ASTM E2799-22 Protokol untuk Evaluasi Antimikroba

Hielscher UIP400MTP adalah sonicator pelat multi-sumur yang kuat dan efisien yang dirancang untuk merampingkan langkah sonikasi dalam protokol ASTM E2799-22. Dengan memberikan energi ultrasonik yang seragam di seluruh pelat mikrotiter, UIP400MTP memastikan pelepasan biofilm yang konsisten dan andal dari tutup pasak tanpa merusak sel atau mengorbankan integritas sampel. Kemampuan throughput tinggi dan pengoperasian yang ramah pengguna secara signifikan mengurangi waktu pemrosesan sekaligus meningkatkan reproduktifitas, menjadikannya solusi ideal untuk laboratorium yang melakukan uji viabilitas biofilm dan pengujian kemanjuran antimikroba.

ASTM E2799

ASTM E2799 adalah metode pengujian standar yang dirancang untuk mengevaluasi kemanjuran agen antimikroba terhadap biofilm, khususnya berfokus pada Pseudomonas aeruginosa. Biofilm adalah komunitas mikroba kompleks yang menempel pada permukaan dan menunjukkan resistensi yang tinggi terhadap perawatan antimikroba, menjadikannya tantangan yang signifikan dalam konteks perawatan kesehatan, industri, dan lingkungan. Metode ini menggunakan uji Konsentrasi Pemberantasan Biofilm Minimum (MBEC) untuk memberikan kerangka kerja yang andal dan dapat direproduksi untuk menguji disinfektan dalam kondisi biofilm yang realistis.

Bagaimana Sonikasi berkontribusi pada ASTM E2799?

Sonikasi memainkan peran penting dalam protokol ASTM E2799 dengan memfasilitasi pelepasan biofilm dari permukaan uji, memastikan penilaian yang akurat dari kelangsungan hidup mikroba setelah perawatan. Dengan menggunakan energi ultrasonik yang terkontrol, protokol ini mencapai gangguan biofilm yang efisien dan konsisten tanpa merusak sel, memungkinkan hasil yang tepat dan dapat direproduksi. Hal ini menjadikan ASTM E2799 alat penting untuk memajukan penelitian biofilm dan mengembangkan strategi antimikroba yang efektif.

Cara Menjalankan Uji MBEC sesuai dengan ASTM E2799-22

Protokol ASTM E2799-22 menguraikan langkah-langkah untuk mengevaluasi kemanjuran agen antimikroba terhadap biofilm. Saat menggunakan isonator pelat mikrotiter Hielscher UIP400MTP, protokol dapat disesuaikan untuk menggabungkan metode sonikasi canggih ini untuk detasemen biofilm. Di bawah ini adalah deskripsi langkah-langkah yang disesuaikan untuk menggunakan UIP400MTP sonicator microplate:

1. Persiapan Biofilm
   Siapkan pelat mikrotiter 96 sumur steril dengan tutup pasak yang dapat dilepas.
   Inokulasi sumur dengan suspensi bakteri standar dalam media pertumbuhan yang sesuai.
   Tempatkan tutup pasak ke piring, pastikan pasak benar-benar terendam dalam suspensi bakteri.
   Inkubasi pelat dalam kondisi terkontrol (misalnya, suhu dan waktu) untuk memungkinkan pembentukan biofilm pada pasak.
2. Pengobatan dengan Agen Antimikroba
   Setelah pembentukan biofilm, ganti media dengan media segar yang mengandung agen antimikroba uji pada konsentrasi yang berbeda.
   Pasang kembali tutup pasak dan inkubasi dalam kondisi yang ditentukan dalam desain pengujian.
3. Persiapan Detasemen Biofilm
   Setelah perawatan, bilas tutup pasak dengan merendamnya dalam larutan bilas steril untuk menghilangkan sisa agen antimikroba dan sel planktonik yang melekat longgar.
4. Detasemen Biofilm Menggunakan Sonicator UIP400MTP
   Siapkan piring mikrotiter 96 sumur segar yang berisi media pemulihan (misalnya, kaldu penetral).
   Lepaskan biofilm dengan menempatkan tutup pasak ke dalam sumur pelat media pemulihan.
   Masukkan pelat ke dalam sonicator UIP400MTP, pastikan tutup dan pelat sejajar dengan benar.
   Atur sonicator ke amplitudo 70% -80% dan sonicate selama 3-4 menit pada mode siklus, untuk memastikan detasemen biofilm yang konsisten tanpa lisis sel.
5. Penilaian Viabilitas Biofilm
   Setelah sonikasi, proses media pemulihan yang mengandung sel biofilm yang terlepas menggunakan teknik mikrobiologi atau analitik standar, seperti:
   • Jumlah unit pembentuk koloni (CFU): Lakukan pengenceran serial dan pelat pada agar untuk pencacahan sel yang layak.
   • Pengukuran kerapatan optik (OD): Gunakan analisis spektrofotometri untuk menilai kerapatan sel.
   • Uji viabilitas berbasis fluoresensi: Mengukur sel hidup dan mati menggunakan pewarna fluoresen.
6. Analisis data
   Bandingkan data viabilitas biofilm yang diolah dan tidak diolah untuk menentukan kemanjuran agen antimikroba.
   Hitung konsentrasi pemberantasan biofilm minimum (MBEC) berdasarkan konsentrasi yang diperlukan untuk menghilangkan sel biofilm yang layak.
7. Kontrol kualitas
   Pastikan kondisi sonikasi yang konsisten dengan mengkalibrasi UIP400MTP secara teratur dan memverifikasi bahwa proses detasemen biofilm tidak menghasilkan lisis atau kerusakan sel yang signifikan.
   Sertakan kontrol yang sesuai, seperti biofilm yang tidak diolah dan kosong hanya sedang, untuk memvalidasi hasilnya.

Sel-sel biofilm yang terbentuk pada pin dikeluarkan oleh sonikasi (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Jerman, UIP250MTP) selama 5 menit dalam pelat 96 sumur yang mengandung media kultur segar untuk pemulihan sel.
(Gambar dan studi: ©de Oliveira et al., 2016)

Dengan mengintegrasikan UIP400MTP ke dalam alur kerja ASTM E2799-22, proses detasemen biofilm dioptimalkan untuk konsistensi, efisiensi, dan aplikasi throughput tinggi.