სტაფილოკოკის ბიოფილმის კულტივაციისა და გამოყოფის პროტოკოლი

სტანდარტიზებული მეთოდები აუცილებელია საიმედო კვლევის შედეგებისთვის. აქ შეგიძლიათ იპოვოთ სტაფილოკოკური ბიოფილმების კულტივირებისა და გამოყოფის პროტოკოლი. ეს პროტოკოლი ფოკუსირებულია მაღალი გამტარუნარიანობის ნიმუშის გამარტივებულ მომზადებაზე UIP400MTP მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტის სონიკატორის გამოყენებით ეფექტური, მაღალი გამტარუნარიანობის ბიოფილმის გამოყოფისთვის 96 ჭაბურღილიან ფირფიტებში. პროტოკოლი ასევე შეიცავს საკვანძო ნაბიჯებს ბიოფილმის კულტივაციის, რეცხვისა და ვიზუალიზაციისთვის, აქცენტი ცვალებადობის მინიმიზაციაზე და რეპროდუქციულობის უზრუნველყოფაზე.

Staphylococcus Biofilm და ანტიბიოტიკების კვლევა

სტაფილოკოკის ბიოფილმები მნიშვნელოვან როლს ასრულებენ მდგრად ინფექციებში, ანტიბიოტიკებისადმი მათი გამძლეობისა და იმუნური რეაქციების გამო. ბიოფილმის ფორმირება უზრუნველყოფს დამცავ გარემოს ბაქტერიებისთვის, რაც ართულებს ინფექციების მკურნალობას. ბიოფილმების კვლევა ხშირად ფოკუსირებულია მათი ფორმირების, ქცევისა და ანტიმიკრობული ნივთიერებებისადმი მგრძნობელობის გაგებაზე, აქცენტი კეთდება მაღალი გამტარუნარიანობის მეთოდებზე ექსპერიმენტული სამუშაოების გამარტივებისთვის.
UIP400MTP მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტის სონიკატორი გთავაზობთ მნიშვნელოვან უპირატესობას ბიოფილმის კვლევაში, რაც საშუალებას აძლევს ბიოფილმების სწრაფ და ეფექტურ გამოყოფას 96 ჭაბურღილის ფირფიტებიდან. ეს მოწყობილობა უზრუნველყოფს ერთგვაროვან ულტრაბგერითი ენერგიას ყველა ჭას, უზრუნველყოფს თანმიმდევრულ შედეგებს და ამცირებს ცვალებადობას.

სტაფილოკოკის ბიოფილმის კულტივაციისა და გამოყოფის პროტოკოლი

ქვემოთ, ჩვენ გასწავლით ნაბიჯ-ნაბიჯ ინსტრუქციას სტაფილოკოკის ბიოფილმის კულტივირებისა და გამოყოფის პროცესის შესახებ. როგორც სამაგალითო ანალიტიკური ნაბიჯი, ჩვენ გაჩვენებთ, თუ როგორ გამოვთვალოთ სპექტროფოტომეტრიულად კულტივირებული ბიომასის კრისტალური იისფერი შეღებვით.

სტაფილოკოკის ბიოფილმის კულტივაცია

საჭირო მასალები:

• სტერილური ბრტყელძირიანი 96 ჭაბურღილის პოლისტიროლის ქსოვილის კულტურის დამუშავებული მიკროტიტრული ფირფიტები ხუფებით
• ტრიპტიკური სოიოს ბულიონი (TSB) 0.25% გლუკოზით
• ბიოლოგიური უსაფრთხოების კაბინეტი

ნაბიჯები:

1. მოამზადეთ სტერილური სამუშაო გარემო ბიოლოგიური უსაფრთხოების კაბინეტში დაბინძურების შესამცირებლად.
2. დაამატეთ TSB, რომელიც შეიცავს 0,25% გლუკოზას მიკროტიტრული ფირფიტის ჭაბურღილებში. TSB გლუკოზის გარეშე ზოგადად არ უწყობს ხელს ბიოფილმის ფორმირებას და უნდა იქნას გამოყენებული მხოლოდ როგორც კონტროლი საჭიროების შემთხვევაში.
3. ჩაყარეთ ჭაბურღილები ბაქტერიული შტამებით, რომლებიც მომზადებულია ქვემოთ აღწერილი წესით:
4. მოამზადეთ ბაქტერიული სუსპენზიები, დარწმუნდით, რომ არ არსებობს წინასწარ არსებული უჯრედების გროვები სუსპენზიების ჰომოგენიზაციის გზით სონიკაციის გამოყენებით ან მტევნის დაშლის გზით 23 მეტრიანი ნემსით და ხანმოკლე მორევით.
5. დახურეთ ფირფიტა სახურავით და ინკუბაცია მოახდინეთ ბიოფილმის ფორმირებისთვის ოპტიმალურ პირობებში (მაგ. 37°C 24 საათის განმავლობაში).
6. სანდოობის უზრუნველსაყოფად ჩაატარეთ ექსპერიმენტი სამჯერ ყოველი ბაქტერიული შტამისთვის.
7. გამოყავით ექვსი ჭაბურღილი თითო ფირფიტაზე უარყოფითი კონტროლისთვის. 30-მდე შტამი შეიძლება შემოწმდეს 96 ჭაბურღილზე.

ბიოფილმის ვიზუალიზაცია და რეცხვა

1. ინკუბაციის შემდეგ, გულდასმით გადააგდეთ გარემო, რათა თავიდან აიცილოთ ბიოფილმის დარღვევა.
2. ყოველი ჭაბურღილი ოთხჯერ გარეცხეთ ფიზიოლოგიური მარილით პლანქტონური ბაქტერიების მოსაშორებლად.
3. შეამოწმეთ ჭაბურღილების ფსკერზე თეთრი ლაქები, რომლებიც მიუთითებს ბიოფილმის არსებობაზე.

ბიოფილმის ამოღება Multi-Well Plate Sonicator UIP400MTP გამოყენებით

მოწყობილობის დაყენება და პარამეტრები:

• UIP400MTP მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტის სონიკატორი
• ოპერაციული პარამეტრები: 60% ამპლიტუდა, ციკლის რეჟიმი 60 წამის ჩართვით / 30 წამის გამორთვით

ნაბიჯები:

1. მოათავსეთ გარეცხილი მიკროტიტრის ფირფიტა UIP400MTP პლატფორმაზე.
2. ნიმუშების გახმოვანება რეკომენდებული პარამეტრებით (60% ამპლიტუდა, 60 წამი ჩართვა, 30 წამი გამორთვა). დაარეგულირეთ პარამეტრები ბაქტერიების შტამზე.
3. დაიწყეთ ბგერითი პროცესი ბიოფილმის მოსაშორებლად. ულტრაბგერითი ტალღები არღვევს ბიოფილმის მატრიქსს, ათავისუფლებს ბაქტერიებს.
4. UIP400MTP უზრუნველყოფს ერთგვაროვან ექსპოზიციას ყველა ჭაბურღილზე თანმიმდევრული გამოყოფის შედეგებისთვის.

ანალიტიკური ნაბიჯი: მოწყვეტილი სტაფილოკოკის ბიოფილმის ბიომასის რაოდენობრივი განსაზღვრა კრისტალური იისფერის გამოყენებით (CV)

საჭირო მასალები:

• 0.1% კრისტალური იისფერი (CV) ხსნარი
• 95% ეთანოლი ან 30% ძმარმჟავა (ხსნარებისთვის)
• მიკროფირფიტის წამკითხველი, რომელსაც შეუძლია წაიკითხოს 570 ნმ
• სტერილური მიკროტიტრული ფირფიტები შეღებვისთვის

ნაბიჯები:

1. შეღებვის ფირფიტის მომზადება: გადაიტანეთ 100 μL მოწყვეტილი ბიოფილმის სუსპენზია გაჟღენთილი ფირფიტის თითოეული ჭაბურღილიდან სუფთა, სტერილური 96-კვამლიანი მიკროტიტრული ფირფიტის შესაბამის ჭებში. ეს უზრუნველყოფს მკაფიო და ერთგვაროვან გარემოს შეღებვისთვის.
2. მოწყვეტილი ბიოფილმის შეღებვა: დაამატეთ 150 μL 0.1% კრისტალური იისფერი ხსნარი თითოეულ ჭაბურღილში, რომელიც შეიცავს მოწყვეტილ ბიოფილმის სუსპენზიას. ნაზად გადაიტანეთ პიპეტი ბიოფილმის სუსპენზიისა და ბროლის იისფერის თანაბრად შერევის უზრუნველსაყოფად.
3. ინკუბაცია: მიეცით ფირფიტა ოთახის ტემპერატურაზე 15 წუთის განმავლობაში ინკუბაციისთვის, რათა ბროლის იისფერმა ეფექტურად შეღებოს ბიომასა.
4. გარეცხვა: ინკუბაციის შემდეგ ფრთხილად გადაყარეთ კრისტალური იისფერი ხსნარი ჭებიდან ბიომასის დარღვევის გარეშე. ყოველი ჭაბურღილი სამჯერ გარეცხეთ სტერილური ფიზიოლოგიური ხსნარით, რათა მოაშოროთ შეკრული ლაქა.
5. გაშრობა: გააშრეთ ფირფიტა ჰაერში ოთახის ტემპერატურაზე ან სტერილური ჰაერის ნაკადის ქვეშ. მოერიდეთ გათბობას, რადგან ამან შეიძლება შეცვალოს შედეგები.
6. ხსნადი: თითოეულ ჭაბურღილს დაამატეთ 200 μL 95% ეთანოლი (ან 30% ძმარმჟავა, სტანდარტული ლაბორატორიული პრაქტიკიდან გამომდინარე) შეკრული ბროლის იის გასახსნელად. ნაზად აურიეთ პიპეტინგით ან შეანჯღრიეთ ფირფიტა 10 წუთის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე.
7. გაზომვა: გაზომეთ ხსნადი ბროლის იისფერი ხსნარის ოპტიკური სიმკვრივე (OD) 570 ნმ-ზე მიკროფირფიტის წამკითხველის გამოყენებით.
8. მონაცემთა ანალიზი: გამოაკლეთ უარყოფითი კონტროლის საშუალო OD570 მნიშვნელობა (ჭები TSB-ით, მაგრამ არა ბაქტერიული ინოკულუმი) ექსპერიმენტული ჭაბურღილებიდან, რათა მოხდეს ფონის შეღებვა. ჩაწერეთ და გააანალიზეთ მონაცემები.

შენიშვნა: შეასრულეთ ექსპერიმენტი სამჯერ თითოეული პირობისთვის, რათა უზრუნველყოთ განმეორებადობა. უზრუნველყავით ბროლის და ეთანოლის სათანადო დამუშავება, უსაფრთხოებისა და განადგურების პროტოკოლების დაცვა.
 

UIP400MTP-ის ძირითადი უპირატესობები ერთი შეხედვით:

• მაღალი გამტარუნარიანობის დამუშავება: შექმნილია სპეციალურად მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტებისთვის, რაც საშუალებას გაძლევთ ერთდროულად დაამუშავოთ რამდენიმე ნიმუში.
• ერთიანი ულტრაბგერითი განაწილება: უზრუნველყოფს თანაბარ ულტრაბგერითი ინტენსივობას ჭაბურღილების გასწვრივ, უზრუნველყოფს თანმიმდევრულ შედეგებს ყველა ნიმუშში.
• გამოიყენეთ ნებისმიერი სტანდარტული ფირფიტა: UIP400MTP შეუძლია გაუმკლავდეს ნებისმიერ სტანდარტულ მრავალჭაჭიან ფირფიტას, პეტრის ჭურჭელს და მილის თაროებს. არ არის საჭირო ძვირადღირებული საკუთრების ფირფიტები!
• მომხმარებლისთვის მოსახერხებელი ინტერფეისი: მარტივი დაყენება და კონტროლი, რაც მას შესანიშნავ ინსტრუმენტად აქცევს ლაბორატორიის პროდუქტიულობის გაზრდისთვის. პროგრამირებადი პარამეტრები და ავტომატიზაცია ხელს უწყობს პროცესის სტანდარტიზაციას!