შეცვალეთ უჯრედის სკრაპი UIP400MTP მაღალი გამტარუნარიანობის Sonicator-ით
მულტი-ომის ანალიზისთვის მიბმული უჯრედული ხაზების გამოყოფა და ამოღება მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტებიდან არის ყოველდღიური ამოცანა ლაბორატორიებში. უჯრედების მაღალი გამტარუნარიანობის გამოყოფა მრავალ ჭაბურღილის სონიკატორის UIP400MTP-ის გამოყენებით ცვლის უჯრედების ხელით სკრაპს, რაც იწვევს რნმ-ის, მთლიანი ლიპიდების და მთლიანი პოლარული მეტაბოლიტების მაღალ მოსავალს. ახალი მეთოდი აერთიანებს Hielscher UIP400MTP sonicator-ს Beckman Coulter i7 თხევადი დამუშავების სამუშაო სადგურთან, რაც საშუალებას აძლევს უჯრედების მაღალი გამტარუნარიანობის, რეპროდუცირებად და ეფექტურ დამუშავებას რნმ-ის, მეტაბოლიტისა და ლიპიდების ექსტრაქციისთვის. წარმოდგენილი მეთოდი აჯობებს უჯრედების ხელით გახეხვის ტრადიციულ მეთოდებს უმაღლესი რეპროდუცირებულობის და მოსავლიანობის მიღწევით სხვადასხვა ტიპის უჯრედებსა და ექსპერიმენტულ პირობებში.
გაამარტივეთ უჯრედის დაშლა მიკროპლატის Sonicator UIP400MTP-ით
უჯრედული კულტურის მიმდევარი სისტემები გადამწყვეტ როლს თამაშობენ ტოქსიკოლოგიურ და ბიოსამედიცინო კვლევებში. ამ კონტექსტში, Cruchley-Fuge et al. (2024) განიხილა მნიშვნელოვანი გამოწვევა PrecisionTox პროექტში, რომელიც ფოკუსირებულია ქიმიური საფრთხის შეფასების omics ტექნოლოგიების გამოყენებაზე. პროექტი მიზნად ისახავდა სხვადასხვა ქიმიკატებით დამუშავებული ათასობით ნიმუშის მაღალი წარმადობის ანალიზს. ამ მოთხოვნის დასაკმაყოფილებლად, მკვლევარებმა შეიმუშავეს ავტომატური სამუშაო ნაკადი, რომელიც აერთიანებს UIP400MTP sonicator-ს დადგენილ ორფაზიან ექსტრაქციის პროტოკოლებს თხევადი ქრომატოგრაფიული მასის სპექტრომეტრიის (LC-MS) ანალიზისთვის. მათი კვლევა აფასებს UIP400MTP Multi-Well Plate Sonicator-ის ეფექტურობას წებოვანი უჯრედების გამოყოფაში ხელით სკრაპთან და სხვა ტრადიციულ მეთოდებთან შედარებით.
ნებისმიერი სტანდარტული მიკროფირფიტიდან მიმაგრებული უჯრედული კულტურების გამოყოფა – მაღალი გამტარუნარიანობა UIP400MTP sonicator-ით
Multi-Omics-ის გამარტივება: ავტომატური მიმაგრებული უჯრედის ამოღება UIP400MTP-ით
ბირმინგემის უნივერსიტეტის ლორა კრაჩლი-ფუგის მკვლევართა ჯგუფმა გამოიყენა ადამიანის სამი უჯრედის ხაზი: HepG2 (ღვიძლის კიბოს უჯრედები), HepaRG (დიფერენცირებული ჰეპატოციტების მსგავსი უჯრედები) და H295R (თირკმელზედა ჯირკვლის კიბოს უჯრედები). ეს უჯრედები კულტივირებული იყო 24 ჭაბურღილში და 96 ჭაბურღილში და ექვემდებარებოდა საცდელ ქიმიკატებს, როგორიცაა აფლატოქსინი B1 და ფორსკოლინი.
ექსპერიმენტული დიზაინი:
- ფაზა 1: UIP400MTP sonicator-ის სიმძლავრის პარამეტრების ოპტიმიზაცია და შედარება უჯრედის ხელით სკრეპთან და ხმოვან წყლის აბანოებთან. HepG2 უჯრედები გამოიყენეს რნმ-ის, მეტაბოლიტისა და ლიპიდების აღდგენის შესაფასებლად.
- ფაზა 2: UIP400MTP-ის ინტეგრაცია ორფაზიან მოპოვების სამუშაო ნაკადში Beckman Coulter i7 სისტემის გამოყენებით. ვალიდაცია ჩატარდა HepaRG და H295R უჯრედების გამოყენებით.
მოპოვების სამუშაო პროცესი: სამუშაო ნაკადი მოიცავდა ქიმიურ ზემოქმედებას მრავალ ჭაბურღილის ფირფიტებში, უჯრედების განცალკევებას UIP400MTP-ის გამოყენებით და ორფაზიან ექსტრაქციას Bligh-ით & დაიერი (ბ&დ) მეთოდი. LC-MS ანალიზი ჩატარდა Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120-ის გამოყენებით ლიპოფილური და პოლარული ნაერთებისთვის. B&D მეთოდი, ლიპიდების რაოდენობრივი განსაზღვრის ოქროს სტანდარტი, მოიცავს ორეტაპიან ექსტრაქციას მეთანოლით, ქლოროფორმით და წყლით, რასაც მოჰყვება ლიპიდების რაოდენობრივი განსაზღვრა ქლოროფორმის ფაზაში.
UIP400MTP მიკროფირფიტის სონიკატორი აადვილებს უჯრედული ხაზების მოცილებას მრავალ ჭის ფირფიტებიდან და პეტრის კერძებიდან
შედეგები:
- ფაზა 1: ოპტიმალური ბგერითი პირობები გამოვლინდა 60% სიმძლავრის დროს.
UIP400MTP-მ აჩვენა რნმ-ის უმაღლესი აღდგენა განსაკუთრებული რეპროდუცირებით, ხელით სკრაპთან და ხმოვან აბაზანებთან შედარებით.
პოლარული მეტაბოლიტის აღდგენა იყო თანმიმდევრული სხვადასხვა მეთოდებში, ხოლო ლიპიდების აღდგენა მნიშვნელოვნად აღემატებოდა UIP400MTP-ს. - ფაზა 2: HepaRG და H295R უჯრედებზე ვალიდაციამ აჩვენა მაღალი რეპროდუცირებადი ლიპიდომიკის და მეტაბოლომიკის მონაცემებში, რაც მითითებულია მჭიდროდ დაჯგუფებული PCA ქულებით.
აფლატოქსინი B1 და ფორსკოლინის მკურნალობა ეფექტურად გამოირჩეოდა კონტროლისგან, რაც ხაზს უსვამს მეთოდის მგრძნობელობას და სანდოობას.
მიკროფირფიტის სონიკატორი UIP400MTP მაღალი გამტარუნარიანობის უჯრედების გამოყოფისთვის
“Hielscher UIP400MTP sonication მოწყობილობა უზრუნველყოფს მაღალი ხარისხის და რეპროდუცირებად ალტერნატიულ მიდგომას "ოქროს სტანდარტის" ხელით უჯრედების სკრეპისადმი, რაც იწვევს რნმ-ის, მთლიანი ლიპიდების და მთლიანი პოლარული მეტაბოლიტების მაღალ მოსავალს.” (კრაჩლი-ფუგე და სხვ., 2024)
კრაჩლი-ფუგე და სხვ. ხაზს უსვამს UIP400MTP sonicator-ის უპირატესობებს მიმაგრებული უჯრედების დამუშავებისთვის. ხელით სკრეპინგის ჩანაცვლებით, ეს მეთოდი აძლიერებს გამეორებადობას, გამტარუნარიანობას და მოსავლიანობას, რაც მას ფასდაუდებელ ინსტრუმენტად აქცევს ფართომასშტაბიანი კვლევებისთვის, როგორიცაა PrecisionTox. UIP400MTP-ის ინტეგრაცია ავტომატიზირებულ სამუშაო ნაკადებში არა მხოლოდ ამცირებს ცვალებადობას, არამედ აუმჯობესებს შრომის ინტენსიურ პროცესებს, რაც შესაძლებელს გახდის მაღალი ხარისხის მულტი-ომის მონაცემების მიღებას.
კრაჩლი-ფუგეს და სხვ. (2024) ხელს უწყობს და აადვილებს უჯრედული კულტურების დამუშავებას მულტი-ომის ანალიზისთვის. UIP400MTP sonicator-ის ინტეგრაცია ავტომატიზირებულ სამუშაო პროცესებთან უზრუნველყოფს ნიმუშის თანმიმდევრულ და ეფექტურ მომზადებას, რაც მას იდეალურად შეეფერება მაღალი წარმადობის ტოქსიკოლოგიური კვლევისთვის.
UIP400MTP არ არის ულტრაბგერითი აბაზანა. ეს არის მაღალი ინტენსივობის ჭიქის რქა ფოკუსირებული სონიკაციისთვის. ეს მძლავრი უკონტაქტო ბგერითი აწვდის ერთგვაროვან ჟღერადობას თქვენი სტანდარტული ჭაბურღილის ყველა ჭაში. თქვენ გაქვთ ზუსტი კონტროლი ამპლიტუდაზე, ძალასა და პულსირებაზე. ჩაშენებული ტაიმერი და ტემპერატურის ზონდი უზრუნველყოფს თანმიმდევრულ შედეგებს. UIP400MTP ფირფიტის სონიკატორი ნიმუშებს წყლის აბაზანით აცივლებს (გარე ჩილერი სურვილისამებრ).
დიზაინი, წარმოება და კონსულტაცია – ხარისხი დამზადებულია გერმანიაში
Hielscher ულტრაბგერითები ცნობილია მათი უმაღლესი ხარისხისა და დიზაინის სტანდარტებით. გამძლეობა და მარტივი მუშაობა საშუალებას იძლევა ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების გლუვი ინტეგრაცია სამრეწველო ობიექტებში. უხეში პირობები და მომთხოვნი გარემო ადვილად უმკლავდება Hielscher ულტრაბგერითებს.
Hielscher Ultrasonics არის ISO სერთიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებული აქცენტი კეთდება მაღალი ხარისხის სონიკატორებზე, რომლებიც აღჭურვილია უახლესი ტექნოლოგიით და მომხმარებლისთვის კეთილგანწყობით. რა თქმა უნდა, Hielscher ულტრაბგერითები შეესაბამება CE და აკმაყოფილებს UL, CSA და RoHs მოთხოვნებს.
უჯრედების მაღალი გამტარუნარიანობის გამოყოფა უჯრედის გახეხვის გარეშე – UIP400MTP sonicator ხელს უწყობს ლაბორატორიულ მუშაობას.
ლიტერატურა / ლიტერატურა
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Lauren E. Cruchley-Fuge, Martin R. Jones, Ossama Edbali, Gavin R. Lloyd, Ralf J. M. Weber, Andrew D. Southam, Mark R. Viant (2024): Automated extraction of adherent cell lines from 24-well and 96-well plates for multi-omics analysis using the Hielscher UIP400MTP sonicator and Beckman Coulter i7 liquid handling workstation. Metabomeeting 2024, University of Liverpool, 26-28th November 2024.
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
ხშირად დასმული შეკითხვები
რა არის უჯრედების განცალკევება?
კვლევაში უჯრედების განცალკევება ეხება ადჰერენტული უჯრედების გამოყოფის პროცესს კულტურის ჭურჭლის ან სუბსტრატის ზედაპირიდან. ეს, როგორც წესი, კეთდება უჯრედების მოსავლელად ქვედა დინების გამოყენებისთვის, როგორიცაა ანალიზი, სუბკულტურა ან კრიოკონსერვაცია. განცალკევება შეიძლება მიღწეული იყოს ფერმენტული მეთოდების გამოყენებით (მაგ., ტრიპსინი), ქიმიური აგენტებით (მაგ., EDTA), მექანიკური მეთოდებით (მაგ., სკრაპით) ან ფიზიკური ტექნიკით, როგორიცაა სონიკა, უჯრედის ტიპისა და კვლევის მოთხოვნების მიხედვით.
როგორ აშორებთ მიმაგრებულ უჯრედებს?
წებოვანი უჯრედების გამოყოფა სონიკაციის გამოყენებით გულისხმობს ფოკუსირებული ულტრაბგერითი ტალღების გამოყენებას, რათა დაარღვიოს უჯრედის ზედაპირის ადჰეზია კონტროლირებად გარემოში. კერძოდ, UIP400MTP microplate sonicator აღწევს ამას ლოკალიზებული მექანიკური ვიბრაციების წარმოქმნით, რომლებიც არღვევს კავშირებს უჯრედებსა და კულტურის ზედაპირს შორის. ძირითადი ნაბიჯები მოიცავს:
- მომზადება: უჯრედები იზრდებიან მრავალ ჭაბურღილ ფირფიტებში და შეიძლება ექვემდებარებოდეს სპეციფიკურ ქიმიურ ნივთიერებებს, როგორც ექსპერიმენტული დიზაინის ნაწილი.
- Sonication: Sonicator UIP400MTP დაპროგრამებულია ოპტიმიზებული პარამეტრებით (მაგ., 60% სიმძლავრე), რათა უზრუნველყოს ეფექტური გამოყოფა უჯრედების დაზიანების ან ბიომოლეკულის მთლიანობის შელახვის გარეშე.
- Ტემპერატურის კონტროლი: მოწყობილობა ინარჩუნებს ტემპერატურულ სტაბილურობას, რათა თავიდან აიცილოს სითბოს მიერ გამოწვეული უჯრედის ან მოლეკულური დეგრადაცია პროცესის დროს.
- განშორების შემდგომი: მოწყვეტილი უჯრედები ექვემდებარება ექსტრაქციის პროტოკოლებს, როგორიცაა Bligh & Dyer biphasic მეთოდი, რნმ-ის, ლიპიდების და მეტაბოლიტების აღდგენისთვის.
ეს მეთოდი აღემატება ხელით გახეხვას მისი ავტომატიზაციის, განმეორებადობისა და მაღალი გამტარუნარიანობის ნიმუშების ეფექტურად დამუშავების გამო.
რა არის არადამაზიანებელი უჯრედის გამოყოფა?
არადამაზიანებელი უჯრედების გამოყოფა გულისხმობს მიბმული უჯრედების მათი სუბსტრატიდან გამოყოფის პროცესს უჯრედის სიცოცხლისუნარიანობის, მთლიანობისა და ფუნქციონირების შელახვის გარეშე. ის მიიღწევა ისეთი ნაზი მეთოდების გამოყენებით, როგორიცაა კონტროლირებადი სონიკა ან ფერმენტის გარეშე ხსნარები.
უჯრედების განადგურების თავიდან აცილება გადამწყვეტია უჯრედების შესანარჩუნებლად’ სტრუქტურული და მოლეკულური მახასიათებლები, რომლებიც აუცილებელია ზუსტი ქვედა დინების აპლიკაციებისთვის, როგორიცაა მულტი-ომის ანალიზი, ფუნქციური ანალიზი ან თერაპიული გამოყენება. დაზიანებულ უჯრედებს შეუძლიათ უჯრედშიდა შიგთავსის გამოყოფა, პოტენციურად დამაბნეველი ექსპერიმენტის შედეგები ან სინჯის ხარისხის კომპრომეტირება.
რა არის ფერმენტისგან თავისუფალი უჯრედების უპირატესობები?
ენზიმისგან თავისუფალი უჯრედების გამოყოფა რამდენიმე უპირატესობას გვთავაზობს, მათ შორის უჯრედის ზედაპირის ცილების და რეცეპტორების შენარჩუნებას, უჯრედების სიცოცხლისუნარიანობის შენარჩუნებას და ბიომოლეკულების პოტენციური ფერმენტული დაზიანების თავიდან აცილებას. ეს მიდგომა განსაკუთრებით მომგებიანია სენსიტიური ქვედა დინების აპლიკაციებისთვის, როგორიცაა ნაკადის ციტომეტრია, პროტეომიკა ან ფუნქციური ანალიზი, სადაც ფერმენტულმა ცვლილებამ შეიძლება ზიანი მიაყენოს მონაცემთა ხარისხს ან ექსპერიმენტულ შედეგებს. გარდა ამისა, ფერმენტებისგან თავისუფალი მეთოდები ხშირად უფრო რეპროდუცირებადია და მათი ადაპტირება შესაძლებელია მაღალი გამტარუნარიანობისთვის.
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორებისგან ლაბორატორია რომ სამრეწველო ზომა.