Ultrazvuka je važan metod obrade za izolaciju virusa majmunskih boginja (MPXV) od analitičkih uzoraka, za fragmentaciju DNK virusa kao i u proizvodnji vakcine protiv majmunskih boginja. Za pripremu uzorka pre dijagnostike i analize (PCR, ELISA itd.) ultrazvuka se koristi za liziju ćelija u cilju oslobađanja virusa majmunskih boginja iz unutrašnjosti ćelije i / ili do fragmenta DNK. U proizvodnji vakcina, primena se kreće od čestica virusa / DNK preparata, enkapsulacije kod nosača lekova i formulisanja vakcinacije.
U nastavku možete pronaći detaljne informacije o ultrazvučnom preparatu za uzorke virusa majmunskih boginja kao i o ultrasonično potpomognute proizvodnji MPXV vakcine.

Šta ćete pronaći na ovoj stranici:

• Ultrazvučna liza za vađenje virusa majmunskih boginja
• Ultrazvučna fragmentacija DNK virusa majmunskih boginja
• Ultrazvučne aplikacije u mpXV proizvodnji vakcina

Ultrazvučna liza i fragmentacija DNK pre lančane reakcije Polimeraze (PCR)

Infekcija virusa majmunskih boginja je otkrivena testiranjem pojačavanja nukleinska kiselina (NAAT), koristeći u realnom vremenu ili konvencionalnu lančanu reakciju polimeraze (PCR), radi otkrivanja jedinstvenih sekvenci virusne DNK. Uzorak (npr. iz nasopharyngeal swap ili biopsije kože) sadrži virus u ćelijama.
Za analizu, virus mora biti oslobođen iz ćelija ans virusna DNK mora biti fragmentirana za PCR.

Ultrazvučni Lysis:

Ultrazvučni poremećaj ćelija / liza je pouzdan i efikasan metod izolacije virusa od uzoraka ćelija i samim time poželjna tehnika u odnosu na hemijske agense, kao što su lizozim, proteinase K i različiti deterdženti koji se alternativno koriste za postizanje ćelijske lize i oslobađanje DNK.
Međutim, upotreba takvih hemijskih reagensa zahteva vremenski zahtevnu pripremu uzorka u nekoliko koraka pre PCR analize kako bi se sprečila inhibicija PCR reakcije. S obzirom da PCR inhibitori utiču na efikasnost pojačavanja, male varijacije količine inhibitora koji nisu uklonjeni mogu dovesti do velikih varijacija u pojačavanju PCR proizvoda (Diaco, 1995).
Prednost ultrazvučnosti za lizu je u tome što je potpuno ometanje ćelijskih struktura i oslobađanje DNK bez potrebe za lisnatim reagensima i dugotrajnim pripremom uzoraka poželjno. (cf. Fykse et al., 2003)

Fragmentacija ultrazvučne DNK:

Ultrazvučna DNK fragmentacija je jednostavna i pouzdana kao što proizvodi DNK fragmente tunable u dužini (basepairs, bp). Pomoću ultrazvuka, DNK se može efikasno fragmentirati na ciljanu DNK dužinu. Precizna kontrola ultrazvučnih parametara i sofisticiranih opcija hlađenja sprečavaju degradaciju DNK.
Pročitaj više o Fragmentacija ultrazvučne DNK!

Ultrazvučne primene u vakcini protiv virusa majmunskih boginja

Vakcine koje se koriste protiv virusa majmunskih boginja trenutno su žive vakcine protiv virusa. Novorazvijene vakcine mogle bi da koriste druge platforme kao što je DNK The currently contains a modified Vaccinia Ankara viurs, an attenuated, non-replicating orthopoxvirus. Sadrži i Tris (tris-aminometan) i natrijum hlorid. Vakcina takođe može da sadrži male količine DNK i proteina iz ćelija Pilećeg embriona Fibroblast, koje se koriste za uzgajanje virusa vakcine, benzonaze i antibiotičkih jedinjenja kao što su gentamicin i ciprofloksacin.

Ultrazvučna homogenizacija se koristi u proizvodnji živih vakcina protiv virusa, DNK vakcina, višestruko valentnih DNK koktela, MRNA vakcina, rekombinantnih proteinskih vakcina, vakcina sličnih virusima, itd.

Detaljnije informacije o ultrazvučnim aplikacijama možete pronaći za poboljšanu proizvodnju vakcine!

Protokol za ultrazvučnu izolaciju virusa majmunskih boginja

Istraživački tim Stitelara (2005) koristio je ultrazvučnu lizu za oslobađanje virusa majmunskih boginja iz kulture ćelija domaćina rasta, kao i iz ćelija dobijenih preko zamene grla od zaraženih primata.

Priprema vakcine protiv majmunskih boginja:

Virusi majmunskih boginja uzgajani su na specifičnim ćelijama pilećeg embriona bez patogena. Posle inkubacije u trajanju od 1 do 2 dana, obustava virusnih ćelija je požnjevena jednom turom otapanja zamrzavanja, a zatim koncentrisana centrifugacijom. Kuglica je ponovo zamenjena i podvrgnuta nekoliko rundi ultrazvučne homogenizacije.

Izolacija od virusa majmuna od vakcinisanih makakija:

Uzorci su tri puta otopljeni i u ultrazvučnim CupHorn-om. Dve razvodnjenosti (1:10 i 1:100) u transportnom medijumu dopunjene sa 1% fetalnog bovinog seruma korišćene su za vakcinaciju monolajera ćelija Vero u šest bunarskih ploča. Nakon 1 h inkubacije na 37°C, inokula je uklonjena i zamenjena kulturom srednje dopunjenom sa 1% fetalnog bovin seruma. Monolajeri su bili kulturni 5 dana na 37°C i umrljani rastvorom kristalne ljubičice.
(cf. Stittelaar et al., 2005)

Ultrazvučnici za analizu virusa i proizvodnju vakcina

Portfolio širokih proizvoda Hielscher Ultrasonics nudi idealan ultrazvučnik za istraživačke i analitičke laboratorije, kao i za industrijsku proizvodnju vakcina.
Hielscher Ultrasonics je specijalizovan za dizajn, proizvodnju i distribuciju ultrazvučnika visokih performansi i sono-bioreaktora za upotrebu u istraživačkim i analitičkim laboratorijama, kao i za implementaciju u proizvodnji industrijskih vakcina (npr. Vakcine, Apis).
Sonication se može primeniti na otvorena plovila, zatvorene neprekidno uzburkane reaktore i neprekidne protočne reaktore. Svi delovi ultrazvučnih sistema, koji su u kontaktu sa tečnim medijumom, napravljeni su od nerđajućeg čelika, titanijuma ili stakla. Autoklavabilni delovi i sanitarna oprema obezbeđuju proizvodnju pod uslovi za farmaceutske razrede.
Automatsko snimanje podataka: Inteligentni softver snima parametre procesa sonacija automatski na integrisanoj SD memorijskoj kartici. Precizna kontrola svih parametara procesa osigurava da se Ponovno produktivnost, standardizacija proizvodnjei olakšava ispunjavanje standarda bezbednosti farmaceutskih proizvoda.
Хиелсцхер Ултрасонична терапија’ ultrazvučni procesori su veoma pouzdani i mogu se precizno kontrolisati. Svi industrijski ultrazvučnici mogu da se prilagode da isporuče ceo opseg od nižih do veoma visokih amplitude. Robustnost Hielscherovih ultrazvučnih sistema omogućava non-stop rad pod velikim dužnostima i u zahtevnim okruženjima.

Табела испод показује приближни капацитет обраде наших ултразвучних уређаја: