Preparasi Ultrasonik Serum Kaya Trombosit

• Plasma kaya trombosit (PRP) adalah plasma darah yang telah diperkaya dengan trombosit, yang digunakan untuk perawatan medis dan estetika.
• Lisis dan pengondisian ultrasonik merupakan metode yang sangat efektif untuk menyiapkan plasma kaya trombosit.
• Hielscher Ultrasonics menawarkan berbagai sistem ultrasonik yang sesuai dengan persyaratan pengolahan darah (misalnya untuk preparasi di dalam dan di luar ruang bersih).

Serum Kaya Trombosit

Sonikasi merupakan metode yang andal dan mudah untuk melisis trombosit dalam serum darah autolog guna melepaskan faktor pertumbuhan. Fraksi yang berasal dari trombosit – juga dikenal sebagai serum autolog terkondisi (ACS) – digunakan untuk perbaikan jaringan atau perawatan estetika. Untuk memperoleh hasil optimal, PRP diperkaya sebelum disuntikkan.
Untuk menyiapkan plasma yang diperkaya dengan faktor pertumbuhan sel, sonikasi merupakan metode yang sangat efektif dan efisien untuk melisis membran sel dan melepaskan hampir seluruh faktor pertumbuhan sel dari trombosit. Dengan lisis dan pengondisian ultrasonik, bahkan darah yang diberi antikoagulan dapat digunakan.
Pengondisian PRP melalui sonikasi merupakan cara yang praktis dan hemat biaya untuk memperoleh faktor pertumbuhan yang terkonsentrasi.

Lisis ultrasonik plasma kaya trombosit (PRP)

Efek Lisis Ultrasonik

Perlakuan ultrasonik pada serum darah menghasilkan lisis trombosit yang homogen untuk melepaskan faktor pertumbuhan yang terperangkap (faktor pertumbuhan AB (PDGF-AB), faktor pertumbuhan AA (PDGF-AA), faktor pertumbuhan BB (PDGF-BB), faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF), faktor pertumbuhan transformasi β (TGF-β), faktor pertumbuhan epidermal (EGF), faktor pertumbuhan mirip insulin (IGF), faktor pertumbuhan sel epitel ECGF dan faktor pertumbuhan fibroblas (FGF)). Trombosit dan granula alfanya didisrupsi melalui sonikasi, dengan memanfaatkan fenomena kavitasi akustik. Penggunaan kavitasi ultrasonik untuk lisis trombosit mengurangi kemungkinan dampak negatif metode pembekuan–pencairan berulang terhadap aktivitas faktor pertumbuhan.

Protokol Preparasi PRP Ultrasonik

Sekitar 16mL sampel darah autolog yang baru diambil dibolak-balik perlahan sebanyak 8–10 kali dalam tabung agar darah dan antikoagulan tercampur dengan baik. Setelah itu, sampel disentrifugasi pada 1800 g selama 20 menit pada suhu ruang. Setelah sentrifugasi, trombosit dan sel mononuklear membentuk lapisan keputihan di bagian bawah lapisan plasma, yang dikenal sebagai plasma kaya trombosit (PRP). Lapisan atas dikenal sebagai plasma miskin trombosit (PPP). Sel mononuklear dapat dihilangkan atau dibiarkan tetap dalam sampel. Sering kali, sel mononuklear dibiarkan tetap dalam sampel PRP untuk menghindari langkah tambahan yang berisiko menimbulkan kontaminasi.
Catatan: Perlakuan ultrasonik pada PRP autolog harus dilakukan dalam kondisi steril.
PRP dan PPP dipisahkan dan dikumpulkan. Ke dalam PPP ditambahkan 1,5mL larutan kalsium klorida 10%, sedangkan ke dalam PRP ditambahkan 0,5mL etanol 5%. Kedua suspensi digoyang perlahan dan didiamkan selama 5 menit pada suhu ruang. Terakhir, 1mL PPP ditambahkan ke dalam suspensi PRP dan didiamkan hingga terbentuk bekuan fibrin.
Perlakuan ultrasonik: Karena gel trombosit yang terbentuk berfungsi sebagai tempat penyimpanan faktor pertumbuhan yang dilepaskan, gel fibrin harus didisrupsi untuk melepaskan faktor pertumbuhan yang tersedia. Parameter untuk lisis ultrasonik dan pelepasan faktor pertumbuhan adalah sebagai berikut: Sonikasi sampel dalam tabung menggunakan UP200Ht atau UP200St (200W, 26kHz) dengan sonotrode S26d2. Untuk menghindari pemanasan berlebih pada sampel darah, sonikasi dapat dilakukan dalam siklus pulsa (misalnya aktif selama 10 detik, nonaktif selama 30 detik). Sampel harus ditempatkan di atas es untuk pendinginan agar suhu secara optimal dipertahankan antara 2–5°C. Setelah sonikasi, sampel disentrifugasi pada 16.000 g selama 5 menit pada suhu ruang. Supernatan dikumpulkan dan dapat disimpan pada -70°C.
Konsentrasi trombosit dalam fraksi PRP meningkat 1,7–4,5 kali lipat dengan metode sonikasi dibandingkan dengan jumlah trombosit rata-rata dalam darah utuh yang dilaporkan dalam literatur.

PRP telah dikombinasikan dengan terapi sel punca yang berasal dari jaringan adiposa (sel punca autolog yang dilepaskan secara ultrasonik dari jaringan adiposa, dicampur dengan PRP, dan disuntikkan kembali ke jaringan pasien untuk perbaikan).

Peralatan Ultrasonik

Hielscher Ultrasonics merupakan ahli dalam teknologi ultrasonik yang canggih dan andal. Perangkat ultrasonik kami digunakan di seluruh dunia untuk lisis, ekstraksi, dan preparasi sampel – secara langsung maupun tidak langsung. Dapat disterilkan dengan autoklaf merupakan ciri aksesori yang, bersama aksesori sekali pakai , memastikan perlakuan bebas kontaminasi pada sampel darah autolog. Sebagian besar sistem kami dapat digunakan untuk lisis ultrasonik sel punca dan PRP, sehingga perangkat ultrasonik kami menjadi lebih efisien secara ekonomis.
Tabel di bawah ini mencantumkan perangkat ultrasonik kami yang sesuai untuk preparasi plasma kaya trombosit beserta volume sampel yang direkomendasikan untuk masing-masing perangkat. Sonikator ultrasonik yang lebih besar dan sistem yang disesuaikan dengan kebutuhan juga tersedia.

Hubungi kami hari ini! Kami akan dengan senang hati membantu Anda menemukan perangkat ultrasonik yang optimal!