประมาณ 10–20% โดยน้ำหนักต่อปริมาตร หรือสารแขวนลอยที่มีความหนาแน่นเทียบเท่ากับ OD600 > 10 ขึ้นอยู่กับวิธีการทดสอบ

บัฟเฟอร์สำหรับการสลายโปรตีนยีสต์ทั่วไปอาจประกอบด้วย:

  • ระบบบัฟเฟอร์ เช่น Tris-HCl, บัฟเฟอร์ฟอสเฟต หรือ HEPES
  • เกลือ เช่น NaCl หรือ KCl
  • ค็อกเทลยับยั้งโปรตีเอส
  • สารรีดิวซ์เสริม เช่น DTT หรือ β-mercaptoethanol
  • สารทำความสะอาดเลือกได้ เช่น Triton X-100, NP-40, SDS หรือ CHAPS ขึ้นอยู่กับความเข้ากันได้ของขั้นตอนต่อไป
  • สารยับยั้งฟอสฟาเตสแบบเลือกได้สำหรับการศึกษาการฟอสโฟรีเลชัน

สำหรับสายพันธุ์ยีสต์ที่ยากหรือการสกัดโปรตีนที่อ่อนโยนมาก สามารถใช้การบำบัดเบื้องต้นด้วย Zymolyase, Lyticase หรือเอนไซม์ย่อยผนังเซลล์อื่น ๆ ก่อนการโซนิเคชัน การบำบัดเบื้องต้นด้วยเอนไซม์นี้เป็นทางเลือก แต่สามารถปรับปรุงประสิทธิภาพการแตกตัวหรือลดความเข้มของคลื่นเสียงอัลตราโซนิกที่ต้องการได้

3. โอนตัวอย่างไปยังไมโครเพลตที่เหมาะสม

UIP400MTP ช่วยให้สามารถทำการสลายและการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันของเซลล์ยีสต์ได้อย่างมีประสิทธิภาพสูงเทสารแขวนยีสต์ลงในไมโครเพลตที่เข้ากันได้กับการโซนิเคชัน โดยมักนิยมใช้ไมโครเพลตที่มีก้นกลมเนื่องจากช่วยในการเก็บตัวอย่างได้ดีขึ้นและลดพื้นที่ตาย ใช้ปริมาณตัวอย่างเท่ากันในแต่ละหลุมเพื่อเพิ่มความแม่นยำในการทำซ้ำ
ปิดผนึกจานด้วยแผ่นรองหรือฟิล์มปิดผนึกที่เหมาะสมเพื่อป้องกันการระเหย การเกิดละออง และการปนเปื้อนข้าม ตรวจสอบให้แน่ใจว่าวัสดุปิดผนึกเข้ากันได้กับอุณหภูมิและเงื่อนไขการอัลตราซาวด์ที่เลือก
ปริมาณการทำงานโดยทั่วไปขึ้นอยู่กับรูปแบบของแผ่นและแอปพลิเคชัน รูปแบบทั่วไปรวมถึงแผ่น 96 หลุม, แผ่นหลุมลึก, แผ่น PCR หรือชั้นวางหลอดที่เหมาะสม

4. ตั้งค่าการระบายความร้อน

การสลายของยีสต์ต้องการความเข้มของคลื่นเสียงความถี่สูงสูง และการทำลายทางกลไกทำให้เกิดความร้อน การควบคุมอุณหภูมิจึงมีความสำคัญอย่างยิ่ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการวิเคราะห์โปรตีน เอนไซม์ RNA หรือการฟอสโฟรีเลชัน

ใช้กลยุทธ์การระบายความร้อนที่เหมาะสม เช่น:

  • บัฟเฟอร์ละลายเซลล์แบบแช่เย็นล่วงหน้า
  • ไมโครเพลตที่ผ่านการทำให้เย็นล่วงหน้า
  • ช่วงหยุดพักเพื่อระบายความร้อนระหว่างช่วงเวลาของการสั่นโซนิค
  • การระบายความร้อนภายนอกของแท่นโซนิเคชัน (หากใช้ได้)

เป้าหมายคือการรักษาตัวอย่างให้เย็นเพียงพอเพื่อป้องกันการสลายตัวของโปรตีน การหยุดทำงานของเอนไซม์ การเสื่อมสภาพของ RNA และความแปรปรวนของตัวอย่างที่เกิดจากอุณหภูมิความร้อน

5. โซนิเกตสารแขวนลอยยีสต์

นำแผ่นที่ปิดผนึกแล้วใส่ลงในเครื่องโซนิคไมโครเพลท Hielscher รุ่น UIP400MTP หรือ UIP550MTP และเลือกโปรแกรมโซนิคแบบเป็นจังหวะ (pulsed sonication) การทำงานแบบเป็นจังหวะนี้แนะนำเนื่องจากช่วยให้เกิดการรบกวนทางกลในระยะที่เครื่องทำงาน (ON phase) และการระบายความร้อนในระยะที่เครื่องหยุดทำงาน (OFF phase)
เป็นจุดเริ่มต้นสำหรับการสลายเซลล์ยีสต์:

พารามิเตอร์ ช่วงเริ่มต้นที่แนะนำ วัตถุประสงค์
คลื่น 60–100% ความเข้มข้นของการเกิดโพรงอากาศสูงสำหรับเซลล์ยีสต์ที่แข็งแรง
โหมดชีพจร เปิด 10–30 วินาที / ปิด 30–60 วินาที การสลายเซลล์อย่างมีประสิทธิภาพด้วยการควบคุมการสะสมความร้อน
เวลาทำงานสะสม 5–15 นาที ปรับตามสายพันธุ์ ความหนาแน่น และโมเลกุลเป้าหมาย
อุณหภูมิ เก็บตัวอย่างให้เย็น ปกป้องโปรตีน, เอนไซม์, RNA, และเมตาบอไลต์
การปิดผนึกแผ่น แนะนำ ป้องกันการระเหย การเกิดละออง และการปนเปื้อนข้าม

สำหรับสารแขวนลอยยีสต์ที่มีความต้านทานสูง, ไบโอแมส P. pastoris ที่หนาแน่น, หรือการสกัดโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่ยาก, ให้เพิ่มเวลา ON สะสมเป็นขั้นตอน สำหรับโปรตีนที่ไวต่อความร้อนหรือการทดสอบเอนไซม์, ให้ใช้พัลส์ที่สั้นลง, ช่วงเวลาพักการทำความเย็นที่ยาวนานขึ้น, และแอมพลิจูดเริ่มต้นที่ต่ำกว่า

 

เครื่องโซนิคแบบหลายหลุมของ Hielscher ช่วยให้การสลายเซลล์ยีสต์ได้อย่างน่าเชื่อถือในปริมาณมาก

การสลายเซลล์ยีสต์แบบปริมาณมากในจานหลุมหลายหลุมด้วย UIP400MTP

 

6. ทำให้ Lysate ชัดเจน

หลังจากการโซนิเคชัน ให้ปั่นเหวี่ยงไมโครเพลทหรือถ่ายตัวอย่างไปยังหลอดสำหรับการปั่นเหวี่ยง นำเศษเซลล์ออกโดยการปั่นเหวี่ยงที่ความเร็วและอุณหภูมิที่เหมาะสม เก็บส่วนใสที่ได้สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป

ขึ้นอยู่กับการใช้งาน ไลเสตสามารถใช้สำหรับ:

  • การหาปริมาณโปรตีน
  • การทดสอบกิจกรรมของเอนไซม์
  • เอสดีเอส-พีจีอี และเวสเทิร์นบลอตติง
  • ELISA และอิมมูโนแอสเซย์
  • โปรตีโอมิกส์ LC-MS/MS
  • การวิเคราะห์เมตาบอไลต์
  • การแยกบริสุทธิ์ DNA หรือ RNA

7. ปรับปรุงและบันทึกวิธีการ

สำหรับการสลายยีสต์ที่สามารถทำซ้ำได้ ให้บันทึกพารามิเตอร์ที่เกี่ยวข้องทั้งหมด รวมถึงสายพันธุ์ สภาพการเพาะเลี้ยง ค่า OD600มวลเซลล์เปียก, องค์ประกอบของบัฟเฟอร์, ประเภทของแผ่น, ปริมาณตัวอย่าง, แอมพลิจูด, วงจรพัลส์, เวลาเปิดสะสม, วิธีการทำความเย็น, และอุณหภูมิตัวอย่างสุดท้าย
หากเครื่องโซนิเคเตอร์ Hielscher ติดตั้งระบบบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ ข้อมูลกระบวนการสามารถนำไปใช้สำหรับการจัดทำเอกสาร การพัฒนาวิธีการ การขยายขนาด และการควบคุมคุณภาพ

เคล็ดลับการเพิ่มประสิทธิภาพการสลายยีสต์

สำหรับการปลดปล่อยโปรตีนสูงสุด ให้ใช้สารแขวนลอยยีสต์ที่มีความหนาแน่น ความเข้มของคลื่นอัลตราโซนิกสูง และระยะเวลาการทำงานสะสมที่เพียงพอ สำหรับโปรตีนที่ไวต่อความร้อน ให้ลดแอมพลิจูด ขยายช่วงพักการทำความเย็น และรักษาอุณหภูมิของจานให้เย็นตลอดการใช้งาน
หากการแตกตัวของเซลล์ไม่สมบูรณ์ ให้เพิ่มระยะเวลาการโซนิคทีละขั้นตอน ทดสอบการบำบัดด้วยเอนไซม์ก่อน ลดความหนืดของตัวอย่าง หรือปรับบัฟเฟอร์ให้เหมาะสม หากโปรตีนเสื่อมสภาพหรือสูญเสียกิจกรรม ให้ปรับปรุงการระบายความร้อน ลดช่วงเวลา ON เพิ่มสารยับยั้ง และตรวจสอบว่าระบบสารลดแรงตึงผิวเข้ากันได้กับโปรตีนเป้าหมาย
เนื่องจากสายพันธุ์ของยีสต์มีความแตกต่างกันอย่างมากในด้านโครงสร้างผนังเซลล์ ระยะการเจริญเติบโต ระบบการแสดงออก และความหนาแน่นของชีวมวล จึงแนะนำให้ใช้เมทริกซ์การปรับให้เหมาะสมแบบสั้น ตัวอย่างเช่น ทดสอบความถี่สามค่า วงจรพัลส์สองค่า และระยะเวลาเปิดรวมสองค่า จากนั้นประเมินประสิทธิภาพการแตกตัวและความสมบูรณ์ของโปรตีน

ค้นหาเครื่องโซนิเคเตอร์ไมโครเพลทที่เหมาะสมสำหรับการทำลายเซลล์ยีสต์!
ไม่ว่าคุณจะทำการวิเคราะห์แผ่นทดสอบเพียงไม่กี่แผ่นหรือทำการคัดกรองยีสต์แบบผ่านปริมาณมาก Hielscher สามารถช่วยคุณเลือกเครื่องโซนิเคเตอร์ไมโครเพลทที่เหมาะสมและพัฒนาโปรโตคอลการแตกเซลล์ที่แข็งแกร่งได้ ติดต่อเราพร้อมข้อมูลสายพันธุ์ยีสต์ของคุณ, กระบวนการทำงาน, และข้อกำหนดด้านปริมาณการผลิต!

การขอข้อมูล



ข้อดีของเครื่องโซนิเคเตอร์ไมโครเพลท Hielscher สำหรับการแตกตัวของยีสต์

เครื่องโซนิคเอเตอร์แบบไมโครเพลทของ Hielscher เหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการที่ต้องการการทำลายเซลล์ที่แม่นยำและสามารถทำซ้ำได้กับตัวอย่างจำนวนมาก เครื่องนี้ช่วยขจัดปัญหาการจัดการแบบทีละตัวอย่างที่ใช้เวลานานของโซนิคเอเตอร์แบบโพรบ และลดความแปรปรวนที่เกิดจากการวางตำแหน่งโพรบด้วยมือ ความลึกของการจุ่ม และความแตกต่างในการจัดการตัวอย่างแต่ละตัวอย่าง

ข้อได้เปรียบหลัก ได้แก่:

  • การประมวลผลปริมาณงานสูง: ทำการโซนิเคตตัวอย่างยีสต์หลายตัวอย่างพร้อมกันในไมโครเพลตหรือในชั้นวางตัวอย่างที่เข้ากันได้
  • เงื่อนไขที่สามารถทำซ้ำได้: ใช้เงื่อนไขการโซนิคชันเดียวกันในทุกหลุมเพื่อให้ได้ผลลัพธ์การแตกตัวที่สม่ำเสมอและเปรียบเทียบได้
  • ไม่มีการปนเปื้อนข้ามระหว่างหัววัด: ตัวอย่างยังคงปิดผนึกในระหว่างการโซนิเคชัน ช่วยลดการปนเปื้อนข้ามและขั้นตอนการทำความสะอาด
  • เหมาะสำหรับเซลล์ที่แข็งแรง: อัลตราซาวนด์ความเข้มสูงช่วยในการทำลายผนังเซลล์ของยีสต์
  • กระบวนการทำงานที่มีประสิทธิภาพ: เหมาะสำหรับการคัดกรองสายพันธุ์, โคลน, สภาวะการแสดงออก, และบัฟเฟอร์การสลาย
  • กระบวนการทำงานที่มีประสิทธิภาพ: การตั้งค่าที่โปรแกรมได้, การบันทึกข้อมูลอัตโนมัติ และเหมาะสำหรับการทำงานอัตโนมัติในห้องปฏิบัติการ

การประยุกต์ใช้ในเทคโนโลยีชีวภาพยีสต์และการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ชีวภาพ

การสลายยีสต์ด้วยคลื่นเสียงความถี่สูงในไมโครเพลทช่วยสนับสนุนกระบวนการวิจัยและการคัดกรองหลายรูปแบบ ในการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ สามารถสลายโคลน P. pastoris และ S. cerevisiae ได้พร้อมกันเพื่อเปรียบเทียบระดับการแสดงออกหรือกิจกรรมของเอนไซม์ ในระบบชีววิทยาและวิทยาการเชิงอณัติ การทำให้เซลล์แตกตัวแบบมาตรฐานช่วยปรับปรุงความสามารถในการเปรียบเทียบระหว่างสภาวะต่างๆ ในจุลชีววิทยา การใช้คลื่นเสียงช่วยในการเตรียมสารละลายเซลล์แตกตัวจากหลายสายพันธุ์ สภาพอาหารเลี้ยงเชื้อ หรือการกระตุ้นความเครียดได้อย่างรวดเร็ว
พื้นที่การใช้งานทั่วไปประกอบด้วย:

  • การสกัดโปรตีนจากยีสต์
  • การคัดกรองโปรตีนรีคอมบิแนนท์
  • การคัดกรองกิจกรรมของเอนไซม์
  • คัดลอกการเลือกหลังการแปลง
  • การเพิ่มประสิทธิภาพการหมัก
  • การเตรียมตัวอย่างโปรตีโอมิกส์
  • การเตรียมตัวอย่างเมตาโบโลมิกส์
  • การศึกษาการแตกของผนังเซลล์
  • การทดสอบจุลชีววิทยาแบบความจุสูง

การสลายยีสต์ที่เชื่อถือได้เริ่มต้นด้วยการควบคุมการโซนิค

การสลายตัวของยีสต์อาจเป็นเรื่องยากเมื่อจำนวนตัวอย่างเพิ่มขึ้น แต่เครื่องโซนิคเอเตอร์ไมโครเพลทของ Hielscher ช่วยให้กระบวนการเร็วขึ้น สะอาดขึ้น และทำซ้ำได้มากขึ้น เครื่อง UIP400MTP และ UIP550MTP ช่วยให้ผู้วิจัยสามารถประมวลผลแผ่นเพลททั้งหมดภายใต้เงื่อนไขอัลตราโซนิกที่กำหนดไว้ล่วงหน้า ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานในขณะที่ลดการจัดการด้วยมือ
สำหรับนักจุลชีววิทยา นักชีววิทยาระดับโมเลกุล นักวิทยาศาสตร์ด้านโปรตีน และห้องปฏิบัติการเทคโนโลยีชีวภาพ การใช้คลื่นเสียงในไมโครเพลทเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพในการปล่อยส่วนประกอบของยีสต์ภายในเซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพและสามารถทำซ้ำได้

สอบถามข้อมูลเพิ่มเติม

ต้องการความช่วยเหลือในการเพิ่มประสิทธิภาพการสลายยีสต์หรือไม่?
แจ้งให้เราทราบเกี่ยวกับสายพันธุ์ยีสต์ ปริมาณตัวอย่าง ความหนาแน่นของเซลล์ รูปแบบของเพลท โมเลกุลเป้าหมาย และการทดสอบในขั้นตอนต่อไป เราจะช่วยให้คุณเลือกเครื่องโซนิคเอเตอร์ไมโครเพลทของ Hielscher ที่เหมาะสมและแนะนำพารามิเตอร์เริ่มต้นที่เหมาะสมสำหรับกระบวนการแตกเซลล์ของคุณ !





เครื่องสะท้อนเสียงแบบแผ่น UIP400MTP สําหรับวิทยาศาสตร์เพื่อชีวิตในคลิปสั้นนี้ คุณจะเห็น Hielscher UIP400MTP ซึ่งเป็นเครื่องโซนิเคเตอร์กำลังสูง 400 วัตต์ ที่ออกแบบมาสำหรับจานหลุมหลายหลุม, จาน PCR และหลอดตัวอย่าง เหมาะสำหรับการใช้งานที่ต้องการความเข้มสูง เช่น การแตกเซลล์, การแตกชิ้นส่วน DNA/RNA และการสกัดโปรตีนต่างจากอ่างอัลตราโซนิก เครื่องนี้มีเขาครอบความเข้มสูงที่ให้เสียงโซนิคอย่างสม่ำเสมอในทุกหลุม พร้อมการควบคุมความถี่, กำลัง, และการกระตุ้นอย่างแม่นยำ มีตัวจับเวลา, ตัววัดอุณหภูมิ, และระบบทำความเย็นในอ่างน้ำ (พร้อมตัวเลือกเครื่องทำความเย็นภายนอก) เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่สม่ำเสมอ ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO และสอดคล้องกับมาตรฐาน UL, RoHS, และ CE เครื่องโซนิเคเตอร์นี้รองรับการใช้งานตลอด 24/7 สำหรับกระบวนการทำงานที่มีปริมาณสูง


คำถามที่พบบ่อยเกี่ยวกับการสลายเซลล์ยีสต์ด้วยไมโครเพลทโซนิเคชัน

เซลล์ยีสต์สามารถถูกทำลายได้โดยการสั่นสะเทือนด้วยคลื่นเสียงหรือไม่?

ใช่ เซลล์ยีสต์ เช่น Saccharomyces cerevisiae และ Pichia pastoris สามารถถูกทำลายได้ด้วยการใช้คลื่นเสียงความเข้มสูง การเกิดโพรงเสียงอัลตราโซนิกสร้างแรงเฉือนทางกลที่รุนแรงซึ่งทำลายผนังเซลล์และเยื่อหุ้มเซลล์ยีสต์ ทำให้โปรตีน เอนไซม์ กรดนิวคลีอิก และเมแทบอไลต์ถูกปล่อยออกมา

ทำไมเซลล์ยีสต์จึงยากต่อการแตกตัวมากกว่าเซลล์แบคทีเรีย?

เซลล์ยีสต์มีผนังเซลล์ที่หนาและทนทานต่อแรงทางกล ซึ่งประกอบด้วยกลูแคน แมนโนโปรตีน และไคตินเป็นหลัก โครงสร้างที่แข็งแรงนี้ทำให้ยีสต์ยากต่อการทำลายมากกว่าเซลล์แบคทีเรียหรือเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหลายชนิด ดังนั้น การทำให้ยีสต์แตกตัวจึงมักต้องใช้ความเข้มข้นสูงกว่า ใช้เวลานานกว่า หรืออาจต้องมีการเตรียมด้วยเอนไซม์ก่อนตามความเหมาะสม

เครื่องโซนิคของ Hielscher รุ่นใดที่เหมาะสำหรับการสลายยีสต์ในไมโครเพลต?

เครื่อง Hielscher UIP400MTP และ UIP550MTP เหมาะสำหรับการสลายยีสต์ในไมโครเพลทที่มีปริมาณสูง UIP400MTP เหมาะสำหรับการเตรียมตัวอย่างแบบขนานในกระบวนการทำงานประจำวัน ในขณะที่ UIP550MTP ให้พลังงานอัลตราโซนิกที่สูงกว่าสำหรับการทำงานที่ต้องการความเข้มข้นสูง เช่น การแตกเซลล์ การเตรียมสารแขวนลอยที่มีความหนาแน่นสูง และการใช้กับยีสต์สายพันธุ์ที่แข็งแรง

Pichia pastoris สามารถถูกทำลายในเครื่องโซนิคเกอร์แบบไมโครเพลทได้หรือไม่?

ใช่ Pichia pastoris หรือที่รู้จักในชื่อ Komagataella phaffii สามารถถูกทำลายได้ด้วยการใช้โซนิคชันแบบไมโครเพลทที่มีความเข้มสูง เนื่องจาก P. pastoris สามารถสร้างชีวมวลที่หนาแน่นและมีผนังเซลล์ที่แข็งแรง จึงแนะนำให้ปรับค่าความถี่, วงจรการสั่น, การระบายความร้อน, และระยะเวลาการโซนิคชันทั้งหมดให้เหมาะสม

พารามิเตอร์การโซนิคเคชันทั่วไปสำหรับการสลายเซลล์ยีสต์คืออะไร?

ช่วงเริ่มต้นที่มีประโยชน์คือ 50–80% ของแอมพลิจูด, การทำงานแบบเป็นจังหวะ เช่น 10–30 วินาที เปิด และ 30–60 วินาที ปิด, และเวลาเปิดสะสม 5–15 นาที. ค่าพารามิเตอร์ที่แน่นอนขึ้นอยู่กับสายพันธุ์ของยีสต์, ความหนาแน่นของเซลล์, ปริมาตรของตัวอย่าง, ประเภทของแผ่น, บัฟเฟอร์, และโมเลกุลเป้าหมาย.

ทำไมการสลายตัวของยีสต์จึงควรทำด้วยโหมดพัลส์?

โหมดพัลส์ช่วยลดการสะสมความร้อนระหว่างการโซนิค. ในระหว่างเฟส ON, การเกิดคาวิเทชันอัลตราโซนิกทำลายเซลล์. ในระหว่างเฟส OFF, ตัวอย่างสามารถเย็นตัวได้. สิ่งนี้มีความสำคัญเพราะความร้อนที่มากเกินไปสามารถทำให้โปรตีนเสียสภาพ, ลดกิจกรรมของเอนไซม์, ทำลาย RNA, และทำให้ความสามารถในการทำซ้ำลดลง.

จำเป็นต้องมีการบำบัดด้วยเอนไซม์ก่อนการสั่นด้วยคลื่นเสียงเพื่อเตรียมเซลล์ยีสต์หรือไม่?

การบำบัดด้วยเอนไซม์ล่วงหน้าไม่จำเป็นต้องทำเสมอไป แต่สามารถปรับปรุงประสิทธิภาพการสลายตัวได้ เอนไซม์เช่น Zymolyase หรือ Lyticase สามารถย่อยผนังเซลล์ยีสต์บางส่วนได้ และช่วยลดความเข้มข้นของคลื่นเสียงหรือเวลาที่ต้องการสำหรับการสลายตัวอย่างสมบูรณ์ได้ ซึ่งอาจมีประโยชน์สำหรับโปรตีนที่ไวต่อการสลายหรือสายพันธุ์ที่ยากต่อการสลาย

การป้องกันการเกิดความร้อนสูงเกินไปในระหว่างการสั่นสะเทือนของยีสต์สามารถทำได้อย่างไร?

ใช้บัฟเฟอร์ที่แช่เย็นไว้ล่วงหน้า โหมดพัลส์ หยุดพักเพื่อลดอุณหภูมิ และตั้งค่าแผ่นไมโครเพลทให้เย็น ปิดฝาไมโครเพลทให้สนิทและตรวจสอบอุณหภูมิเมื่อเป็นไปได้ สำหรับโปรตีนที่ไวต่อความร้อน ให้ใช้ช่วงเวลาเปิด (ON) สั้นลง ช่วงเวลาปิด (OFF) ยาวขึ้น และดำเนินการกับตัวอย่างภายใต้สภาวะเย็น

การสั่นด้วยคลื่นเสียงไมโครเพลทสามารถทดแทนการบดด้วยลูกปัดสำหรับการสลายเซลล์ยีสต์ได้หรือไม่?

ในหลายขั้นตอนการทำงาน ใช่ การโซนิเคชันด้วยไมโครเพลทสามารถแทนที่การบดด้วยลูกปัดได้เมื่อต้องการการแตกตัวที่สะอาด ทำซ้ำได้ และขนานกัน การทำเช่นนี้ช่วยหลีกเลี่ยงการจัดการลูกปัด ลดความซับซ้อนของวัสดุสิ้นเปลือง และทำให้การอัตโนมัติง่ายขึ้น อย่างไรก็ตาม ควรตรวจสอบความถูกต้องของแต่ละการใช้งานโดยการเปรียบเทียบผลผลิตการแตกตัว ความสมบูรณ์ของโปรตีน และประสิทธิภาพของการทดสอบ

การสั่นด้วยไมโครเพลทเหมาะสำหรับการสกัดโปรตีนจากยีสต์หรือไม่?

ใช่ การสั่นด้วยไมโครเพลทเหมาะสำหรับการสกัดโปรตีนจากยีสต์ โดยเฉพาะเมื่อต้องเปรียบเทียบหลายโคลนหรือสภาวะการเพาะเลี้ยง ตัวยับยั้งโปรตีเอส บัฟเฟอร์เย็น และการตั้งค่าพัลส์ที่ควบคุมได้ช่วยรักษาคุณภาพของโปรตีน

สามารถใช้วิธีเดียวกันสำหรับการสกัด DNA, RNA, และโปรตีนได้หรือไม่?

หลักการพื้นฐานของการใช้คลื่นเสียงเดียวกันสามารถนำมาใช้ได้ แต่ควรปรับค่าบัฟเฟอร์และเงื่อนไขของกระบวนการให้เหมาะสมกับโมเลกุลเป้าหมาย การทำงานกับโปรตีนจำเป็นต้องมีการยับยั้งโปรตีเอสและการควบคุมอุณหภูมิ การทำงานกับอาร์เอ็นเอจำเป็นต้องมีการจัดการที่ปราศจากอาร์เอ็นเอเอสและระบบทำความเย็นที่แข็งแรง การทำงานกับดีเอ็นเออาจต้องการเงื่อนไขการแตกตัวและการทำให้บริสุทธิ์ที่แตกต่างกัน ขึ้นอยู่กับว่าต้องการดีเอ็นเอที่สมบูรณ์หรือดีเอ็นเอที่ถูกตัดเป็นชิ้น

ควรใช้แผ่นอะไรสำหรับการสลายยีสต์?

ใช้ไมโครเพลทหรือเพลทหลุมลึกที่เข้ากันได้กับการโซนิเคชันพร้อมการปิดผนึกที่เหมาะสม เพลทก้นกลมมักมีประโยชน์สำหรับการจัดการสารแขวนลอย เพลทควรทนต่อสภาวะการโซนิเคชันที่เลือก อุณหภูมิของตัวอย่าง และขั้นตอนการปั่นเหวี่ยง

ฉันจะรู้ได้อย่างไรว่าการสลายตัวของยีสต์เสร็จสมบูรณ์แล้ว?

ประสิทธิภาพของการแตกตัวสามารถตรวจสอบได้โดยการส่องกล้องจุลทรรศน์, ปริมาณโปรตีนที่ได้, กิจกรรมของเอนไซม์, การลดลงของความหนืด, การวิเคราะห์ SDS-PAGE, ปริมาณ DNA/RNA ที่ได้, หรือการเปรียบเทียบกับวิธีการแตกตัวที่ทราบแล้ว สำหรับการพัฒนาวิธีการ ควรประเมินทั้งปริมาณและคุณภาพของโมเลกุลเป้าหมายที่ปล่อยออกมา

UIP400MTP หรือ UIP550MTP: คุณควรเลือกใช้ไมโครเพลทโซนิเคเตอร์รุ่นใด?

UIP400MTP เป็นเครื่องโซนิเคเตอร์ไมโครเพลทที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการเตรียมตัวอย่างแบบปริมาณมากในกระบวนการทำงานประจำวัน รวมถึงการแตกเซลล์ยีสต์ การสกัดโปรตีน การตัดชิ้นดีเอ็นเอ การแยกไบโอฟิล์ม และการเตรียมตัวอย่างสำหรับการทดสอบ เหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการที่ต้องการการทำโซนิเคชันที่แม่นยำและสามารถทำซ้ำได้ในรูปแบบเพลทมาตรฐาน
UIP550MTP ให้พลังงานอัลตราโซนิกที่สูงขึ้นและแนะนำเมื่อต้องการการใช้งานที่ท้าทายมากขึ้นซึ่งต้องการความเข้มเสียงที่สูงขึ้น เวลาในการประมวลผลที่สั้นลง ปริมาณตัวอย่างที่สูงขึ้น หรือสภาวะการทำลายที่แข็งแกร่งขึ้น สำหรับการแตกตัวของยีสต์ UIP550MTP มีประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับชีวมวลที่หนาแน่น สายพันธุ์ที่ยาก ปริมาณการทำงานที่มากขึ้น และการคัดกรองการแสดงออกที่มีประสิทธิภาพสูง

การสลายของยีสต์โดยการสั่นด้วยไมโครเพลทสามารถทำให้เป็นระบบอัตโนมัติได้หรือไม่?

ใช่ การทำโซนิเคชันด้วยไมโครเพลทเหมาะอย่างยิ่งสำหรับกระบวนการทำงานในห้องปฏิบัติการแบบอัตโนมัติ เนื่องจากตัวอย่างยังคงอยู่ในรูปแบบของเพลท ซึ่งช่วยสนับสนุนการผสานรวมกับระบบปิเปต ระบบจัดการเพลท การปั่นเหวี่ยง การเตรียมชุดทดสอบ และกระบวนการคัดกรองแบบความจุสูง

 

วรรณกรรม / อ้างอิง

การทำลายเซลล์ยีสต์แบบผ่านปริมาณมากโดยใช้เครื่องโซนิเคเตอร์แบบโฟกัส UIP400MTP สำหรับบ่อน้ำยา

เรายินดีที่จะพูดคุยเกี่ยวกับกระบวนการของคุณ