ASTM E2799-22 პროტოკოლი ანტიმიკრობული შეფასებისთვის
Hielscher UIP400MTP არის მძლავრი და ეფექტური მრავალფოსოიანი ფირფიტის სონიკატორი, რომელიც შექმნილია ASTM E2799-22 პროტოკოლში სონიკაციის ეტაპის გასამარტივებლად. მთელ მიკროტიტრულ ფირფიტაზე ერთგვაროვანი ულტრაბგერითი ენერგიის მიწოდებით UIP400MTP უზრუნველყოფს ბიოფილმების თანმიმდევრულ და საიმედო მოცილებას წკირებიანი ხუფებიდან უჯრედების დაზიანების ან ნიმუშის მთლიანობის შელახვის გარეშე. მისი მაღალი გამტარუნარიანობა და მოსახერხებელი ოპერირება მნიშვნელოვნად ამცირებს დამუშავების დროს და აუმჯობესებს განმეორებადობას, რაც მას იდეალურ გადაწყვეტად აქცევს ლაბორატორიებისთვის, რომლებიც ატარებენ ბიოფილმის სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზებსა და ანტიმიკრობული ეფექტურობის ტესტირებას.
ASTM E2799
ASTM E2799 არის სტანდარტიზებული ტესტის მეთოდი, რომელიც შექმნილია ბიოფილმების წინააღმდეგ ანტიმიკრობული აგენტების ეფექტურობის შესაფასებლად და კონკრეტულად Pseudomonas aeruginosa-ზეა ფოკუსირებული. ბიოფილმები არის რთული მიკრობული თანასაზოგადოებები, რომლებიც ეკვრის ზედაპირებს და ავლენს მომატებულ გამძლეობას ანტიმიკრობული დამუშავების მიმართ, რაც მათ მნიშვნელოვან გამოწვევად აქცევს ჯანდაცვის, სამრეწველო და გარემოსდაცვით სფეროებში. ეს მეთოდი იყენებს ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაციის (MBEC) ანალიზს, რათა უზრუნველყოს სანდო და განმეორებადი ჩარჩო სადეზინფექციო საშუალებების შესამოწმებლად ბიოფილმის რეალისტურ პირობებში.
96-ფოსოიანი ფირფიტის სონიკატორი UIP400MTP მაღალი გამტარუნარიანობის სკრინინგისთვის
როგორ უწყობს ხელს სონიკაცია ASTM E2799-ს?
სონიკაცია მნიშვნელოვან როლს ასრულებს ASTM E2799 პროტოკოლში, ხელს უწყობს ბიოფილმების გამოყოფას ტესტის ზედაპირებიდან, რაც უზრუნველყოფს მიკრობული სიცოცხლისუნარიანობის ზუსტ შეფასებას დამუშავების შემდეგ. კონტროლირებადი ულტრაბგერითი ენერგიის გამოყენებით, პროტოკოლი აღწევს ბიოფილმის ეფექტურ და თანმიმდევრულ დარღვევას უჯრედების დაზიანების გარეშე, რაც იძლევა ზუსტ და განმეორებად შედეგებს. ეს ხდის ASTM E2799-ს აუცილებელ ინსტრუმენტად ბიოფილმის კვლევის წინსვლისა და ეფექტური ანტიმიკრობული სტრატეგიების შემუშავებისთვის.
როგორ ჩავატაროთ MBEC ანალიზი ASTM E2799-22-ის შესაბამისად
ASTM E2799-22 პროტოკოლი ასახავს ნაბიჯებს ბიოფილმების მიმართ ანტიმიკრობული აგენტების ეფექტურობის შესაფასებლად. Hielscher UIP400MTP მიკროტიტრული ფირფიტის სონიკატორის გამოყენებისას, პროტოკოლი შეიძლება ადაპტირდეს ბიოფილმის გამოყოფის ამ მოწინავე სონიკაციური მეთოდის ჩასართავად. ქვემოთ მოცემულია ნაბიჯების აღწერა, რომლებიც მორგებულია მიკროპლატის სონიკატორის UIP400MTP-ის გამოყენებაზე:
- ბიოფილმების მომზადება
მოამზადეთ სტერილური 96-ფოსოიანი მიკროტიტრული ფირფიტა მოსახსნელი წკირებიანი ხუფებით.
ფოსოებში შეიტანეთ შესაფერის საკვებ არეში მომზადებული სტანდარტიზებული ბაქტერიული სუსპენზია.
დააფარეთ წკირებიანი ხუფი ფირფიტას და დარწმუნდით, რომ წკირები მთლიანად ჩაძირულია ბაქტერიულ სუსპენზიაში.
ჩაატარეთ ფირფიტის ინკუბაცია კონტროლირებად პირობებში (მაგ., ტემპერატურა და დრო), რათა წკირებზე ბიოფილმი წარმოიქმნას. - დამუშავება ანტიმიკრობული აგენტებით
ბიოფილმის წარმოქმნის შემდეგ ჩაანაცვლეთ საკვები არე ახალი საკვები არით, რომელიც შეიცავს გამოსაცდელ ანტიმიკრობულ აგენტებს სხვადასხვა კონცენტრაციით.
კვლავ დააფარეთ წკირებიანი ხუფი და ჩაატარეთ ინკუბაცია ტესტის გეგმაში მითითებულ პირობებში. - მომზადება ბიოფილმის ამოღებისთვის
დამუშავების შემდეგ ჩამორეცხეთ წკირებიანი ხუფი სტერილურ სარეცხ ხსნარში ჩაძირვით, ნარჩენი ანტიმიკრობული აგენტებისა და სუსტად მიკრული პლანქტონური უჯრედების მოსაშორებლად. - ბიოფილმის გამოყოფა UIP400MTP სონიკატორის გამოყენებით
მოამზადეთ ახალი 96-ფოსოიანი მიკროტიტრული ფირფიტა, რომელიც შეიცავს უჯრედების აღსადგენ არეს (მაგ., მანეიტრალიზებელ ბულიონს).
მოაცილეთ ბიოფილმები წკირებიანი ხუფის წკირების უჯრედების აღსადგენი არის შემცველი ფირფიტის ფოსოებში მოთავსებით.
ჩადეთ ფირფიტა UIP400MTP სონიკატორში, დარწმუნდით, რომ სახურავი და ფირფიტა სწორად არის გასწორებული.
დააყენეთ სონიკატორი 70%–80% ამპლიტუდაზე და ჩაატარეთ სონიკაცია 3–4 წუთის განმავლობაში ციკლის რეჟიმში, რათა უზრუნველყოთ ბიოფილმის თანმიმდევრული გამოყოფა უჯრედების ლიზისის გარეშე. - ბიოფილმის სიცოცხლისუნარიანობის შეფასება
სონიკაციის შემდეგ დაამუშავეთ უჯრედების აღსადგენი არე, რომელიც შეიცავს მოცილებული ბიოფილმის უჯრედებს, სტანდარტული მიკრობიოლოგიური ან ანალიტიკური მეთოდების გამოყენებით, როგორიცაა:- კოლონიაწარმომქმნელი ერთეულების (CFU) დათვლა: მოამზადეთ სერიული განზავებები და დათესეთ აგარზე სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების დასათვლელად.
- ოპტიკური სიმკვრივის (OD) გაზომვები: გამოიყენეთ სპექტროფოტომეტრიული ანალიზი უჯრედის სიმკვრივის შესაფასებლად.
- ფლუორესცენციაზე დაფუძნებული სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზები: რაოდენობრივად განსაზღვრეთ ცოცხალი და მკვდარი უჯრედები ფლუორესცენტური საღებავების გამოყენებით.
- მონაცემთა ანალიზი
შეადარეთ დამუშავებული და დაუმუშავებელი ბიოფილმების სიცოცხლისუნარიანობის მონაცემები ანტიმიკრობული აგენტების ეფექტურობის დასადგენად.
გამოთვალეთ ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაცია (MBEC) იმ კონცენტრაციის საფუძველზე, რომელიც საჭიროა სიცოცხლისუნარიანი ბიოფილმის უჯრედების აღმოსაფხვრელად. - ხარისხის კონტროლი
უზრუნველყავით თანმიმდევრული სონიკაციის პირობები UIP400MTP-ის რეგულარული კალიბრირებით და იმის გადამოწმებით, რომ ბიოფილმის გამოყოფის პროცესი არ იწვევს უჯრედების მნიშვნელოვან ლიზისს ან განადგურებას.
შედეგების დასადასტურებლად ჩართეთ შესაბამისი კონტროლები, როგორიცაა დაუმუშავებელი ბიოფილმები და მხოლოდ არის შემცველი ბლანკები.
წკირებზე წარმოქმნილი ბიოფილმის უჯრედები მოაცილეს 5 წუთის განმავლობაში სონიკაციით (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP) 96-ფოსოიან ფირფიტებში, რომლებიც უჯრედების აღსადგენად ახალ საკვებ არეს შეიცავდა.
(სურათი და კვლევა: ©de Oliveira et al., 2016)
UIP400MTP ASTM E2799-22 სამუშაო ნაკადში ინტეგრაციით, ბიოფილმის გამოყოფის პროცესი ოპტიმიზებულია თანმიმდევრულობის, ეფექტურობისა და მაღალი გამტარუნარიანობის აპლიკაციებისთვის.
ლიტერატურა / წყაროები
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
ხშირად დასმული შეკითხვები
რა არის ASTM E2799?
ASTM E2799 არის სტანდარტული ტესტის მეთოდი, რომელიც დადგენილია ASTM International-ის მიერ Pseudomonas aeruginosa ბიოფილმის წინააღმდეგ სადეზინფექციო ეფექტურობის შესამოწმებლად MBEC ანალიზის გამოყენებით. მეთოდი ფართოდ გამოიყენება ბიოფილმის ფორმირების, ანტიმიკრობული ეფექტურობისა და მასალის ზედაპირის ურთიერთქმედების შესაფასებლად, რაც საშუალებას იძლევა სტანდარტიზებული შედარება ბიოფილმთან დაკავშირებულ კვლევებში.
რა განსხვავებაა ASTM E2799-22 და ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 და ASTM E2799-17 შორის?
ASTM E2799 არის სტანდარტიზებული ტესტის მეთოდი, რომელიც აფასებს სადეზინფექციო საშუალებების ეფექტურობას Pseudomonas aeruginosa-ს ბიოფილმების წინააღმდეგ MBEC (ბიოფილმის ერადიკაციის მინიმალური კონცენტრაცია) ანალიზის გამოყენებით. ამ მეთოდმა გაიარა რამდენიმე გადასინჯვა მისი სიზუსტისა და გამოყენებადობის გასაუმჯობესებლად.
- ASTM E2799-11: ეს იყო სტანდარტის საწყისი გამოშვება, რომელიც ადგენს ფუნდამენტურ პროცედურებს P. aeruginosa ბიოფილმების წინააღმდეგ სადეზინფექციო ეფექტურობის შესაფასებლად MBEC ანალიზის გამოყენებით.
- ASTM E2799-12: ეს გადახედვა მოიცავდა მცირე ტექნიკურ განახლებებს სიცხადის გასაუმჯობესებლად და 2011 წლის ვერსიაში გამოვლენილი ბუნდოვანებების აღმოსაფხვრელად.
- ASTM E2799-17: ამ განახლებაში პროტოკოლში უფრო მნიშვნელოვანი ცვლილებები შევიდა, მათ შორის ბიოფილმის კულტივირების პროცესის, დამუშავების ჩატარებისა და ნეიტრალიზაციის პროცედურების კორექტირება, რომელთა მიზანია განმეორებადობის გაუმჯობესება და ბიოფილმის კვლევის მიღწევებთან შესაბამისობა.
- ASTM E2799-22: უახლესი რევიზია ასახავს უახლეს სამეცნიერო გაგებას და ტექნოლოგიურ მიღწევებს ბიოფილმის კვლევებში. იგი მოიცავს ბიოფილმის ზრდის, დამუშავებისა და ანალიზის დახვეწილ მეთოდოლოგიას, რაც უზრუნველყოფს ტესტის მეთოდის შესაბამისობას და ეფექტურობას სადეზინფექციო საშუალებების ეფექტურობის მიმდინარე შეფასებებისთვის.
ASTM E2799-ის ყოველი გადასინჯვა განხორციელდა მეთოდის სანდოობის, განმეორებადობისა და შესაბამისობის გასაუმჯობესებლად, იმის უზრუნველსაყოფად, რომ იგი ბიოფილმის კვლევის სფეროში მეცნიერულ და ტექნოლოგიურ პროგრესთან ერთად განახლებული დარჩეს.
რა განსხვავებაა MBEC და MBIC ანალიზებს შორის?
ძირითადი განსხვავება MBEC (ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაცია) და MBIC (ბიოფილმის მინიმალური ინჰიბიტორული კონცენტრაცია) ანალიზებს შორის მდგომარეობს მათ ფოკუსში:
MBEC ანალიზები ზომავს ანტიმიკრობული აგენტის ყველაზე დაბალ კონცენტრაციას, რომელიც საჭიროა წინასწარ ჩამოყალიბებული ბიოფილმების სრულად აღმოსაფხვრელად, და აფასებს ნივთიერების უნარს, მოკლას ბიოფილმში ჩაშენებული მიკროორგანიზმები.
MBIC ანალიზები განსაზღვრავს ანტიმიკრობული აგენტის ყველაზე დაბალ კონცენტრაციას, რომელიც ხელს უშლის ბიოფილმების თავდაპირველ წარმოქმნას, და აფასებს მის უნარს, დათრგუნოს ბიოფილმის განვითარება.
ორივე ანალიზი გადამწყვეტია ბიოფილმების წინააღმდეგ ანტიმიკრობული საშუალებების ეფექტურობის გასაგებად, მაგრამ მიზნად ისახავს ბიოფილმის სასიცოცხლო ციკლის სხვადასხვა ეტაპებს.
შეიტყვეთ, თუ როგორ გამოიყენება UIP400MTP მიკროფირფიტის სონიკატორი MBIC ანალიზში ბიოფილმის მოსაცილებლად!
ახალი მიკროფირფიტის სონიკატორები ჯიუტი ბიოფილმების დასანგრევად
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი წარმადობის ულტრაბგერით ჰომოგენიზატორებს ლაბორატორიული ზომიდან – სამრეწველო ზომამდე.