Protokol Uji MBEC Menggunakan Sonikator Pelat 96 Sumur UIP400MTP

Uji MBEC digunakan untuk menentukan konsentrasi agen antimikroba yang diperlukan untuk menghilangkan biofilm yang terbentuk pada tutup berpasak. Untuk menilai viabilitas biofilm, biofilm harus terlebih dahulu dilepaskan dari tutup berpasak pada pelat 96 sumur. Sonikasi merupakan metode yang paling andal dan efisien untuk pelepasan ini. Sonikator pelat multisumur UIP400MTP dirancang khusus untuk memproses pelat uji dengan efisiensi dan kemudahan maksimal, menyederhanakan dan mempercepat uji MBEC dengan kapasitas pemrosesan sampel yang tinggi.

Sonikasi untuk Pelepasan Biofilm

Sonikasi merupakan langkah penting dalam uji Konsentrasi Eradikasi Biofilm Minimum (MBEC), yang memungkinkan pelepasan sel biofilm secara efektif dari permukaan tempat sel tersebut melekat. Biofilm secara alami merupakan komunitas mikroorganisme terstruktur yang terbungkus dalam matriks ekstraseluler, sehingga jauh lebih tahan terhadap agen antimikroba dibandingkan sel planktonik. Selama uji MBEC, sonikasi menggunakan gelombang ultrasonik untuk menghasilkan kavitasi terkendali, mengganggu matriks biofilm dan melepaskan sel yang tertanam di dalamnya ke dalam suspensi. Langkah ini memastikan bahwa sel biofilm terdispersi secara merata dalam medium pemulihan, sehingga memudahkan penilaian viabilitas yang akurat melalui penanaman pada pelat, pengenceran, atau metode spektrofotometri. Tanpa pelepasan biofilm yang tepat, komponen matriks yang tersisa dapat melindungi sel, sehingga efektivitas antimikroba dinilai lebih rendah daripada yang sebenarnya. Oleh karena itu, sonikasi sangat diperlukan untuk memperoleh nilai MBEC yang andal dan dapat direproduksi, yang mencerminkan potensi eradikasi sebenarnya dari agen yang diuji. Sonikator pelat multisumur UIP400MTP memungkinkan preparasi sampel dengan kapasitas pemrosesan sampel yang tinggi secara mudah dalam pelat uji.

Protokol Uji Konsentrasi Eradikasi Biofilm Minimum (MBEC)

Langkah 1: Pembentukan Biofilm

1. Siapkan suspensi bakteri:
   Tumbuhkan bakteri dalam medium yang sesuai hingga fase pertumbuhan logaritmik.
   Encerkan kultur bakteri hingga mencapai densitas optik yang ditentukan (misalnya, OD600 ~0,1).
2. Inokulasikan pelat 96 sumur:
   Tambahkan suspensi bakteri (misalnya, 150–200 µL) ke setiap sumur pada pelat mikrotiter standar 96 sumur.
3. Pasang tutup berpasak:
   Letakkan tutup berpasak pada pelat yang telah diinokulasi agar biofilm dapat terbentuk pada permukaan pasak.
4. Inkubasikan pelat:
   Inkubasikan sistem tersebut pada suhu yang sesuai (misalnya, 37°C) selama 24–48 jam tanpa pengocokan untuk mendukung pertumbuhan biofilm.

Langkah 2: Perlakuan dengan Agen Antimikroba

• Siapkan larutan antimikroba:
  Siapkan berbagai konsentrasi antimikroba dalam medium segar.
  Paparkan biofilm pada agen antimikroba:
  Angkat tutup berpasak dari kultur bakteri dan bilas dalam larutan salin steril atau PBS untuk menghilangkan sel planktonik.
  Letakkan tutup berpasak pada pelat 96 sumur baru yang berisi larutan antimikroba.
• Inkubasikan pelat:
  Inkubasikan selama jangka waktu yang ditentukan (misalnya, 24 jam) agar terjadi paparan antimikroba.

Langkah 3: Sonikasi dengan Sonikator Pelat 96 Sumur UIP400MTP

Langkah sonikasi sangat penting untuk melepaskan biofilm dari tutup berpasak guna menilai viabilitasnya. Ikuti langkah-langkah berikut untuk sonikator UIP400MTP:

1. Siapkan sistem:
   Isi setiap sumur pada pelat 96 sumur baru dengan medium pemulihan (misalnya, kaldu penetral atau medium pertumbuhan segar).
2. Pindahkan tutup berpasak:
   Angkat tutup berpasak dari pelat perlakuan antimikroba.
   Bilas tutup berpasak dalam larutan salin steril atau PBS untuk menghilangkan sisa agen antimikroba.
3. Atur posisi pelat dan sonikator:
   Pasang tutup berpasak pada pelat berisi medium pemulihan.
   Letakkan pelat berisi medium pemulihan pada platform sonikator UIP400MTP, dan pastikan pelat berada di tengah serta stabil.
4. Sesuaikan parameter sonikasi:
   Atur parameter sonikasi pada UIP400MTP (pengaturan dapat disesuaikan dengan biofilm):
   Amplitudo: 70–100%.
   Waktu sonikasi: 1–3 menit (sesuaikan berdasarkan ketahanan biofilm) dalam mode siklus.
5. Lakukan sonikasi:
   Mulai proses sonikasi. Getaran ultrasonik akan melepaskan biofilm dari permukaan pasak ke dalam medium pemulihan.
6. Pantau proses:
   Gunakan sensor suhu yang dapat dicolokkan untuk memantau suhu sampel dalam sumur. UIP400MTP dapat dihubungkan ke unit pendingin laboratorium untuk pendinginan.
7. Penanganan setelah sonikasi:
   Segera pindahkan medium pemulihan (yang kini mengandung biofilm yang telah terlepas) ke pelat steril baru untuk analisis selanjutnya.

(A) Pelat berisi TSB dengan glukosa 2% yang digunakan untuk pembentukan biofilm, pemulihan sel, dan
penentuan MIC dan MBCB; (B) Tutup dengan pin untuk pembentukan biofilm stafilokokus. penentuan MIC dan MBCB; (B) Tutup dengan pin untuk pembentukan biofilm stafilokokus.
Sel biofilm yang terbentuk pada pin dilepaskan melalui sonikasi (Hielscher Ultrasound Technology) selama 5 min dalam pelat 96 sumur yang berisi medium kultur segar untuk pemulihan sel.
(Gambar dan studi: ©de Oliveira et al., 2016)

Langkah 4: Penilaian Viabilitas

Tanam pada pelat dan kulturkan biofilm yang telah terlepas:

1. Lakukan pengenceran berseri terhadap medium pemulihan dan tanam pada agar untuk menghitung unit pembentuk koloni (CFU).
   Sebagai alternatif, gunakan uji viabilitas kolorimetrik atau berbasis fluoresensi.
2. Catat hasil:
   Tentukan MBEC sebagai konsentrasi antimikroba terendah yang mengeradikasi viabilitas biofilm yang dapat dideteksi.

Desain, Manufaktur, dan Konsultasi – Kualitas Buatan Jerman

Sonikator ultrasonik Hielscher dikenal dengan standar kualitas dan desain tertinggi. Ketangguhan dan pengoperasian yang mudah memungkinkan integrasi sonikator ultrasonik kami ke fasilitas industri berjalan lancar. Kondisi berat dan lingkungan yang menuntut dapat ditangani dengan mudah oleh sonikator Hielscher.

Hielscher Ultrasonics adalah perusahaan bersertifikasi ISO dan memberikan perhatian khusus pada sonikator ultrasonik berkinerja tinggi yang dilengkapi teknologi mutakhir dan mudah digunakan. Tentu saja, sonikator ultrasonik Hielscher mematuhi ketentuan CE dan memenuhi persyaratan UL, CSA, dan RoHs.

Baca di sini bagaimana UIP400MTP digunakan untuk pelepasan biofilm sebagai langkah preparasi sampel dalam protokol ASTM E2799 untuk menguji efektivitas disinfektan terhadap biofilm Pseudomonas aeruginosa menggunakan uji MBEC.