Ուլտրաձայնային կիրառություններ MonkeyPox վիրուսում
Ուլտրաձայնային ախտորոշումը մշակման կարևոր մեթոդ է ջրծաղիկի վիրուսի (MPXV) վերլուծական նմուշներից մեկուսացման, վիրուսի ԴՆԹ-ի մասնատման, ինչպես նաև կապիկների դեմ պատվաստանյութերի արտադրության համար: Նմուշի պատրաստման համար նախքան ախտորոշումը և անալիզը (PCR, ELISA և այլն) ուլտրաձայնային ախտորոշումն օգտագործվում է բջիջների լիզավորման համար՝ կապիկի վիրուսը բջջի ներսից և/կամ մասնատելու ԴՆԹ-ից ազատելու համար: Պատվաստանյութերի արտադրության մեջ կիրառությունները տատանվում են վիրուսի մասնիկների/ԴՆԹ-ի պատրաստումից, թմրամիջոցների կրիչների մեջ պարփակումից և պատվաստանյութի ձևավորումից:
Ստորև կարող եք գտնել մանրամասն տեղեկատվություն ուլտրաձայնային կապիկի վիրուսի նմուշի պատրաստման, ինչպես նաև MPXV պատվաստանյութի ուլտրաձայնային օգնությամբ:
Այն, ինչ դուք կգտնեք այս էջում.
- Ուլտրաձայնային լիզիս՝ կապիկի վիրուսի արդյունահանման համար
- Monkeypox վիրուսի ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային մասնատում
- Ուլտրաձայնային կիրառություններ MPXV պատվաստանյութերի արտադրության մեջ
Այս համակարգը 2x1կՎտ հզորությամբ ուլտրաձայնային սարքերի համար՝ շարունակական հոսքի շահագործման համար, տեղադրված է պատվաստանյութերի արտադրության հաստատությունում:
Ուլտրաձայնային լիզը և ԴՆԹ-ի մասնատումը մինչև պոլիմերազային շղթայական ռեակցիան (PCR)
Կապիկի ջրծաղիկի վիրուսի վարակը հայտնաբերվում է նուկլեինաթթվի ուժեղացման թեստով (NAAT)՝ օգտագործելով իրական ժամանակում կամ սովորական պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա (PCR), վիրուսային ԴՆԹ-ի եզակի հաջորդականությունների հայտնաբերման համար: Նմուշը (օրինակ՝ քիթ-կոկորդային խոռոչի փոխարկումից կամ մաշկի բիոպսիայից) պարունակում է վիրուս բջիջներում:
Վերլուծության համար վիրուսը պետք է ազատվի բջիջներից, իսկ վիրուսային ԴՆԹ-ն պետք է մասնատվի PCR-ի համար:
Ուլտրաձայնային Լիզիս.
Բջիջների ուլտրաձայնային խանգարումը/լիզը հուսալի և արդյունավետ մեթոդ է բջիջների նմուշներից վիրուսները մեկուսացնելու համար և, հետևաբար, նախընտրելի մեթոդ քիմիական նյութերի նկատմամբ, ինչպիսիք են լիզոզիմը, պրոտեինազ K և տարբեր լվացող միջոցները, որոնք այլընտրանքային կերպով օգտագործվում են բջիջների լիզման և ԴՆԹ-ի ազատման համար:
Այնուամենայնիվ, նման քիմիական ռեակտիվների օգտագործումը պահանջում է ժամանակատար նմուշի պատրաստում մի քանի քայլով, նախքան PCR վերլուծությունը, որպեսզի կանխվի PCR ռեակցիայի արգելակումը: Քանի որ PCR ինհիբիտորները ազդում են ուժեղացման արդյունավետության վրա, չհեռացված ինհիբիտորների քանակի փոքր տատանումները կարող են հանգեցնել PCR արտադրանքի ուժեղացման մեծ տատանումների (Diaco, 1995):
Լիզիզի համար ուլտրաձայնային ախտահանման առավելությունն այն է, որ ցանկալի է բջջային կառուցվածքների ամբողջական խախտումը և ԴՆԹ-ի ազատումը առանց լիզինգի ռեակտիվների և ժամանակատար նմուշների պատրաստման: (տես Fykse et al., 2003)
Ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի մասնատում.
Ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի մասնատումը պարզ և հուսալի է, քանի որ արտադրում է երկարությամբ կարգավորելի ԴՆԹ բեկորներ (բազային զույգեր, bp): Օգտագործելով ուլտրաձայնը, ԴՆԹ-ն կարող է արդյունավետորեն մասնատվել ԴՆԹ-ի նպատակային երկարությանը: Ուլտրաձայնային պարամետրերի ճշգրիտ վերահսկումը և հովացման բարդ տարբերակները կանխում են ԴՆԹ-ի քայքայումը:
Կարդացեք ավելին ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի մասնատման մասին:
Ուլտրաձայնային կիրառություններ Monkeypox վիրուսի պատվաստանյութում
Կապիկի ջրծաղիկի վիրուսի դեմ օգտագործվող պատվաստանյութերը ներկայումս կենդանի վիրուսային պատվաստանյութեր են: Նոր մշակված պատվաստանյութերը կարող են օգտագործել այլ հարթակներ, ինչպիսիք են ԴՆԹ-ի վրա հիմնված: Ներկայում պարունակում է փոփոխված Vaccinia Ankara վիրուսներ՝ թուլացած, չվերարտադրվող օրթոպոքսվիրուս: Այն նաև պարունակում է տրիս (տրիս-ամինոմեթան) և նատրիումի քլորիդ։ Պատվաստանյութը կարող է նաև պարունակել փոքր քանակությամբ ԴՆԹ և սպիտակուց՝ հավի սաղմի ֆիբրոբլաստ բջիջներից, որոնք օգտագործվում են պատվաստանյութի վիրուսը, բենզոնազը և հակաբիոտիկ միացությունները, ինչպիսիք են գենտամիցինը և ցիպրոֆլոքասինը, աճեցնելու համար:
Ուլտրաձայնային հոմոգենացումն օգտագործվում է կենդանի թուլացած վիրուսի պատվաստանյութերի, ԴՆԹ պատվաստանյութերի, բազմավալենտ ԴՆԹ կոկտեյլների, mRNA պատվաստանյութերի, ռեկոմբինանտ սպիտակուցային պատվաստանյութերի, վիրուսանման մասնիկների պատվաստանյութերի և այլնի արտադրության մեջ:
- վիրուսի մասնիկների և գործակալների ցրում
- էմուլգացիա
- վիրուսների ապաակտիվացում
- թմրամիջոցների կրիչի ձևակերպում (NLC, SLN)
- ինկապսուլյացիան
- գործակալների լուծարում
- օժանդակ նյութերի պատրաստում
- Գազազերծում / Օդազերծում
Ծաղկի վիրուսի ուլտրաձայնային մեկուսացման արձանագրություն
Stittelaar-ի հետազոտական թիմը (2005) օգտագործել է ուլտրաձայնային լուծ՝ կապիկի ծաղիկի վիրուսը ազատելու համար աճող հյուրընկալող բջիջների կուլտուրայից, ինչպես նաև վարակված պրիմատներից կոկորդի փոխանակման միջոցով ստացված բջիջներից:
Կապիկի դեմ պատվաստանյութի պատրաստում.
Monkeypox վիրուսները աճեցվել են հատուկ պաթոգենից զերծ հավի սաղմի ֆիբրոբլաստ բջիջների վրա: 1-ից 2 օր ինկուբացիայից հետո վիրուս-բջիջների կախոցը հավաքվել է սառեցման-հալեցման մեկ փուլով և այնուհետև կենտրոնացվել ցենտրիֆուգման միջոցով: Գնդիկը նորից կասեցվեց և ենթարկվեց ուլտրաձայնային հոմոգենացման մի քանի փուլերի:
Monkeypox վիրուսի մեկուսացում պատվաստված մակակներից.
Նմուշները երեք անգամ սառեցվել-հալվել են և հնչյունավորվել ուլտրաձայնային CupHorn-ում: Երկու նոսրացում (1:10 և 1:100) տրանսպորտային միջավայրում, որը լրացվել է 1% պտղի տավարի շիճուկով, օգտագործվել է վեց ջրհորի ափսեներում Vero բջջային մոնաշերտերը պատվաստելու համար: 37°C-ում ինկուբացիայից 1 ժամ հետո պատվաստումները հեռացվեցին և փոխարինվեցին կուլտուրայի միջավայրով, որը լրացվում էր 1% պտղի տավարի շիճուկով: Միաշերտերը մշակվել են 5 օր 37°C ջերմաստիճանում և ներկվել բյուրեղյա մանուշակագույն լուծույթով:
(տես Stittelaar et al., 2005)
Ուլտրաձայնային սարքեր վիրուսների վերլուծության և պատվաստանյութերի արտադրության համար
Hielscher Ultrasonics-ի արտադրանքի լայն պորտֆելը առաջարկում է իդեալական ուլտրաձայնային սարք հետազոտական և վերլուծական լաբորատորիաների, ինչպես նաև արդյունաբերական պատվաստանյութերի արտադրության համար:
Hielscher Ultrasonics-ը մասնագիտացած է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային սարքերի և սոնոբիոռեակտորների նախագծման, արտադրության և բաշխման մեջ՝ հետազոտական և անալիտիկ լաբորատորիաներում օգտագործելու, ինչպես նաև արդյունաբերական պատվաստանյութերի արտադրության մեջ (օրինակ՝ պատվաստանյութեր, API-ներ)
Sonication-ը կարող է կիրառվել բաց անոթների, փակ շարունակաբար խառնվող ռեակտորների և շարունակական հոսքի միջով ռեակտորների համար: Ուլտրաձայնային համակարգերի բոլոր մասերը, որոնք շփվում են հեղուկ միջավայրի հետ, պատրաստված են չժանգոտվող պողպատից, տիտանից կամ ապակուց: Ավտոկլավվող մասերը և սանիտարական կցամասերը ապահովում են արտադրությունը տակ դեղագործական պայմաններ.
Տվյալների ավտոմատ գրանցում. Խելացի ծրագրակազմը ձայնագրման գործընթացի պարամետրերը ավտոմատ կերպով գրանցում է ինտեգրված SD հիշողության քարտի վրա: Գործընթացի բոլոր պարամետրերի ճշգրիտ վերահսկումը ապահովում է վերարտադրելիություն, արտադրության ստանդարտացումև նպաստում է դեղագործական արտադրանքի անվտանգության ստանդարտների կատարմանը:
Hielscher Ultrasonics’ Ուլտրաձայնային պրոցեսորները շատ հուսալի են և կարող են ճշգրիտ կառավարվել: Բոլոր արդյունաբերական ուլտրաձայնային սարքերը կարող են ճշգրտվել, որպեսզի մատուցեն ամբողջ տիրույթը՝ ցածրից մինչև շատ բարձր ամպլիտուդներով: Hielscher-ի ուլտրաձայնային համակարգերի ամրությունը թույլ է տալիս 24/7 աշխատել ծանր պարտականությունների և պահանջկոտ միջավայրերում:
Ստորև բերված աղյուսակը ցույց է տալիս մեր ուլտրաձայնային սարքերի մոտավոր մշակման հզորությունը.
| Խմբաքանակի ծավալը | Հոսքի արագություն | Առաջարկվող սարքեր |
|---|---|---|
| բազմաբնակարան հորատանցք / միկրոտիտրային թիթեղներ | հ/հ | UIP400MTP |
| 1-ից 500 մլ | 10-ից 200 մլ / րոպե | UP100H |
| 10-ից 2000 մլ | 20-ից 400 մլ / րոպե | UP200Ht, UP400 Փ |
| 0.1-ից 20լ | 0.2-ից 4լ/րոպե | UIP2000hdT |
| 10-ից 100 լ | 2-ից 10 լ / րոպե | UIP4000hdT |
| հ/հ | 10-ից 100 լ / րոպե | UIP16000 |
| հ/հ | ավելի մեծ | կլաստերի UIP16000 |
Կապ մեզ հետ: / Հարցրեք մեզ:
ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային կտրում
Հարմարեցված է Jkwchui-ից CC-BY-SA.03-ի ներքո
Գրականություն / Հղումներ
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Փաստեր, որոնք արժե իմանալ
կապիկի ծաղիկի վիրուս
Կապիկի ծաղիկը (MPV, MPXV կամ hMPXV) երկշղթա ԴՆԹ վիրուսի տեսակ է, որն առաջացնում է վիրուսային զոոնոզային հիվանդություն։ Այս հիվանդությունը հայտնի է որպես կապիկների վարակ և կարող է առաջանալ մարդկանց և կենդանիների մոտ: Պատկանում է օրթոպոքսվիրուսների ցեղին՝ Poxviridae ընտանիքին։ Monkeypox վիրուսը մարդու օրթոպոքսվիրուսներից է variola (VARV), cowpox (CPX) և vaccinia (VACV) վիրուսների հետ միասին: Օրթոպոքսվիրուսները բնութագրվում են խոշոր աղյուսի տեսքով վիրուսային մասնիկներով, որոնք պարունակում են մոտ 200,000 bp երկշղթա ԴՆԹ գենոմ:
ELISA փորձարկում
ELISA-ն նշանակում է Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay և պիտակավորված իմունովերլուծություն է, որը համարվում է իմունովերլուծության ոսկե ստանդարտ: ELISA-ն իմունոլոգիական թեստ է, որը գնահատվում է իր բարձր ախտորոշիչ զգայունության համար, որն օգտագործվում է մոլեկուլների հայտնաբերման և քանակականացման համար, ներառյալ հակամարմինները, անտիգենները, սպիտակուցները, գլիկոպրոտեինները և հորմոնները: ELISA-ի սկզբունքը հիմնված է հակագեն-հակամարմին փոխազդեցության վրա: Այս հակագեն-հակամարմին փոխազդեցությամբ հատուկ հակամարմինները կապվում են նրա թիրախային անտիգենին: Միայն երբ փոխազդեցությունը տեղի է ունենում, սուբստրատը կարող է կապվել ֆերմենտին և կարող է դիտվել սուբստրատի հետագա փոխակերպում, ինչը նշանակում է, որ դրական արդյունք է ստացվում:
Hielscher Ultrasonics-ը արտադրում է բարձր արդյունավետության ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորներ լաբորատորիա դեպի արդյունաբերական չափս.