Ултразвучне апликације у вирусу МонкеиПок

Ултразвук је важан метод обраде за изолацију вируса богиња мајмуна (МПКСВ) из аналитичких узорака, за фрагментацију ДНК вируса, као и за производњу вакцине против мајмунских богиња. За припрему узорка пре дијагностике и анализе (ПЦР, ЕЛИСА итд.) ултразвук се користи за лизу ћелија у циљу ослобађања вируса мајмунских богиња из унутрашњости ћелије и/или фрагментације ДНК. У производњи вакцина, примене се крећу од припреме вирусних честица / ДНК, инкапсулације у носаче лекова и формулисања инокулума.
Испод можете пронаћи детаљне информације о ултразвучној припреми узорка вируса мајмунских богиња, као и ултразвучно потпомогнутој производњи МПКСВ вакцине.

Шта ћете наћи на овој страници:

• Ултразвучна лиза за екстракцију вируса мајмунских богиња
• Ултразвучна фрагментација ДНК вируса мајмунских богиња
• Ултразвучне примене у производњи МПКСВ вакцина

Ултразвучна лиза и фрагментација ДНК пре ланчане реакције полимеразе (ПЦР)

Инфекција вирусом мајмунских богиња се открива тестирањем амплификације нуклеинске киселине (НААТ), користећи у реалном времену или конвенционалну ланчану реакцију полимеразе (ПЦР), за детекцију јединствених секвенци вирусне ДНК. Узорак (нпр. из замене назофаринкса или биопсије коже) садржи вирус у ћелијама.
За анализу, вирус мора бити ослобођен из ћелија и вирусна ДНК мора бити фрагментирана за ПЦР.

Ултразвучна лиза:

Ултразвучно уништавање/лиза ћелија је поуздан и ефикасан метод за изоловање вируса из ћелијских узорака и тиме пожељна техника у односу на хемијске агенсе, као што су лизозим, протеиназа К и различити детерџенти који се алтернативно користе за постизање ћелијске лизе и ослобађања ДНК.
Међутим, употреба оваквих хемијских реагенаса захтева дуготрајну припрему узорка у неколико корака пре ПЦР анализе да би се спречила инхибиција ПЦР реакције. Пошто ПЦР инхибитори утичу на ефикасност амплификације, мале варијације количине инхибитора који се не уклањају могу довести до великих варијација у амплификацији ПЦР производа (Диацо, 1995).
Предност ултразвучне обраде за лизу је у томе што је пожељно потпуно разбијање ћелијских структура и ослобађање ДНК без потребе за реагенсима за лизу и дуготрајном припремом узорка. (уп. Фиксе ет ал., 2003)

Ултразвучна фрагментација ДНК:

Ултразвучна фрагментација ДНК је једноставна и поуздана јер производи фрагменте ДНК подесивих по дужини (базни парови, бп). Користећи ултразвук, ДНК се може ефикасно фрагментирати до циљане дужине ДНК. Прецизна контрола ултразвучних параметара и софистициране опције хлађења спречавају деградацију ДНК.
Прочитајте више о ултразвучној фрагментацији ДНК!

Ултразвучне апликације у вакцини против вируса мајмунских богиња

Вакцине које се користе против вируса мајмунских богиња су тренутно живе вирусне вакцине. Новоразвијене вакцине могу да користе друге платформе као што је ДНК. Тренутно садржи модификовани вирус Вацциниа Анкара, ослабљени ортопоксвирус који се не реплицира. Такође садржи Трис (трис-аминометан) и натријум хлорид. Вакцина такође може да садржи мале количине ДНК и протеина из ћелија фибробласта пилећег ембриона, који се користе за узгој вируса вакцине, бензоназе и једињења антибиотика као што су гентамицин и ципрофлоксацин.

Ултразвучна хомогенизација се користи у производњи живих атенуираних вирусних вакцина, ДНК вакцина, мултивалентних ДНК коктела, мРНА вакцина, рекомбинантних протеинских вакцина, вакцина честица сличних вирусу, итд.

Можете пронаћи детаљније информације о ултразвучним апликацијама за побољшану производњу вакцина!

Протокол за ултразвучну изолацију вируса мајмунских богиња

Истраживачки тим Ститтелаара (2005) користио је ултразвучну лизу да ослободи вирус мајмунских богиња из ћелијске културе домаћина раста, као и из ћелија добијених заменом грла од инфицираних примата.

Припрема вакцине против мајмунских богиња:

Вируси мајмунских богиња су узгајани на ћелијама фибробласта пилећих ембриона без специфичних патогена. После инкубације од 1 до 2 дана, суспензија вирусних ћелија је сакупљена једним циклусом замрзавања-одмрзавања, а затим концентрисана центрифугирањем. Пелета је ресуспендована и подвргнута неколико кругова ултразвучне хомогенизације.

Изолација вируса мајмунских богиња из вакцинисаних макака:

Узорци су замрзнути-одмрзнути три пута и соникирани у ултразвучном ЦупХорн-у. Два разблажења (1:10 и 1:100) у транспортном медијуму са додатком 1% феталног говеђег серума су коришћена за инокулацију монослојева Веро ћелија у плочама са шест јажица. После 1 х инкубације на 37°Ц, инокула је уклоњена и замењена медијумом за културу са додатком 1% феталног говеђег серума. Монослојеви су култивисани 5 дана на 37°Ц и обојени кристално љубичастим раствором.
(уп. Ститтелаар ет ал., 2005)

Ултрасоникатори за анализу вируса и производњу вакцина

Широки портфолио производа Хиелсцхер Ултрасоницс нуди идеалан ултрасоникатор за истраживачке и аналитичке лабораторије, као и за индустријску производњу вакцина.
Хиелсцхер Ултрасоницс је специјализован за дизајн, производњу и дистрибуцију ултразвучних и соно-биореактора високих перформанси за употребу у истраживачким и аналитичким лабораторијама, као и за примену у индустријској производњи вакцина (нпр. вакцине, АПИ-ји).
Соникација се може применити на отворене судове, затворене реакторе са континуираним мешањем и реакторе са континуираним протоком. Сви делови ултразвучних система, који долазе у контакт са течним медијумом, направљени су од нерђајућег челика, титанијума или стакла. Аутоклавирајући делови и санитарни елементи обезбеђују производњу под услови фармацеутског квалитета.
Аутоматско снимање података: Интелигентни софтвер аутоматски бележи параметре процеса соникације на интегрисану СД меморијску картицу. Прецизна контрола свих параметара процеса обезбеђује репродуктивност, стандардизација производње, и олакшава испуњавање стандарда безбедности фармацеутских производа.
Hielscher Ultrasonics’ ултразвучни процесори су веома поуздани и могу се прецизно контролисати. Сви индустријски ултрасоникатори се могу подесити да испоруче пуни опсег од нижих до веома високих амплитуда. Робусност Хиелсцхерових ултразвучних система омогућава рад 24 сата дневно у тешким условима иу захтевним окружењима.

Табела у наставку даје вам индикацију приближних капацитета обраде наших ултразвучних апарата: