Fragmentatie van alfa-synucleïne met de VialTweeter Sonicator

α-synucleïnefibrillen en -linten worden in wetenschappelijk onderzoek gefragmenteerd om kleinere fibrillensnippers of zelfs afzonderlijke eiwitmoleculen te genereren, die gemakkelijker geanalyseerd kunnen worden met verschillende experimentele technieken. De VialTweeter Sonicator is een van de meest gebruikte ultrasone apparaten voor efficiënte en betrouwbare alfa-synucleïnefragmentatie.

α-Synucleïne in onderzoek

Alfasynucleïnefibrillen zijn eiwitaggregaten die sterk geassocieerd worden met neurodegeneratieve aandoeningen zoals de ziekte van Parkinson en bepaalde vormen van dementie, waaronder dementie met Lewy-lichaampjes. Onderzoek gericht op alfa-synucleïne fibrillen heeft als doel hun rol in de progressie van de ziekte te begrijpen en mogelijke therapeutische interventies te ontwikkelen. Door alfa-synucleïne fibrillen op te splitsen in kleinere fragmenten, kunnen onderzoekers hun specifieke structurele kenmerken onderzoeken. Door alfa-synucleïnefibrillen te fragmenteren kunnen onderzoekers bijvoorbeeld hun interacties met andere moleculen, zoals eiwitten, lipiden of kleine moleculen, onderzoeken. Door kleinere fragmenten te maken, kunnen de bindingsplaatsen en affiniteit voor deze interacterende partners effectiever worden onderzocht. Kleinere α-Syn fribrils en linten kunnen ook veranderde toxiciteit en biochemische effecten vertonen. Daarom is een betrouwbare en efficiënte fragmentatietechniek, die reproduceerbare resultaten oplevert in een snelle en eenvoudige monsterbehandeling, van cruciaal belang.
Ultrasone Alpha-Syn Fragmentatie: De VialTweeter sonicator is het gevestigde ultrasone sample prep systeem dat tot 10 vials gelijktijdig sonificeert onder exact dezelfde omstandigheden. Programmeerbare instellingen maken het mogelijk om dezelfde experimenten eenvoudig en snel opnieuw uit te voeren, wat zeer betrouwbare en reproduceerbare resultaten oplevert bij de fragmentatie van alfa-synucleïnefibrillen.

 

α-Synucleïne monstervoorbereiding met een Sonicator

Eén manier om alfa-synucleïnefibrillen te bestuderen is door ze te extraheren en te fragmenteren met technieken als sonificatie. Sonificatie is een proces waarbij ultrasone geluidsgolven met een hoge intensiteit en lage frequentie eiwitaggregaten verstoren en afbreken, waardoor kleinere fibrillen of afzonderlijke eiwitmoleculen vrijkomen. De sonicator VialTweeter is een veelgebruikt apparaat in α-synucleïne-gerelateerd onderzoek voor dit doel.

Talloze onderzoeken beschrijven nauwkeurige protocollen voor monstervoorbereiding van alfa-synucleïnefibrillen door middel van sonicatie, waarbij gebruik wordt gemaakt van de Hielscher VialTweeter voor efficiënte en betrouwbare α-synucleïnefibrilfragmentatie. Door de fibrillen ultrasoon te fragmenteren, kunnen onderzoekers de resulterende producten analyseren en hun structuur, toxiciteit en interacties met andere moleculen onderzoeken. Dit onderzoek biedt belangrijke inzichten in de mechanismen die ten grondslag liggen aan neurodegeneratie en identificeert mogelijk nieuwe therapeutische doelwitten. De gevestigde α-synucleïne sonicatieprotocollen met de VialTweeter sonicator zorgen voor betrouwbare en reproduceerbare resultaten.

Ultrasone fragmentatie van α-synucleïnefibrillen – Protocollen

Aangezien veel onderzoekers de VialTweeter sonicator gebruiken als favoriete fragmentatietechniek om uniforme α-synucleïnefibril fragmenten te produceren, zijn er gevestigde protocollen beschikbaar. Hieronder vindt u een paar voorbeeldige fragmentatieprotocollen.
 

 
ClearTau zaadpreparaat: De ClearTau-fibrillen werden verdund tot 10 μM in dH2O en gesonitiseerd bij 70% amplitude gedurende 50 s met 1 s AAN 1 s UIT cyclus in de buis met behulp van de sonicator UP200St met VialTweeter. Zaden werden gekarakteriseerd door elektronenmicroscopie.
ThS-fluorescentiemeting: De ClearTau-fibrillen werden verdund tot 2,5 μM in dH2O en gesoneerd bij 70% amplitude gedurende 50 s met 1 s AAN 1 s UIT-cyclus in de buis met UP200St met VialTweeter. 2,5 uM full-length Tau 4R2N monomeer werd gebruikt als controle. Aan de 100 pl reactie, werden 100 pl ThS (10 uM) toegevoegd, waardoor uiteindelijke eiwitconcentraties van 1,25 uM. Single-time point ThS fluorescentie werd gemeten met behulp van 96 wells heldere bodem platen opgezet in FLUOstar Omega microplaatlezer met excitatie bij 445 nm en emissie bij 485 nm werd opgenomen.
(vgl. Limorenko et al., 2023)
 
Uniforme α-synucleïne lengte met behulp van sonicatie: De lengte heterogeniteit van α-syn fibrillen en linten werd verminderd door sonicatie gedurende 20 minuten op ijs in 2-ml Eppendorf buisjes in een VialTweeter ingesteld op 75% amplitude, 0,5 s pulsen.
(vgl. Bousset et al., 2013)
 
De kwaliteitscontrole van humaan recombinant monomeer WT of S129A a-Syn en de fibrillaire polymorfen die ze genereren en die van a-Syn 1-110 werd uitgevoerd. Vervolgens werden de fibrillaire polymorfen gefragmenteerd door sonicatie gedurende 20 minuten in 2-mL Eppendorf buisjes in de VialTweeter ultrasoonapparaat om fibrillaire deeltjes te genereren met een gemiddelde grootte van 42-52 nm die geschikt zijn voor endocytose.
(vgl. Shrivastava et al., 2020)
 

 
De α-Syn fibrillen werden gefragmenteerd door sonicatie gedurende 20 minuten in 2 ml Eppendorf buisjes in een VialTweeter om fibrillaire deeltjes te genereren met een gemiddelde grootte van 42-52 nm zoals beoordeeld door TEM-analyse.
(cf. Negrini et al., 2022)
 
De geresuspendeerde fibrillen91 (in PBS) werden voorafgaand aan de toevoeging aan celculturen gefragmenteerd door sonicatie gedurende 20 minuten in 2 ml Eppendorf buisjes met de Vial Tweeter sonicator, aliquoteerd, flash bevroren in vloeibare stikstof en opgeslagen tot gebruik bij -80 ̊C.
(vgl. Vajhøj et al., 2021)
 

VialTweeter en laboratorium Sonicators voor α-Syn Fragmentatie

Hielscher Ultrasonics wordt wereldwijd erkend als toonaangevende fabrikant van ultramoderne ultrasone apparaten. Onze ultrasone apparaten worden vertrouwd en worden wereldwijd gebruikt in grote onderzoekslaboratoria. Ze bieden ongeëvenaarde kwaliteit en prestaties voor uw kritische experimenten.
Met de Hielscher VialTweeter en elke andere Hielscher sonicator ervaart u een ongeëvenaard gebruiksgemak, omdat ze zorgvuldig zijn ontworpen voor reproduceerbare resultaten, gebruiksgemak en naadloze bediening. Met functies voor automatische gegevensregistratie kunt u zich concentreren op uw onderzoek terwijl onze ultrasone apparaten nauwgezet cruciale gegevens registreren voor reproduceerbaarheid en precisie.
Bereik vol vertrouwen consistente en reproduceerbare resultaten!
Onze ultrasone apparaten zijn ontworpen en geproduceerd in Duitsland. Duitse precisie en de hoogste technische kwaliteit garanderen elke keer weer betrouwbare en nauwkeurige monstervoorbereiding zoals alfa-synucleïnefibrilfragmentatie. Geen zorgen meer over inconsistente resultaten - onze ultrasoontechnologie zorgt ervoor dat uw onderzoek in de voorhoede van de wetenschappelijke vooruitgang blijft.
Maar dat is nog niet alles! Ons streven naar uitmuntendheid gaat verder dan onze producten. We zijn trots op onze uitzonderlijke klantenservice en bieden deskundige ondersteuning bij al uw vragen en problemen. Ons toegewijde team is er om u te helpen bij elke stap van uw onderzoeksreis, zodat u het meeste uit onze ultrasone apparaten kunt halen.
Kies voor innovatie, betrouwbaarheid en uitzonderlijke gebruikerservaring - kies voor onze laboratorium sonicators zoals de VialTweeter voor alfa-synucleïnefibril fragmentatie. Profiteer van de reeds bestaande protocollen en sluit u aan bij toonaangevende onderzoekers die vertrouwen op onze technologie voor hun kritische onderzoeken. Verhoog uw onderzoek en verken nieuwe grenzen in het onderzoek naar dementie en neurodegeneratieve ziekten met onze ultramoderne ultrasone apparaten.

 

 

Ontwerp, productie en advies – Kwaliteit Made in Germany

Hielscher ultrasone machines staan bekend om hun hoge kwaliteit en ontwerpnormen. Robuustheid en eenvoudige bediening zorgen voor een soepele integratie van onze ultrasoonapparatuur in industriële faciliteiten. Ruwe omstandigheden en veeleisende omgevingen worden gemakkelijk door Hielscher ultrasoontoestellen aangepakt.

Hielscher Ultrasonics is een ISO-gecertificeerd bedrijf en legt speciale nadruk op hoogwaardige ultrasone apparaten met state-of-the-art technologie en gebruiksvriendelijkheid. Uiteraard zijn Hielscher ultrasone apparaten CE-conform en voldoen ze aan de eisen van UL, CSA en RoHs.
 
De onderstaande tabel geeft een indicatie van de verwerkingscapaciteit van onze ultrasone apparaten op laboratoriumformaat: