Protokol Kultivasi dan Pelepasan Biofilm Staphylococcus

Metode yang terstandardisasi sangat penting untuk memperoleh hasil penelitian yang andal. Di sini Anda dapat menemukan protokol kultivasi dan pelepasan biofilm stafilokokus. Protokol ini berfokus pada penyiapan sampel yang efisien dengan kapasitas pemrosesan sampel yang tinggi menggunakan sonikator pelat multisumur UIP400MTP untuk pelepasan biofilm yang efisien dengan kapasitas pemrosesan sampel yang tinggi pada pelat 96 sumur. Protokol ini juga mencakup langkah-langkah utama untuk kultivasi, pencucian, dan visualisasi biofilm, dengan fokus pada meminimalkan variabilitas dan memastikan reproduktibilitas.

Penelitian Biofilm Staphylococcus dan Antibiotik

Biofilm Staphylococcus berperan penting dalam infeksi persisten karena resistensinya terhadap antibiotik dan respons imun. Pembentukan biofilm menyediakan lingkungan pelindung bagi bakteri, sehingga infeksi sulit diobati. Penelitian biofilm sering berfokus pada pemahaman mengenai pembentukan, perilaku, dan kerentanannya terhadap antimikroba, dengan penekanan pada metode berkapasitas pemrosesan sampel yang tinggi untuk mengefisienkan alur kerja eksperimen.
Sonikator pelat multisumur UIP400MTP menawarkan keunggulan yang signifikan dalam penelitian biofilm dengan memungkinkan pelepasan biofilm dari pelat 96 sumur secara cepat dan efisien. Perangkat ini memberikan energi ultrasonik yang seragam ke semua sumur, sehingga memastikan hasil yang konsisten sekaligus meminimalkan variabilitas.

Protokol untuk Kultivasi dan Pelepasan Biofilm Staphylococcus

Di bawah ini, kami memandu Anda langkah demi langkah melalui proses kultivasi dan pelepasan biofilm stafilokokus. Sebagai contoh langkah analisis, kami menunjukkan cara mengukur secara kuantitatif biomassa hasil kultivasi dengan spektrofotometri melalui pewarnaan kristal violet.

Kultivasi Biofilm Staphylococcus

Bahan dan Peralatan yang Diperlukan:

• Pelat mikrotiter polistirena steril 96 sumur dengan dasar datar, yang telah diberi perlakuan untuk kultur jaringan, lengkap dengan penutup
• Kaldu kedelai triptik (TSB) dengan glukosa 0,25%
• Kabinet keselamatan biologis

Langkah-langkah:

1. Siapkan lingkungan kerja steril di dalam kabinet keselamatan biologis untuk meminimalkan kontaminasi.
2. Tambahkan TSB yang mengandung glukosa 0,25% ke dalam sumur pelat mikrotiter. TSB tanpa glukosa umumnya tidak mendukung pembentukan biofilm dan hanya boleh digunakan sebagai kontrol jika diperlukan.
3. Inokulasikan sumur dengan galur bakteri yang disiapkan sebagaimana dijelaskan di bawah ini:
4. Siapkan suspensi bakteri, dan pastikan tidak ada gugus sel yang sudah terbentuk sebelumnya dengan menghomogenkan suspensi menggunakan sonikasi atau dengan memecah gugus tersebut menggunakan jarum 23-gauge dan pencampuran singkat menggunakan vorteks.
5. Tutup rapat pelat dengan penutupnya dan inkubasi pada kondisi optimal untuk pembentukan biofilm (misalnya, 37°C selama 24 jam).
6. Lakukan eksperimen dalam tiga ulangan untuk setiap galur bakteri (tiga sumur per galur) guna memastikan keandalan.
7. Alokasikan enam sumur per pelat untuk kontrol negatif. Hingga 30 galur dapat diuji pada setiap pelat 96 sumur.

Visualisasi dan Pencucian Biofilm

1. Setelah inkubasi, buang medium dengan hati-hati agar tidak mengganggu biofilm.
2. Cuci setiap sumur empat kali dengan larutan garam fisiologis untuk menghilangkan bakteri planktonik.
3. Periksa dasar sumur untuk melihat bercak putih yang menandakan keberadaan biofilm.

Pelepasan Biofilm Menggunakan Sonikator Pelat Multisumur UIP400MTP

Penyiapan Perangkat dan Parameter:

• Sonikator pelat multisumur UIP400MTP
• Pengaturan operasi: amplitudo 60%, mode siklus dengan 60 detik AKTIF / 30 detik NONAKTIF

Langkah-langkah:

1. Letakkan pelat mikrotiter yang telah dicuci pada platform UIP400MTP.
2. Lakukan sonikasi pada sampel menggunakan pengaturan yang direkomendasikan (amplitudo 60%, 60 detik AKTIF, 30 detik NONAKTIF). Sesuaikan pengaturan dengan galur bakteri.
3. Mulai proses sonikasi untuk melepaskan biofilm. Gelombang ultrasonik merusak matriks biofilm, sehingga melepaskan bakteri yang melekat.
4. UIP400MTP memastikan paparan yang seragam pada semua sumur untuk menghasilkan pelepasan yang konsisten.

Langkah Analisis: Kuantifikasi Biomassa Biofilm Staphylococcus yang Telah Dilepaskan Menggunakan Kristal Violet (CV)

Bahan dan Peralatan yang Diperlukan:

• Larutan kristal violet (CV) 0,1%
• Etanol 95% atau asam asetat 30% (untuk pelarutan)
• Pembaca pelat mikro yang mampu melakukan pembacaan pada 570 nm
• Pelat mikrotiter steril untuk pewarnaan

Langkah-langkah:

1. Penyiapan Pelat Pewarnaan: Pindahkan 100 µL suspensi biofilm yang telah dilepaskan dari setiap sumur pelat yang telah disonikasi ke sumur yang bersesuaian pada pelat mikrotiter 96 sumur yang bersih dan steril. Langkah ini memastikan lingkungan yang bersih dan seragam untuk pewarnaan.
2. Pewarnaan Biofilm yang Telah Dilepaskan: Tambahkan 150 µL larutan kristal violet 0,1% ke setiap sumur yang berisi suspensi biofilm yang telah dilepaskan. Campurkan perlahan menggunakan pipet untuk memastikan suspensi biofilm dan kristal violet tercampur merata.
3. Inkubasi: Inkubasi pelat pada suhu ruang selama 15 menit agar kristal violet dapat mewarnai biomassa secara efektif.
4. Pencucian: Setelah inkubasi, buang larutan kristal violet dari sumur dengan hati-hati tanpa mengganggu biomassa. Cuci setiap sumur tiga kali dengan larutan garam fisiologis steril untuk menghilangkan zat warna yang tidak terikat.
5. Pengeringan: Biarkan pelat mengering di udara pada suhu ruang atau di bawah tudung aliran udara steril. Hindari pemanasan karena dapat mengubah hasil.
6. Pelarutan: Tambahkan 200 µL etanol 95% (atau asam asetat 30%, sesuai praktik standar laboratorium) ke setiap sumur untuk melarutkan kristal violet yang terikat. Campurkan perlahan dengan menggunakan pipet atau menggoyangkan pelat selama 10 menit pada suhu ruang.
7. Pengukuran: Ukur densitas optik (OD) larutan kristal violet yang telah dilarutkan pada 570 nm menggunakan pembaca pelat mikro.
8. Analisis Data: Kurangi nilai sumur eksperimen dengan nilai rata-rata OD570 kontrol negatif (sumur berisi TSB tanpa inokulum bakteri) untuk memperhitungkan pewarnaan latar belakang. Catat dan analisis data.

Catatan: Lakukan eksperimen dalam tiga ulangan untuk setiap kondisi guna memastikan reproduktibilitas. Pastikan penanganan kristal violet dan etanol dilakukan dengan benar, sesuai protokol keselamatan dan pembuangan.
 

Sekilas manfaat utama UIP400MTP:

• Pemrosesan dengan Kapasitas Pemrosesan Sampel yang Tinggi: Dirancang khusus untuk pelat multisumur, sehingga Anda dapat memproses beberapa sampel secara bersamaan.
• Distribusi Ultrasonik yang Seragam: Memastikan intensitas ultrasonik yang sama di seluruh sumur, sehingga memberikan hasil yang konsisten pada semua sampel.
• Gunakan Pelat Standar Apa Pun: UIP400MTP dapat digunakan untuk pelat multisumur standar apa pun, cawan Petri, dan rak tabung. Tidak memerlukan pelat khusus produsen yang mahal!
• Antarmuka yang Ramah Pengguna: Mudah disiapkan dan dikendalikan, sehingga menjadi alat yang sangat baik untuk meningkatkan produktivitas laboratorium. Pengaturan yang dapat diprogram dan otomatisasi mempermudah standardisasi proses!