Примене ултразвука код вируса мајмунских богиња

Ултразвучна обрада је важан поступак за изолацију вируса мајмунских богиња (MPXV) из аналитичких узорака, за фрагментацију вирусне ДНК, као и у производњи вакцина против мајмунских богиња. За припрему узорака пре дијагностике и анализе (PCR, ELISA итд.), ултразвучна обрада се користи за лизу ћелија како би се вирус мајмунских богиња ослободио из унутрашњости ћелије и / или за фрагментацију ДНК. У производњи вакцина, примене обухватају припрему вирусних честица / ДНК, инкапсулацију у носаче лекова и формулисање инокулума.
У наставку можете пронаћи детаљне информације о ултразвучној припреми узорака вируса мајмунских богиња, као и о производњи вакцина против MPXV уз помоћ ултразвука.

Шта ћете пронаћи на овој страници:

• Ултразвучна лиза за издвајање вируса мајмунских богиња
• Ултразвучна фрагментација ДНК вируса мајмунских богиња
• Примене ултразвука у производњи вакцина против MPXV

Ултразвучна лиза и фрагментација ДНК пре ланчане реакције полимеразе (PCR)

Инфекција вирусом мајмунских богиња открива се тестирањем амплификацијом нуклеинских киселина (NAAT), применом ланчане реакције полимеразе (PCR) у реалном времену или конвенционалне ланчане реакције полимеразе, ради откривања јединствених секвенци вирусне ДНК. Узорак (нпр. назофарингеални брис или биопсијски узорак коже) садржи вирус у ћелијама.
За анализу, вирус мора бити ослобођен из ћелија, а вирусна ДНК мора бити фрагментисана за PCR.

Ултразвучна лиза:

Ултразвучно разарање / лиза ћелија је поуздана и ефикасна метода за изолацију вируса из ћелијских узорака и стога је пожељнија техника од примене хемијских агенаса, као што су лизозим, протеиназа K и различити детерџенти, који се користе као алтернатива за постизање лизе ћелија и ослобађања ДНК.
Међутим, употреба таквих хемијских реагенаса захтева дуготрајну припрему узорака у више корака пре PCR анализе како би се спречила инхибиција PCR реакције. Пошто PCR инхибитори утичу на ефикасност амплификације, мале разлике у количини неуклоњених инхибитора могу довести до великих разлика у амплификацији PCR производа (Diaco, 1995).
Предност ултразвучне обраде за лизу огледа се у томе што су потпуно разарање ћелијских структура и ослобађање ДНК без потребе за реагенсима за лизу и дуготрајном припремом узорака пожељни. (уп. Fykse et al., 2003)

Ултразвучна фрагментација ДНК:

Ултразвучна фрагментација ДНК је једноставна и поуздана јер ствара фрагменте ДНК чија се дужина може подешавати (парови база, bp). Помоћу ултразвука, ДНК се може ефикасно фрагментисати до циљне дужине. Прецизна контрола ултразвучних параметара и напредне могућности хлађења спречавају деградацију ДНК.
Прочитајте више о ултразвучној фрагментацији ДНК!

Примене ултразвука код вакцине против вируса мајмунских богиња

Вакцине које се користе против вируса мајмунских богиња тренутно су вакцине са живим вирусом. Новоразвијене вакцине могле би да користе друге платформе, као што су оне засноване на ДНК Тренутно садржи модификовани виурс Vaccinia Ankara, атенуисани ортопоксвирус који се не репликује. Такође садржи Tris (трис-аминометан) и натријум-хлорид. Вакцина може да садржи и мале количине ДНК и протеина из ћелија фибробласта пилећег ембриона, које се користе за узгој вакциналног вируса, бензоназу и антибиотска једињења као што су гентамицин и ципрофлоксацин.

Ултразвучна хомогенизација се користи у производњи вакцина са живим атенуисаним вирусима, ДНК вакцина, мултивалентних ДНК коктела, мРНК вакцина, вакцина са рекомбинантним протеинима, вакцина са честицама налик вирусима итд.

Можете пронаћи детаљније информације о применама ултразвука за побољшану производњу вакцина!

Протокол за ултразвучну изолацију вируса мајмунских богиња

Истраживачки тим Stittelaar (2005) користио је ултразвучну лизу за ослобађање вируса мајмунских богиња из културе ћелија домаћина у којој је узгајан, као и из ћелија добијених брисевима грла заражених примата.

Припрема вакцине против мајмунских богиња:

Вируси мајмунских богиња узгајани су на ћелијама фибробласта пилећег ембриона без специфичних патогена. Након инкубације у трајању од 1 до 2 дана, суспензија вируса и ћелија прибрана је једним циклусом замрзавања и одмрзавања, а затим концентрисана центрифугирањем. Талог је ре-суспендован и подвргнут неколико циклуса ултразвучне хомогенизације.

Изолација вируса мајмунских богиња из вакцинисаних макакија:

Узорци су замрзнути и одмрзнути три пута и сониковани у ултразвучном CupHorn-у. Две дилуције (1:10 и 1:100) у транспортном медијуму обогаћеном са 1% феталног бовјег серума коришћене су за инокулисање монослојева Vero ћелија у плочама са шест бунарчића. Након 1 h инкубације на 37°C, инокулуми су уклоњени и замењени културним медијумом обогаћеним са 1% феталног бовјег серума. Монослојеви су култивисани 5 дана на 37°C и обојени раствором кристал виолета.
(уп. Stittelaar et al., 2005)

Ултразвучни уређаји за анализу вируса и производњу вакцина

Широк асортиман производа компаније Hielscher Ultrasonics нуди идеалан ултразвучни уређај за истраживачке и аналитичке лабораторије, као и за индустријску производњу вакцина.
Hielscher Ultrasonics је специјализован за пројектовање, производњу и дистрибуцију ултразвучних уређаја високих перформанси и сонобиореактора за употребу у истраживачким и аналитичким лабораторијама, као и за примену у индустријској производњи вакцина (нпр. вакцине, активни фармацеутски састојци).
Соникација се може примењивати у отвореним посудама, затвореним реакторима са непрекидним мешањем и реакторима са континуалним протоком. Сви делови ултразвучних система који долазе у контакт са течним медијумом израђени су од нерђајућег челика, титанијума или стакла. Делови који се могу стерилисати у аутоклаву и санитарни прикључци обезбеђују производњу у условима фармацеутског квалитета.
Аутоматско бележење података: Интелигентни софтвер аутоматски бележи параметре процеса соникације на уграђену SD меморијску картицу. Прецизна контрола свих процесних параметара обезбеђује репродуктивност, стандардизацију производње, и олакшава испуњавање стандарда безбедности фармацеутских производа.
Ултразвучни процесори компаније Hielscher Ultrasonics веома су поуздани и могу се прецизно контролисати. Сви индустријски ултразвучни уређаји могу се подесити за рад у пуном опсегу, од нижих до веома високих амплитуда. Робусност ултразвучних система компаније Hielscher омогућава рад 24/7 при великим оптерећењима и у захтевним окружењима.

Табела у наставку даје преглед приближног капацитета обраде наших ултразвучних уређаја: