C. elegans paraugu ultraskaņas sagatavošana

C. elegans, nematode, ir plaši izmantots modelorganisms bioloģijā. Paraugu sagatavošana pirms analīzes prasa līzi, olbaltumvielu un lipīdu ekstrakciju, kā arī RNS fragmentāciju, ko var droši veikt, izmantojot apstrādi ar ultraskaņu. Ultraskaņas šūnu sagraušana ir uzticamas, sarežģītas un viegli lietojamas ierīces ātrai C. elegans paraugu sagatavošanai.

C. elegans paraugu ultraskaņas sagatavošana

Caenorhabditis elegans ir apaļtārpi, kas tiek plaši izmantoti pētniecības laboratorijās, lai pētītu genomiku, attīstības bioloģiju un slimības. Daudziem C. elegans genoma gēniem ir funkcionāli analogi cilvēkiem. Tādējādi nematode ir ārkārtīgi noderīgs modelis cilvēku slimībām. Citi priekšrocības C. elegans plašai izmantošanai ir tās vieglā un lētā audzēšana uz baktērijas (piemēram, E. coli) saturošām plāksnēm, tās caurspīdīgums, ērta apstrāde, kā arī iespēja tārpus sasaldēt un uzglabāt ilgāku laiku.
Olbaltumvielu un lipīdu analīze ir regulāras procedūras laboratorijās, un ultraskaņas paraugu sagatavošana ir pierādīta metode C. elegans nematodes līzei jebkurā attīstības stadijā (t.i., embriji, kāpuri L1-L4, pieaugušie). Tā kā C. elegans tiek izmantots arī kā olbaltumvielu ekspresijas sistēma, lai pārmērīgi ekspresētu mērķa olbaltumvielas, ir nepieciešama uzticama, atkārtojama līzes un olbaltumvielu ekstrakcijas metode, kas nodrošina augstu olbaltumvielu iznākumu. Ultraskaņas šūnu sagraušanas un ekstrakcijas sistēmas ir pieejamas kā zondes tipa homogenizatori un kā daudzparaugu ultraskaņas ierīces. Piedāvājot ērtu paraugu sagatavošanu un visu veidu paraugu izmērus un skaitus, Hielscher Ultrasonics piedāvā ideālu ultraskaņas šūnu sagraušanas ierīci jūsu laboratorijas procedūrai.

Ultraskaņas protokoli C. elegans sagraušanai un līzei

C. elegans ultraskaņas homogenizāciju un līzi, kā arī turpmāku olbaltumvielu un lipīdu ekstrakciju var veikt, izmantojot dažādas procedūras, izmantojot dažādus homogenizācijas un līzes buferšķīdumus utt. Visiem līzes protokoliem ir kopīga īpašība, ka paraugi ir nepārtraukti jātur ledū, lai novērstu olbaltumvielu degradāciju. Zemāk mēs piedāvājam dažus uzticamus un ātrus ultraskaņas līzes un ekstrakcijas protokolus augstas kvalitātes olbaltumvielu vai lipīdu saturošu C. elegans paraugu sagatavošanai.

Ultraskaņas C. elegans līzes priekšrocības

• uzticama
• atkārtojama
• precīzi temperatūras kontrolēta
• uzticama procesa kontrole
• maiga metode
• viegli pielietojama
• droša

Ultraskaņas olbaltumvielu ekstrakcija no C. elegans paraugiem

C. elegans tārpu ultraskaņas līzi un olbaltumvielu ekstrakciju var veikt, izmantojot dažādus protokolus. Zemāk mēs piedāvājam dažus uzticamus un ātrus līzes protokolus atkārtojamiem olbaltumvielu ekstrakcijas rezultātiem.

Ātra citozola ekstrakta sagatavošana no C. elegans tārpiem, izmantojot apstrādi ar ultraskaņu

Ar šo protokolu jūs varat sagatavot C. elegans lizātus mazāk nekā 30 minūtēs.
C. elegans savākšana
Izvēlieties vēlamos C. elegans tārpus 1,5 ml mēģenē ar fosfāta buferšķīdumu (PBS) vai nomazgājiet tos no plāksnes ar 1,5 ml PBS. Centrifugējiet 1 minūti pie 2000 apgr./min, lai nogulsnētos. Paraugus visu laiku turiet ledū.
Tad nomazgājiet tārpus divas reizes ar PBS.
Pēc tam nomazgājiet tārpus divas reizes ar ddH₂O.
Atkārtoti suspendējiet tārpus vismaz 500 ul homogenizācijas buferšķīduma (HB). Tārpu paraugi tagad ir gatavi ultraskaņas līzei.
Lai iegūtu augstāku olbaltumvielu ekstrakta kvalitāti, jūs varētu vēlēties samazināt baktēriju piesārņojumu, mazgājot tārpus 5 minūtes katrā PBS un sterilā, ultra-tīrā ūdenī (ddH₂O) vai veicot saharozes flotāciju. Tārpu paraugus nepārtraukti turiet ledū.

Ultraskaņas C. elegans līzes protokols

• Pārliecinieties, ka esat iepriekš sagatavojis ultraskaņas ierīci, lai ultraskaņas homogenizators būtu gatavs lietošanai (zonde uzstādīta, apstrādes ar ultraskaņu programma iepriekš iestatīta). 

Ja jūsu ultraskaņas apstrādātājs ir uzstādīts uz statīva, novietojiet ledus vannu ar paraugu mēģenēm zem ultraskaņas zondes un ievietojiet ultraskaņas zondi 1,5 ml mēģenē.

• C. elegans līzei ar UP200St vai UP200Ht ultraskaņas apstrāde jāveic, izmantojot mikro-zondi (piemēram, 2 mm zondi S26d2; skatiet attēlu pa kreisi) ar 40% amplitūdu 1 sekundi ar 30 sekunžu pauzēm starp tām. 5 ultraskaņas apstrādes cikli pa 1 sekundi ar 30 sekunžu pauzēm ir ideāli C. elegans līzei. Ja veicat līzi pirmo reizi, varat pārbaudīt līzes gaitu mazās paraugu alikvotās pēc katra impulsa, izmantojot mikroskopu.
• Līze ir veiksmīgi pabeigta, kad nematodes ir sagrauztas. Pārmērīga ultraskaņas apstrāde izraisa kodolu sadalīšanos, kas kļūst redzams, kad paraugs kļūst viskozs vai veidojas putas. Lai novērstu paraugu degradāciju, ja nepieciešams, izmantojiet vairāk impulsu. Nepalieliniet katra ultraskaņas impulsa cikla ilgumu, lai iegūtu augstas kvalitātes olbaltumvielu ekstraktus.
• Notīriet šūnu lizātu, centrifugējot ultraskaņā lizētas nematodes ar 14 000 apgr./min 10 minūtes 4 ºC temperatūrā.
• Pēc tam pārnesiet supernatantu uz tīru mēģeni un sagatavojiet to imūnprecipitācijai vai citiem testiem.

Piezīme par homogenizācijas buferi: Sagatavojiet homogenizācijas buferi iepriekš aprakstītajai ultraskaņas līzes protokolam šādi:

Augstas caurlaidības C. elegans līze 96 aku plāksnēs, izmantojot UIP400MTP plākšņu ultraskaņas apstrādātāju

C. elegans līze (pieaugušas nematodes)
UIP400MTP 80% amplitūda, 20 cikli (katrs ultraskaņas apstrādes cikls: 30 sek ON, 30 sek OFF)
Līzes buferis:

• 1. opcija) 4% SDS, 0,1 M Tris/HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
• 2. opcija) ko-imūnprecipitācijai (ko-IP): 10 mM Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,5 % NP-40 (Complete proteāzes inhibitoru kokteilis)

Augstas caurlaidības DNS fragmentācija
C. elegans (pieaugušas nematodes) DNS 200-300bp: UIP400MTP plākšņu ultraskaņas apstrādātājs – iestatiet 80% amplitūdu, 30 impulsus – katrs 30 sek on, 30 sek off

UIP400MTP plākšņu ultraskaņas apstrādātājs augstas caurlaidības paraugu sagatavošanai vienmērīgi apstrādā paraugus ar ultraskaņu daudzaku, mikrotitru plāksnēs un 96 aku plāksnēs

C. elegans ultraskaņas līze kvantitatīviem afinitātes attīrīšanas testiem

C. elegans embriji (∼2 miljoni uz atkārtojumu) tika svaigi savākti bioloģiskos trīskārtējos kopijās, balinot jaunus grūtnieciskus hermafrodītus, un apstrādāti ar ultraskaņu uz ledus (cikls: 0,5 s, amplitūda: 40–45%, 5 gājieni/sesijā, 5 sesijas, intervāls starp sesijām: 30 s; UP200S ultraskaņas apstrādātājs ar mikro-zondi S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) līzes buferī (kopējais tilpums: ∼600 μl; 50 mm Tris-HCl, pH 7,4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTT, 10% glicerīns, proteāzes inhibitoru maisījums, 0,1% Nonidet P-40 Substitute). Pēc ultraskaņas apstrādes Nonidet P-40 Substitute tika pievienots līdz 1%, un lizāti tika inkubēti ar rotāciju “galva pāri astei” 4°C temperatūrā 30 minūtes, pēc tam centrifugēti ar 20 000 × g 20 minūtes 4°C temperatūrā. Notīrītais lizāts tika tad aspirēts, netraucējot augšējo lipīdu slāni, un sadalīts uz pusēm starp anti-GFP agarozes bumbiņām vai bloķētām kontroles bumbiņām (40–50 μl). Pēc rotācijas “galva pāri astei” 4°C temperatūrā 60–90 minūtes, bumbiņas tika mazgātas vienu reizi ar līzes buferi, kas satur 0,1% Nonidet P-40 Substitute, pēc tam divas reizes mazgātas vai nu buferī I (25 mm Tris-HCl, pH 7,4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2), vai buferī II (1 mm Tris-HCl, pH 7,4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2), vai abos. GFP:MBK-2 pull-down eksperimentiem tika veikti divi atsevišķi eksperimenti, izmantojot dažādus mazgāšanas nosacījumus. Olbaltumvielas tika eluētas, orbīti kratot 50 μl 6 m urīnvielas/2 M tiourīna istabas temperatūrā. MBK-1::GFP pull-down eksperimentiem olbaltumvielas tika eluētas divas reizes, kratot 50μl 8 m guanidīnija hlorīda 90°C temperatūrā, pēc tam veicot etanola nogulsnēšanu. Eluētās olbaltumvielu paraugi tika tad sagremoti šķīdumā.
(sk. Chen et al., 2016)

Tārpu ultraskaņas homogenizācija un līze

C. elegans līzes un olbaltumvielu ekstrakcijas procedūrai no katra parauga tika savākti 30 000 attiecīgā stadija nematodes, mazgātas ledussalā S-basal, koncentrētas centrifugējot pie 1500 apgr./min 2 min, sešas reizes mazgātas ledussalā S-basal, lai noņemtu atlikušās baktērijas, un pēc tam glabātas uz ledus līdz lietošanai. Olbaltumvielu ekstrakcijai grūtnieces pieaugušas tārpes ļāva izveidot blīvu nogulsnējumu pēc pēdējās S-basal mazgāšanas. Tārpu nogulsnējumus pēc tam resuspendēja 1 ml ledussalā ekstrakcijas buferšķīduma [20 mM kālija fosfāts, pH 7,4, 2 mM EDTA, 1% Triton-X-100, proteāžu inhibitori (Sigma P2714)] un nekavējoties apstrādāja.
∼30 000 grūtnieces pieaugušas tārpes (atbilst ∼100 mg svara), tika apstrādātas ar ultraskaņu uz ledus, izmantojot zondes tipa ultraskaņas homogenizatoru (piemēram, UP50H ar mikrozondu MS2) pie 40% amplitūdas 10 ciklos pa 3 sek. ieslēgts, 30 sek. izslēgts, 1 ml ledussalā ekstrakcijas buferšķīduma. (skat. Baskharan et al. 2012)

Lipīdu ultraskaņas ekstrakcija no C. elegans

Lipīdu omikā, metabolomikas nozarē, tiek raksturots un analizēts bioloģisko sistēmu lipīdu komplekts. C. elegans plaši tiek izmantots lipīdu omikā, lai pētītu metabolisko lipīdu mijiedarbību un to ietekmi uz veselību un dzīves ilgumu.
Ultraskaņas līze un ekstrakcija tiek izmantota, lai atbrīvotu lipīdus, piemēram, sfingolipīdus, no C. elegans embrijiem, kāpuriem un pieaugušām tārpiem. Apstrāde ar ultraskaņu tiek izmantota, lai sagatavotu tārpu homogenātus un pēc tam ekstrakētu lipīdus no parauga.
Protokols lipīdu ultraskaņas ekstrakcijai no C. elegans
Atkausējiet C. elegans nogulsnējumu uz ledus un resuspendējiet ar 0,5 ml ultratīra ūdens. Apstrādājiet C. elegans paraugus ar ultraskaņu 1,5 mL mēģenēs, vienlaikus nepārtraukti turētos paraugus uz ledusa.
Apstrādi ar ultraskaņu var veikt, izmantojot zondes ultraskaņas homogenizatoru, piemēram, UP200Ht, ultraskaņas paraugu sagatavošanas vienību VialTweeter (vienlaicīga 10 paraugu apstrāde ar ultraskaņu) vai UIP400MTP (daudziedobu plates, piemēram, 96 iedobu plates, apstrādei ar ultraskaņu). Ultraskaņas līzei ar UP200Ht izmantojiet mikrozondu S26d2. Iestatiet ultraskaņas cikla režīmu digitālajā izvēlnē. Iestatiet amplitūdu uz 10% un apstrādes ar ultraskaņu cikla režīmu ar 2 sek. impulsiem 20 ciklos ar 30 sek. pauzi starp katru ultraskaņas impulsu sēriju.
Pārnesiet supernatantus uz stikla mēģenēm ar vītni. Veiciet Folča ekstrakciju, pievienojot 1 ml ultratīra ūdens katrai stikla mēģenei, pēc tam pievienojot 6 ml hloroforma/metanola (attiecība = 2:1) maisījuma katrai stikla mēģenei.
Vortexējiet katru stikla mēģeni 30 sek. 4 reizes. Centrifugējiet mēģenes pie 1 258 x g 15 min (Eppendorf, 5810 R), lai uzlabotu fāzu atdalīšanos. Pārnesiet apakšējo hidrofobo frakciju uz tīru stikla mēģeni ar stikla Pastera pipeti. Nožāvējiet apakšējo hidrofobo frakciju slāpekļa plūsmā slāpekļa iztvaicētājā. Glabājiet žāvēto nogulsnējumu -80 °C saldētavā līdz lietošanai. 


Tārpu lizātu ultraskaņas sagatavošana

Tārpu lizāts: L4 stadijas tārpi tika savākti un mazgāti trīs reizes ar M9 buferšķīdumu (42,26 mM Na₂HPO₄, 22,04 mM KH₂PO₄, 85,56 mM NaCl un 0,87 mM MgSO₄) , lai noņemtu visas baktērijas. Pēc iespējas lielāka M9 bufera daudzuma noņemšanas tārpi tika resuspendēti līzes buferī: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM fosfāta β-glicerols, 0,1% (v/v) Triton X-100, 50 mM nātrija fluorīds, 1 mM nātrija ortovanadāts, 5 mM nātrija pirofosfāts, 0,2 mM fenilmetānsulfonilfluorīds un proteāzes inhibitors. Tārpi tika sasaldēti šķidrā slāpeklī un atkausēti 37°C temperatūrā trīs reizes, pēc tam tārpi tika apstrādāti ar ultraskaņu uz sausā ledus, izmantojot ultraskaņas VialTweeter ierīci 10 paraugu mēģenju vienlaicīgai sagatavošanai. Apstrāde ar ultraskaņu tika veikta ar 50% amplitūdu 10 ciklos pa 2 sek. ar 30 sek. pauzi starp ultraskaņas impulsu sērijām. Pēc tam paraugi tika centrifugēti 12 000 apgr./min. 4°C temperatūrā 15 min. Supernatants tika savākts un uzglabāts -70°C. Alikvots tika izmantots olbaltumvielu kvantificēšanai ar Bradforda testu.
Kopējā glutationa, GSH un GSSG noteikšana: Glutationa kvantificēšanai lizāti un noteikšana tika veikta tajā pašā dienā. Glikozē baroti un kontroles L4 kāpuri tika savākti un trīs reizes mazgāti ar M9 buferi. Pēc iespējas lielāka M9 bufera daudzuma noņemšanas tārpi tika resuspendēti ledussalā metapīrogļskābē (5% w/v), pēc tam tārpi tika apstrādāti ar ultraskaņu ledū, izmantojot ultraskaņas VialTweeter ar 50% amplitūdu desmit ultraskaņas apstrādes ciklos pa 2 sek. ar 30 sek. pauzi starp katru ciklu. Pēc tam tika centrifugēti 12 000 apgr./min. 4 ̊C temperatūrā 15 min.
(sk. Alcántar-Fernández et al., 2018)

C. elegans paraugu sagatavošana pirms imūnprecipitācijas un Rietumu blotēšanas

Īsumā, embriju ekstraktiem C. elegans L1 kāpuri tika audzēti liela apjoma šķidrās S-barotnes kultūrās līdz pieaugušam stadijam. Embriji tika savākti, izmantojot standarta balināšanas metodi, un suspendēti līzes buferī (50 mM Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7% glicerīns, 0,05% NP-40, 1􏰅 proteāzes inhibitoru kokteilis un 1􏰅 fosfatāzes inhibitoru kokteilis I un II), ātri sasaldēti šķidrā slāpeklī un lizēti, izmantojot ultraskaņas šūnu sagraušanu ar ultraskaņas homogenizatoru ar mikrouzgali, piemēram, UP200Ht ar S26d2 10 impulsu garumā 10 s ar 30% amplitūdu. Ja ir jā sagatavo lielāks paraugu skaits, ieteicams izmantot ultraskaņas VialTweeter vai MultiSample-Ultrasonicator UIP400MTP labu plāksnēm. Pēc apstrādes ar ultraskaņu ekstrakti tika iepriekš attīrīti, centrifugējot 30 000g 20 min 4°C temperatūrā. Iepriekš attīrītais ekstrakts (300µg kopējā olbaltumviela) tika inkubēts ar 40µ􏰂g anti-CDC-25.1 afinitātes attīrītu antivielu (šis pētījums), kas savstarpēji saistīta ar proteīnu A-agarozu, vai kā kontrole tika izmantots līdzīgs trušs imūnglobulīna (Ig)G daudzums, kas savstarpēji saistīts ar proteīnu A-agarozu, kopējā tilpumā 200µl līzes bufera, kas satur 1% NP-40, kura iekļaušana samazināja nespecifisku olbaltumvielu saistīšanos ar matricu. Paraugi tika rotēti 1 h 4°C temperatūrā, bumbiņas tika mazgātas trīs reizes ar līzes buferi un eluētas ar 30µl glicīna/HCl un 200 mM NaCl, pH 2,2. Pēc imūnprecipitācijas eluāti tika atšķaidīti 30µ􏰂l SDS paraugu bufera, uzkarsēti līdz 95°C 4 min, un parasti 3% no kopējā ievades daudzuma un 30% no eluātiem tika uzklāti uz SDS-PAGE, kam sekoja Rietumu blotēšana ar anti-CDC-25.1 (1:400), anti-LIN-23 (1:750), anti-ubikvitīna (1:1000), anti-GSK3􏰁 (1:500) vai anti-􏰁β-aktīna (1:2000) antivielām. Ja ekstrakti netika pakļauti imūnprecipitācijai, tas pats kopējais olbaltumvielu daudzums, kas iegūts no šiem ekstrakts, tika resuspendēts SDS paraugu buferī, uzkarsēts līdz 95°C un pēc tam tieši uzklāts uz SDS-PAGE un analizēts ar Rietumu blotēšanu. (sk. Segref et al. 2020)

Ultraskaņas līze ar precīzu temperatūras kontroli

Precīza un uzticama temperatūras kontrole ir būtiska, strādājot ar bioloģiskiem paraugiem. Augstas temperatūras izraisa termiski inducētu olbaltumvielu degradāciju paraugos.
Kā visas mehāniskās paraugu sagatavošanas metodes, apstrāde ar ultraskaņu rada siltumu. Tomēr paraugu temperatūru var labi kontrolēt, izmantojot VialTweeter. Mēs piedāvājam dažādas iespējas monitorēt un kontrolēt jūsu paraugu temperatūru, sagatavojot tos analīzei ar VialTweeter un VialPress.

1. Parauga temperatūras monitorings: Ultraskaņas procesors UP200St, kas darbina VialTweeter, ir aprīkots ar inteliģentu programmatūru un pievienojamu temperatūras sensoru. Pievienojiet temperatūras sensoru UP200St un ievietojiet temperatūras sensora galu vienā no paraugu mēģenēm. Ar digitālo krāsu skārienekrānu varat iestatīt UP200St izvēlnē konkrētu temperatūras diapazonu jūsu parauga apstrādei ar ultraskaņu. Ultraskaņas iekārta automātiski apstāsies, kad būs sasniegta maksimālā temperatūra, un pauzēs, līdz parauga temperatūra nokritīsies līdz iestatītās temperatūras ∆ apakšējai vērtībai. Tad apstrāde ar ultraskaņu automātiski sāksies no jauna. Šī gudrā funkcija novērš karstuma izraisītu degradāciju.
2. VialTweeter bloku var iepriekš atdzesēt. Ievietojiet VialTweeter bloku (tikai sonotrodi bez pārvērtēja!) ledusskapī vai saldētavā, lai iepriekšējā dzesēšana palīdzētu aizkavēt temperatūras paaugstināšanos paraugā. Ja iespējams, arī pašu paraugu var iepriekšējā atdzesēt.
3. Izmantojiet sauso ledu, lai dzesētu apstrādes ar ultraskaņu laikā. Izmantojiet plakanu trauku, kas piepildīts ar sauso ledu, un novietojiet VialTweeter uz sausā ledus, lai siltums varētu ātri izkliedēties.

Atrodiet optimālo ultraskaņas šūnu sagraušas iekārtu savai līzes lietojumprogrammai

Hielscher Ultrasonics ir ilggadējs pieredzējis augstas veiktspējas ultraskaņas šūnu sagraušas iekārtu un homogenizatoru ražotājs laboratorijām, galda un rūpnieciskā mēroga sistēmām. Jūsu baktēriju šūnu kultūras izmērs, jūsu pētniecības vai ražošanas mērķis un šūnu tilpums, kas jāapstrādā stundā vai dienā, ir būtiski faktori, lai atrastu pareizo ultraskaņas šūnu sagraušas iekārtu jūsu lietojumprogrammai.
Hielscher Ultrasonics piedāvā dažādus risinājumus vairāku paraugu (līdz 10 flakoniem) vienlaicīgai apstrādei ar ultraskaņu, kā arī masu paraugiem (t.i., mikrotitru plāksnēm / 96 aku plāksnēm), klasisko zondes tipa laboratorijas ultraskaņas iekārtu ar dažādiem jaudas līmeņiem no 50 līdz 400 vatiem līdz pilnībā rūpnieciskiem ultraskaņas procesoriem ar līdz pat 16 000 vatiem vienā iekārtā komerciālai šūnu sagraušai un olbaltumvielu ekstrakcijai lielā ražošanā. Visas Hielscher ultraskaņas iekārtas ir izstrādātas 24/7/365 darbībai ar pilnu slodzi. Izturība un uzticamība ir mūsu ultraskaņas iekārtu pamatīpašības.
Visi digitālie ultraskaņas homogenizatori ir aprīkoti ar inteliģentu programmatūru, krāsu skārienekrānu un automātisku datu protokolēšanu, kas padara ultraskaņas iekārtu par ērtu darba rīku laboratorijās un ražošanas iekārtās.
Paziņojiet mums, kāda veida šūnas, kādu tilpumu, ar kādu frekvenci un ar kādu mērķi jums ir jāapstrādā jūsu bioloģiskie paraugi. Mēs ieteiksim jums vispiemērotāko ultraskaņas šūnu sagraušas iekārtu jūsu procesa prasībām.

Tālāk redzamā tabula sniedz priekšstatu par mūsu ultraskaņas sistēmu aptuveno apstrādes jaudu no kompaktiem rokas homogenizatoriem un MultiSample ultraskaņas iekārtām līdz rūpnieciskiem ultraskaņas procesoriem komerciāliem lietojumiem: