Елуција антитела ултразвуком коришћењем ултразвучне обраде високе пропусности

Афинитетна хроматографија је моћна техника за пречишћавање протеина, која захтева ултразвучно потпомогнуто неспецифично елуирање је поуздана техника припреме узорка за добијање антитела из афинитетне хроматографије. Ефикасно и поновљиво елуирање циљних антитела везаних за матрице афинитета значајно је побољшано ултразвуком. Високопропусни соникатор плоча УИП400МТП је оптимално прикладан за елуирање великог броја узорака у плочама са 96 јажица, микротитарским и мултибунарским плочама и олакшава опоравак антитела у афинитетној хроматографији.

Како соникација олакшава елуцију?

Користећи ултразвучно интензивирано неспецифично елуирање, лабораторијски радници и научници могу ефикасно да поврате пречишћена антитела из колона афинитетне хроматографије. Ова пречишћена антитела пролазе кроз низводне апликације у различитим областима, као што су имунологија, биотехнологија и медицинска дијагностика.

Елуција је корак припреме узорка који се обично користи за афинитетну хроматографију: Афинитетна хроматографија користи високо специфичне интеракције између циљног молекула (као што је антитело) и лиганда имобилисаног на хроматографској матрици. Ово омогућава селективно пречишћавање циљног молекула из комплексне смеше коришћењем специфичног афинитета везивања молекула, нпр. антитела.
Специфично везивање антитела: Антитела се често пречишћавају коришћењем афинитетне хроматографије, где се селективно везују за лиганд имобилисан на хроматографској смоли. Ово може бити антиген, протеин А/Г или било који други молекул који специфично реагује са антителом од интереса.
елуција: Након везивања циљног антитела за матрикс, следећи корак укључује елуирање (или испирање) везаног антитела са смоле. Овај корак елуирања обично укључује прекид специфичног везивања између антитела и лиганда. Овај корак се може олакшати соникацијом.
Ултразвучно потпомогнуто неспецифично елуирање: За разлику од специфичних метода елуирања које ремете само интеракцију антитело-лиганд, неспецифичне методе елуирања ремете све интеракције на смоли, укључујући и оне неспецифичне. Ово може бити корисно када се ради са јако везаним загађивачима који могу ометати процес пречишћавања. Овде долази соникација у игру! Ултразвучни таласи се користе за стварање кавитационих мехурића у пуферу за елуирање. Када се ови мехурићи колабирају у близини матрице смоле, они производе интензивне локализоване силе смицања и микрострујање. Овај механички поремећај помаже у разбијању неспецифичних интеракција између антитела и лиганда, олакшавајући елуирање везаног антитела из матрице.

Предности ултразвучног елуирања помоћу ултразвучне обраде

Ултразвучно елуирање нуди неколико предности, посебно у контексту техника пречишћавања протеина као што је афинитетна хроматографија.
На пример, соникација надмашује алтернативне методе у погледу интегритета протеина, опоравка, чистоће, свестраности и ефикасности. Ове предности чине ултразвучно елуирање пожељним избором за процесе пречишћавања протеина, посебно у апликацијама где је одржавање структуре и активности протеина од суштинског значаја. Поред тога, ултразвучно елуирање се истиче по својој једноставности, ефикасности, свестраности и компатибилности са широким спектром протеина и матрица афинитета. Примењујући ултразвучне таласе да поремете интеракције протеина и матрице, ултразвучно елуирање нуди нежан и брз метод за пречишћавање протеина, обезбеђујући високе стопе опоравка и очување интегритета протеина за низводне примене.

Нежније према структури протеина: Елуирање са ниским пХ подразумева употребу киселих пуфера да се поремети везивање између циљног протеина (нпр. антитела) и матрице афинитета. Међутим, излагање ниском пХ може денатурисати протеине, потенцијално компромитујући њихову структуру и биолошку активност. Насупрот томе, ултразвучно елуирање се првенствено ослања на механичко оштећење, а не на хемијску денатурацију, што га чини нежнијим за структуру протеина. Ово је посебно корисно када се пречишћавају деликатни протеини или антитела осетљива на промене пХ.

• Смањени ризик од агрегације: Елуирање са ниским пХ може повећати ризик од агрегације протеина услед одвијања протеина и излагања хидрофобних региона. Агрегација може довести до губитка активности протеина и потешкоћа у даљем процесу обраде. Ултразвучно елуирање, за поређење, минимизира ризик од агрегације употребом механичких сила да се поремете интеракције између протеина и матрице афинитета без значајног мењања природне конформације протеина.
• Побољшан опоравак и чистоћа: Ултразвучно елуирање може постићи веће стопе опоравка и нивое чистоће у поређењу са алтернативним методама елуирања. Механички поремећај који обезбеђује ултразвучна обрада ефикасно ослобађа везане протеине из матрице афинитета док минимизира неспецифичне интеракције. Ово доводи до побољшаног опоравка циљног протеина са смањеном контаминацијом од неспецифично везаних молекула, доприносећи већој чистоћи елуиране фракције.
• Висока пропусна обрада: Хиелсцхер Ултрасоницс нуди различите соникаторе за пречишћавање протеина уз помоћ ултразвука, елуцију и биопанинг. Соникатор микротитарске плоче УИП400МТП омогућава масовну обраду узорака у плочама са 96 и другим плочама са више јажица. ВиалТвеетер је идеалан за симултану ултразвучну обраду до 10 епрувета као што су Еппендорф бочице под истим условима. ЦупХорн је свестрани соникатор идеалан за неколико епрувета, малих чаша и других посуда. И наравно, класични соникатори типа сонде са микроврховима су добро успостављен лабораторијски алат за припрему узорака. Хиелсцхер Ултрасоницс асортиман производа има идеалан соникатор за подешавање експеримента и величину узорка.
• Свестраност и компатибилност: Ултразвучно елуирање је компатибилно са широким спектром протеина и матрица афинитета, нудећи свестраност у апликацијама за пречишћавање. Насупрот томе, елуирање са ниским пХ можда није погодно за одређене протеине који су осетљиви на киселе услове или за афинитетне матрице које су склоне деградацији или испирању при ниском пХ. Ултразвучно елуирање пружа нежну и универзално применљиву алтернативу која се може прилагодити специфичним потребама пречишћавања без угрожавања интегритета протеина или стабилности матрикса.
• Време и ефикасност: Ултразвучно елуирање обично захтева краће време елуирања у поређењу са другим методама елуирања. Брзо и ефикасно ослобађање везаних протеина олакшано ултразвуком смањује време обраде и повећава укупну ефикасност пречишћавања, што га чини атрактивном опцијом за апликације велике пропусности или када су потребни резултати осетљиви на време.

Биопанинг уз помоћ ултразвука

Биопаннинг је критична техника у пречишћавању антитела, посебно када се морају добити високо специфична антитела за истраживање или медицинску дијагностику. Биопанинг је процес у коме се антитела изолују из мешавине антитела, такозване библиотеке антитела.

Како функционише ултразвучни биопанинг?

Почиње са библиотеком антитела, мешавином различитих антитела. Свако антитело карактерише свој јединствени облик и специфичност. За анализу и терапију, специфична антитела која препознају одређену мету, као што је вирус или ћелија рака, морају бити изолована. Користећи биопанинг, ова специфична антитела се могу изоловати. Ултрасоницатион помаже да се олакша процес биопанинга, чинећи пречишћавање антитела ефикаснијим.

Почевши од библиотеке антитела, антитела се обично приказују на површини бактериофага, ћелије квасца или другог система приказа. Ова библиотека представља широк спектар антитела.
У првом кораку, ова библиотека је изложена вашем циљном молекулу. Антитела која се везују за мету ће се залепити, док ће се друга испрати. Да би се уклонила невезана антитела, узорци се неколико пута исперу пуферским раствором.

Сада имамо узорке који садрже само везана антитела. Међутим, то значи да су антитела још увек везана за свој систем приказа. Да би их ослободили, интеракција антитело-лиганд мора бити прекинута. Овај корак је познат као елуирање. Узорци се могу елуирати коришћењем раствора који ремети везивање, нпр. коришћењем специфичног пуфера за елуирање, хаотропног, снижавања пХ вредности, применом топлоте итд. Ове технике елуирања уништавају везивање антитело-лиганд, али такође могу да погоршају сама антитела. Због тога се ултразвук користи као алтернативна техника за нежно уклањање антитела са њихове мете.

Након завршетка корака елуирања, добијамо пречишћена антитела, спремна за употребу у истраживању, дијагностици или терапији.

Биопаннинг је моћна техника у пречишћавању антитела, а ултразвучно елуирање олакшава и интензивира ефикасност – што доводи до високо пречишћених, неоштећених антитела. Ултразвучни биопанинг омогућава научницима да изолују високо специфична антитела из сложених узорака, отварајући врата за широк спектар примена.

Соникатори за пречишћавање антитела

Хиелсцхер соникатори су добро успостављени алати који се користе у најбољим истраживачким установама широм света. Цењени због свог најсавременијег дизајна и супериорних перформанси, Хиелсцхер соникатори се сматрају незаменљивим лабораторијским алатима у областима биотехнологије и молекуларне биологије. Хиелсцхер Ултрасоницс нуди соникаторе за појединачни узорак, као и припрему узорака велике пропусности, који олакшавају ефикасно пречишћавање антитела и елуирање молекула везаних за циљ, и омогућавају ефикасно биопанинг да би се изоловала специфична антитела са прецизношћу и брзином.
У контексту пречишћавања антитела, Хиелсцхер соникатори се истичу у олакшавању корака прања и елуирања ефикасним уклањањем невезаних антитела уз очување интегритета комплекса везаних за циљ. Њихова прецизна контрола и скалабилност омогућавају прилагођене услове обраде, обезбеђујући оптималне резултате пречишћавања у широком спектру запремина узорака и сложености.
Хиелсцхер соникатори представљају технолошку иновацију у ултразвучној обради, нудећи неупоредиве могућности за пречишћавање антитела, елуирање и биопанинг. Својом прецизношћу, поузданошћу и лакоћом рада, различити ултразвучни системи нуде оптималну ефикасност и свестраност за биофармацеутска истраживања, дијагностику и терапију.
Контактирајте нас сада да бисте сазнали више о Хиелсцхер соникаторима за пречишћавање антитела, елуцију и биопанинг! Наше искусно техничко особље радо разговара о вашој апликацији везаној за антитела!

Дизајн, производња и консалтинг – Квалитет Маде ин Германи

Хиелсцхер ултрасоникатори су познати по свом највишем квалитету и стандардима дизајна. Робусност и једноставан рад омогућавају несметану интеграцију наших ултразвучних апарата у индустријске објекте. Хиелсцхер ултрасоникатори се лако носе са тешким условима и захтевним окружењима.

Хиелсцхер Ултрасоницс је ИСО сертификована компанија и ставља посебан нагласак на ултрасоникаторе високих перформанси са најсавременијом технологијом и једноставношћу за коришћење. Наравно, Хиелсцхер ултрасоникатори су усаглашени са ЦЕ и испуњавају захтеве УЛ, ЦСА и РоХ.

Поређење ултразвучног елуирања у односу на традиционалне технике елуирања

1. Градијентна елуција: У градијентном елуирању, јачина везивања између циљног протеина и матрице афинитета се постепено смањује променом састава пуфера за елуирање. Ово може укључивати променљиве факторе као што су пХ, концентрација соли или концентрација конкурентских лиганада. Градијентно елуирање омогућава фино подешавање услова елуирања како би се селективно ослободио циљни протеин док се минимизира неспецифично везивање.
   Предности ултразвучног елуирања: Ултразвучно елуирање нуди брже и равномерније ослобађање везаних протеина у поређењу са градијентом елуирања. Док градијентно елуирање захтева пажљиву оптимизацију и праћење услова елуирања, ултразвучно елуирање обезбеђује једноставнији и ефикаснији метод за опоравак протеина.
2. Конкурентска елуција: У компетитивном елуирању, висока концентрација конкурентног лиганда се уводи у пуфер за елуирање да би се пореметило везивање између циљног протеина и матрице афинитета. Конкурентни лиганд се такмичи са циљним протеином за места везивања на матриксу, чиме истискује протеин и отпушта га у елуат.
   Предности ултразвучног елуирања: Ултразвучно елуирање нуди нежнију и разноврснију алтернативу конкурентном елуирању. Компетитивно елуирање може захтевати употребу високих концентрација хаотропних агенаса (тј. ко-раствор који ремети мрежу водоничне везе између молекула воде и смањује стабилност природног стања протеина слабљењем хидрофобног ефекта) или јаких хемикалија, које могу утицати на стабилност и активност протеина. Насупрот томе, ултразвучно елуирање обезбеђује механичко оштећење без потребе за додатним хемијским агенсима, чувајући интегритет протеина и обезбеђујући високе стопе опоравка.
3. Елуирање изазвано температуром: Температуром изазвано елуирање укључује промену температуре пуфера за елуирање да би се пореметило везивање између циљног протеина и матрице афинитета. Ово се може постићи повећањем или смањењем температуре, у зависности од специфичне интеракције протеин-матрикс.
   Предности ултразвучног елуирања: Ултразвучно елуирање нуди бржи и контролисанији метод за елуирање протеина у поређењу са методама изазваним температуром. Док елуирање изазвано температуром може захтевати прецизну контролу градијената температуре и дуже време еквилибрације, ултразвучно елуирање обезбеђује тренутни механички поремећај, што резултира краћим временом елуирања и побољшаном ефикасношћу.
4. Ензимско елуирање: Ензимско елуирање користи специфичне ензиме који цепају везе између циљног протеина и матрице афинитета, ослобађајући протеин у елуат. Овај метод је посебно користан за протеине који су чврсто везани за матрикс или за апликације које захтевају прецизну контролу услова елуирања.
   Предности ултразвучног елуирања: Ултразвучно елуирање нуди неензимску алтернативу ензимском елуирању без хемикалија. Док ензимско елуирање може захтевати оптимизацију концентрације ензима, времена инкубације и пХ услова, ултразвучно елуирање пружа једноставан и универзално применљив метод за опоравак протеина без потребе за додатним реагенсима или специјализованом опремом.