FFPE-Prouwevirbereedung mat héijem Prouwenduerchsaz: Proteinextraktioun a Schéierfragmentéierung vun Nukleinsaieren
Mam Ultraschallapparat UIP400MTP fir héije Prouwenduerchsaz geet Hielscher Ultrasonics d’Erausfuerderunge bei der Virbereedung vu formalinfixéiertem a paraffinagebettem (FFPE) Geweebe un. Entdeckt, wéi mat Ultraschall grouss Zuele vu FFPE-Prouwe fir d’Entparaffinéierung, d’Geweebelys, d’Homogeniséierung, d’Proteinextraktioun an d’Schéierfragmentéierung vun DNA/RNA verschafft ginn! Profitéiert vun der Virbereedung vu FFPE-Geweebe mat Ultraschall – fir grouss Zuele vu Prouwen a Multiwell-Placken ze verschaffen! Kritt héichwäerteg Prouwen an héich Prouwenzuele fir zouverlässeg Fuerschungsresultater! A spuert zu gudder Lescht Zäit a Suen!
Méi einfach FFPE-Prouwevirbereedung duerch Ultraschallbehandlung mat héijem Prouwenduerchsaz
D’Formalinfixatioun an d’Abettung a Paraffin (FFPE) ass déi heefegst Method fir zolidd Geweeben ze konservéieren an ze archivéieren. D’Extraktioun vu Biomoleküllen aus FFPE-Geweebeprouwe stellt wéinst der Qualitéit vun de gelagerte Prouwen dacks bedeitend Erausfuerderungen duer. Dës Prouwen, déi fir d’Molekularbiologie an d’klinesch Fuerschung vun onschätzbarem Wäert sinn, bidden eng räich Quell u biologeschen Informatioune fir retrospektiv Studien an d’Validéierung vun diagnostesche Biomarker. Obwuel d’Formalinfixatioun an d’Abettung a Paraffin d’Architektur an d’Morphologie vum Geweebe erhalen, erschwéiert dëse Prozess d’Extraktioun vun héichwäertegen Nukleinsaieren a Proteinnen. Formalin bewierkt d’Quervernetzung vun Nukleinsaieren a Proteinnen, wat zu molekularer Fragmentéierung a cheemesche Modifikatioune féiert. Entdeckt, wéi den Ultraschallapparat UIP400MTP fir héije Prouwenduerchsaz d’Erausfuerderunge vun der FFPE-Prouwevirbereedung iwwerwënnt!
Ultraschallapparat fir eng effizient FFPE-Prouwevirbereedung
- Einfachen Aarbechtsoflaf: Vereinfacht Prozesser, déi benotzerfrëndlech sinn.
- Entparaffinéierung, Proteinextraktioun, Schéierfragmentéierung vun DNA / RNA
- Séier Veraarbechtung mat héijem Prouwenduerchsaz: Effizient Handhabung vu Multiwell-Placken.
- Effektiv Entparaffinéierung: Verbessert Solubiliséierung vu Proteinnen.
- Net gëfteg Léisungsmëttel: Vermeit den Asaz vu schiedlechen organesche Léisungsmëttele wéi Xylol.
UIP400MTP Ultraschallapparat fir héije Prouwenduerchsaz fir d’Veraarbechtung vu FFPE-Prouwe mat héijem Prouwenduerchsaz a Multiwell-Placken
Fortschrëtter bei den Technike fir d’Proteinextraktioun aus FFPE-Geweebe
Hielscher Ultrasonics geet d’Erausfuerderunge bei der FFPE-Prouwevirbereedung mat héijem Prouwenduerchsaz un. D’Ultraschallbehandlung benotzt Ultraschallwellen, fir mechanesch Schwéngungen a fokusséiert Kavitatioun ze generéieren, déi zellulär Strukturen effektiv opbriechen an d’Solubiliséierung vu Biomoleküllen verbesseren. Dës Technik ass ëmmer méi beléift, well si d’Effizienz an d’Ausbeut bei der Extraktioun vun Nukleinsaieren a Proteinnen aus FFPE-Geweeben erhéije kann an och d’Schéierfragmentéierung vun DNA an RNA fir d’Virbereedung vu Sequenzéierungsbibliothéiken erméiglecht. Et ass ganz wichteg ze betounen, datt d’Ultraschallbehandlung mam UIP400MTP Ultraschallapparat fir Multiwell-Placken d’Integritéit vun dëse Biomoleküllen fir uschléissend Uwendungen erhält.
Schéierfragmentéierung vun Nukleinsaieren duerch Ultraschallbehandlung mat héijem Prouwenduerchsaz
Den Ultraschallapparat UIP400MTP fir Multiwell-Placken, dee fir Uwendunge mat héijem Proufduerchsaz agesat gëtt, bréngt d’Virbereedung vu FFPE-Prouwen op en neien Niveau. Dës Method fir d’Beschallung vu Multiwell-Placke mat Ultraschall bitt eng effizient an zouverlässeg Léisung fir déi gläichzäiteg Veraarbechtung vu verschiddene Prouwen. Si erméiglecht eng séier a reproduzéierbar Extraktioun vun DNA, RNA a Proteinnen, déi fir verschidden analytesch Techniken entscheedend sinn, dorënner d’Sequenzéierung vun der nächster Generatioun (NGS), quantitativ PCR a proteomesch Analysen. D’Optimiséierung vun de Beschallungsparameteren, wéi Amplitud, Dauer an Temperatur, verbessert d’Qualitéit an d’Quantitéit vun den extrahéierte Biomoleküllen nach weider.
Den Ultraschallapparat UIP400MTP fir Multiwell-Placke bitt bedeitend Virdeeler fir d’Fragmentéierung an d’Schéierfragmentéierung vun DNA an RNA aus FFPE-Geweebe. Eng vun de besonneschen Eegenschafte vun dësem System ass seng Fäegkeet, enk begrenzte Fragmentgréisste vun DNA an RNA ze erreechen. Dobäi léisst sech d’Ultraschallintensitéit präzis astellen, fir kuerz Fragmenter vun 150–200 Basepueren (bp) oder méi laang Fragmenter vun 15–20 Kilobasepueren (kbp) ze kréien. Dës Villsäitegkeet mécht den UIP400MTP onverzichtbar fir Sequenzéierungsuwendunge mat kuerzen a mat laange Liessequenzen a garantéiert héichwäerteg Resultater fir d’Sequenzéierung vun der nächster Generatioun (NGS) an d’Sequenzéierung vum ganze Genom (WGS). Seng präzis Kontroll vun der Fragmentgréisst ass fir Fuerscher an alle Beräicher vun der Genomik entscheedend, well si et erlaabt, Prouwen no de Spezifikatioune virzebereeden.
Kontaktéiert eis fir fortgeschratt Léisunge fir FFPE-Geweebe
Entdeckt den Ultraschallapparat UIP400MTP fir Multiwell-Placke fir eng effizient Gewënnung vu Biomoleküllen aus FFPE-Prouwen, bei där d’Integritéit vun den extrahéierten Nukleinsaieren a Proteinnen erhale bleift an d’Reproduzéierbarkeet vun de Resultater garantéiert gëtt. Dës Technologie léisst sech nahtlos an aner preparativ an analytesch Aarbechtsofleef integréieren a vereinfacht a verbessert molekular Ënnersichunge mat FFPE-Geweebearchiven.
Fixéierungsmëttel an hir Wierkungen
D’Fixéierung ass en entscheedende Schrëtt bei der Proufvirbereedung, deen zellulär Strukturen erhält, biocheemesch Reaktioune stoppt an den Ofbau verhënnert. Jee no de spezifeschen experimentellen Ufuerderunge gi verschidde Fixéierungsmëttel agesat. Déi zwee heefegst Fixéierungsmëttel si Formaldehyd a Paraformaldehyd, déi Proteinnen an Nukleinsaieren ënnerenee vernetzen an domat d’Morphologie an d’Antigenizitéit vun Zellen a Geweeben erhalen. Aner Fixéierungsmëttel, wéi Ethanol, Methanol a Glutaraldehyd, gi fir spezifesch Uwendungen agesat.
Fixéierungsmëttel op Basis vu Formaldehyd a Paraformaldehyd bilde Methylenbrécken tëscht Aminogruppen, wat zu enger Vernetzung vu Proteinne féiert. Dëse Prozess immobiliséiert zellulär Bestanddeeler effektiv an erhält hir Integritéit wärend den uschléissenden Analyseschrëtt. D’Wierkunge vun dëse Fixéierungsmëttel kënne vu Facteure wéi Konzentratioun, pH an Temperatur beaflosst ginn, an d’Optimiséierung vun dëse Parameteren ass entscheedend, fir eng optimal Erhalung vun den zelluläre Strukturen ze garantéieren.
Virdeeler vun der FFPE-Virbereedung mat Ultraschall
D’Ultraschallbehandlung ass eng leeschtungsstaark Technik fir den Opschloss vu fixéierten Zellen a Geweeben, déi konventionell Techniken iwwertrëfft. Si bitt verschidde bemierkenswäert Virdeeler géintiwwer traditionelle Lysismethoden:
- Vitess an Effizienz: D’Ultraschalllys erméiglecht e séieren Opschloss vun Zellen a Geweeben a reduzéiert d’Veraarbechtungszäit däitlech am Verglach mat mechaneschen oder cheemesche Lysismethoden. Héichfrequent Schallwellen, déi vun der Ultraschallsond produzéiert ginn, erzeuge mechanesch Schéierkräften, déi déi fixéiert zellulär Strukturen opbriechen. Dëse séieren an effizienten Opschloss erméiglecht et de Fuerscher, grouss Proufvolumë bannent kuerzer Zäit ze verschaffen.
- Schounend an astellbar: D’Ultraschalllys bitt e schounenden Opschlossmechanismus, dee Schied u sensibele Biomoleküllen, wéi Proteinnen, Nukleinsaieren an Enzymen, miniméiert. Am Géigesaz zu mechanesche Methoden, déi iwwerméisseg Hëtzt oder Schéierkräften erzeugen, benotzt d’Ultraschalllys kontrolléiert Kavitatioun, fir Zellen opzeschléissen a gläichzäiteg d’Integritéit an d’Funktionalitéit vun den intrazelluläre Bestanddeeler ze erhalen.
- Villsäitegkeet: D’Ultraschalllys kann a Verbindung mat verschiddene Fixéiermëttelen agesat ginn, wat de Fuerscher erlaabt, mat enger breeder Palett vu fixéierte Prouwen ze schaffen. Egal ob Formaldehyd, Paraformaldehyd oder alternativ Fixéiermëttele benotzt ginn, liwwert d’Ultraschalllys konsequent en effizienten Opbroch a garantéiert domat eng optimal Réckgewënnung vun zelluläre Bestanddeeler.
- Héich Ausbeut a Qualitéit: D’Ultraschalllys erméiglecht héich Ausbeuten un intakten zelluläre Bestanddeeler, well si fixéiert Zellen a Gewëss gläichméisseg opbrieche kann. Doduerch kënne nogelagert Uwendungen, wéi d’Proteinnanalys, d’Nukleinsaierextraktioun an enzymatesch Tester, zouverlässeg a reproduzéierbar Resultater liwweren.
- Kompatibilitéit mat der Automatiséierung: D’Ultraschalllys kann einfach an automatiséiert Systemer integréiert ginn, wat d’Veraarbechtung vu Prouwe mat héijem Duerchsaz erméiglecht. Dës Kompatibilitéit erlaabt de Fuerscher, hiren Aarbechtsoflaf ze vereinfachen an d’Produktivitéit ze steigeren, besonnesch bei grouss ugeluechte Studien.
Ultraschallapparat UIP400MTP fir Placke mat 96 Vertéiwungen fir d’Ultraschallbehandlung vu Mikrotiterplacken a Placke mat méi Vertéiwungen
D’Ultraschalllys huet den Opbroch vu fixéierten Zellen a Gewëss revolutionéiert a bitt vill Virdeeler géintiwwer traditionelle Lysmethoden. Hir Vitess, Effizienz, Selektivitéit, Villsäitegkeet, héich Ausbeut a Kompatibilitéit mat der Automatiséierung maachen si zu engem onverzichtbaren Instrument an der molekularbiologescher a biotechnologescher Fuerschung. Mat kontaktlosen Ultraschallapparater souwéi Ultraschallapparater mat Sond bitt Hielscher Ultrasonics dee passendsten Ultraschallhomogenisator fir Är Uwendung an de Liewenswëssenschaften. Egal ob Dir eenzel Prouwen, méi Prouwen oder ganz héich Proufzuele gläichzäiteg veraarbechte wëllt, mir bidden Iech dee beschten Ultraschallapparat, deen Äre Fuerschungs- an Diagnostikufuerderungen entsprécht.
Liest méi iwwer Hielscher seng kontaktlos Ultraschallapparater fir d’Virbereedung vu méi Prouwen a vu Prouwe mat héijem Duerchsaz!
- eemoleg Investitioun
- benotzt Äert eegent Verbrauchsmaterial
- keng widderkéierend Käschte fir proprietären Accessoiren a Verbrauchsmaterial
- héijen Duerchsaz
- präzis Steierung
- Technologie um neiste Stand
- Zouverlässegkeet & Robustheet
- astellbar, präzis Prozesssteierung
- Industriequalitéit: kann kontinuéierlech 24/7 bedriwwe ginn
- einfach a sécher ze bedéngen
- wéineg Ënnerhalt
Liest méi iwwer d’Uwendunge vun Ultraschallapparater an de Liewenswëssenschaften!
Placken-Ultraschallapparat UIP400MTP fir all Placke mat 96 Vertéiwungen, Mikrotiterplacken a Placke mat méi Vertéiwungen.
Design, Fabrikatioun a Berodung – Qualitéit aus Däitschland
Hielscher Ultraschallapparater si fir hir héchst Qualitéits- an Designstandarde bekannt. Robustheet an einfach Bedéngung erméiglechen eng reiwungslos Integratioun vun eisen Ultraschallapparater an industriell Anlagen. Hielscher Ultraschallapparater meeschteren haart Konditiounen an usprochsvoll Ëmfelder ouni Schwieregkeeten.
Hielscher Ultrasonics ass en ISO-zertifiéiert Betrib a leet besonnesche Wäert op leeschtungsstaark Ultraschallapparater mat Technologie um neiste Stand a Benotzerfrëndlechkeet. Selbstverständlech sinn Hielscher Ultraschallapparater CE-konform an erfëllen d’Ufuerderunge vun UL, CSA a RoHs.
Kontaktéiert eis! / Frot eis!
UIP400MTP Ultraschallapparat: FFPE-Proufvirbereedung mat héijem Duerchsaz an enger Plack mat méi Vertéiwungen
Heefeg gestallte Froen
Hei drënner beäntwere mir heefeg gestallte Froen, déi fir d’Virbereedung vu FFPE-Gewëss an d’Ultraschallbehandlung vu FFPE-Prouwe relevant sinn.
Wéi gëtt FFPE-Gewëss virbereet?
Schrëtt fir d’Virbereedung vu FFPE-Geweebe: Déi suergfälteg Handhabung a Veraarbechtung vu frëschem Geweebe sinn entscheedend fir qualitativ héichwäerteg FFPE-Prouwen ze kréien. D’Erhale vun der zellulärer Architektur, den Nukleinsaieren an de Proteinnen ass wesentlech fir eng präzis uschléissend Analys. All Schrëtt – vun der Entnam bis zur Abettung – erfuerdert Präzisioun, fir d’Integritéit vun der Prouf fir verschidden Analysen ze erhalen, dorënner histologesch Ënnersichungen, Immunhistochemie a molekular Studien. Wann dëse Fixatiouns- an Abettungsprozess richteg duerchgefouert gëtt, garantéiert en, datt dat konservéiert Geweebe den In-vivo-Zoustand präzis erëmspigelt, wat zouverlässeg Resultater an der Diagnostik an an der Fuerschung erméiglecht.
Mir féieren Iech duerch déi 6 Haaptschrëtt vum Abettungsprozess vu FFPE-Geweebeprouwen.
- Geweebeentnam
Souwuel Biopsië vu liewege Mamendéieren ewéi och Geweebekulture si gëeegent Quelle fir frëscht Geweebe fir d’Virbereedung vu FFPE-Prouwen ze gewannen.
Et ass wichteg, eng aseptesch Technik unzewenden: Benotzt steril Instrumenter an Händschen, fir Kontaminatiounen ze vermeiden. Ent huelt d’Geweebe am Idealfall an engem sterillen Ëmfeld, zum Beispill an engem Operatiounssall oder ënner enger Laminarstréimungshaub.
Well d’Prouf ganz fragil ass, ass eng virsiichteg Handhabung wesentlech: Reduzéiert Verspéidunge bei der Veraarbechtung op e Minimum a fänkt direkt no der Exzisioun mat der uschléissender Geweebeveraarbechtung un. Dëst ass entscheedend, fir Autolys an Ofbau ze verhënneren. Halt d’Geweebe bei Raumtemperatur; vermeit d’Afréieren, well et d’Bildung vun Äiskristaller a Geweebeschied verursaache kann. - Geweebefixatioun
Als Éischt gëtt d’Geweebe mat enger Fixatiounsléisung behandelt: Benotzt 10% neutral gepuffert Formalin (NBF), wat 4% Formaldehyd am Waasser entsprécht, op en neutrale pH gepuffert.
Taucht d’Geweebe vollstänneg a Formalin an. Suergt fir e Volumeverhältnis vu Fixatiounsmëttel zu Geweebe vun op d’mannst 10:1. D’Fixatiounszäit läit typescherweis tëscht 6 a 24 Stonnen, ofhängeg vun der Geweebenaart an der Gréisst. Et ass wichteg, datt d’Fixatiounsmëttel d’Geweebe grëndlech duerchdrénge kann. Eng ze staark Fixatioun kann awer zu Quervernetzunge féieren, déi d’Antigen-Demaskéierung erschwéieren, wärend eng net ausräichend Fixatioun zu enger schlechter Geweebekonservéierung féiere kann. - Zouschneide vum Geweebe
Als Zweet schneit Dir d’Geweebe op eng Déckt vun ongeféier 3–5 mm zou, fir datt d’Fixatiounsmëttel et ausräichend duerchdrénge kann. Suergt fir déi richteg Orientéierung vum Geweebe, fir relevant histologesch Strukturen ze erfaassen. Dëst erliichtert den Extraktiounsprozess, wann d’Geweebe spéider fir d’Analys benotzt gëtt. - Veraarbechtung vun der fixéierter Prouf
Elo muss dat fixéiert Geweebe dehydréiert ginn: No der Fixatioun muss d’Geweebe dehydréiert ginn, fir sécherzestellen, datt de Paraffinwuess et grëndlech duerchdrénge kann. Féiert d’Geweebe duerch eng ofgestuuft Ethanolserie (70%, 80%, 90% an 100%), fir Waasser ze entfernen.
Kläre mat Xylol: Paraffinwuess ass net am Waasser léislech, awer am Xylol. Dofir muss d’Waasser am Geweebe duerch Xylol ersat ginn. Xylol selwer ass awer net am Waasser léislech, mee am Alkohol, soudatt en Tëscheschrëtt néideg ass, bei deem d’Waasser fir d’éischt duerch Alkohol ersat gëtt. Taucht d’Geweebe a Xylol oder an e Xylolersatz an, fir Ethanol ze entfernen an d’Geweebe op d’Paraffininfiltratioun virzebereeden.
Infiltratioun mat Paraffin: Bett d’Geweebe a geschmoltene Paraffinwuess an a suergt fir eng vollstänneg Infiltratioun. Bei dësem Schrëtt gëtt de Paraffin typescherweis e puer Mol gewiesselt, fir eng grëndlech Duerchdrénkung ze garantéieren. - Abette vum Geweebe
An dësem Schrëtt gëtt d’Geweebe zu engem Geweebeblock geformt: Leet d’Geweebe an der gewënschter Orientéierung an eng Form a schëtt geschmoltene Paraffin driwwer. Loosst de Paraffin duerch Ofkillen bei Raumtemperatur oder op enger kaler Plack fest ginn. - Schneiden a Montéieren
Mikrotomie: Fir dat agebettent Geweebe ze schneiden, benotzt Dir e Mikrotom, fir dënn Schnëtter (typesch 4–5 Mikrometer) aus dem Paraffinblock ze schneiden. Duerno gëtt d’Prouf montéiert, andeems d’Schnëtter op Glasobjektträger geluecht ginn, fir se uschléissend ze fierwen a mikroskopesch ze analyséieren.
Kontrolléiert zum Schluss d’Qualitéit vun der Histologie: Bewäert déi éischt Schnëtter ënner engem Mikroskop, fir eng korrekt Fixatioun a Veraarbechtung sécherzestellen. Passt d’Protokoller jee no Bedarf un d’Geweebenaart an déi observéiert Qualitéit un.
FFPE-Geweebe kënne benotzt ginn, fir RNA, DNA a Proteinnen ze gewannen an Unzeeche vu Kriibs oder anere Krankheeten z’entdecken. Si kënne jorelaang gelagert ginn a sinn e wesentleche Bestanddeel dovun, wéi Fuerscher an Dokteren Geweebeprouwe fir Diagnostik a Fuerschung notzen.
Wat sinn heefeg Problemer an Erausfuerderunge bei FFPE-Geweebe?
Geweebeprouwen, déi mat Formalin fixéiert an a Paraffin agebett sinn (FFPE), gi vill an der Fuerschung an an der Diagnostik benotzt, bréngen awer verschidden Erausfuerderungen an heefeg Problemer mat sech:
- Ofbau vu Biomoleküllen: Eng laang Fixéierung kann zum Ofbau vun DNA, RNA a Proteinne féieren, wat d’Extraktioun vu qualitativ héichwäertegen Nukleinsaieren oder Proteinne fir uschléissend Uwendunge erschwéiert. Eng korrekt Fixéierung (déi eng Ënner- an Iwwerfixéierung vermeit) ass fir d’Erhale vum Geweebe essenziell.
- Antigenmaskéierung: De Fixéierungsprozess kann antigen Plaze maskéieren an domat d’Effektivitéit vun der Antikierperbindung an der Immunhistochemie an aneren immunologeschen Assaye reduzéieren. Dëst erfuerdert dacks eng Antigen-Demaskéierung, e Verfaren, bei deem d’Maskéierung vun engem Epitop réckgängeg gemaach an d’Bindung tëscht Epitop an Antikierper erëmhiergestallt gëtt. Allerdéngs kann déi voll Antigenizitéit net ëmmer erëmhiergestallt ginn.
- Variabel Fixéierungsqualitéit: Ënnerscheeder bei de Fixéierungszäiten a -bedéngunge kënnen zu enger ongläichméisseger Prouwequalitéit féieren, wat d’Reproduzéierbarkeet an d’Vergläichbarkeet vun de Resultater beaflosst. Benotzt zouverlässeg Fixéierungsprotokoller a vermeit eng Ënner- an Iwwerfixéierung.
- DNA-Schied a Fragmentéierung: D’Fixéierung vu FFPE-Prouwe mat Formalin ka verschidden Aarte vun DNA-Schied verursaachen, dorënner d’Deaminéierung vu Cytosin (Mutatioune vu C zu T), oxidativ Schied (z. B. 8-oxo-Guanin, dat zu Mutatioune vu G zu T féiert), souwéi physesch Schied wéi Eenzelstrangbréch, Lücken a Plazen ouni Bas, déi d’Aktivitéit vun der DNA-Polymerase behënneren. De Prozess vun der Formalinfixéierung kann eng Fragmentéierung vun der DNA verursaachen, wat genetesch a genomesch Analyse wéi PCR a Sequenzéierung erschwéiert.
- RNA-Qualitéit: RNA, déi aus FFPE-Geweeben extrahéiert gëtt, ass dacks fragmentéiert a cheemesch modifizéiert, wat d’Duerchféierung vu qualitativ héichwäertegen transkriptomeschen Analysen erschwéiert.
- Proteinmodifikatiounen: Formalin kann cheemesch Modifikatiounen a Proteinnen ausléisen, déi hir Struktur a Funktioun beaflossen, wat proteomesch Analyse stéiere kann.
- Artefakte bei der Prouweveraarbechtung: Beim Abetten a Schneide kënne mechanesch Belaaschtung an Hëtzt Artefakte verursaachen an d’Geweebe weider beschiedegen.
- Variabilitéit tëscht Chargen: Ënnerscheeder an de Fixéierungs- an Abettungsprotokoller tëscht verschiddene Chargë kënnen zu enger bedeitender Variabilitéit vun de Resultater féieren, wat Vergläicher tëscht Studien erschwéiert.
- Problemer bei der Lagerung: D’Laangzäitlagerung vu FFPE-Bléck ka mat der Zäit zu weiderem Ofbau an zum Verloscht vun der Integritéit vun den Nukleinsaieren féieren, wat d’Benotzbarkeet vun archivéierte Prouwe fir retrospektiv Studie beaflosst.
Quervernetzung: D’Fixéierung mat Formalin verursaacht eng Quervernetzung vu Proteinnen an Nukleinsaieren, déi molekular Analysen erschwéiere kann an d’Genauegkeet vun der Immunhistochemie an aneren Assaye beaflosse kann.
D’Benotze vun optiméierte Protokoller, de virsiichtegen Ëmgang mat Prouwen an d’Uwendung vu fortgeschrattenen Techniken hëllefen, d’Qualitéit an d’Zouverlässegkeet vun den Donnéeën ze verbesseren, déi aus FFPE-Geweebe gewonne ginn.
Wat ass den Ënnerscheed tëscht FFPE-Geweebe a gefruerem Geweebe?
FFPE-Geweebe (mat Formalin fixéiert an a Paraffin agebett) gëtt konservéiert, andeems et mat Formalin fixéiert an duerno a Paraffinwuess agebett gëtt. Dëst erméiglecht eng Laangzäitlagerung bei Raumtemperatur, wärend d’Geweebemorphologie erhale bleift. Am Géigesaz dozou gëtt gefruerent Geweebe séier duerch Afréiere konservéiert, wat d’Integritéit vun den Nukleinsaieren a Proteinne besser erhält, awer eng Lagerung bei ganz niddregen Temperaturen erfuerdert.
Wéi eng Chemikalie gi fir d’FFPE-Abettung benotzt?
D’Chemikalien, déi fir d’FFPE-Abettung benotzt ginn, ëmfaassen normalerweis Formalin fir d’Fixéierung a Paraffinwues fir d’Abettung. Fir d’FFPE-Abettung gi Geweber typescherweis entweder mat 10% (v/v) neutral gepuffertem Formalin (FA) oder mat enger frësch preparéierter 4% (w/v) Formaldehydléisung (PFA) aus Paraformaldehydpolver fixéiert. Formalin, eng Léisung vu Formaldehyd am Waasser, gëtt op en neutrale pH gepuffert, fir d’Gewebemorphologie ze erhalen an eng iwwerméisseg Quervernetzung ze verhënneren. D’Léisung op Basis vu Paraformaldehyd suergt och fir eng effektiv Fixéierung, andeems si Proteinne quervernetzt an doduerch d’Gewebestruktur fir déi uschléissend Abettung a Paraffinwues stabiliséiert. Dës Chemikalie si wesentlech, fir d’Integritéit an d’Morphologie vum Gewebe wärend dem Fixéierungs- an Abettungsprozess ze erhalen.
Wéi gëtt de Paraffin aus FFPE-Prouwen ewechgeholl?
Fir Paraffin aus FFPE-Prouwen ewechzehuelen, ginn d’Gewebeschnëtter typescherweis enger Rei vu Wäschschrëtt mat Xylol ënnerzunn, gefollegt vun enger Rehydratioun duerch eng ofgestuuft Rei vun Alkoholen a schliisslech Waasser. Well Xylol héichgëfteg ass a Gesondheetsrisike wéi Otemproblemer, Hautreizungen a méiglech laangfristeg Auswierkunge bei widderhuelter Expositioun mat sech bréngt, entwéckelt sech d’Paraffinentfernung mat Ultraschall a ville Laboratoiren zu enger villverspriechender Alternativ. Dës Method benotzt intensiv Ultraschallwellen, fir Paraffin effizient a sécher ewechzehuelen, ouni datt gëfteg Léisungsmëttel wéi Xylol néideg sinn. Doduerch gëtt de Risiko fir d’Laborpersonal reduzéiert an e méi séchert Aarbechtsëmfeld geschaf.
Wéi laang soll ech meng Geweber fixéieren, fir eng gutt Qualitéit vun de FFPE-Prouwen ze kréien?
Allgemeng Recommandatioune fir d’Fixéierungsdauer gesinn typescherweis vir, Gewebeprouwen 24 bis 48 Stonnen a Formalin ze fixéieren. Dës Dauer geet am Allgemengen duer, fir d’Gewebemorphologie an d’zellulär Strukturen ze erhalen a gläichzäiteg eng Iwwerfixéierung ze miniméieren, déi zu iwwerméisseger Quervernetzung an zum Ofbau vun Nukleinsaieren a Proteinne féiere kann. Déi optimal Fixéierungszäit kann awer jee no Gréisst an Aart vum Gewebe variéieren, woubäi méi kleng oder méi empfindlech Prouwe méi kuerz Fixéierungszäite brauchen. Et ass entscheedend, eng adequat Fixéierung ze garantéieren, fir d’Autolys an den Ofbau vum Gewebe ze verhënneren, a gläichzäiteg eng ze laang Fixéierung ze vermeiden, déi uschléissend molekular Analyse erschwéiere kéint.