ASTM E2799-22 პროტოკოლი ანტიმიკრობული შეფასებისთვის
Hielscher UIP400MTP არის მძლავრი და ეფექტური მრავალსაჭიანი თეფშის სონიკატორი, რომელიც შექმნილია ASTM E2799-22 პროტოკოლში სონიკაციის ეტაპის გასამარტივებლად. ერთგვაროვანი ულტრაბგერითი ენერგიის მიწოდებით მთელ მიკროტიტრულ ფირფიტაზე, UIP400MTP უზრუნველყოფს ბიოფილების თანმიმდევრულ და საიმედო გამოყოფას სამაგრის ხუფებიდან უჯრედების დაზიანების ან ნიმუშის მთლიანობის შელახვის გარეშე. მისი მაღალი გამტარუნარიანობა და მოსახერხებელი ოპერაცია მნიშვნელოვნად ამცირებს დამუშავების დროს და აძლიერებს განმეორებადობას, რაც მას იდეალურ გადაწყვეტად აქცევს ლაბორატორიებისთვის, რომლებიც ატარებენ ბიოფილმის სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზს და ანტიმიკრობული ეფექტურობის ტესტირებას.
ASTM E2799
ASTM E2799 არის სტანდარტიზებული ტესტის მეთოდი, რომელიც შექმნილია ბიოფილმების წინააღმდეგ ანტიმიკრობული აგენტების ეფექტურობის შესაფასებლად, კონკრეტულად ფოკუსირებული Pseudomonas aeruginosa-ზე. ბიოფილები არის რთული მიკრობული თემები, რომლებიც ეკვრის ზედაპირებს და ავლენენ გაძლიერებულ წინააღმდეგობას ანტიმიკრობული მკურნალობის მიმართ, რაც მათ მნიშვნელოვან გამოწვევად აქცევს ჯანდაცვის, სამრეწველო და გარემოს კონტექსტში. ეს მეთოდი იყენებს ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაციის (MBEC) ანალიზს, რათა უზრუნველყოს სანდო და განმეორებადი ჩარჩო სადეზინფექციო საშუალებების შესამოწმებლად ბიოფილმის რეალისტურ პირობებში.
96 ჭაბურღილის თეფშიანი სონიკატორი UIP400MTP მაღალი გამტარუნარიანობის სკრინინგისთვის
როგორ უწყობს ხელს Sonication ASTM E2799-ს?
Sonication მნიშვნელოვან როლს ასრულებს ASTM E2799 პროტოკოლში, ხელს უწყობს ბიოფილმების გამოყოფას ტესტის ზედაპირებიდან, რაც უზრუნველყოფს მიკრობული სიცოცხლისუნარიანობის ზუსტ შეფასებას მკურნალობის შემდეგ. კონტროლირებადი ულტრაბგერითი ენერგიის გამოყენებით, პროტოკოლი აღწევს ბიოფილმის ეფექტურ და თანმიმდევრულ დარღვევას უჯრედების დაზიანების გარეშე, რაც იძლევა ზუსტ და გამეორებად შედეგებს. ეს ხდის ASTM E2799-ს აუცილებელ ინსტრუმენტად ბიოფილმის კვლევის წინსვლისა და ეფექტური ანტიმიკრობული სტრატეგიების შემუშავებისთვის.
როგორ ჩავატაროთ MBEC ანალიზი ASTM E2799-22-ის შესაბამისად
ASTM E2799-22 პროტოკოლი ასახავს ნაბიჯებს ბიოფილმების მიმართ ანტიმიკრობული აგენტების ეფექტურობის შესაფასებლად. Hielscher UIP400MTP მიკროტიტრული ფირფიტის სონიკატორის გამოყენებისას, პროტოკოლი შეიძლება ადაპტირდეს ბიოფილმის ამოღების ამ მოწინავე ბგერითი მეთოდის ჩართვისთვის. ქვემოთ მოცემულია საფეხურების აღწერა, რომლებიც მორგებულია მიკროპლატის სონიკატორის UIP400MTP-ის გამოყენებაზე:
- ბიოფილმების მომზადება
მოამზადეთ სტერილური 96 ჭაბურღილის მიკროტიტრული ფირფიტა მოსახსნელი ქუდის ხუფებით.
ჩაყარეთ ჭაბურღილები სტანდარტიზებული ბაქტერიული სუსპენზიით შესაფერის ზრდის გარემოში.
მოათავსეთ სამაგრი სახურავი თეფშზე, დარწმუნდით, რომ კალმები მთლიანად ჩაეფლო ბაქტერიულ სუსპენზიაში.
ჩაატარეთ ფირფიტის ინკუბაცია კონტროლირებად პირობებში (მაგ. ტემპერატურა და დრო), რათა მოხდეს ბიოფილმის ფორმირება სამაგრებზე. - მკურნალობა ანტიმიკრობული საშუალებებით
ბიოფილმის წარმოქმნის შემდეგ, ჩაანაცვლეთ გარემო ახალი გარემოთი, რომელიც შეიცავს სატესტო ანტიმიკრობულ აგენტებს სხვადასხვა კონცენტრაციით.
ხელახლა დაამაგრეთ სამაგრი სახურავი და ჩაატარეთ ინკუბაცია ტესტის დიზაინში მითითებულ პირობებში. - მომზადება ბიოფილმის ამოღებისთვის
დამუშავების შემდეგ ჩამოიბანეთ სამაგრი სახურავი სტერილურ გამრეცხ ხსნარში ჩაძირვით ნარჩენი ანტიმიკრობული აგენტების და თავისუფლად დამაგრებული პლანქტონური უჯრედების მოსაშორებლად. - ბიოფილმის ამოღება UIP400MTP Sonicator-ის გამოყენებით
მოამზადეთ ახალი 96 ჭაბურღილი მიკროტიტრული ფირფიტა, რომელიც შეიცავს აღდგენის საშუალებას (მაგ., ნეიტრალიზაციის ბულიონი).
ამოიღეთ ბიოფილმები სამაგრის სახურავის მოთავსებით აღდგენის საშუალო ფირფიტის ჭებში.
ჩადეთ ფირფიტა UIP400MTP სონიკატორში, დარწმუნდით, რომ სახურავი და ფირფიტა სწორად არის გასწორებული.
დააყენეთ სონიკატორი 70%-80% ამპლიტუდაზე და ჩაატარეთ სონიკი 3-4 წუთის განმავლობაში ციკლის რეჟიმში, რათა უზრუნველყოთ ბიოფილმის თანმიმდევრული გამოყოფა უჯრედების ლიზისის გარეშე. - ბიოფილმის სიცოცხლისუნარიანობის შეფასება
სონიკაციის შემდეგ, დაამუშავეთ აღდგენის საშუალება, რომელიც შეიცავს მოწყვეტილ ბიოფილმის უჯრედებს სტანდარტული მიკრობიოლოგიური ან ანალიტიკური ტექნიკის გამოყენებით, როგორიცაა:- კოლონიების ფორმირების ერთეულების (CFU) რაოდენობა: შეასრულეთ სერიული განზავება და ფირფიტა აგარზე სიცოცხლისუნარიანი უჯრედების აღრიცხვისთვის.
- ოპტიკური სიმკვრივის (OD) გაზომვები: გამოიყენეთ სპექტროფოტომეტრიული ანალიზი უჯრედის სიმკვრივის შესაფასებლად.
- ფლუორესცენტზე დაფუძნებული სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზები: რაოდენობრივად განსაზღვრეთ ცოცხალი და მკვდარი უჯრედები ფლუორესცენტური საღებავების გამოყენებით.
- მონაცემთა ანალიზი
შეადარეთ დამუშავებული და არანამკურნალევი ბიოფილების სიცოცხლისუნარიანობის მონაცემები ანტიმიკრობული აგენტების ეფექტურობის დასადგენად.
გამოთვალეთ ბიოფილმის ერადიკაციის მინიმალური კონცენტრაცია (MBEC) კონცენტრაციის საფუძველზე, რომელიც საჭიროა სიცოცხლისუნარიანი ბიოფილმის უჯრედების აღმოსაფხვრელად. - ხარისხის კონტროლი
უზრუნველყავით თანმიმდევრული ბგერითი პირობები UIP400MTP-ის რეგულარული კალიბრირებით და დამოწმებით, რომ ბიოფილმის გამოყოფის პროცესი არ იწვევს უჯრედების მნიშვნელოვან ლიზას ან განადგურებას.
შედეგების დასადასტურებლად ჩართეთ შესაბამისი კონტროლი, როგორიცაა დაუმუშავებელი ბიოფილმები და მხოლოდ საშუალო ზომის ბლანკები.
ქინძისთავებზე წარმოქმნილი ბიოფილმის უჯრედები განადგურდა სონიკაციით (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP) 5 წუთის განმავლობაში 96 ჭაბურღილიან თეფშებში, რომლებიც შეიცავდნენ ახალ კულტურულ გარემოს უჯრედების აღდგენისთვის.
(სურათი და შესწავლა: ©de Oliveira et al., 2016)
UIP400MTP ASTM E2799-22 სამუშაო ნაკადში ინტეგრაციით, ბიოფილმის გამოყოფის პროცესი ოპტიმიზებულია თანმიმდევრულობის, ეფექტურობისა და მაღალი გამტარუნარიანობის აპლიკაციებისთვის.
ლიტერატურა / ლიტერატურა
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- ASTM E2799-22 Standard Test Method for Testing Disinfectant Efficacy against Pseudomonas aeruginosa Biofilm using the MBEC Assay
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
ხშირად დასმული შეკითხვები
რა არის ASTM E2799?
ASTM E2799 არის სტანდარტული ტესტის მეთოდი, რომელიც დადგენილია ASTM International-ის მიერ Pseudomonas aeruginosa ბიოფილმის წინააღმდეგ სადეზინფექციო ეფექტურობის შესამოწმებლად MBEC ანალიზის გამოყენებით. მეთოდი ფართოდ გამოიყენება ბიოფილმის ფორმირების, ანტიმიკრობული ეფექტურობისა და მასალის ზედაპირის ურთიერთქმედების შესაფასებლად, რაც საშუალებას იძლევა სტანდარტიზებული შედარება ბიოფილმთან დაკავშირებულ კვლევებში.
რა განსხვავებაა ASTM E2799-22 და ASTM E2799-11, ASTM E2799-12 და ASTM E2799-17 შორის?
ASTM E2799 არის სტანდარტიზებული ტესტის მეთოდი, რომელიც აფასებს სადეზინფექციო საშუალებების ეფექტურობას Pseudomonas aeruginosa ბიოფილმების წინააღმდეგ MBEC (მინიმალური ბიოფილმის ერადიკაციის კონცენტრაცია) ანალიზის გამოყენებით. ამ მეთოდმა განიცადა რამდენიმე გადახედვა მისი სიზუსტისა და გამოყენების გასაუმჯობესებლად.
- ASTM E2799-11: ეს იყო სტანდარტის საწყისი გამოშვება, რომელიც ადგენს ფუნდამენტურ პროცედურებს P. aeruginosa ბიოფილმების წინააღმდეგ სადეზინფექციო ეფექტურობის შესაფასებლად MBEC ანალიზის გამოყენებით.
- ASTM E2799-12: ეს გადახედვა მოიცავდა მცირე ტექნიკურ განახლებებს სიცხადის გასაუმჯობესებლად და 2011 წლის ვერსიაში გამოვლენილი ბუნდოვანებების აღმოსაფხვრელად.
- ASTM E2799-17: ამ განახლებაში უფრო მნიშვნელოვანი ცვლილებები განხორციელდა პროტოკოლში, მათ შორის ბიოფილმის გაშენების პროცესის კორექტირება, მკურნალობის გამოყენება და ნეიტრალიზაციის პროცედურები, რომლებიც მიზნად ისახავს გამრავლების გაძლიერებას და ბიოფილმის კვლევის მიღწევებს.
- ASTM E2799-22: უახლესი რევიზია ასახავს უახლეს სამეცნიერო გაგებას და ტექნოლოგიურ მიღწევებს ბიოფილმის კვლევებში. იგი მოიცავს ბიოფილმის ზრდის, მკურნალობისა და ანალიზის დახვეწილ მეთოდოლოგიას, რაც უზრუნველყოფს ტესტის მეთოდის შესაბამისობას და ეფექტურობას სადეზინფექციო საშუალებების ეფექტურობის მიმდინარე შეფასებებისთვის.
ASTM E2799-ის ყოველი გადასინჯვა განხორციელდა მეთოდის სანდოობის, განმეორებადობისა და შესაბამისობის გასაუმჯობესებლად, იმის უზრუნველსაყოფად, რომ იგი დარჩეს მეცნიერულ და ტექნოლოგიურ პროგრესთან ბიოფილმის კვლევის სფეროში.
რა განსხვავებაა MBEC და MBIC ანალიზებს შორის?
ძირითადი განსხვავება MBEC (ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაცია) და MBIC (ბიოფილმის მინიმალური ინჰიბიტორული კონცენტრაცია) ანალიზებს შორის მდგომარეობს მათ ფოკუსში:
MBEC ანალიზები გაზომეთ ანტიმიკრობული აგენტის ყველაზე დაბალი კონცენტრაცია, რომელიც საჭიროა წინასწარ ჩამოყალიბებული ბიოფილების სრულად აღმოსაფხვრელად, შეაფასეთ ნივთიერების უნარი ბიოფილმში ჩაშენებული მიკროორგანიზმების მოსაკლავად.
MBIC ანალიზები განსაზღვროს ანტიმიკრობული აგენტის ყველაზე დაბალი კონცენტრაცია, რომელიც აფერხებს ბიოფილმების თავდაპირველ წარმოქმნას, აფასებს მის უნარს, დათრგუნოს ბიოფილმის განვითარება.
ორივე ანალიზი გადამწყვეტია ბიოფილმების წინააღმდეგ ანტიმიკრობული საშუალებების ეფექტურობის გასაგებად, მაგრამ მიზნად ისახავს ბიოფილმის სასიცოცხლო ციკლის სხვადასხვა ეტაპებს.
შეიტყვეთ, თუ როგორ გამოიყენება UIP400MTP მიკროფირფიტის სონიკატორი MBIC ანალიზში ბიოფილმის ამოღებისთვის!
ჯიუტი ბიოფილმების გასანადგურებლად ახალი მიკროპლაკეტების სონიკატორები
Hielscher Ultrasonics აწარმოებს მაღალი ხარისხის ულტრაბგერითი ჰომოგენიზატორებისგან ლაბორატორია რომ სამრეწველო ზომა.