Применение ультразвука при работе с вирусом оспы обезьян

Обработка ультразвуком является важным методом обработки для выделения вируса оспы обезьян (MPXV) из аналитических образцов, фрагментации вирусной ДНК, а также производства вакцин против оспы обезьян. При подготовке образцов перед диагностикой и анализом (ПЦР, ELISA и т. д.) обработка ультразвуком используется для лизиса клеток с целью высвобождения вируса оспы обезьян из клеток и / или фрагментации ДНК. В производстве вакцин области применения охватывают подготовку вирусных частиц / ДНК, инкапсуляцию в носители лекарственных средств и приготовление инокулятов.
Ниже вы найдете подробную информацию об ультразвуковой подготовке образцов вируса оспы обезьян, а также о производстве вакцин против MPXV с применением ультразвука.

Что вы найдете на этой странице:

• Ультразвуковой лизис для извлечения вируса оспы обезьян
• Ультразвуковая фрагментация ДНК вируса оспы обезьян
• Применение ультразвука в производстве вакцин против MPXV

Ультразвуковой лизис и фрагментация ДНК перед полимеразной цепной реакцией (ПЦР)

Инфекцию, вызванную вирусом оспы обезьян, выявляют методом амплификации нуклеиновых кислот (NAAT), используя полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в реальном времени или обычную ПЦР для обнаружения уникальных последовательностей вирусной ДНК. Образец (например, мазок из носоглотки или биоптат кожи) содержит вирус внутри клеток.
Для анализа вирус необходимо высвободить из клеток, а вирусную ДНК необходимо фрагментировать для ПЦР.

Ультразвуковой лизис:

Ультразвуковое разрушение клеток / лизис является надежным и эффективным методом выделения вирусов из клеточных образцов и поэтому предпочтительнее применения химических агентов, таких как лизоцим, протеиназа K и различные детергенты, которые используются в качестве альтернативы для лизиса клеток и высвобождения ДНК.
Однако применение таких химических реагентов требует трудоемкой многоэтапной подготовки образцов перед ПЦР-анализом, чтобы предотвратить ингибирование реакции ПЦР. Поскольку ингибиторы ПЦР влияют на эффективность амплификации, небольшие изменения количества неудаленных ингибиторов могут привести к значительным изменениям амплификации продукта ПЦР (Diaco, 1995).
Преимущество обработки ультразвуком для лизиса заключается в том, что полное разрушение клеточных структур и высвобождение ДНК без необходимости использования лизирующих реагентов и трудоемкой подготовки образцов являются желательными результатами. (См. Fykse et al., 2003)

Ультразвуковая фрагментация ДНК:

Ультразвуковая фрагментация ДНК проста и надежна, поскольку позволяет получать фрагменты ДНК регулируемой длины (пары оснований, bp). С помощью ультразвука ДНК можно эффективно фрагментировать до заданной длины. Точный контроль ультразвуковых параметров и продуманные возможности охлаждения предотвращают деградацию ДНК.
Узнайте больше об ультразвуковой фрагментации ДНК!

Применение ультразвука при изготовлении вакцины против вируса оспы обезьян

Вакцины, применяемые против вируса оспы обезьян, в настоящее время являются живыми вирусными вакцинами. Вновь разрабатываемые вакцины могут использовать другие платформы, например на основе ДНК… В настоящее время содержит модифицированный вирус Vaccinia Ankara, ослабленный, нереплицирующийся ортопоксвирус. Также содержит Tris (трис-аминометан) и хлорид натрия. Вакцина также может содержать небольшие количества ДНК и белка из клеток фибробластов куриного эмбриона, которые используются для выращивания вакцинного вируса, бензоназу и антибиотические соединения, такие как гентамицин и ципрофлоксацин.

Ультразвуковая гомогенизация используется при производстве живых аттенуированных вирусных вакцин, ДНК-вакцин, поливалентных ДНК-коктейлей, мРНК-вакцин, вакцин на основе рекомбинантных белков, вакцин на основе вирусоподобных частиц и т. д.

Вы можете найти более подробную информацию о применении ультразвука для совершенствования производства вакцин!

Протокол ультразвукового выделения вируса оспы обезьян

Исследовательская группа Stittelaar (2005) использовала ультразвуковой лизис для высвобождения вируса оспы обезьян из культуры клеток-хозяев, в которой выращивали вирус, а также из клеток, полученных с помощью мазков из горла инфицированных приматов.

Подготовка вакцины против оспы обезьян:

Вирусы оспы обезьян выращивали на клетках фибробластов куриного эмбриона, свободных от специфических патогенов. После инкубации в течение 1–2 дней вирусно-клеточную суспензию собирали с помощью одного цикла замораживания и оттаивания, а затем концентрировали центрифугированием. Осадок ресуспендировали и подвергали нескольким циклам ультразвуковой гомогенизации.

Выделение вируса оспы обезьян из вакцинированных макак:

Образцы трижды замораживали и оттаивали, а затем обрабатывали ультразвуком в ультразвуковом CupHorn. Два разведения (1:10 и 1:100) в транспортной среде с добавлением 1% фетальной бычьей сыворотки использовали для инокуляции монослоев клеток Vero в шестилуночных планшетах. После инкубации в течение 1 h при 37°C инокуляты удаляли и заменяли культуральной средой с добавлением 1% фетальной бычьей сыворотки. Монослои культивировали в течение 5 дней при 37°C и окрашивали раствором кристаллического фиолетового.
(См. Stittelaar et al., 2005)

Ультразвуковые аппараты для анализа вирусов и производства вакцин

Широкий ассортимент продукции Hielscher Ultrasonics позволяет подобрать идеальный ультразвуковой аппарат для исследовательских и аналитических лабораторий, а также для промышленного производства вакцин.
Hielscher Ultrasonics специализируется на проектировании, производстве и поставке высокопроизводительных ультразвуковых аппаратов и ультразвуковых биореакторов для использования в исследовательских и аналитических лабораториях, а также для внедрения в промышленное производство вакцин (например, вакцины, активные фармацевтические ингредиенты).
Обработка ультразвуком может применяться в открытых емкостях, закрытых реакторах с непрерывным перемешиванием и реакторах с непрерывным протоком. Все детали ультразвуковых систем, контактирующие с жидкой средой, изготовлены из нержавеющей стали, титана или стекла. Автоклавируемые детали и санитарные соединения обеспечивают производство в условиях, соответствующих требованиям фармацевтического производства.
Автоматическая регистрация данных: Интеллектуальное программное обеспечение автоматически записывает параметры процесса обработки ультразвуком на встроенную карту памяти SD. Точный контроль всех параметров процесса обеспечивает воспроизводимость, стандартизацию производства, а также способствует выполнению стандартов безопасности фармацевтической продукции.
Ультразвуковые процессоры Hielscher Ultrasonics отличаются высокой надежностью и поддаются точному управлению. Все промышленные ультразвуковые аппараты можно настроить для работы во всем диапазоне амплитуд, от низких до очень высоких. Прочность ультразвуковых систем Hielscher позволяет работать круглосуточно, 24/7, при высоких нагрузках и в сложных условиях.

Приведенная ниже таблица дает представление о приблизительной производительности наших ультразвуковых аппаратов: