MBEC ანალიზის პროტოკოლი 96-ფოსოიანი ფირფიტის სონიკატორით UIP400MTP

MBEC ანალიზი გამოიყენება ანტიმიკრობული აგენტების იმ კონცენტრაციის დასადგენად, რომელიც საჭიროა წკირებიან თავსახურებზე წარმოქმნილი ბიოფილმების აღმოსაფხვრელად. ბიოფილმის სიცოცხლისუნარიანობის შესაფასებლად ბიოფილმები ჯერ უნდა მოცილდეს 96-ფოსოიანი ფირფიტის წკირებიან თავსახურებს. სონიკაცია ამ მოცილების ყველაზე საიმედო და ეფექტური მეთოდია. მრავალფოსოიანი ფირფიტის სონიკატორი UIP400MTP სპეციალურად შექმნილია საანალიზო ფირფიტების მაქსიმალურად ეფექტური და მოხერხებული დამუშავებისთვის, რაც ამარტივებს და აჩქარებს მაღალი წარმადობის MBEC ანალიზებს.

სონიკაცია ბიოფილმის მოსახსნელად

სონიკაცია გადამწყვეტი ნაბიჯია ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაციის (MBEC) ანალიზში, რაც საშუალებას იძლევა, ბიოფილმის უჯრედები ეფექტურად მოცილდეს ზედაპირს. ბიოფილმები მიკროორგანიზმების სტრუქტურირებული თანასაზოგადოებებია, რომლებიც უჯრედგარე მატრიქსშია მოქცეული, რაც მათ პლანქტონურ უჯრედებთან შედარებით მნიშვნელოვნად უფრო მდგრადს ხდის ანტიმიკრობული აგენტების მიმართ. MBEC ანალიზების დროს სონიკაცია იყენებს ულტრაბგერით ტალღებს კონტროლირებადი კავიტაციის შესაქმნელად, რომელიც არღვევს ბიოფილმის მატრიქსს და მასში მოქცეულ უჯრედებს სუსპენზიაში ათავისუფლებს. ეს ნაბიჯი უზრუნველყოფს ბიოფილმის უჯრედების თანაბარ განაწილებას აღდგენის არეში, რაც ხელს უწყობს სიცოცხლისუნარიანობის ზუსტ შეფასებას დათესვის, განზავების ან სპექტროფოტომეტრიული მეთოდებით. ბიოფილმის სათანადო მოცილების გარეშე მატრიქსის ნარჩენმა კომპონენტებმა შეიძლება დაიცვან უჯრედები, რაც ანტიმიკრობული ეფექტურობის შეუსაბამოდ დაბალ შეფასებას გამოიწვევს. მაშასადამე, სონიკაცია აუცილებელია საიმედო და რეპროდუცირებადი MBEC მნიშვნელობების მისაღებად, რომლებიც ასახავს გამოცდილი აგენტების ბიოფილმის აღმოფხვრის რეალურ პოტენციალს. მრავალფოსოიანი ფირფიტის სონიკატორი UIP400MTP იძლევა საანალიზო ფირფიტებში ნიმუშების მაღალი წარმადობით მარტივად მომზადების საშუალებას.

ბიოფილმის აღმოფხვრის მინიმალური კონცენტრაციის (MBEC) ანალიზის პროტოკოლი

ნაბიჯი 1: ბიოფილმის ფორმირება

1. მოამზადეთ ბაქტერიული სუსპენზია:
   გაზარდეთ ბაქტერიები შესაბამის საკვებ არეში ზრდის ლოგარითმულ ფაზამდე.
   განაზავეთ ბაქტერიული კულტურა განსაზღვრულ ოპტიკურ სიმკვრივემდე (მაგ., OD600 ~0.1).
2. მოახდინეთ 96-ფოსოიანი ფირფიტის ინოკულაცია:
   დაამატეთ ბაქტერიული სუსპენზია (მაგ., 150–200 µL) სტანდარტული 96-ფოსოიანი მიკროტიტრული ფირფიტის თითოეულ ფოსოში.
3. მიამაგრეთ წკირებიანი თავსახური:
   მოათავსეთ წკირებიანი თავსახური ინოკულირებულ ფირფიტაზე, რათა ბიოფილმი წკირების ზედაპირებზე წარმოიქმნას.
4. ფირფიტის ინკუბაცია:
   ინკუბაცია ჩაატარეთ შესაბამის ტემპერატურაზე (მაგ., 37°C) 24–48 საათის განმავლობაში შერყევის გარეშე, ბიოფილმის ზრდის ხელშესაწყობად.

ნაბიჯი 2: დამუშავება ანტიმიკრობული აგენტებით

• მოამზადეთ ანტიმიკრობული ხსნარები:
  მოამზადეთ სხვადასხვა კონცენტრაციის ანტიმიკრობული ხსნარები ახალ საკვებ არეში.
  მოაქციეთ ბიოფილმები ანტიმიკრობული აგენტების ზემოქმედების ქვეშ:
  ამოიღეთ წკირებიანი თავსახური ბაქტერიული კულტურიდან და გაავლეთ სტერილურ ფიზიოლოგიურ ხსნარში ან PBS-ში პლანქტონური უჯრედების მოსაშორებლად.
  მოათავსეთ წკირებიანი თავსახური ახალ 96-ფოსოიან ფირფიტაში, რომელიც შეიცავს ანტიმიკრობულ ხსნარებს.
• ფირფიტის ინკუბაცია:
  ინკუბაცია განსაზღვრული პერიოდის განმავლობაში (მაგ., 24 საათი) ანტიმიკრობული ზემოქმედების უზრუნველსაყოფად.

ნაბიჯი 3: სონიკაცია 96-ფოსოიანი ფირფიტის სონიკატორით UIP400MTP

სონიკაციის ეტაპი გადამწყვეტია ბიოფილმების წკირებიანი თავსახურებიდან მოსაცილებლად მათი სიცოცხლისუნარიანობის შესაფასებლად. UIP400MTP სონიკატორის გამოყენებისას მიჰყევით ამ ნაბიჯებს:

1. მოამზადეთ კონფიგურაცია:
   შეავსეთ ახალი 96-ფოსოიანი ფირფიტის თითოეული ფოსო აღდგენის არით (მაგ., ნეიტრალიზებელი ბულიონით ან ახალი საკვები არით).
2. გადაიტანეთ წკირებიანი თავსახური:
   ამოიღეთ წკირებიანი თავსახური ანტიმიკრობული დამუშავების ფირფიტიდან.
   გაავლეთ წკირებიანი თავსახური სტერილურ ფიზიოლოგიურ ხსნარში ან PBS-ში ნარჩენი ანტიმიკრობული აგენტების მოსაშორებლად.
3. მოათავსეთ ფირფიტა და სონიკატორი:
   მიამაგრეთ წკირებიანი თავსახური აღდგენის არის შემცველ ფირფიტას.
   მოათავსეთ აღდგენის არის ფირფიტა UIP400MTP სონიკატორის პლატფორმაზე და დარწმუნდით, რომ ფირფიტა ცენტრშია და სტაბილურია.
4. დაარეგულირეთ სონიკაციის პარამეტრები:
   დააყენეთ სონიკაციის პარამეტრები UIP400MTP-ზე (პარამეტრები შეიძლება მორგებულ იქნეს ბიოფილმზე):
   ამპლიტუდა: 70–100%.
   სონიკაციის დრო: 1–3 წუთი (დაარეგულირეთ ბიოფილმის სიმტკიცის მიხედვით) ციკლურ რეჟიმში.
5. სონიკაცია:
   დაიწყეთ სონიკაციის პროცესი. ულტრაბგერითი ვიბრაცია ბიოფილმებს წკირების ზედაპირებიდან მოაცილებს და აღდგენის არეში გადაიტანს.
6. პროცესის მონიტორინგი:
   გამოიყენეთ მიერთებადი ტემპერატურის სენსორი ფოსოებში ნიმუშის ტემპერატურის მონიტორინგისთვის. UIP400MTP შეიძლება დაუკავშირდეს ლაბორატორიულ ჩილერს გაგრილებისთვის.
7. სონიკაციის შემდგომი მოპყრობა:
   დაუყოვნებლივ გადაიტანეთ აღდგენის არე (რომელიც ახლა შეიცავს მოხსნილ ბიოფილმებს) ახალ სტერილურ ფირფიტაში შემდგომი ანალიზისთვის.

(A) ფირფიტა, რომელიც შეიცავს TSB-ს 2% გლუკოზით და გამოიყენება ბიოფილმის ფორმირებისთვის, უჯრედების აღდგენისთვის და
MIC და MBCB-ის განსაზღვრისთვის; (B) თავსახური წკირებით სტაფილოკოკური ბიოფილმების ფორმირებისთვის. MIC და MBCB-ის განსაზღვრა; (B) თავსახური წკირებით სტაფილოკოკური ბიოფილმების ფორმირებისთვის.
წკირებზე წარმოქმნილი ბიოფილმის უჯრედები მოცილდა სონიკაციით (Hielscher Ultrasound Technology) 5 წუთის განმავლობაში 96-ფოსოიან ფირფიტებში, რომლებიც შეიცავდა ახალ საკვებ არეს უჯრედების აღდგენისთვის.
(სურათი და კვლევა: ©de Oliveira et al., 2016)

ნაბიჯი 4: სიცოცხლისუნარიანობის შეფასება

მოხსნილი ბიოფილმების დათესვა და კულტივირება:

1. გააკეთეთ აღდგენის არის სერიული განზავებები და დათესეთ აგარზე კოლონიაწარმომქმნელი ერთეულების (CFU) დასათვლელად.
   ალტერნატიულად, გამოიყენეთ კოლორიმეტრიული ან ფლუორესცენციაზე დაფუძნებული სიცოცხლისუნარიანობის ანალიზი.
2. შედეგების აღრიცხვა:
   განსაზღვრეთ MBEC როგორც ანტიმიკრობული აგენტის ყველაზე დაბალი კონცენტრაცია, რომელმაც გააქრო ბიოფილმის გამოვლენადი სიცოცხლისუნარიანობა.

დიზაინი, წარმოება და კონსულტაცია – გერმანიაში შექმნილი ხარისხი

Hielscher-ის ულტრაბგერითი აპარატები ცნობილია უმაღლესი ხარისხითა და დიზაინის სტანდარტებით. გამძლეობა და მარტივი ექსპლუატაცია უზრუნველყოფს ჩვენი ულტრაბგერითი აპარატების უპრობლემო ინტეგრაციას სამრეწველო ობიექტებში. Hielscher-ის სონიკატორები ადვილად უმკლავდება მძიმე პირობებსა და მომთხოვნ გარემოს.

Hielscher Ultrasonics არის ISO-სერტიფიცირებული კომპანია და განსაკუთრებულ ყურადღებას უთმობს მაღალი წარმადობის ულტრაბგერით აპარატებს, რომლებიც გამოირჩევა უახლესი ტექნოლოგიითა და გამოყენების სიმარტივით. რა თქმა უნდა, Hielscher-ის ულტრაბგერითი აპარატები შეესაბამება CE-ის მოთხოვნებს და აკმაყოფილებს UL, CSA და RoHs-ის მოთხოვნებს.

წაიკითხეთ აქ, თუ როგორ გამოიყენება UIP400MTP ბიოფილმის მოსახსნელად, როგორც ნიმუშის მომზადების ეტაპი ASTM E2799 პროტოკოლში, რომელიც განკუთვნილია სადეზინფექციო საშუალების ეფექტურობის შესამოწმებლად Pseudomonas aeruginosa ბიოფილმის წინააღმდეგ MBEC ანალიზის გამოყენებით.