Lysisbuffers kunnen efficiënt en snel worden bereid met behulp van ultrasone weefselhomogenisatoren. Aangezien ultrasoonapparaten een gedroomd instrument zijn voor mengen, oplossen en dispergeren, maken zij een betrouwbare en gebruiksvriendelijke bereiding van lysisbuffers mogelijk.

Ultrasone bereiding van lysisbuffers

Ultrasone weefselhomogenisatoren zijn een algemeen instrument voor celdisruptie, -lyse en -extractie, en daarom in de meeste laboratoria beschikbaar. Een secundaire toepassing van ultrasone apparaten van het sonde-type is de bereiding van lysisbuffers.

Lysisbuffer is een oplossing die wordt gebruikt om cellen open te breken (lyseren) en hun inhoud vrij te maken voor downstreamanalyse. De specifieke samenstelling van de lysisbuffer kan variëren, afhankelijk van het type cellen dat wordt gelyseerd en de downstream-toepassing. Een typische lysisbuffer bevat echter bestanddelen als detergenten, zouten en proteaseremmers. Bufferzouten (bv. Tris-HCl) en ionische zouten (bv. NaCl) worden gewoonlijk gebruikt om de pH en de osmolariteit van het lysaat te regelen.
Om een lysisbuffer te maken worden de componenten in de juiste concentraties en pH gemengd. Het mengsel wordt gewoonlijk geroerd of geschud totdat de componenten zijn opgelost en de oplossing homogeen is.
Ultrasone homogenisatie is een methode die kan worden gebruikt om een goede lysisbuffer te maken door het mengen en oplossen van de componenten te verbeteren. Bij deze methode worden ultrasone golven – gewoonlijk in het bereik van 20 tot 30 kHz – worden aangebracht op het mengsel, waardoor cavitatiebelletjes ontstaan die instorten en lokaal intense energie opwekken, wat leidt tot mechanische afschuiving en vermenging van de componenten.
Het ultrasone homogenisatieproces kan helpen eventuele klonters of aggregaten van de componenten te breken, en ervoor zorgen dat de oplossing uniform wordt gemengd. Bijgevolg kan een dergelijke verbeterde lysisbuffer leiden tot een efficiëntere celdisruptie en een hogere opbrengst aan geëxtraheerd materiaal. Bovendien kan ultrasone homogenisatie de tijd verkorten die nodig is om een lysisbuffer te maken in vergelijking met traditionele roer- of schudmethoden.
In het algemeen is ultrasone homogenisatie een krachtig instrument om de kwaliteit en de efficiëntie van de bereiding van lysisbuffers te verbeteren.

Protocol voor de bereiding van ultrasone lysisbuffer

Dit is een algemeen protocol voor het maken van een lysisbuffer met behulp van een sonde-ultrageluidsapparaat:
 
Materialen:

• Detergent(en) naar keuze (bv. Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Zout(en) naar keuze (bv. NaCl, KCl)
• Proteaseremmers (bv. PMSF, aprotinine, leupeptine)
• ultrasonicator
• roerder
• Gedeïoniseerd water
• pH-meter of pH-strips

 
 
Stapsgewijze instructies:

1. Bepaal de samenstelling van de lysisbuffer op basis van de cellen of weefsels die u gaat lyseren en de toepassingen waarvoor u het lysaat gaat gebruiken. Bereid de stockoplossingen van detergenten, zouten en proteaseremmers in de gewenste concentraties.
2. Voeg de stockoplossingen van detergentia, zouten en proteaseremmers toe aan een bekerglas of kolf.
3. Voeg gedeïoniseerd water toe om het volume op de gewenste hoeveelheid buffer te brengen.
4. Meng de componenten met behulp van een roerder om een voorgemengde oplossing te krijgen.
5. Meet de pH van de buffer met een pH-meter of pH-strips, en pas de pH zo nodig aan met kleine hoeveelheden zuur of base.
6. Gebruik de ultrasone sensor om de voormengseloplossing te homogeniseren zodat een zeer homogene oplossing wordt verkregen. Soniceer de oplossing daarom gedurende enkele seconden totdat de oplossing grondig is gemengd en eventuele klonters of aggregaten zijn afgebroken. De duur en het vermogen van de sonicatie kunnen worden geoptimaliseerd op basis van de specifieke lysisbuffer en het gebruikte ultrasoonapparaat.
7. Meet na de ultrasoonbehandeling opnieuw de pH van de buffer en pas deze zo nodig aan.
8. Filter de buffer door een filter van 0,2 micron om eventuele brokstukken of aggregaten die zich tijdens de sonicatie hebben gevormd, te verwijderen.
9. De lysisbuffer is nu klaar voor gebruik.

 
Opmerking: De exacte samenstelling en pH van de lysisbuffer kan variëren afhankelijk van de cellen of weefsels die worden gelyseerd en de downstream-toepassingen. Het bovenstaande protocol is een algemene richtlijn en moet wellicht worden geoptimaliseerd voor specifieke toepassingen.
 
Ultrasone homogenisatoren worden algemeen gebruikt voor celdisruptie en extractie van intracellulaire moleculen. Daarom wordt bij veel lysetoepassingen gebruik gemaakt van sonicatie van het sonde-type, niet alleen voor de bereiding van de lysisbuffer, maar ook voor de mechanische celdisruptie en -extractie.
Dit maakt ultrasone weefselhomogenisatoren tot een veelzijdig instrument voor laboratoria en verklaart het brede gebruik van ultrasone apparaten in de microbiologie, biotechnologie en biowetenschappen.

lab ultrasone homogenisatoren

Hielscher Ultrasonics produceert en levert ultrasone homogenisatoren en sondes (sonotroden) met verschillende vermogens en monstervolumes. Hierdoor kunnen wij u de meest geschikte ultrasone disruptor voor uw monstervoorbereiding aanbieden. Wij richten ons op de hoogste kwaliteit, uitstekend gebruiksgemak en betrouwbare sonicatieresultaten. Alle digitale ultrasoonapparaten beschikken over slimme software, programmering en voorinstelling van sonicatieprotocollen, browserafstandsbediening, temperatuurregeling, monsterverlichting en automatische gegevensregistratie op een ingebouwde SD-kaart.

Ontwerp, productie en advies – Kwaliteit gemaakt in Duitsland

Hielscher ultrasoonapparaten staan bekend om hun hoogste kwaliteit en ontwerpnormen. Robuustheid en eenvoudige bediening maken een soepele integratie van onze ultrasoonapparaten in industriële installaties mogelijk. Ruwe omstandigheden en veeleisende omgevingen worden gemakkelijk door Hielscher ultrasoontoestellen aangepakt.

Hielscher Ultrasonics is een ISO gecertificeerd bedrijf en legt speciale nadruk op hoogwaardige ultrasoontoestellen met de modernste technologie en gebruiksvriendelijkheid. Uiteraard zijn Hielscher ultrasone apparaten CE-conform en voldoen ze aan de eisen van UL, CSA en RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: