Elúcia protilátok ultrazvukom pomocou vysokovýkonnej ultrazvukom

Afinitná chromatografia je silná technika na čistenie proteínov, ktorá vyžaduje Ultrazvukom asistovaná nešpecifická elúcia je spoľahlivá technika prípravy vzoriek na získanie protilátok z afinitnej chromatografie. Účinná a reprodukovateľná elúcia cieľových protilátok viazaných na afinitné matice sa významne zlepšuje ultrazvukom. Vysokovýkonný doskový sonikátor UIP400MTP je optimálne vhodný na eluáciu vysokého počtu vzoriek v 96-jamkových, mikrotitračných a multijamkových platniach a uľahčuje obnovu protilátok pri afinitnej chromatografii.

Ako ultrazvukom uľahčuje elúciu?

Pomocou ultrazvukovo zosilnenej nešpecifickej elúcie môžu laboratórni pracovníci a vedci účinne obnoviť purifikované protilátky z afinitných chromatografických kolón. Tieto purifikované protilátky prechádzajú následnými aplikáciami v rôznych oblastiach, ako je imunológia, biotechnológia a lekárska diagnostika.

Elúcia je krok prípravy vzorky bežne používaný na afinitnú chromatografiu: Afinitná chromatografia využíva vysoko špecifické interakcie medzi cieľovou molekulou (napríklad protilátkou) a ligandom imobilizovaným na chromatografickej matrici. To umožňuje selektívnu purifikáciu cieľovej molekuly z komplexnej zmesi pomocou špecifickej väzbovej afinity molekúl, napr. protilátok.
Špecifická väzba protilátok: Protilátky sa často purifikujú pomocou afinitnej chromatografie, kde sa selektívne viažu na ligand imobilizovaný na chromatografickej živici. Môže to byť antigén, proteín A / G alebo akákoľvek iná molekula, ktorá špecificky interaguje s príslušnou protilátkou.
Elučné: Po naviazaní cieľovej protilátky na matricu ďalší krok zahŕňa eluáciu (alebo vymytie) viazanej protilátky zo živice. Tento elučný krok typicky zahŕňa narušenie špecifickej väzby medzi protilátkou a ligandom. Tento krok môže byť zariadený ultrazvukom.
Ultrazvuková sonda UP50H je laboratórny homogenizátor často používaný ako bunkový disruptor, rozptyľovač a emulgátor v laboratóriách.Ultrazvukom asistovaná nešpecifická elúcia: Na rozdiel od špecifických elučných metód, ktoré narúšajú iba interakciu protilátka-ligand, nešpecifické elučné metódy narúšajú všetky interakcie na živici, vrátane nešpecifických. To môže byť výhodné pri zaobchádzaní so silne viazanými kontaminantmi, ktoré by mohli interferovať s procesom čistenia. Tu prichádza do hry ultrazvukom! Ultrazvukové vlny sa používajú na generovanie kavitačných bublín v elučnom pufri. Keď sa tieto bubliny zrútia v blízkosti živicovej matrice, vytvárajú intenzívne lokalizované šmykové sily a mikrostreamovanie. Toto mechanické narušenie pomáha pri prerušení nešpecifických interakcií medzi protilátkou a ligandom, čo uľahčuje elúciu viazanej protilátky z matrice.

Dosky s 96 jamkami a iné viacjamkové dosky sa najlepšie spracovávajú pomocou UIP400MTP Sonicator. Tento ultrazvukový systém je ideálny pre lýzu, fragmentáciu DNA a spracovanie solubilizácie buniek vzorky vo vysokej priepustnosti.

Vysoko výkonný sonicator UIP400MTP uľahčuje elúciu protilátok a proteínov

Žiadosť o informácie





 

Tento návod vysvetľuje, aký typ ultrazvukom je najlepší pre vaše úlohy prípravy vzoriek, ako je lýza, narušenie buniek, izolácia proteínov, fragmentácia DNA a RNA v laboratóriách, analýza a výskum. Vyberte si ideálny typ ultrazvukom pre vašu aplikáciu, objem vzorky, počet vzoriek a priepustnosť. Hielscher Ultrasonics má ideálny ultrazvukový homogenizátor pre vás!

Ako nájsť perfektný sonikátor pre narušenie buniek a extrakciu bielkovín vo vede a analýze

Miniatúra videa

 

Výhody ultrazvukovej elúcie pomocou ultrazvukom

Ultrazvuková elúcia ponúka niekoľko výhod, najmä v kontexte techník čistenia proteínov, ako je afinitná chromatografia.
Napríklad ultrazvukom vyniká alternatívnymi metódami, pokiaľ ide o integritu bielkovín, regeneráciu, čistotu, všestrannosť a účinnosť. Tieto výhody robia ultrazvukovú elúciu preferovanou voľbou pre procesy čistenia proteínov, najmä v aplikáciách, kde je nevyhnutné zachovať štruktúru a aktivitu proteínov. Okrem toho, ultrazvuková elúcia vyniká svojou jednoduchosťou, účinnosťou, univerzálnosťou a kompatibilitou so širokou škálou proteínov a afinitných matríc. Použitie ultrazvukových vĺn na narušenie interakcií proteín-matrica, ultrazvuková elúcia ponúka jemnú a rýchlu metódu čistenia proteínov, zabezpečenie vysokej miery zotavenia a zachovanie integrity proteínov pre následné aplikácie.

Jemnejšia k štruktúre bielkovín: Elúcia pri nízkom pH zahŕňa použitie kyslých tlmivých roztokov na narušenie väzby medzi cieľovým proteínom (napr. protilátkami) a afinitnou matricou. Vystavenie nízkemu pH však môže denaturovať proteíny, čo potenciálne ohrozuje ich štruktúru a biologickú aktivitu. Naproti tomu ultrazvuková elúcia sa primárne spolieha skôr na mechanické narušenie ako na chemickú denaturáciu, čo je šetrnejšie k proteínovej štruktúre. To je obzvlášť výhodné pri čistení jemných proteínov alebo protilátok citlivých na zmeny pH.

  • Znížené riziko agregácie: Elúcia s nízkym pH môže zvýšiť riziko agregácie proteínov v dôsledku rozkladu proteínov a expozície hydrofóbnych oblastí. Agregácia môže viesť k strate aktivity bielkovín a ťažkostiam pri následnom spracovaní. Ultrazvuková elúcia v porovnaní s tým minimalizuje riziko agregácie použitím mechanických síl na narušenie interakcií medzi proteínom a afinitnou matricou bez významnej zmeny natívnej konformácie proteínu.
  • Zlepšená regenerácia a čistota: Ultrazvuková elúcia môže dosiahnuť vyššie rýchlosti zotavenia a úrovne čistoty v porovnaní s alternatívnymi elučnými metódami. Mechanické narušenie zabezpečené ultrazvukom účinne uvoľňuje viazané proteíny z afinitnej matrice pri minimalizácii nešpecifických interakcií. Výsledkom je zvýšená regenerácia cieľového proteínu so zníženou kontamináciou nešpecificky viazanými molekulami, čo prispieva k vyššej čistote eluovanej frakcie.
  • Vysokovýkonné spracovanie: Hielscher Ultrasonics ponúka rôzne ultrazvukom pre ultrazvuk-asistované čistenie proteínov, elution a biopanning. Mikrotitračná doska-sonikátor UIP400MTP umožňuje hromadné spracovanie vzoriek v 96-jamkových a iných viacjamkových platniach. VialTweeter je ideálny pre bezproblémovú, súčasnú ultrazvukom až 10 skúmaviek, ako sú injekčné liekovky Eppendorf za rovnakých podmienok. CupHorn je všestranný ultrazvukom ideálny pre niekoľko skúmaviek, malých kadičiek a iných nádob. A samozrejme, klasické sondové sonikátory s mikrotipmi sú dobre zavedeným laboratórnym nástrojom na prípravu vzoriek. Hielscher Ultrasonics produktový rad má ideálny sonicator pre vaše nastavenie experimentu a veľkosť vzorky.
  • Všestrannosť a kompatibilita: Ultrazvuková elúcia je kompatibilná so širokou škálou proteínov a afinitných matríc, ktoré ponúkajú všestrannosť v čistiacich aplikáciách. Naproti tomu elúcia s nízkym pH nemusí byť vhodná pre určité proteíny, ktoré sú citlivé na kyslé podmienky, alebo pre afinitné matrice, ktoré sú náchylné na degradáciu alebo lúhovanie pri nízkom pH. Ultrazvuková elúcia poskytuje jemnú a univerzálne použiteľnú alternatívu, ktorá môže byť prispôsobená špecifickým potrebám čistenia bez ohrozenia integrity proteínov alebo stability matrice.
  • Čas a efektivita: Ultrazvuková elúcia typicky vyžaduje kratšie elučné časy v porovnaní s inými elučnými metódami. Rýchle a efektívne uvoľňovanie viazaných proteínov uľahčené ultrazvukom znižuje čas spracovania a zvyšuje celkovú účinnosť čistenia, čo z neho robí atraktívnu voľbu pre aplikácie s vysokou priepustnosťou alebo keď sú potrebné časovo citlivé výsledky.
96-Well Plate Sonicator UIP400MTP na lýzu buniek, extrakciu DNA, fragmentáciu DNA, solubilizáciu buniek a čistenie proteínov.

96-jamkový doskový sonikátor UIP400MTP na sonikáciu platní s viacerými jamkami, platní PCR a ELISA

 

VialTweeter na ultrazvukovom procesore UP200ST

VialTweeter sonikator pre súčasnú ultrazvukom 10 vzoriek, napr. narušiť bunky a extrahovať proteíny

Ultrazvukovo asistované biopanning

Biopanning je kritickou technikou pri čistení protilátok, najmä ak je potrebné získať vysoko špecifické protilátky pre výskum alebo lekársku diagnostiku. Biopanning je proces, pri ktorom sa protilátky izolujú zo zmesi protilátok, takzvanej knižnice protilátok.

Ako funguje Ultrasonic Biopanning?

Začína to knižnicou protilátok, zmesou rôznych protilátok. Každá protilátka sa vyznačuje vlastným jedinečným tvarom a špecifickosťou. Na analýzu a terapeutiká sa musia izolovať špecifické protilátky, ktoré rozpoznávajú konkrétny cieľ, ako je vírus alebo rakovinová bunka. Pomocou biopanningu je možné tieto špecifické protilátky izolovať. Ultrazvukom pomáha uľahčiť proces biopanningu, čím sa čistenie protilátok stáva efektívnejším.

Počnúc knižnicou protilátok sa protilátky zvyčajne zobrazujú na povrchu bakteriofágu, kvasinkovej bunky alebo iného zobrazovacieho systému. Táto knižnica predstavuje rozmanitú škálu protilátok.
V prvom kroku je táto knižnica vystavená cieľovej molekule. Protilátky, ktoré sa viažu na cieľ, sa prilepia, zatiaľ čo ostatné sa zmyjú. Na odstránenie neviazaných protilátok sa vzorky niekoľkokrát premyjú tlmivým roztokom.

Teraz máme vzorky obsahujúce iba viazané protilátky. To však znamená, že protilátky sú stále pripojené k svojmu zobrazovaciemu systému. Aby sa uvoľnili, musí sa prerušiť interakcia protilátka-ligand. Tento krok je známy ako elúcia. Vzorky sa môžu eluovať použitím roztoku, ktorý naruší väzbu, napr. použitím špecifického elučného tlmivého roztoku, chaotropného roztoku, zníženie hodnoty pH, použitie tepla atď. Tieto elučné techniky ničia väzbu protilátka-ligand, ale môžu tiež zhoršiť samotné protilátky. Preto sa ultrazvukom používa ako alternatívna technika na jemné odstránenie protilátok z ich cieľa.

Po dokončení elučného kroku získame purifikované protilátky, pripravené na použitie vo výskume, diagnostike alebo terapii.

Biopanning je výkonná technika pri čistení protilátok a ultrazvuková elúcia uľahčuje a zintenzívňuje účinnosť – čo vedie k vysoko purifikovaným, nepoškodeným protilátkam. Ultrazvukové biopanning umožňuje vedcom izolovať vysoko špecifické protilátky z komplexných vzoriek, otvára dvere širokej škále aplikácií.

Sonikátory na čistenie protilátok

Hielscher sonicators sú dobre zavedené nástroje používané v najlepších výskumných zariadeniach po celom svete. Cenené pre svoj najmodernejší dizajn a vynikajúci výkon, Hielscher sonicators sú považované za nepostrádateľné laboratórne nástroje v oblasti biotechnológie a molekulárnej biológie. Hielscher Ultrasonics ponúka sonicators pre jednu vzorku, rovnako ako vysoko priepustná príprava vzoriek, ktoré uľahčujú efektívne čistenie protilátok a elúciu cieľových molekúl a umožňujú efektívne biopanning izolovať špecifické protilátky s presnosťou a rýchlosťou.
V kontexte čistenia protilátok, Hielscher sonicators vynikajú v uľahčení premývacích a elučných krokov efektívnym odstraňovaním neviazaných protilátok pri zachovaní integrity komplexov viazaných na cieľ. Ich presné riadenie a škálovateľnosť umožňujú prispôsobené podmienky spracovania a zabezpečujú optimálne výsledky čistenia v širokom rozsahu objemov a zložitostí vzoriek.
Hielscher sonicators predstavujú technologické inovácie v ultrazvukovom spracovaní, ktoré ponúkajú bezkonkurenčné schopnosti čistenia protilátok, elúcie a biopanningu. Vďaka svojej presnosti, spoľahlivosti a jednoduchosti obsluhy, rôzne ultrazvukové systémy ponúkajú optimálnu účinnosť a všestrannosť pre biofarmaceutický výskum, diagnostiku a terapiu.
Kontaktujte nás teraz, aby ste sa dozvedeli viac o Hielscher sonicators pre čistenie protilátok, elúciu, a biopanning! Náš skúsený technický personál s radosťou prediskutuje vašu aplikáciu súvisiacu s protilátkami!

Prečo Hielscher Ultrasonics?

  • vysoká účinnosť
  • Najmodernejšia technológia
  • Spoľahlivosť & Robustnosť
  • nastaviteľné, presné riadenie procesu
  • Dávkové & Inline
  • pre akýkoľvek objem
  • inteligentný softvér
  • inteligentné funkcie (napr. programovateľné, dátové protokoly, diaľkové ovládanie)
  • Jednoduché a bezpečné ovládanie
  • nízka údržba
  • CIP (čisté miesto)

Dizajn, výroba a poradenstvo – Kvalita vyrobená v Nemecku

Hielscher ultrasonicators sú známe svojimi najvyššími štandardmi kvality a dizajnu. Robustnosť a jednoduchá obsluha umožňujú hladkú integráciu našich ultrazvukových prístrojov do priemyselných zariadení. Drsné podmienky a náročné prostredia ľahko zvládajú ultrazvukové prístroje Hielscher.

Hielscher Ultrasonics je spoločnosť certifikovaná podľa ISO a kladie osobitný dôraz na vysoko výkonné ultrazvukové prístroje s najmodernejšou technológiou a užívateľskou prívetivosťou. Samozrejme, Hielscher ultrasonicators sú v súlade s CE a spĺňajú požiadavky UL, CSA a RoHs.

Kontaktuj nás! / Opýtajte sa nás!

Požiadajte o ďalšie informácie

Použite nižšie uvedený formulár a požiadajte o ďalšie informácie o ultrazvukových procesoroch, aplikáciách a cene. Radi s vami prediskutujeme váš proces a ponúkneme vám ultrazvukový systém spĺňajúci vaše požiadavky!









Vezmite prosím na vedomie naše Zásady ochrany osobných údajov,


Video ukazuje ultrazvukový systém prípravy vzoriek UIP400MTP, ktorý umožňuje spoľahlivú prípravu vzoriek akýchkoľvek štandardných multi-well dosiek pomocou ultrazvuku s vysokou intenzitou. Typické aplikácie UIP400MTP zahŕňajú bunkovú lýzu, DNA, RNA a strihanie chromatínu, ako aj extrakciu bielkovín.

Ultrasonicator UIP400MTP pre multi-well dosky ultrazvukom

Miniatúra videa

Porovnanie ultrazvukovej elúcie vs tradičné elučné techniky

  1. Vypieranie gradientu: Pri gradientovej elúcii sa väzbová sila medzi cieľovým proteínom a afinitnou matricou postupne znižuje zmenou zloženia elučného tlmivého roztoku. To môže zahŕňať meniace sa faktory, ako je pH, koncentrácia soli alebo koncentrácia konkurenčných ligandov. Gradientová elúcia umožňuje jemné doladenie podmienok elúcie tak, aby selektívne uvoľnil cieľový proteín a zároveň minimalizovala nešpecifickú väzbu.
    Výhody ultrazvukovej elúcie: Ultrazvuková elúcia ponúka rýchlejšie a rovnomernejšie uvoľňovanie viazaných proteínov v porovnaní s gradientovou elúciou. Zatiaľ čo gradientová elúcia vyžaduje starostlivú optimalizáciu a monitorovanie elučných podmienok, ultrazvuková elúcia poskytuje jednoduchšiu a efektívnejšiu metódu na regeneráciu proteínov.
  2. Konkurenčné objasnenie: Pri kompetitívnej elúcii sa do elučného tlmivého roztoku zavedie vysoká koncentrácia konkurenčného ligandu, aby sa narušila väzba medzi cieľovým proteínom a afinitnou matricou. Konkurenčný ligand súťaží s cieľovým proteínom o väzbové miesta na matrici, čím vytesňuje proteín a uvoľňuje ho do eluátu.
    Výhody ultrazvukovej elúcie: Ultrazvuková elúcia ponúka jemnejšiu a všestrannejšiu alternatívu k konkurenčnej elúcii. Kompetitívna elúcia môže vyžadovať použitie vysokých koncentrácií chaotropných činidiel (t. j. kosolútu, ktorý narúša sieť vodíkových väzieb medzi molekulami vody a znižuje stabilitu prirodzeného stavu proteínov oslabením hydrofóbneho účinku) alebo agresívnych chemikálií, ktoré môžu ovplyvniť stabilitu a aktivitu proteínov. Naproti tomu ultrazvuková elúcia poskytuje mechanické narušenie bez potreby ďalších chemických látok, zachováva integritu proteínov a zabezpečuje vysokú mieru zotavenia.
  3. Elúcia vyvolaná teplotou: Elúcia indukovaná teplotou zahŕňa zmenu teploty elučného tlmivého roztoku s cieľom narušiť väzbu medzi cieľovým proteínom a afinitnou matricou. To sa dá dosiahnuť buď zvýšením alebo znížením teploty v závislosti od špecifickej interakcie proteín-matrica.
    Výhody ultrazvukovej elúcie: Ultrazvuková elúcia ponúka rýchlejšiu a kontrolovanejšiu metódu elúcie proteínov v porovnaní s metódami indukovanými teplotou. Zatiaľ čo elúcia vyvolaná teplotou môže vyžadovať presnú kontrolu teplotných gradientov a dlhšie rovnovážne časy, ultrazvuková elúcia poskytuje okamžité mechanické narušenie, čo vedie k kratším časom elúcie a zlepšenej účinnosti.
  4. Enzymatická elúcia: Enzymatická elúcia využíva špecifické enzýmy, ktoré štiepia väzby medzi cieľovým proteínom a afinitnou matricou, čím uvoľňujú proteín do eluátu. Táto metóda je obzvlášť užitočná pre proteíny, ktoré sú pevne viazané na matricu alebo pre aplikácie vyžadujúce presnú kontrolu podmienok elúcie.
    Výhody ultrazvukovej elúcie: Ultrazvuková elúcia ponúka neenzymatickú a bezchemickú alternatívu k enzymatickej elúcii. Zatiaľ čo enzymatická elúcia môže vyžadovať optimalizáciu koncentrácie enzýmov, inkubačného času a podmienok pH, ultrazvuková elúcia poskytuje priamu a univerzálne použiteľnú metódu na regeneráciu proteínov bez potreby ďalších činidiel alebo špecializovaného vybavenia.
Sonicator pre vysoko výkonnú prípravu vzoriek! Sonikátor UIP400MTP dosiek uľahčuje lýzu, extrakciu proteínov, fragmentáciu DNA a rozpustnosť buniek biologických vzoriek v platniach s 96 jamkami.

Doska sonikator UIP400MTP pre akékoľvek 96-jamkové platne, mikrotitračné platne a viacjamkové platne.



Literatúra/referencie


Vysoko výkonné ultrazvukom! Produktový rad Hielscher pokrýva celé spektrum od kompaktného laboratórneho ultrasonicator cez stolové jednotky až po plne priemyselné ultrazvukové systémy.

Hielscher Ultrasonics vyrába vysokovýkonné ultrazvukové homogenizers z laboratórium na priemyselnej veľkosti.


Radi prediskutujeme váš proces.

Poďme sa skontaktovať.