อัลตราโซนิกต้นกำเนิดการแยกเซลล์
- cavitation ล้ำเสียงเป็นวิธีกลที่มีประสิทธิภาพสูงในการแยกเซลล์ต้นกำเนิดจากเนื้อเยื่อไขมันของมนุษย์
- ultrasonically แยก stromal หลอดเลือดส่วน (SVF) แสดงที่มีศักยภาพสูงสำหรับการปฏิรูปการประยุกต์ทางการแพทย์
- Hielscher Ultrasonics มีตัวเลือกต่างๆของ sonication ตรงและทางอ้อมสำหรับเซลล์ต้นกำเนิดเก็บเกี่ยว
แยกอัลตราโซนิกของเซลล์ต้นกำเนิด
จากร่างกายมนุษย์เนื้อเยื่อไขมันที่สกัด (ผ่านการดูดไขมัน) จะได้รับการรักษาโดย ultrasonication เพื่อเอาเนื้อเยื่อจากเซลล์ต้นกำเนิดและเซลล์เจริญเติบโตอื่น ๆ นี้ส่วนแยกของเซลล์เป็นที่รู้จักกันเป็นเซลล์ stromal หลอดเลือดส่วน (SVF)
เทคนิคการแยกล้ำของเซลล์ต้นกำเนิดจากเนื้อเยื่อไขมันจะขึ้นอยู่เพียงผู้เดียวในหลักการทำงานของ cavitation ล้ำเสียงที่ได้มาซึ่งเป็นแรงเฉือนกล กองกำลังเฉือน cavitational ทำลายเนื้อเยื่อไขมันเพื่อให้เซลล์ต้นกำเนิดจะถูกปล่อยออกมาจากโครงสร้างของเนื้อเยื่อไขมัน การแยกเซลล์ต้นกำเนิดอัลตราโซนิกเป็นขั้นตอนการทำงานของเอนไซม์ฟรีหลีกเลี่ยงการใช้คอลลา, trypsin หรือ dispase
การแยกเซลล์ต้นกำเนิดสกัดเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal, สารตั้งต้นและ endothelial เซลล์เจริญเติบโตประเภทอื่น ๆ ที่เนื้อเยื่อไขมัน sonicated จะหมุนเหวี่ยง
เซลล์ต้นกำเนิดที่แยกออกมาจะถูกเก็บรวบรวมและวิเคราะห์คุณภาพของพวกเขารวมถึงการนับเซลล์ที่มีศักยภาพ, endotoxin และย้อมสีแกรมใช้ก่อนทันทีสำหรับการปลูก autologous หรือถูกเก็บไว้ในฝั่งการจัดเก็บ
หลีกเลี่ยงเอนไซม์ทำไม?
ตั้งแต่การย่อยของเอนไซม์ในการแยกเซลล์ต้นกำเนิดจะมาพร้อมกับค่าใช้จ่ายสูงและความเสี่ยงด้านความปลอดภัยที่เป็นไปได้เช่นเดียวกับการขาดประสิทธิภาพ [Oberbauer et al, 2015] วิธีการแยกไม่ใช่เอนไซม์เช่น cavitation ล้ำเสียงเป็นที่ต้องการ ขั้นตอนการแยกล้ำแทนการย่อยของเอนไซม์โดยการแยกเซลล์และมวลเซลล์โดยอัตโนมัติจากเนื้อเยื่อไขมัน
GDmini2 ที่ UP200St-TD Transducer (200 วัตต์)
- รวดเร็ว
- ที่มีประสิทธิภาพ
- ทำซ้ำได้
- ปลอดภัย
- เอนไซม์ฟรี
- ค่าใช้จ่ายที่มีประสิทธิภาพ
- ตัวเลือกการฆ่าเชื้อ
ไขมันที่ได้จากเซลล์ต้นกำเนิด
ต้นกำเนิดผลผลิตมือถือ
ตีพิมพ์วิธีการแยก SVF ใช้อัตราผลตอบแทน cavitation ล้ำเสียงใน 1.67-2.24 × 107 เซลล์ที่มีศักยภาพของ97.1 – 98.9% [วิกเตอร์, S., ๒๐๑๔] เซลล์ผลผลิตประมาณ2–4ล้านเซลล์/กรัมเนื้อเยื่อไขมันได้รับโดยสลายล้ำของ adipocytes เป็นผู้ใหญ่ในเนื้อเยื่อไขมัน dissociated [สว่าง et al., ๒๐๑๔]
เซลล์เตรียม ultrasonically มี adipogenic และเซลล์กระดูกที่มีศักยภาพสูงอย่างเท่าเทียมกันความแตกต่างเมื่อเทียบกับวิธีการแยกเอนไซม์มาตรฐาน [Oberbauer et al, 2015]
ระบบอัลตราโซนิกสำหรับการแยกเซลล์ต้นกำเนิด
เพื่อให้ความปลอดภัยสูงสุดและคุณภาพที่ดีที่สุด, เครื่องอัลตราโซนิกที่เชื่อถือได้ซึ่งช่วยให้การควบคุมที่แม่นยำกว่าการรักษาเซลล์ต้นกำเนิดเป็นปัจจัยสำคัญสำหรับการรักษาที่ประสบความสำเร็จของผู้ป่วย Hielscher Ultrasonics มีตัวเลือกต่างๆสำหรับ autologous กระบวนการแยก cavitation ล้ำเสียงเพื่อแยกและต้นกำเนิดการเก็บเกี่ยวและ endothelial เซลล์สารตั้งต้น
Sonication โดยตรง
สำหรับต้นกำเนิดจากกระบวนการแยกเซลล์ผ่าน sonication โดยตรงล้ำเสียงแตร (sonotrode ปลายอัลตราโซนิก / สอบสวน) จะแช่ลงไปในเนื้อเยื่อไขมันไขมัน Via sonotrode คลื่นอัลตราซาวนด์เป็นคู่โดยตรงในไขมัน autologous เพื่อให้ cavitation ล้ำเสียงออกเซลล์ต้นกำเนิดและเซลล์ stromal จากเนื้อเยื่อที่เหลือ โปรเซสเซอร์ล้ำเสียง Hielscher Uf200 ःที และ UP200St การกับ sonotrode S26d14 เป็นระบบที่ใช้กันทั่วไปในการรักษาเซลล์ต้นกำเนิด autologous แยก SVF โดย sonication โดยตรงเป็นส่วนใหญ่เหมาะสำหรับใช้ในคลีนรูมสิ่งอำนวยความสะดวก
Sonication ทางอ้อม
ตั้งแต่เซลล์ต้นกำเนิดที่มีการใช้สำหรับการใช้งาน autologous หมันของกระบวนการที่มีความสำคัญมาก ดังนั้น Hielscher ได้มีการพัฒนาหลายตัวเลือกของ sonication ทางอ้อมเช่น GDmini2, VialTweeter และระบบที่กำหนดเองอื่น ๆ โดย sonication ทางอ้อมคลื่นอัลตราซาวนด์เป็นคู่ผ่านภาชนะกำแพงเข้าไปในเนื้อเยื่อไขมัน stromal หลอดเลือดส่วน (SVF) จะแยกตัวออกจากเนื้อเยื่อไขมันโดย cavitation ล้ำเสียงเช่นเดียวกับในช่วง sonication โดยตรง
กระบวนการ sonication ทางอ้อมมีความได้เปรียบในการประมวลผลเซลล์ในเรือปิดภายใต้ เงื่อนไขการปนเปื้อนฟรี ตั้งแต่ความเสี่ยงของการปนเปื้อนโดยการใส่ฮอร์อัลตราซาวนด์ (sonotrode) จะถูกกำจัดออก การแยกเซลล์จะดำเนินการในระบบปิดการสร้างความมั่นใจในกระบวนการฆ่าเชื้อ
อุปกรณ์ล้ำดิจิตอล Hielscher สามารถควบคุมอย่างแม่นยำผ่านทางจอสัมผัสหรือการควบคุมเบราว์เซอร์ ขั้นตอนการ sonication ได้ก่อนตั้งค่าผ่านทางเมนูที่ใช้งานง่าย อุปกรณ์อัลตราโซนิกมีการติดตั้งข้อมูลโดยอัตโนมัติบันทึก (ข้อมูลทั้งหมด sonication กระบวนการจะถูกเก็บไว้ในแบบบูรณาการ SD-Card) การป้อนข้อมูลพลังงานล้ำเสียงสามารถปรับเปลี่ยนได้ตรงกับโปรโตคอลการแยกเซลล์
วรรณคดี / อ้างอิง
- โอเบอ bauer; ในประเทศ วูเซอร์ กาเบรียลคริสเตียน; เรด, ไฮนซ์; วูล์ฟ (๒๐๑๕): ระบบแยกเอนไซม์และเอนไซม์สำหรับเซลล์เนื้อเยื่อไขมัน: สถานะปัจจุบันของศิลปะ. การฟื้นฟูเซลล์ (๒๐๑๕) 4:7
ข้อเท็จจริงที่รู้
เซลล์ต้นกำเนิด
เซลล์ต้นกำเนิดเป็นเซลล์ที่แตกต่างของสิ่งมีชีวิตหลายเซลล์ที่มีความสามารถในการผลิตเซลล์ไปเรื่อย ๆ จากประเภทเดียวกัน พวกเขามีลักษณะที่โดดเด่นมีศักยภาพที่จะพัฒนาเป็นหลายประเภทที่แตกต่างกันของเซลล์ในร่างกายระหว่างรัฐในช่วงต้นของชีวิตและการเจริญเติบโต คุณลักษณะเด่นที่สุดของเซลล์ต้นกำเนิดที่มีความสามารถของพวกเขาที่จะต่ออายุตัวเองโดยการแบ่งเซลล์และความสามารถของพวกเขาจะกลายเป็นเซลล์ tissue- หรืออวัยวะเฉพาะที่มีฟังก์ชั่นพิเศษ เซลล์ต้นกำเนิด pluripotent มีศักยภาพที่จะแตกต่างในใด ๆ ของสามเซลล์สืบพันธุ์: endoderm (เยื่อบุภายในกระเพาะอาหารลำไส้ปอด) mesoderm (กล้ามเนื้อกระดูกเลือดปัสสาวะ) หรือ ectoderm (เนื้อเยื่อผิวหนังและระบบประสาท)
ในอวัยวะบางอย่างเช่นลำไส้และไขกระดูกเซลล์ต้นกำเนิดอย่างสม่ำเสมอแบ่งการซ่อมแซมและแทนที่ชำรุดหรือเสียหายเนื้อเยื่อ ในอวัยวะอื่น ๆ เช่นตับอ่อนและหัวใจเซลล์ต้นกำเนิดเพียงแบ่งภายใต้เงื่อนไขพิเศษ
stromal mesenchymal / เซลล์ต้นกำเนิด (MSC) ซึ่งมีศักยภาพสูงสำหรับการใช้งานในการรักษาต่าง ๆ นานาในการปฏิรูปและการแพทย์ aestethic จะพบว่าส่วนใหญ่ในไขกระดูก แต่พวกเขาสามารถแยกได้จากเนื้อเยื่ออื่น ๆ (เช่นกระดูกอ่อนไขมันเซลล์กล้ามเนื้อ) เกินไป. เซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal ถือเป็นเซลล์ต้นกำเนิดผู้ใหญ่แม่บทที่โดดเด่นด้วยความสามารถในตัวของตัวเองต่ออายุ
วิจัยเซลล์ต้นกำเนิดและการรักษาที่ถูกนำมาใช้ในการเพาะปลูกเนื้อเยื่อและอวัยวะเพื่อวัตถุประสงค์ในการปลูกถ่าย (วิศวกรรมเนื้อเยื่อ) ด้านการแพทย์อื่น ๆ สำหรับการประยุกต์ใช้เซลล์ต้นกำเนิดที่สามารถพบได้ในการรักษาโรคทางสมอง (เช่นพาร์กินสันและโรคอัลไซเม), การรักษาด้วยการขาดเซลล์โรคเลือด (เช่นโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาว) ร่วมกันและกระดูกอ่อนเสื่อม (เช่นโรคข้อเข่าเสื่อม) เช่นเดียวกับการรักษาเครื่องสำอาง (เช่นการรักษาต่อต้านริ้วรอย) โดยทั่วไปเซลล์ต้นกำเนิดมีขนาดประมาณ 15-25 ไมครอนในเส้นผ่าศูนย์กลาง
เซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal (MSC) เป็นเซลล์ stromal หลายด้านที่มีความสามารถในการแยกความแตกต่างเป็นความหลากหลายของเซลล์ชนิดรวมทั้งเซลล์สร้างกระดูก (เซลล์กระดูก) chondrocytes (เซลล์กระดูกอ่อน) myocytes (เซลล์กล้ามเนื้อ) และ adipocytes (เซลล์ไขมัน)
stromal หลอดเลือดเศษส่วน (SVF)
stromal หลอดเลือดเศษส่วน (SVF) เป็นส่วนประกอบของ lipoaspirate ที่สามารถสกัดได้ผ่านการดูดไขมันจากเนื้อเยื่อไขมันในร่างกายมนุษย์ lipoaspirate ประกอบด้วยส่วนผสมที่แตกต่างกันของเซลล์และมีเนื้อหาที่สูงของเซลล์ต้นกำเนิดหรือที่เรียกว่าเซลล์ไขมันที่ได้มาจากต้นกำเนิด (ASC หรือ ADSC) ซึ่งแสดงให้เห็นความคล้ายคลึงกันกับเซลล์ต้นกำเนิดจากไขกระดูกเช่นความสามารถของพวกเขาเพื่อแยกความแตกต่างเข้าสู่เซลล์ multilineage
ประชากรที่แตกต่างกันของ SVF รวม endothelial เซลล์เม็ดเลือดแดง, เซลล์, เซลล์เม็ดเลือดขาว monocytes / macrophages และ pericytes หมู่คนอื่น ๆ ได้เป็นอย่างดีในฐานะที่เป็นส่วนสำคัญของเซลล์ต้นกำเนิดไขมันที่ได้มาจาก
ครีบไขมันได้มาจากเซลล์ stromal / ต้นกำเนิด (ASC)
ไขมันที่ได้มาจากเซลล์ต้นกำเนิด (ASC/ADSC) ปล่อยระดับสูงของปัจจัยการเจริญเติบโตออกฤทธิ์ทางชีวภาพเช่นปัจจัยการเจริญเติบโตผิวหนัง (EGF) ปัจจัยการเจริญเติบโตของหลอดเลือดผนัง (VEGF) ปัจจัยการเจริญเติบโต fibroblast พื้นฐาน (bFGF), ปัจจัยการเจริญเติบโตของโรคมะเร็ง (KGF), ปัจจัยการเจริญเติบโตที่สืบทอด (PDGF), ปัจจัยการเจริญเติบโต hepatocyte (HGF), เปลี่ยนปัจจัยการเจริญเติบโต-เบต้า (TGF-β), ปัจจัยการเจริญเติบโตของอินซูลิน (IGF), และสมองที่ได้มา neurotrophic ปัจจัย (BDNF). ACS ไม่เพียงแต่ปล่อยปัจจัยการเจริญเติบโต, พวกเขายังหลั่ง cytokines รวมทั้ง fms-เกี่ยวข้องกับไทโรซีนไคเนส 3 (Flt-3) ligand, granulocyte-อาณานิคมกระตุ้น (G-น้ำไขสันหลัง), granulocyte macrophage-อาณานิคมกระตุ้น (จีเอ็ม-น้ำไขสันหลัง), macrophage-อาณานิคม ปัจจัยกระตุ้น (M-น้ำไขสันหลัง), interleukin (IL) เช่น IL-6, IL-7, IL-8, IL-11, และ IL-12, ปัจจัยยับยั้งเม็ดเลือดขาว (LIF) และปัจจัยการตายของเนื้องอก-อัลฟา (TNF-α)
สกัดจากเซลล์ต้นกำเนิดชนิด
เซลล์ที่เป็นผู้ใหญ่โดยอัตโนมัติจากมนุษย์สามารถสกัดได้จากแหล่งต่อไปนี้:
- ไขกระดูกซึ่งจะต้องมีการสกัดโดยการเก็บเกี่ยว, ที่อยู่, เจาะเข้าไปในกระดูก
- เนื้อเยื่อไขมัน (เซลล์ไขมัน) ซึ่งจะต้องมีการสกัดโดยการดูดไขมัน
- เลือดซึ่งจะต้องมีการสกัดผ่าน apheresis ประเด็นเลือดจากผู้บริจาคผ่าน “การฟอกไต” เครื่องที่เซลล์ต้นกำเนิดจะถูกดึงในขณะที่ส่วนประกอบของเลือดอื่น ๆ จะกลับกลับมาเป็นผู้บริจาค