โปรโตคอลการเพาะปลูกและการกําจัดฟิล์มชีวภาพ Staphylococcus

วิธีการที่ได้มาตรฐานเป็นสิ่งสําคัญสําหรับผลการวิจัยที่เชื่อถือได้ คุณสามารถค้นหาโปรโตคอลการเพาะปลูกและการแยกสําหรับฟิล์มชีวภาพของหินแหลม โปรโตคอลนี้มุ่งเน้นไปที่การเตรียมตัวอย่างที่มีปริมาณงานสูงอย่างคล่องตัวโดยใช้เครื่อง sonicator แบบเพลทหลายหลุม UIP400MTP สําหรับการถอดฟิล์มชีวภาพที่มีประสิทธิภาพและมีปริมาณงานสูงในแผ่น 96 หลุม โปรโตคอลนี้ยังมีขั้นตอนสําคัญสําหรับการเพาะเลี้ยง การล้าง และการสร้างภาพไบโอฟิล์ม โดยมุ่งเน้นไปที่การลดความแปรปรวนและรับประกันความสามารถในการทําซ้ํา

การวิจัยไบโอฟิล์มและยาปฏิชีวนะ Staphylococcus

ฟิล์มชีวภาพ Staphylococcus มีบทบาทสําคัญในการติดเชื้อถาวรเนื่องจากความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะและการตอบสนองของภูมิคุ้มกัน การสร้างไบโอฟิล์มให้สภาพแวดล้อมที่ป้องกันแบคทีเรียทําให้การติดเชื้อรักษาได้ยาก การวิจัยเกี่ยวกับไบโอฟิล์มมักมุ่งเน้นไปที่การทําความเข้าใจการก่อตัว พฤติกรรม และความอ่อนไหวต่อยาต้านจุลชีพ โดยเน้นที่วิธีการที่มีปริมาณงานสูงเพื่อปรับปรุงเวิร์กโฟลว์การทดลอง
เครื่อง sonicator แบบหลายหลุม UIP400MTP มีข้อได้เปรียบที่สําคัญในการวิจัยไบโอฟิล์มโดยช่วยให้สามารถถอดไบโอฟิล์มออกจากแผ่น 96 หลุมได้อย่างรวดเร็วและมีประสิทธิภาพ อุปกรณ์นี้ให้พลังงานอัลตราโซนิกที่สม่ําเสมอกับหลุมทั้งหมดเพื่อให้มั่นใจได้ผลลัพธ์ที่สม่ําเสมอในขณะที่ลดความแปรปรวนให้เหลือน้อยที่สุด

โปรโตคอลสําหรับการเพาะปลูกและปลดฟิล์มชีวภาพ Staphylococcus

ด้านล่างนี้ เราจะแนะนําคุณด้วยคําแนะนําทีละขั้นตอนผ่านกระบวนการเพาะเลี้ยงและถอดฟิล์มชีวภาพ Staphylococcus ในฐานะที่เป็นขั้นตอนการวิเคราะห์ที่เป็นแบบอย่างเราแสดงวิธีหาปริมาณมวลชีวภาพที่เพาะปลูกด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกโดยการย้อมสีคริสตัลไวโอเล็ต

การเพาะปลูก Staphylococcus Biofilm

วัสดุที่ต้องการ:

• แผ่นไมโครไทเตอร์ที่ผ่านการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อโพลีสไตรีน 96 หลุมที่ผ่านการบําบัดด้วยไขมันพร้อมฝาปิด
• น้ําซุปถั่วเหลืองทริปติก (TSB) ที่มีกลูโคส 0.25%
• ตู้นิรภัยทางชีวภาพ

กระได:

1. เตรียมสภาพแวดล้อมการทํางานที่ปลอดเชื้อในตู้นิรภัยทางชีวภาพเพื่อลดการปนเปื้อน
2. เพิ่ม TSB ที่มีกลูโคส 0.25% ลงในหลุมแผ่นไมโครไทเตอร์ โดยทั่วไปแล้ว TSB ที่ไม่มีกลูโคสไม่สนับสนุนการสร้างไบโอฟิล์ม และควรใช้เป็นตัวควบคุมหากจําเป็นเท่านั้น
3. ฉีดวัคซีนในหลุมด้วยสายพันธุ์แบคทีเรียที่เตรียมไว้ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง:
4. เตรียมสารแขวนลอยของแบคทีเรียเพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีกลุ่มเซลล์ที่มีอยู่ก่อนโดยการทําให้สารแขวนลอยเป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้การ sonication หรือโดยการสลายคลัสเตอร์ด้วยเข็ม 23 เกจและการหมุนเวียนสั้น ๆ
5. ปิดผนึกจานด้วยฝาปิดและฟักไข่ภายใต้สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสําหรับการสร้างไบโอฟิล์ม (เช่น 37°C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง)
6. ทําการทดลองเป็นสามเท่าสําหรับแบคทีเรียแต่ละสายพันธุ์ (สามหลุมต่อสายพันธุ์) เพื่อให้มั่นใจในความน่าเชื่อถือ
7. จัดสรรหกหลุมต่อจานสําหรับการควบคุมเชิงลบ สามารถทดสอบได้ถึง 30 สายพันธุ์ต่อเพลต 96 หลุม

การสร้างภาพและการล้างไบโอฟิล์ม

1. หลังจากการฟักตัว ให้ทิ้งสื่ออย่างระมัดระวังเพื่อหลีกเลี่ยงการรบกวนไบโอฟิล์ม
2. ล้างแต่ละบ่อสี่ครั้งด้วยน้ําเกลือทางสรีรวิทยาเพื่อกําจัดแบคทีเรียแพลงก์ตอน
3. ตรวจสอบด้านล่างของหลุมเพื่อหาหย่อมสีขาวที่บ่งบอกถึงการมีอยู่ของไบโอฟิล์ม

การถอดฟิล์มชีวภาพโดยใช้ Multi-Well Plate Sonicator UIP400MTP

การตั้งค่าอุปกรณ์และพารามิเตอร์:

• UIP400MTP เครื่องสะท้อนเสียงแบบแผ่นหลายหลุม
• การตั้งค่าการทํางาน: 60% amplitude, โหมดรอบเปิด 60 วินาที / ปิด 30 วินาที

กระได:

1. วางแผ่นไมโครไทเตอร์ที่ล้างแล้วลงบนแท่น UIP400MTP
2. Sonicate samp ที่การตั้งค่าที่แนะนํา (60% amplitude, เปิด 60 วินาที, ปิด 30 วินาที) ปรับการตั้งค่าให้เข้ากับสายพันธุ์ของแบคทีเรีย
3. เริ่มกระบวนการ sonication เพื่อถอดฟิล์มชีวภาพ คลื่นอัลตราโซนิกขัดขวางเมทริกซ์ไบโอฟิล์มปล่อยแบคทีเรียที่เกาะติด
4. UIP400MTP ช่วยให้มั่นใจได้ถึงการเปิดรับแสงที่สม่ําเสมอในทุกหลุมเพื่อผลลัพธ์การถอดที่สม่ําเสมอ

ขั้นตอนการวิเคราะห์: การหาปริมาณชีวมวล Staphylococcus Biofilm ที่แยกออกโดยใช้คริสตัลไวโอเล็ต (CV)

วัสดุที่ต้องการ:

• 0สารละลายคริสตัลไวโอเล็ต (CV) .1%
• เอทานอล 95% หรือกรดอะซิติก 30% (สําหรับการละลาย)
• เครื่องอ่านไมโครเพลทสามารถอ่านที่ความเร็ว 570 นาโนเมตร
• แผ่นไมโครไทเตอร์ปลอดเชื้อสําหรับการย้อมสี

กระได:

1. การเตรียมแผ่นย้อมสี: ถ่ายโอนสารแขวนลอยไบโอฟิล์มที่แยกออก 100 μL จากแต่ละหลุมของแผ่น sonicated ลงในหลุมที่สอดคล้องกันของแผ่นไมโครไทเตอร์ 96 หลุมที่สะอาดและปลอดเชื้อ สิ่งนี้ทําให้มั่นใจได้ถึงสภาพแวดล้อมที่ชัดเจนและสม่ําเสมอสําหรับการย้อมสี
2. การย้อมสีไบโอฟิล์มที่แยกออก: เติมสารละลายคริสตัลไวโอเล็ต 0.1% 150 μL ลงในแต่ละหลุมที่มีสารแขวนลอยไบโอฟิล์มที่แยกออก ปิเปตเบา ๆ เพื่อให้แน่ใจว่ามีส่วนผสมของสารแขวนลอยไบโอฟิล์มและคริสตัลไวโอเล็ตอย่างสม่ําเสมอ
3. การฟักไข่: ปล่อยให้เพลตฟักตัวที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาทีเพื่อให้คริสตัลไวโอเล็ตสามารถย้อมสีชีวมวลได้อย่างมีประสิทธิภาพ
4. การซัก: หลังจากการฟักไข่ให้ทิ้งสารละลายคริสตัลไวโอเล็ตออกจากบ่อน้ําอย่างระมัดระวังโดยไม่รบกวนชีวมวล ล้างแต่ละหลุมสามครั้งด้วยน้ําเกลือทางสรีรวิทยาที่ปราศจากเชื้อเพื่อขจัดคราบที่ไม่ผูกมัด
5. การอบแห้ง: ปล่อยให้จานผึ่งลมให้แห้งที่อุณหภูมิห้องหรือภายใต้เครื่องดูดควันอากาศที่ปลอดเชื้อ หลีกเลี่ยงการให้ความร้อน เพราะอาจทําให้ผลลัพธ์เปลี่ยนไปได้
6. การละลาย: เติมเอทานอล 200% 95% (หรือกรดอะซิติก 30% ขึ้นอยู่กับแนวทางปฏิบัติในห้องปฏิบัติการมาตรฐาน) ลงในแต่ละหลุมเพื่อละลายคริสตัลไวโอเล็ตที่ผูกมัด ผสมเบา ๆ โดยการปิเปตหรือเขย่าจานเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
7. การวัด: วัดความหนาแน่นของแสง (OD) ของสารละลายคริสตัลไวโอเล็ตที่ละลายได้ที่ 570 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท
8. การวิเคราะห์ข้อมูล: ลบค่าเฉลี่ย OD570 ของกลุ่มควบคุมเชิงลบ (หลุมที่มี TSB แต่ไม่มีเชื้อแบคทีเรีย) จากหลุมทดลองเพื่อพิจารณาการย้อมสีพื้นหลัง บันทึกและวิเคราะห์ข้อมูล

หมายเหตุ: ทําการทดลองเป็นสามครั้งสําหรับแต่ละเงื่อนไขเพื่อให้แน่ใจว่าสามารถทําซ้ําได้ ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามีการจัดการคริสตัลไวโอเล็ตและเอทานอลอย่างเหมาะสม โดยปฏิบัติตามโปรโตคอลความปลอดภัยและการกําจัด
 

ประโยชน์หลักของ UIP400MTP โดยย่อ:

• การประมวลผลปริมาณงานสูง: ออกแบบมาโดยเฉพาะสําหรับเพลตหลายหลุม ช่วยให้คุณสามารถประมวลผลตัวอย่างหลายตัวอย่างพร้อมกันได้
• การกระจายอัลตราโซนิกสม่ําเสมอ: รับประกันความเข้มของอัลตราโซนิกที่เท่ากันทั่วทั้งหลุม ให้ผลลัพธ์ที่สม่ําเสมอในทุกตัวอย่าง
• ใช้แผ่นมาตรฐานใด ๆ : UIP400MTP สามารถรองรับแผ่นหลายหลุมมาตรฐาน จานเพาะเชื้อ และชั้นวางท่อ ไม่จําเป็นต้องใช้เพลทที่เป็นกรรมสิทธิ์ราคาแพง!
• ส่วนต่อประสานที่ใช้งานง่าย: ติดตั้งและควบคุมได้ง่าย ทําให้เป็นเครื่องมือที่ยอดเยี่ยมในการเพิ่มประสิทธิภาพการทํางานของห้องปฏิบัติการ การตั้งค่าที่ตั้งโปรแกรมได้และระบบอัตโนมัติช่วยอํานวยความสะดวกในการกําหนดมาตรฐานกระบวนการ!