Protokol Uji MBEC menggunakan UIP400MTP Plate Sonicator 96 sumur
Uji MBEC digunakan untuk menentukan konsentrasi agen antimikroba yang diperlukan untuk menghilangkan biofilm yang terbentuk pada tutup pasak. Untuk menilai kelayakan biofilm, biofilm harus terlebih dahulu dilepas dari tutup pasak pelat 96 sumur. Sonikasi adalah metode yang paling andal dan efisien untuk detasemen ini. UIP400MTP sonicator pelat multi-sumur dirancang khusus untuk memproses pelat uji dengan efisiensi dan kenyamanan maksimum, merampingkan dan mempercepat pengujian MBEC throughput tinggi.
Sonikasi untuk Detasemen Biofilm
Sonikasi adalah langkah penting dalam uji Konsentrasi Pemberantasan Biofilm Minimum (MBEC), memungkinkan penghilangan sel biofilm yang efektif dari perlekatan permukaannya. Biofilm adalah komunitas mikroorganisme terstruktur yang terbungkus dalam matriks ekstraseluler, yang membuatnya secara signifikan lebih tahan terhadap agen antimikroba dibandingkan dengan sel planktonik. Selama pengujian MBEC, sonikasi menggunakan gelombang ultrasonik untuk menghasilkan kavitasi terkontrol, mengganggu matriks biofilm dan melepaskan sel yang tertanam ke dalam suspensi. Langkah ini memastikan bahwa sel biofilm tersebar secara merata dalam media pemulihan, memfasilitasi penilaian viabilitas yang akurat melalui metode pelapisan, pengenceran, atau spektrofotometri. Tanpa detasemen biofilm yang tepat, komponen matriks sisa dapat melindungi sel, yang menyebabkan meremehkan kemanjuran antimikroba. Oleh karena itu, sonikasi sangat diperlukan untuk mendapatkan nilai MBEC yang andal dan dapat direproduksi, yang mencerminkan potensi pemberantasan sebenarnya dari agen yang diuji. Sonicator pelat multi-sumur UIP400MTP memungkinkan persiapan sampel throughput tinggi yang mudah di pelat pengujian.
Sonikator pelat multi-sumur UIP400MTP memfasilitasi persiapan sampel throughput tinggi dalam pelat pengujian.
Protokol Uji Konsentrasi Pemberantasan Biofilm Minimum (MBEC)
Langkah 1: Pembentukan Biofilm
- Siapkan suspensi bakteri:
Tumbuhkan bakteri dalam media yang sesuai untuk pertumbuhan fase log.
Encerkan kultur bakteri ke kerapatan optik yang ditentukan (misalnya, OD600 ~ 0,1). - Inokulasi pelat 96 sumur:
Tambahkan suspensi bakteri (misalnya, 150–200 μL) ke dalam setiap sumur pelat mikrotiter standar 96 sumur. - Pasang tutup pasak:
Tempatkan tutup pasak ke pelat yang diinokulasi untuk memungkinkan pembentukan biofilm pada permukaan pasak. - Inkubasi piring:
Inkubasi pengaturan pada suhu yang sesuai (misalnya, 37°C) selama 24-48 jam tanpa mengocok untuk mendorong pertumbuhan biofilm.
Langkah 2: Pengobatan dengan Agen Antimikroba
- Siapkan larutan antimikroba:
Siapkan berbagai konsentrasi antimikroba dalam media segar.
Memaparkan biofilm ke agen antimikroba:
Lepaskan tutup pasak dari kultur bakteri dan bilas dengan garam steril atau PBS untuk menghilangkan sel planktonik.
Tempatkan tutup pasak ke dalam pelat 96 sumur baru yang berisi larutan antimikroba. - Inkubasi piring:
Inkubasi selama jangka waktu tertentu (misalnya, 24 jam) untuk memungkinkan paparan antimikroba.
Sonicator pelat multi-sumur UIP400MTP untuk persiapan sampel throughput tinggi
Langkah 3: Sonikasi dengan Sonicator Plat 96-Sumur UIP400MTP
Langkah sonikasi sangat penting untuk melepaskan biofilm dari tutup pasak untuk menilai kelangsungan hidup. Ikuti langkah-langkah ini untuk sonicator UIP400MTP:
- Siapkan pengaturan:
Isi piring 96 sumur segar dengan media pemulihan (misalnya, kaldu penetral atau media pertumbuhan segar) di setiap sumur. - Pindahkan tutup pasak:
Lepaskan tutup pasak dari pelat perawatan antimikroba.
Bilas tutup pasak dengan garam steril atau PBS untuk menghilangkan sisa agen antimikroba. - Posisikan pelat dan sonikator:
Pasang tutup pasak ke pelat media pemulihan.
Tempatkan pelat media pemulihan ke platform sonicator UIP400MTP, pastikan pelat berada di tengah dan stabil. - Sesuaikan parameter sonikasi:
Atur parameter sonikasi di UIP400MTP (Pengaturan dapat disesuaikan dengan biofilm):
Amplitudo: 70–100%.
Waktu sonikasi: 1-3 menit (sesuaikan berdasarkan kekokohan biofilm) pada mode siklus. - Sonikat:
Mulai proses sonikasi. Getaran ultrasonik akan mengeluarkan biofilm dari permukaan pasak ke media pemulihan. - Pantau Prosesnya:
Gunakan sensor suhu yang dapat dicolokkan untuk memantau sample suhu di sumur. UIP400MTP dapat dihubungkan ke pendingin laboratorium untuk pendinginan. - Penanganan Pasca-Sonikasi:
Segera pindahkan media pemulihan (sekarang berisi biofilm yang terlepas) ke dalam pelat steril baru untuk analisis hilir.
(A) Pelat yang mengandung TSB dengan glukosa 2% yang digunakan untuk pembentukan biofilm, pemulihan sel, dan
penetapan MIC dan MBCB; (B) Tutup dengan pin untuk pembentukan biofilm stafilokokus. penetapan MIC dan MBCB; (B) Tutup dengan pin untuk pembentukan biofilm stafilokokus.
Sel-sel biofilm yang terbentuk pada pin dikeluarkan dengan sonikasi (Teknologi Ultrasound Hielscher) selama 5 menit dalam pelat 96 sumur yang mengandung media kultur segar untuk pemulihan sel.
(Gambar dan studi: ©de Oliveira et al., 2016)
Langkah 4: Penilaian Kelangsungan Hidup
Biofilm terpisah pelat dan kultur:
- Lakukan pengenceran serial media pemulihan dan pelat ke agar-agar untuk menghitung unit pembentuk koloni (CFU).
Atau, gunakan uji viabilitas berbasis kolorimetri atau fluoresensi. - Rekam hasil:
Tentukan MBEC sebagai konsentrasi antimikroba terendah yang memberantas viabilitas biofilm yang terdeteksi.
Desain, Manufaktur, dan Konsultasi – Kualitas Buatan Jerman
Ultrasonicators Hielscher terkenal dengan kualitas dan standar desainnya yang tertinggi. Ketahanan dan pengoperasian yang mudah memungkinkan integrasi ultrasonicator kami ke dalam fasilitas industri. Kondisi kasar dan lingkungan yang menuntut mudah ditangani oleh sonicator Hielscher.
Hielscher Ultrasonics adalah perusahaan bersertifikat ISO dan memberikan penekanan khusus pada ultrasonicators berkinerja tinggi yang menampilkan teknologi canggih dan keramahan pengguna. Tentu saja, ultrasonicators Hielscher sesuai dengan CE dan memenuhi persyaratan UL, CSA dan RoHs.
Sederhanakan persiapan sampel di pelat 96 sumur dan pelat uji Menggunakan Sonicator pelat multi-sumur UIP400MTP
Literatur / Referensi
- FactSheet UIP400MTP Multi-well Plate Sonicator – Non-Contact Sonicator – Hielscher Ultrasonics
- Dreyer J., Ricci G., van den Berg J., Bhardwaj V., Funk J., Armstrong C., van Batenburg V., Sine C., VanInsberghe M.A., Marsman R., Mandemaker I.K., di Sanzo S., Costantini J., Manzo S.G., Biran A., Burny C., Völker-Albert M., Groth A., Spencer S.L., van Oudenaarden A., Mattiroli F. (2024): Acute multi-level response to defective de novo chromatin assembly in S-phase. Molecular Cell 2024.
- Mochizuki, Chika; Taketomi, Yoshitaka; Irie, Atsushi; Kano, Kuniyuki; Nagasaki, Yuki; Miki, Yoshimi; Ono, Takashi; Nishito, Yasumasa; Nakajima, Takahiro; Tomabechi, Yuri; Hanada, Kazuharu; Shirouzu, Mikako; Watanabe, Takashi; Hata, Kousuke; Izumi, Yoshihiro; Bamba, Takeshi; Chun, Jerold; Kudo, Kai; Kotani, Ai; Murakami, Makoto (2024): Secreted phospholipase PLA2G12A-driven lysophospholipid signaling via lipolytic modification of extracellular vesicles facilitates pathogenic Th17 differentiation. BioRxiv 2024.
- Cosenza-Contreras M, Seredynska A, Vogele D, Pinter N, Brombacher E, Cueto RF, Dinh TJ, Bernhard P, Rogg M, Liu J, Willems P, Stael S, Huesgen PF, Kuehn EW, Kreutz C, Schell C, Schilling O. (2024): TermineR: Extracting information on endogenous proteolytic processing from shotgun proteomics data. Proteomics. 2024.
- De Oliveira A, Cataneli Pereira V, Pinheiro L, Moraes Riboli DF, Benini Martins K, Ribeiro de Souza da Cunha MDL (2016): Antimicrobial Resistance Profile of Planktonic and Biofilm Cells of Staphylococcus aureus and Coagulase-Negative Staphylococci. International Journal of Molecular Sciences 17(9):1423; 2016.
- Martins KB, Ferreira AM, Pereira VC, Pinheiro L, Oliveira A, Cunha MLRS (2019): In vitro Effects of Antimicrobial Agents on Planktonic and Biofilm Forms of Staphylococcus saprophyticus Isolated From Patients With Urinary Tract Infections. Frontiers in Microbiology 2019.
- Microplate Sonicator Validated in Peer-Reviewed Proteomics Study
Pertanyaan yang Sering Diajukan
Apa itu Uji MBEC?
Uji Konsentrasi Pemberantasan Biofilm Minimum (MBEC) adalah metode standar yang digunakan untuk menentukan konsentrasi terendah agen antimikroba yang diperlukan untuk membasmi bakteri terkait biofilm. Ini melibatkan pertumbuhan biofilm pada permukaan khusus, memaparkannya pada konsentrasi antimikroba yang berbeda, dan menilai kelangsungan hidup sel yang terlepas setelah gangguan biofilm, biasanya melalui sonikasi, untuk mengevaluasi kemanjuran pengobatan.
Apa Perbedaan antara MBIC dan MBEC?
Minimum Biofilm Inhibitory Concentration (MBIC) adalah konsentrasi terendah dari agen antimikroba yang diperlukan untuk mencegah pembentukan biofilm, sedangkan Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) adalah konsentrasi terendah yang diperlukan untuk memberantas biofilm yang sudah mapan. MBIC berfokus pada pencegahan biofilm, sedangkan MBEC menilai kemanjuran pengobatan terhadap biofilm matang.
Pelat apa yang biasa digunakan untuk Pengujian MBEC?
Pelat mikrotiter yang biasa digunakan untuk pengujian MBEC biasanya pelat 96 sumur yang terbuat dari polistirena atau polipropilena. Bahan-bahan ini menyediakan permukaan yang cocok untuk pembentukan biofilm dan tahan secara kimiawi terhadap agen antimikroba yang diuji selama pengujian. Pelat polistirena banyak disukai karena kejernihan optiknya, yang menguntungkan untuk analisis hilir seperti spektrofotometri atau pengukuran berbasis fluoresensi. Desain pelat ini mencakup tutup pasak yang dapat dilepas, yang penting untuk pengujian karena biofilm terbentuk pada pasak yang direndam dalam sumur yang mengandung media pertumbuhan. Pelat standar, seperti yang sesuai dengan protokol pengujian MBEC, direkayasa secara khusus untuk memastikan reproduktifitas dan kompatibilitas dengan UIP400MTP sonicator atau peralatan pemrosesan lainnya.
Apa itu Pelat Tutup PEG?
Pelat tutup PEG adalah sistem pelat multi-sumur khusus di mana tutupnya dilengkapi dengan pasak atau pin polietilen glikol (PEG) kecil yang memanjang ke setiap sumur. Pasak ini menyediakan permukaan untuk pembentukan biofilm mikroba dalam kondisi terkendali, meniru pertumbuhan biofilm dunia nyata. Desainnya memungkinkan biofilm berkembang pada pasak sementara sumur mengandung media pertumbuhan atau agen antimikroba, memungkinkan pengujian throughput tinggi dari kerentanan biofilm terhadap perawatan, seperti dalam uji MBEC dan MBIC.
Hielscher Ultrasonics memproduksi homogenizer ultrasonik berkinerja tinggi dari laboratorium hingga ukuran industri.