Protokol ASTM E2799-22 untuk Evaluasi Antimikroba

Hielscher UIP400MTP adalah sonikator pelat multisumur yang bertenaga dan efisien, dirancang untuk mempermudah tahap sonikasi dalam protokol ASTM E2799-22. Dengan menyalurkan energi ultrasonik secara seragam ke seluruh pelat mikrotiter, UIP400MTP memastikan pelepasan biofilm dari tutup berpasak secara konsisten dan andal tanpa merusak sel atau mengganggu integritas sampel. Kapasitas pemrosesan sampelnya yang tinggi dan pengoperasiannya yang mudah secara signifikan mengurangi waktu pemrosesan sekaligus meningkatkan reproduktibilitas, sehingga menjadikannya solusi ideal bagi laboratorium yang melakukan uji viabilitas biofilm dan pengujian efikasi antimikroba.

ASTM E2799

ASTM E2799 adalah metode uji terstandar yang dirancang untuk mengevaluasi efikasi agen antimikroba terhadap biofilm, dengan fokus khusus pada Pseudomonas aeruginosa. Biofilm merupakan komunitas mikroba kompleks yang melekat pada permukaan dan menunjukkan peningkatan resistansi terhadap perlakuan antimikroba, sehingga menjadi tantangan besar dalam konteks layanan kesehatan, industri, dan lingkungan. Metode ini menggunakan uji Konsentrasi Eradikasi Biofilm Minimum (MBEC) untuk menyediakan kerangka kerja yang andal dan dapat direproduksi bagi pengujian disinfektan dalam kondisi biofilm yang realistis.

Bagaimana Sonikasi Berkontribusi terhadap ASTM E2799?

Sonikasi berperan penting dalam protokol ASTM E2799 dengan memfasilitasi pelepasan biofilm dari permukaan uji, sehingga memastikan penilaian viabilitas mikroba yang akurat setelah perlakuan. Dengan menggunakan energi ultrasonik yang terkontrol, protokol ini menghasilkan disrupsi biofilm yang efisien dan konsisten tanpa merusak sel, sehingga memungkinkan hasil yang presisi dan dapat direproduksi. Hal ini menjadikan ASTM E2799 alat penting untuk memajukan penelitian biofilm dan mengembangkan strategi antimikroba yang efektif.

Cara Melakukan Uji MBEC Sesuai dengan ASTM E2799-22

Protokol ASTM E2799-22 menguraikan langkah-langkah untuk mengevaluasi efikasi agen antimikroba terhadap biofilm. Saat menggunakan sonikator pelat mikrotiter Hielscher UIP400MTP, protokol dapat disesuaikan untuk memasukkan metode sonikasi canggih ini guna melepaskan biofilm. Berikut adalah uraian langkah-langkah yang disesuaikan dengan penggunaan sonikator pelat mikro UIP400MTP:

1. Penyiapan Biofilm
   Siapkan pelat mikrotiter 96 sumur steril dengan tutup berpasak yang dapat dilepas.
   Inokulasikan sumur dengan suspensi bakteri terstandar dalam medium pertumbuhan yang sesuai.
   Pasang tutup berpasak pada pelat, dan pastikan pasak terendam sepenuhnya dalam suspensi bakteri.
   Inkubasi pelat dalam kondisi terkontrol (misalnya, suhu dan waktu) agar biofilm dapat terbentuk pada pasak.
2. Perlakuan dengan Agen Antimikroba
   Setelah biofilm terbentuk, ganti medium dengan medium segar yang mengandung agen antimikroba uji pada konsentrasi yang berbeda.
   Pasang kembali tutup berpasak dan inkubasi dalam kondisi yang ditetapkan dalam rancangan pengujian.
3. Persiapan untuk Pelepasan Biofilm
   Setelah perlakuan, bilas tutup berpasak dengan merendamnya dalam larutan pembilas steril untuk menghilangkan sisa agen antimikroba dan sel planktonik yang melekat lemah.
4. Pelepasan Biofilm Menggunakan Sonikator UIP400MTP
   Siapkan pelat mikrotiter 96 sumur baru yang berisi medium pemulihan (misalnya, kaldu penetral).
   Lepaskan biofilm dengan menempatkan tutup berpasak ke dalam sumur pelat yang berisi medium pemulihan.
   Masukkan pelat ke dalam sonikator UIP400MTP, dan pastikan tutup serta pelat sejajar dengan benar.
   Atur sonikator pada amplitudo 70%–80% dan lakukan sonikasi selama 3–4 menit dalam mode siklus untuk memastikan pelepasan biofilm yang konsisten tanpa lisis sel.
5. Penilaian Viabilitas Biofilm
   Setelah sonikasi, proses medium pemulihan yang mengandung sel biofilm yang telah dilepaskan menggunakan teknik mikrobiologi atau analitik standar, seperti:
   • Penghitungan unit pembentuk koloni (CFU): Lakukan pengenceran berseri dan tanam pada agar untuk menghitung sel viabel.
   • Pengukuran densitas optik (OD): Gunakan analisis spektrofotometri untuk menilai kepadatan sel.
   • Uji viabilitas berbasis fluoresensi: Kuantifikasi sel hidup dan mati menggunakan pewarna fluoresen.
6. Analisis Data
   Bandingkan data viabilitas biofilm yang diberi perlakuan dan yang tidak diberi perlakuan untuk menentukan efikasi agen antimikroba.
   Hitung konsentrasi eradikasi biofilm minimum (MBEC) berdasarkan konsentrasi yang diperlukan untuk menghilangkan sel biofilm yang viabel.
7. Pengendalian Mutu
   Pastikan kondisi sonikasi yang konsisten dengan mengalibrasi UIP400MTP secara berkala dan memverifikasi bahwa proses pelepasan biofilm tidak menyebabkan lisis atau kerusakan sel yang signifikan.
   Sertakan kontrol yang sesuai, seperti biofilm tanpa perlakuan dan blanko yang hanya berisi medium, untuk memvalidasi hasil.

Sel biofilm yang terbentuk pada pasak dilepaskan melalui sonikasi (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Jerman, UIP250MTP) selama 5 min dalam pelat 96 sumur yang berisi medium kultur segar untuk pemulihan sel.
(Gambar dan penelitian: ©de Oliveira et al., 2016)

Dengan mengintegrasikan UIP400MTP ke dalam alur kerja ASTM E2799-22, proses pelepasan biofilm dioptimalkan untuk konsistensi, efisiensi, dan aplikasi dengan kapasitas pemrosesan sampel yang tinggi.