โปรโตคอลการทดสอบ MBEC โดยใช้ Plate Sonicator 96 หลุม UIP400MTP

การทดสอบ MBEC ใช้เพื่อกําหนดความเข้มข้นของสารต้านจุลชีพที่จําเป็นในการกําจัดฟิล์มชีวภาพที่เกิดขึ้นบนฝาหมุด ในการประเมินความมีชีวิตของไบโอฟิล์ม ก่อนอื่นจะต้องถอดไบโอฟิล์มออกจากฝาหมุดของแผ่น 96 หลุม Sonication เป็นวิธีที่น่าเชื่อถือและมีประสิทธิภาพมากที่สุดสําหรับการปลดนี้ UIP400MTP เครื่อง sonicator แบบหลายหลุมได้รับการออกแบบมาโดยเฉพาะเพื่อประมวลผลแผ่นทดสอบที่มีประสิทธิภาพและความสะดวกสบายสูงสุดปรับปรุงและเร่งการทดสอบ MBEC ที่มีปริมาณงานสูง

Sonication สําหรับการแยกฟิล์มชีวภาพ

Sonication เป็นขั้นตอนสําคัญในการทดสอบความเข้มข้นของการกําจัดฟิล์มชีวภาพขั้นต่ํา (MBEC) ทําให้สามารถกําจัดเซลล์ไบโอฟิล์มออกจากสิ่งที่แนบมากับพื้นผิวได้อย่างมีประสิทธิภาพ ไบโอฟิล์มเป็นชุมชนที่มีโครงสร้างโดยเนื้อแท้ของจุลินทรีย์ที่ห่อหุ้มอยู่ในเมทริกซ์นอกเซลล์ ซึ่งทําให้พวกมันต้านทานสารต้านจุลชีพได้มากกว่าอย่างมีนัยสําคัญเมื่อเทียบกับเซลล์แพลงก์ตอน ในระหว่างการทดสอบ MBEC การ sonication จะใช้คลื่นอัลตราโซนิกเพื่อสร้างโพรงอากาศที่ควบคุมได้ขัดขวางเมทริกซ์ไบโอฟิล์มและปล่อยเซลล์ที่ฝังอยู่ในสารแขวนลอย ขั้นตอนนี้ช่วยให้มั่นใจได้ว่าเซลล์ไบโอฟิล์มจะกระจายอย่างสม่ําเสมอในอาหารที่กู้คืน ซึ่งอํานวยความสะดวกในการประเมินความมีชีวิตที่แม่นยําผ่านวิธีการชุบ การเจือจาง หรือวิธีการสเปกโตรโฟโตเมตริก หากไม่มีการแยกฟิล์มชีวภาพที่เหมาะสมส่วนประกอบเมทริกซ์ที่ตกค้างสามารถป้องกันเซลล์ได้ซึ่งนําไปสู่การประเมินประสิทธิภาพของยาต้านจุลชีพต่ําเกินไป ดังนั้นการ sonication จึงเป็นสิ่งที่ขาดไม่ได้เพื่อให้ได้ค่า MBEC ที่เชื่อถือได้และทําซ้ําได้ซึ่งสะท้อนให้เห็นถึงศักยภาพในการกําจัดที่แท้จริงของตัวแทนที่ทดสอบ UIP400MTP เครื่อง sonicator แบบเพลทหลายหลุมช่วยให้สามารถเตรียมตัวอย่างที่มีปริมาณงานสูงในแผ่นทดสอบได้อย่างง่ายดาย

โปรโตคอลการทดสอบความเข้มข้นของการกําจัดฟิล์มชีวภาพขั้นต่ํา (MBEC)

ขั้นตอนที่ 1: การสร้างไบโอฟิล์ม

1. เตรียมสารแขวนลอยของแบคทีเรีย:
   ปลูกแบคทีเรียในสื่อที่เหมาะสมเพื่อการเจริญเติบโตแบบเฟสบันทึก
   เจือจางการเพาะเชื้อแบคทีเรียให้มีความหนาแน่นของแสงที่กําหนด (เช่น OD600 ~0.1)
2. ฉีดวัคซีนแผ่น 96 หลุม:
   เติมสารแขวนลอยของแบคทีเรีย (เช่น 150–200 μL) ลงในแต่ละหลุมของแผ่นไมโครไทเตอร์มาตรฐาน 96 หลุม
3. ติดฝาหมุด:
   วางฝาหมุดลงบนแผ่นที่ฉีดวัคซีนเพื่อให้เกิดฟิล์มชีวภาพบนพื้นผิวหมุด
4. บ่มจาน:
   บ่มการตั้งค่าที่อุณหภูมิที่เหมาะสม (เช่น 37°C) เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมงโดยไม่ต้องเขย่าเพื่อส่งเสริมการเจริญเติบโตของไบโอฟิล์ม

ขั้นตอนที่ 2: การรักษาด้วยสารต้านจุลชีพ

• เตรียมสารละลายต้านจุลชีพ:
  เตรียมความเข้มข้นของต้านจุลชีพในช่วงในอาหารสด
  ให้ไบโอฟิล์มสัมผัสกับสารต้านจุลชีพ:
  ถอดฝาหมุดออกจากการเพาะเชื้อแบคทีเรียแล้วล้างออกด้วยน้ําเกลือปลอดเชื้อหรือ PBS เพื่อขจัดเซลล์แพลงก์ตอน
  วางฝาหมุดลงในแผ่น 96 หลุมใหม่ที่มีสารละลายต้านจุลชีพ
• บ่มจาน:
  ฟักไข่เป็นระยะเวลาที่กําหนด (เช่น 24 ชั่วโมง) เพื่อให้ได้รับยาต้านจุลชีพ

ขั้นตอนที่ 3: Sonication ด้วย 96-Well Plate Sonicator UIP400MTP

ขั้นตอนการ sonication มีความสําคัญต่อการถอดฟิล์มชีวภาพออกจากฝาหมุดเพื่อประเมินความมีชีวิต ทําตามขั้นตอนเหล่านี้สําหรับเครื่อง UIP400MTP เสียง:

1. เตรียมการตั้งค่า:
   เติมจานสด 96 หลุมด้วยอาหารเพื่อการกู้คืน (เช่น น้ําซุปที่ทําให้เป็นกลางหรืออาหารเจริญเติบโตสด) ในแต่ละหลุม
2. โอนฝาหมุด:
   ถอดฝาหมุดออกจากแผ่นบําบัดต้านจุลชีพ
   ล้างฝาหมุดด้วยน้ําเกลือปลอดเชื้อหรือ PBS เพื่อขจัดสารต้านจุลชีพที่ตกค้าง
3. วางตําแหน่งเพลตและเครื่องโซนิคเตอร์:
   ติดฝาหมุดเข้ากับแผ่นสื่อการกู้คืน
   วางแผ่นสื่อการกู้คืนลงบนแท่น sonicator UIP400MTP ตรวจสอบให้แน่ใจว่าแผ่นอยู่ตรงกลางและมั่นคง
4. ปรับพารามิเตอร์ sonication:
   ตั้งค่าพารามิเตอร์ sonication ที่ UIP400MTP (สามารถปรับการตั้งค่าเป็นไบโอฟิล์มได้):
   แอมพลิจูด: 70–100%
   เวลาในการ Sonication: 1-3 นาที (ปรับตามความทนทานของไบโอฟิล์ม) ที่โหมดวงจร
5. โซนิเคต:
   เริ่มกระบวนการ sonication การสั่นสะเทือนของอัลตราโซนิกจะขับไบโอฟิล์มออกจากพื้นผิวหมุดไปยังตัวกลางการกู้คืน
6. ตรวจสอบกระบวนการ:
   ใช้เซ็นเซอร์อุณหภูมิแบบเสียบได้เพื่อตรวจสอบ samp อุณหภูมิในหลุม UIP400MTP สามารถเชื่อมต่อกับเครื่องทําความเย็นในห้องปฏิบัติการเพื่อทําความเย็นได้
7. การจัดการหลังการ sonication:
   ถ่ายโอนสื่อการกู้คืนทันที (ตอนนี้มีไบโอฟิล์มที่แยกออก) ลงในแผ่นปลอดเชื้อใหม่สําหรับการวิเคราะห์ปลายน้ํา

(A) แผ่นที่มี TSB ที่มีกลูโคส 2% ที่ใช้ในการสร้างไบโอฟิล์ม การฟื้นตัวของเซลล์ และ
การกําหนด MIC และ MBCB; (B) ฝาปิดพร้อมหมุดสําหรับการสร้างฟิล์มชีวภาพ Staphylococcal การกําหนด MIC และ MBCB; (B) ฝาปิดพร้อมหมุดสําหรับการสร้างฟิล์มชีวภาพ Staphylococcal
เซลล์ไบโอฟิล์มที่เกิดขึ้นบนหมุดถูกหลุดออกโดยการ sonication (Hielscher Ultrasound Technology) เป็นเวลา 5 นาทีในแผ่น 96 หลุมที่มีอาหารเลี้ยงสดเพื่อการกู้คืนเซลล์
(ภาพและการศึกษา: ©de Oliveira et al., 2016)

ขั้นตอนที่ 4: การประเมินความมีชีวิต

แผ่นและวัฒนธรรมชีวภาพที่แยกจากกัน:

1. ทําการเจือจางแบบอนุกรมของอาหารที่กู้คืนและชุบลงบนวุ้นเพื่อแจกแจงหน่วยสร้างอาณานิคม (CFU)
   อีกวิธีหนึ่งคือใช้การทดสอบความมีชีวิตตามสีหรือเรืองแสง
2. บันทึกผลลัพธ์:
   กําหนด MBEC เป็นความเข้มข้นต่ําสุดของยาต้านจุลชีพที่กําจัดความมีชีวิตของไบโอฟิล์มที่ตรวจพบได้

การออกแบบ การผลิต และการให้คําปรึกษา – คุณภาพ ผลิตในประเทศเยอรมนี

เครื่องอัลตราโซนิก Hielscher เป็นที่รู้จักกันดีในด้านคุณภาพและมาตรฐานการออกแบบสูงสุด ความทนทานและใช้งานง่ายช่วยให้สามารถรวมเครื่องอัลตราโซนิกของเราเข้ากับโรงงานอุตสาหกรรมได้อย่างราบรื่น สภาพที่ขรุขระและสภาพแวดล้อมที่ต้องการสามารถจัดการได้อย่างง่ายดายโดยเครื่องสะท้อนเสียง Hielscher

Hielscher Ultrasonics เป็น บริษัท ที่ได้รับการรับรองมาตรฐาน ISO และให้ความสําคัญเป็นพิเศษกับเครื่องอัลตราโซนิกประสิทธิภาพสูงที่มีเทคโนโลยีล้ําสมัยและเป็นมิตรกับผู้ใช้ แน่นอนว่าเครื่องอัลตราโซนิกของ Hielscher เป็นไปตามมาตรฐาน CE และตรงตามข้อกําหนดของ UL, CSA และ RoHs

อ่านที่นี่ว่า UIP400MTP ใช้สําหรับการลอกฟิล์มชีวภาพเป็นขั้นตอนการเตรียมตัวอย่างระหว่างโปรโตคอล ASTM E2799 สําหรับการทดสอบประสิทธิภาพของสารฆ่าเชื้อกับไบโอฟิล์ม Pseudomonas aeruginosa โดยใช้การทดสอบ MBEC