แทนที่การขูดเซลล์ด้วย UIP400MTP High-throughput Sonicator

การถอดและการสกัดสายเซลล์ที่ยึดติดจากเพลตหลายหลุมสําหรับการวิเคราะห์มัลติโอมิกส์เป็นงานประจําวันในห้องปฏิบัติการ การถอดเซลล์ที่มีปริมาณงานสูงโดยใช้เครื่อง sonic UIP400MTP ator แบบหลายหลุมแทนที่การขูดเซลล์ด้วยตนเองซึ่งนําไปสู่ผลผลิตที่สูงขึ้นของ RNA ไขมันทั้งหมด และสารเมตาบอไลต์ขั้วทั้งหมด วิธีการใหม่รวมเครื่องสะท้อนเสียง Hielscher UIP400MTP เข้ากับเวิร์กสเตชันการจัดการของเหลว Beckman Coulter i7 ทําให้สามารถประมวลผลเซลล์สําหรับ RNA สารเมตาบอไลต์และการสกัดไขมันได้อย่างมีประสิทธิภาพ วิธีการที่นําเสนอเหนือกว่าวิธีการขูดเซลล์แบบแมนนวลแบบดั้งเดิมโดยบรรลุความสามารถในการทําซ้ําและผลผลิตที่เหนือกว่าในเซลล์ประเภทต่างๆ และสภาวะการทดลอง

ปรับปรุงการถอดเซลล์ด้วย Microplate Sonicator UIP400MTP

ระบบการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ยึดติดมีบทบาทสําคัญในการวิจัยทางพิษวิทยาและชีวการแพทย์ ในบริบทนี้ Cruchley-Fuge et al. (2024) กล่าวถึงความท้าทายที่สําคัญในโครงการ PrecisionTox ที่มุ่งเน้นไปที่การใช้ประโยชน์จากเทคโนโลยีโอมิกส์สําหรับการประเมินอันตรายจากสารเคมี โครงการนี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อการวิเคราะห์ปริมาณงานสูงของตัวอย่างหลายพันตัวอย่างที่ผ่านการบําบัดด้วยสารเคมีที่หลากหลาย เพื่อตอบสนองความต้องการนี้นักวิจัยได้พัฒนาเวิร์กโฟลว์อัตโนมัติที่รวมเครื่องโซนิคเตอร์ UIP400MTP เข้ากับโปรโตคอลการสกัดแบบ biphasic ที่กําหนดไว้สําหรับการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีเหลว-แมสสเปกโตรเมตรี (LC-MS) การศึกษาของพวกเขาประเมินประสิทธิภาพของ UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator ในการแยกเซลล์ที่ยึดติดเมื่อเทียบกับการขูดด้วยมือและวิธีการแบบดั้งเดิมอื่นๆ

การปรับปรุงมัลติโอมิกส์: การสกัดเซลล์ที่ยึดติดโดยอัตโนมัติด้วย UIP400MTP

ทีมนักวิจัยของ Laura Cruchley-Fuge จากมหาวิทยาลัยเบอร์มิงแฮมใช้เซลล์มนุษย์สามสาย: HepG2 (เซลล์มะเร็งตับ), HepaRG (เซลล์คล้ายเซลล์ตับที่แตกต่าง) และ H295R (เซลล์มะเร็งต่อมหมวกไต) เซลล์เหล่านี้ถูกเพาะเลี้ยงในแผ่น 24 หลุมและ 96 หลุม และสัมผัสกับสารเคมีทดสอบ เช่น อะฟลาทอกซิน B1 และฟอร์สโคลิน

การออกแบบการทดลอง:

• ระยะที่ 1: การเพิ่มประสิทธิภาพการตั้งค่าพลังงานของเครื่องโซนิก UIP400MTP และการเปรียบเทียบกับการขูดเซลล์แบบแมนนวลและอ่างน้ําโซนิค เซลล์ HepG2 ถูกนํามาใช้เพื่อประเมิน RNA เมตาบอไลต์ และการฟื้นตัวของไขมัน
• ระยะที่ 2: การรวม UIP400MTP เข้ากับเวิร์กโฟลว์การสกัดแบบสองเฟสโดยใช้ระบบ Beckman Coulter i7 การตรวจสอบความถูกต้องดําเนินการโดยใช้เซลล์ HepaRG และ H295R

เวิร์กโฟลว์การสกัด: เวิร์กโฟลว์ครอบคลุมการสัมผัสสารเคมีในเพลตหลายหลุม การแยกเซลล์โดยใช้ UIP400MTP และการสกัดแบบ biphasic ผ่าน Bligh & ไดเออร์ (B&D) วิธี การวิเคราะห์ LC-MS ดําเนินการโดยใช้ Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 สําหรับสารประกอบไลโปฟิลิกและโพลาร์ เดอะ บี&วิธี D ซึ่งเป็นมาตรฐานทองคําสําหรับการหาปริมาณไขมัน เกี่ยวข้องกับการสกัดสองขั้นตอนด้วยเมทานอล คลอโรฟอร์ม และน้ํา ตามด้วยการหาปริมาณไขมันในระยะคลอโรฟอร์ม

เครื่อง sonicator ไมโครเพลท UIP400MTP ช่วยในการถอดสายเซลล์ที่ยึดติดออกจากแผ่นหลายหลุมและจานเพาะเชื้อ

ผลลัพธ์:

• ระยะที่ 1: มีการระบุเงื่อนไขการ sonication ที่เหมาะสมที่กําลังไฟ 60%
  UIP400MTP ให้การกู้คืน RNA สูงสุดพร้อมความสามารถในการทําซ้ําที่ยอดเยี่ยมเมื่อเทียบกับการขูดด้วยตนเองและอ่างโซนิค
  การกู้คืนเมตาบอไลต์ขั้วโลกมีความสอดคล้องกันในทุกวิธีการในขณะที่การฟื้นตัวของไขมันนั้นเหนือกว่าอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเทียบกับ UIP400MTP
• ระยะที่ 2: การตรวจสอบความถูกต้องของเซลล์ HepaRG และ H295R แสดงให้เห็นถึงความสามารถในการทําซ้ําสูงในข้อมูลลิพิโดมิกส์และเมตาโบโลมิกส์ ตามที่ระบุโดยคะแนน PCA ที่จัดกลุ่มอย่างแน่นหนา
  การรักษาด้วยอะฟลาทอกซิน B1 และฟอร์สโคลินแตกต่างจากกลุ่มควบคุมอย่างมีประสิทธิภาพ โดยเน้นย้ําถึงความไวและความน่าเชื่อถือของวิธีการ

“อุปกรณ์ sonication Hielscher UIP400MTP เป็นแนวทางทางเลือกที่มีคุณภาพสูงและทําซ้ําได้สําหรับ "มาตรฐานทองคํา" ของการขูดเซลล์ด้วยตนเองซึ่งนําไปสู่ผลผลิตที่สูงขึ้นของ RNA ไขมันทั้งหมดและเมตาบอไลต์ขั้วทั้งหมด” (Cruchley-Fuge และคณะ, 2024)

Cruchley-Fuge และคณะ เน้นข้อดีของเครื่องสะท้อนเสียง UIP400MTP สําหรับการประมวลผลเซลล์ที่ยึดติด วิธีนี้ช่วยเพิ่มความสามารถในการทําซ้ํา ปริมาณงาน และผลผลิต ทําให้เป็นเครื่องมืออันล้ําค่าสําหรับการศึกษาขนาดใหญ่ เช่น PrecisionTox การรวมเข้ากับเวิร์กโฟลว์อัตโนมัติของ UIP400MTP ไม่เพียงแต่ช่วยลดความแปรปรวน แต่ยังช่วยเพิ่มความคล่องตัวให้กับกระบวนการที่ใช้แรงงานมาก

ผลงานของ Cruchley-Fuge et al. (2024) อํานวยความสะดวกและปรับปรุงการประมวลผลการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ยึดติดสําหรับการวิเคราะห์มัลติโอมิกส์ การรวมเครื่องโซนิคเตอร์ UIP400MTP เข้ากับเวิร์กโฟลว์อัตโนมัติช่วยให้มั่นใจได้ถึงการเตรียมตัวอย่างที่สม่ําเสมอและมีประสิทธิภาพทําให้เหมาะอย่างยิ่งสําหรับการวิจัยทางพิษวิทยาที่มีปริมาณงานสูง
 

การออกแบบ การผลิต และการให้คําปรึกษา – คุณภาพ ผลิตในประเทศเยอรมนี

เครื่องอัลตราโซนิก Hielscher เป็นที่รู้จักกันดีในด้านคุณภาพและมาตรฐานการออกแบบสูงสุด ความทนทานและใช้งานง่ายช่วยให้สามารถรวมเครื่องอัลตราโซนิกของเราเข้ากับโรงงานอุตสาหกรรมได้อย่างราบรื่น สภาพที่ขรุขระและสภาพแวดล้อมที่ต้องการสามารถจัดการได้ง่ายโดยเครื่องอัลตราโซนิกของ Hielscher

Hielscher Ultrasonics เป็น บริษัท ที่ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO และให้ความสําคัญเป็นพิเศษกับเครื่องสะท้อนเสียงประสิทธิภาพสูงที่มีเทคโนโลยีล้ําสมัยและเป็นมิตรกับผู้ใช้ แน่นอนว่าเครื่องอัลตราโซนิกของ Hielscher เป็นไปตามมาตรฐาน CE และตรงตามข้อกําหนดของ UL, CSA และ RoHs