Ուլտրաձայնի կիրառությունները կապիկի ծաղիկի վիրուսի դեպքում
Ուլտրաձայնային մշակումը կարևոր մշակման եղանակ է՝ անալիտիկ նմուշներից կապիկի ծաղիկի վիրուսի (MPXV) մեկուսացման, վիրուսի ԴՆԹ-ի մասնատման և կապիկի ծաղիկի պատվաստանյութի արտադրության համար։ Ախտորոշման և անալիզից (PCR, ELISA և այլն) առաջ նմուշապատրաստման համար ուլտրաձայնային մշակումն օգտագործվում է բջիջների լիզիսի՝ կապիկի ծաղիկի վիրուսը բջջի ներքինից ազատելու և/կամ ԴՆԹ-ն մասնատելու նպատակով։ Պատվաստանյութի արտադրության մեջ կիրառությունները ընդգրկում են վիրուսի մասնիկների / ԴՆԹ-ի պատրաստումը, պատիճավորումը դեղորայքային կրողներում և ինոկուլների դեղաձևումը։
Ստորև կարող եք գտնել մանրամասն տեղեկություններ կապիկի ծաղիկի վիրուսի ուլտրաձայնային նմուշապատրաստման ինչպես նաև ուլտրաձայնով օժանդակված MPXV պատվաստանյութի արտադրության մասին։
Ի՞նչ կգտնեք այս էջում.
- Կապիկի ծաղիկի վիրուսի արդյունահանման ուլտրաձայնային լիզիս
- Կապիկի ծաղիկի վիրուսի ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային մասնատում
- Ուլտրաձայնի կիրառությունները MPXV պատվաստանյութի արտադրության մեջ
Այս 2x 1kW ուլտրաձայնային սարքերի համակարգը՝ անընդհատ հոսքի աշխատանքի համար, տեղադրված է պատվաստանյութի արտադրական օբյեկտում։
Ուլտրաձայնային լիզիս և ԴՆԹ-ի մասնատում պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայից (PCR) առաջ
Կապիկի ծաղիկի վիրուսով վարակը հայտնաբերվում է նուկլեինաթթվային ամպլիֆիկացիայի թեստով (NAAT)՝ իրական ժամանակի կամ ավանդական պոլիմերազային շղթայական ռեակցիայի (PCR) միջոցով՝ վիրուսի ԴՆԹ-ի յուրահատուկ հաջորդականությունները հայտնաբերելու համար։ Նմուշը (օրինակ՝ քթըմպանի քսուքից կամ մաշկի բիոպսիաներից) պարունակում է վիրուսը բջիջների ներսում։
Վերլուծության համար վիրուսը պետք է բջիջներից ազատվի, իսկ վիրուսի ԴՆԹ-ն՝ մասնատվի PCR-ի համար։
Ուլտրաձայնային լիզիս.
Ուլտրաձայնային բջջային քայքայումը / լիզիսը վիրուսները բջջային նմուշներից մեկուսացնելու հուսալի և արդյունավետ եղանակ է և նախընտրելի տեխնիկա՝ համեմատած քիմիական միջոցների հետ, ինչպիսիք են լիզոզիմը, proteinase K-ն և տարբեր դետերգենտները, որոնք հակառակ դեպքում կիրառվում են բջջի լիզիսն իրագործելու և ԴՆԹ-ն ազատելու համար։
Այնուամենայնիվ, նման քիմիական ռեագենտների կիրառումը պահանջում է ժամանակատար նմուշապատրաստում՝ PCR-ի վերլուծությունից առաջ մի քանի փուլով՝ PCR-ի արգելակումը կանխելու նպատակով։ Քանի որ PCR-ի արգելակիչներն ազդում են ամպլիֆիկացիայի արդյունավետության վրա, արգելակիչների հեռացման փոքր տատանումները կարող են հանգեցնել PCR պրոդուկտի ամպլիֆիկացման խոշոր տատանումների (Diaco, 1995)։
Ուլտրաձայնային մշակման առավելությունը լիզիսի համար այն է, որ բջջային կառուցվածքների ամբողջական քայքայումն ու ԴՆԹ-ի ազատումը՝ առանց լիզիսային ռեագենտների և ժամանակատար նմուշապատրաստման կարիքի, ցանկալի արդյունք են (cf. Fykse et al., 2003)։
ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային ֆրագմենտացում.
Ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի մասնատումը պարզ և հուսալի է, քանի որ այն առաջացնում է երկարությամբ կարգավորելի ԴՆԹ-ի ֆրագմենտներ (հիմքազույգեր, bp)։ Ուլտրաձայնի կիրառմամբ ԴՆԹ-ն արդյունավետ մասնատվում է մինչև նպատակադրված ԴՆԹ-ի երկարությունը։ Ուլտրաձայնային պարամետրերի ճշգրիտ վերահսկումն ու զարգացած հովացման տարբերակները կանխում են ԴՆԹ-ի դեգրադացիան։
Կարդացեք ավելին ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային մասնատման մասին։
Ուլտրաձայնի կիրառությունները կապիկի ծաղիկի վիրուսի պատվաստանյութի մեջ
Կապիկի ծաղիկի վիրուսի դեմ կիրառվող պատվաստանյութերն առայժմ կենդանի վիրուսի պատվաստանյութեր են։ Նոր մշակվող պատվաստանյութերը կարող են օգտագործել այլ հարթակներ, ինչպես օրինակ՝ ԴՆԹ-ի վրա հիմնվածը։ Ընթացիկը պարունակում է մոդիֆիկացված Vaccinia Ankara վիրուս՝ թուլացված, չվերարտադրվող օրթոպոքսվիրուս։ Այն նաև պարունակում է Tris (tris-aminomethane) և նատրիումի քլորիդ։ Պատվաստանյութը կարող է նաև պարունակել պատվաստանյութային վիրուսն աճեցնելու համար օգտագործվող հավի սաղմի ֆիբրոբլաստային բջիջների ԴՆԹ-ի և սպիտակուցի փոքր քանակություններ, benzonase և հակաբիոտիկ միացություններ, ինչպիսիք են գենտամիցինն ու ցիպրոֆլոքսացինը։
Ուլտրաձայնային հոմոգենիզացիան կիրառվում է կենդանի-թուլացված վիրուսային պատվաստանյութերի, ԴՆԹ-պատվաստանյութերի, բազմարժեք ԴՆԹ-ի կոկտեյլների, mRNA պատվաստանյութերի, ռեկոմբինանտ սպիտակուցային պատվաստանյութերի, վիրուսանման մասնիկների պատվաստանյութերի և այլնի արտադրության մեջ։
- վիրուսային մասնիկների և միջոցների դիսպերսիա
- էմուլգացում
- վիրուսների ինակտիվացում
- դեղորայքային կրողների դեղաձևում (NLC, SLN)
- պատիճավորում
- միջոցների լուծում
- ադյուվանտների պատրաստում
- գազազրկում / օդազրկում
Կապիկի ծաղիկի վիրուսի ուլտրաձայնային մեկուսացման արձանագրություն
Stittelaar (2005)-ի հետազոտական թիմը կիրառել է ուլտրաձայնային լիզիս՝ կապիկի ծաղիկի վիրուսն աճեցման հյուրընկալող բջջային կուլտուրայից, ինչպես նաև վարակված պրիմատների ըմպանային քսուքներից ստացված բջիջներից ազատելու համար։
Կապիկի ծաղիկի վիրուսի պատվաստանյութի պատրաստում.
Կապիկի ծաղիկի վիրուսները աճեցվել են ախտածիններից ազատ հավի սաղմի ֆիբրոբլաստային բջիջների վրա։ 1–2 օր ինկուբացիայից հետո վիրուս-բջջային կախույթը հավաքվել է սառեցման-հալման մեկ փուլով, այնուհետև խտացվել է ցենտրիֆուգմամբ։ Նստվածքը վերակախվել և մի քանի փուլով ենթարկվել է ուլտրաձայնային հոմոգենիզացման։
Կապիկի ծաղիկի վիրուսի մեկուսացում պատվաստված մակակներից.
Նմուշները ենթարկվել են եռակի սառեցման-հալման և ուլտրաձայնային մշակման ուլտրաձայնային CupHorn-ում։ 1% պտղային հորթի շիճուկով լրացված տեղափոխման միջավայրում պատրաստված երկու նոսրացում (1:10 և 1:100) օգտագործվել են վեց հորանով թիթեղներում Vero բջջային միաշերտները վարակելու համար։ 37°C-ում 1 ժամ ինկուբացիայից հետո ինոկուլները հեռացվել և փոխարինվել են 1% պտղային հորթի շիճուկով լրացված կուլտուրային միջավայրով։ Միաշերտները աճեցվել են 5 օր 37°C-ում և ներկվել են բյուրեղային մանուշակագույնի լուծույթով։
(cf. Stittelaar et al., 2005)
Ուլտրաձայնային սարքեր՝ վիրուսների վերլուծության և պատվաստանյութերի արտադրության համար
Hielscher Ultrasonics ընկերության լայն արտադրատեսականին իդեալական ուլտրաձայնային սարք է առաջարկում հետազոտական և վերլուծական լաբորատորիաների համար, ինչպես նաև արդյունաբերական պատվաստանյութերի արտադրության համար։
Hielscher Ultrasonics ընկերությունը մասնագիտացած է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային սարքերի և սոնո-կենսառեակտորների նախագծման, արտադրության և բաշխման մեջ՝ հետազոտական և վերլուծական լաբորատորիաների համար, ինչպես նաև արդյունաբերական պատվաստանյութերի արտադրության մեջ կիրառման համար (օրինակ՝ պատվաստանյութեր, API-ներ).
Ուլտրաձայնային մշակումը կիրառելի է բաց տարողություններում, փակ շարունակաբար խառնվող ռեակտորներում և անընդհատ հոսքային ռեակտորներում։ Ուլտրաձայնային համակարգերի՝ հեղուկ միջավայրի հետ շփվող բոլոր մասերը պատրաստված են չժանգոտվող պողպատից, տիտանից կամ ապակուց։ Ավտոկլավավորվող մասերը և սանիտարական միացումները ապահովում են արտադրությունը դեղագործական որակի պայմաններում։
Տվյալների ավտոմատ գրանցում. Խելացի ծրագրային ապահովումն ուլտրաձայնային պրոցեսի պարամետրերը ավտոմատ գրանցում է ներկառուցված SD հիշողության քարտի վրա։ Բոլոր պրոցեսային պարամետրերի ճշգրիտ վերահսկումն ապահովում է վերարտադրելիությունը, և արտադրության ստանդարտացումը, և հեշտացնում է դեղագործական արտադրանքի անվտանգության ստանդարտներին համապատասխանելը։
Hielscher Ultrasonics-ի ուլտրաձայնային պրոցեսորները չափազանց վստահելի են և կարող են ճշգրիտ կառավարվել։ Բոլոր արդյունաբերական ուլտրաձայնային սարքերը կարելի է կարգավորել՝ ապահովելու համար ամպլիտուդների ամբողջ տիրույթը՝ ցածրից մինչև չափազանց բարձր։ Hielscher-ի ուլտրաձայնային համակարգերի ամրությունը թույլ է տալիս աշխատել 24/7՝ ծանր բեռնվածքի և պահանջկոտ միջավայրերի պայմաններում։
Ստորև բերված աղյուսակը պատկերացում է տալիս մեր ուլտրաձայնային սարքերի մոտավոր մշակման կարողության վերաբերյալ.
| Խմբաքանակի ծավալ | Հոսքի ծավալային արագություն | Առաջարկվող սարքեր |
|---|---|---|
| բազմահորիկ / միկրոտիտրային թիթեղներ | կիրառելի չէ | UIP400MTP |
| 1-ից 500mL | 10-ից 200mL/min | UP100H |
| 10-ից 2000mL | 20-ից 400mL/min | UP200Ht, UP400St |
| 0,1-ից 20L | 0,2-ից 4L/min | UIP2000hdT |
| 10-ից 100L | 2-ից 10L/min | UIP4000hdT |
| կիրառելի չէ | 10-ից 100L/min | UIP16000 |
| կիրառելի չէ | ավելի մեծ | համակցված սարքերի խումբ՝ UIP16000 |
Կապվե՛ք մեզ հետ։ / Հարցրե՛ք մեզ։
ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային սահքային մասնատում
Հարմարեցված է Jkwchui հեղինակի նյութից՝ CC-BY-SA.03 լիցենզիայի ներքո
Գրականություն / Ծանոթագրություններ
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. — Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Փաստեր, որոնք արժե իմանալ
Կապիկի ծաղիկի վիրուս
Կապիկի ծաղիկը (MPV, MPXV կամ hMPXV) երկշղթա ԴՆԹ վիրուսի տեսակ է, որն առաջացնում է վիրուսային զոոնոզային հիվանդություն։ Այդ հիվանդությունը հայտնի է որպես կապիկի ծաղիկի վարակ և կարող է առաջանալ ինչպես մարդկանց, այնպես էլ կենդանիների մոտ։ Այն պատկանում է Orthopoxvirus ցեղին՝ Poxviridae ընտանիքում։ Կապիկի ծաղիկի վիրուսը մարդու օրթոպոքսվիրուսներից է՝ variola (VARV), cowpox (CPX) և vaccinia (VACV) վիրուսների հետ մեկտեղ։ Օրթոպոքսվիրուսներն աչքի են ընկնում խոշոր, աղյուսաձև վիրուսային մասնիկներով, որոնք պարունակում են մոտավորապես 200 000 bp երկարությամբ երկշղթա ԴՆԹ գենոմ։
ELISA անալիզ
ELISA նշանակում է Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay և պիտակավորված իմունոլոգիական անալիզ է, որը համարվում է իմունոլոգիական անալիզների ոսկե ստանդարտը։ ELISA-ն իմունոլոգիական թեստ է՝ գնահատված իր բարձր ախտորոշիչ զգայունությամբ, կիրառվում է մոլեկուլները՝ այդ թվում հակամարմինները, հակածինները, սպիտակուցները, գլիկոպրոտեինները և հորմոնները, հայտնաբերելու և քանակապես որոշելու համար։ ELISA-ի սկզբունքը հիմնված է հակածին-հակամարմին փոխազդեցության վրա։ Հակածին-հակամարմին այդ փոխազդեցությամբ հատուկ հակամարմինները կապվում են իրենց թիրախային հակածնին։ Միայն փոխազդեցությունն իրականանալուց հետո սուբստրատը կարող է կապվել ֆերմենտի հետ, և այնուհետև դիտվում է հաջորդական սուբստրատային փոխակերպում, ինչը նշանակում է, որ արդյունքը դրական է ստացվել։
Hielscher Ultrasonics ընկերությունն արտադրում է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ՝ լաբորատոր մասշտաբից մինչև արդյունաբերական չափեր։