Պլազմիդի պատրաստում, օգտագործելով ուլտրաձայնային հետազոտություն
Ultrasonication-ը պլազմիդային ԴՆԹ-ի մասնատման հուսալի մեթոդ է: Ճշգրիտ կառավարելի ամպլիտուդը, պուլսացիայի ռեժիմը և ջերմաստիճանի վերահսկումը ուլտրաձայնային սարքի ամենակարևոր հատկանիշներն են պլազմիդի չվնասող մասնատման համար: Բացի այդ, որոշ գործակալների օգտագործումը օգնում է պաշտպանվել պլազմիդի դեգրադացիայից: Hielscher Ultrasonics-ն առաջարկում է տարբեր լուծումներ մեկ սրվակներից վերահսկվող պլազմիդի մասնատման, բազմաթիվ նմուշների, ինչպես նաև բազմաբնակարան հորատանցքերի թիթեղների միաժամանակ արտահոսքի միջոցով: Իմացեք ավելին պլազմիդի ուլտրաձայնային հաջող մասնատման մասին:
UIP400MTP թույլ է տալիս ճշգրիտ վերահսկվող ուլտրաձայնային բազմաբնակարան հորատանցքերի թիթեղները: UIP400MTP-ի կիրառություններից մեկը պլազմիդային ԴՆԹ-ի մասնատումն է հատուկ նպատակային երկարության բեկորներ ստանալու նպատակով:
Պլազմիդի խուզում, օգտագործելով ուլտրաձայնային եղանակ
Երբ ԴՆԹ-ի նմուշները ենթարկվում են ուլտրաձայնային ալիքների, ուլտրաձայնային գեներացվող թրթռումները հեղուկում ստեղծում են ակուստիկ կավիտացիա, որը կտրում կամ կոտրում է բարձր մոլեկուլային քաշի ԴՆԹ-ի մոլեկուլները մեխանիկական ուժերի միջոցով: Sonication-ը ԴՆԹ-ի զանգվածային կտրման փորձերի համար առավել լայնորեն կիրառվող մեթոդն է, ներառյալ այնպիսի ծրագրեր, ինչպիսիք են Chromatin Immunoprecipitation-ը (ChIP), որի համար փոքր բեկորների չափերը բացարձակապես կարևոր են բարձր խտություն ստանալու համար: (տես Tseng et al., 2012)
Պլազմիդային ԴՆԹ-ն (pDNA) ԴՆԹ-ի հատուկ ձև է, որը բնութագրվում է իր օղակաձև ձևով և հանդիպում է բակտերիաների և որոշ էուկարիոտների մեջ:
Գերոլորված pDNA-ն պլազմիդային ԴՆԹ-ի ցանկալի ձևն է, քանի որ այն լավագույն արդյունքներն է ցույց տալիս ներքևում գտնվող գործընթացներում, ինչպիսիք են ավտոմատացված հաջորդականությունը և տրանսֆեկցիան: Ultrasonication-ը հարմար է pDNA-ի, ներառյալ supercoiled pDNA-ի մասնատման համար, հաջողությամբ:
Թոմփսոնը և այլք: (2008 թ.) ցույց տվեց, որ պլազմիդային հնչյունավորումը, որը հայտնի է գերոլորված ԴՆԹ-ի մասնատման համար, արդյունավետ միջոց է բարելավելու phred20 հաջորդականության ընթերցման երկարություններն այն աստիճան, որ դրանք էականորեն չեն տարբերվում Բեքման Քուլթերի հսկիչ կաղապարից կամ ֆերմենտային գծային պլազմիդներից:
- Հստակ վերահսկելի
- Վերարտադրելի արդյունքներ
- Կարգավորելի է նպատակային ԴՆԹ-ի բեկորների երկարություններին
- ջերմաստիճանի վերահսկում
- Ընդարձակելի ցանկացած նմուշի չափի
Պլազմիդային վեկտորների օգտագործումը
Պլազմիդները հաճախ օգտագործվում են որպես գեների կլոնավորման, փոխանցման և մանիպուլյացիայի գործիքներ: Երբ պլազմիդները փորձնականորեն օգտագործվում են այդ նպատակների համար, դրանք կոչվում են վեկտորներ: ԴՆԹ-ի բեկորները կամ գեները կարող են տեղադրվել պլազմիդային վեկտորի մեջ՝ ստեղծելով այսպես կոչված ռեկոմբինանտ պլազմիդ։ Պլազմիդային վեկտորները օգտագործվում են որպես փոխադրամիջոցներ՝ ռեկոմբինանտ ԴՆԹ-ն հյուրընկալող բջիջ մղելու համար և հանդիսանում են մոլեկուլային կլոնավորման հիմնական բաղադրիչ:
“Ոչ վիրուսային վեկտորները լայնորեն ուսումնասիրվում են գենային թերապիայի մեջ դրանց պոտենցիալ օգտագործման համար՝ տարբեր բարդ հիվանդությունների բուժման համար: Ոչ վիրուսային վեկտորները պաշտպանում են պլազմիդային ԴՆԹ-ն ֆիզիկական, քիմիական և ֆերմենտային դեգրադացիայից և ԴՆԹ-ի մոլեկուլը հասցնում թիրախային տեղամաս: Օրինակ՝ կատիոնային լիպոսոմները, խիտոզանը և այլ դրական լիցքավորված նանոմասնիկներն էլեկտրաստատիկ փոխազդեցությունների միջոցով պլազմիդային ԴՆԹ-ի հետ կազմում են բարդույթներ։ Այնուամենայնիվ, հեշտությամբ ձևավորված կատիոնային լիպոսոմները/պլազմիդային ԴՆԹ-ի համալիրները համեմատաբար մեծ են (այսինքն՝ 300–400 նմ) և տարասեռ բնույթով, ինչը դժվարացնում է դրանց օգտագործումը դեղագործական կիրառություններում: Խոշոր և տարասեռ պլազմիդային ԴՆԹ/լիպոսոմները, պլազմիդային ԴՆԹ/աերոզոլները և պլազմիդային ԴՆԹ/պեպտիդային համալիրները կարող են վերածվել ավելի փոքր և միատարր մասնիկների՝ օգտագործելով ուլտրաձայնային եղանակը:” (Sarker et al., 2019)
Պլազմիդային վեկտորների օգտագործման նշանավոր օրինակ է CRISPR–Cas9-ը: CRISPR–Cas9 համակարգը սովորաբար առաքվում է բջիջներին որպես մեկ մեծ պլազմիդ կամ մի քանի փոքր պլազմիդներ, որոնք կոդավորում են թիրախային հաջորդականությունը, CRISPR ուղեցույցը և Cas9:
ԴՆԹ-ով բեռնված PLGA նանոմասնիկների ուլտրաձայնային պատրաստում նանո տեղումներով
Jo et al. (2020) օգտագործեց պոլի(կաթնաթթվային-կո-գլիկոլաթթու) (PLGA)՝ նանոմասնիկների կրիչ ձևավորելու համար CRISPR-Cas9 մոդելի պլազմիդի առաքման համար առաջնային ոսկրածուծից ստացված մակրոֆագներին: PLGA նանոմասնիկների նանո տեղումների համար օգտագործվել են PLGA երկու տարբեր վերջնական խմբերով (էսթեր և ամին խմբեր)՝ նպատակ ունենալով, որ դրական լիցքավորված ամինային ծայրամասային կափարիչները մեծացնեն պարփակման արդյունավետությունը և բեռնվածությունը՝ դրա և բացասական լիցքավորված ողնաշարի միջև լիցքի փոխազդեցության պատճառով: ԴՆԹ-ն։ 50 մլ պոլիպրոպիլենային կոնաձև ցենտրիֆուգային խողովակում 100 մգ Pluronic F127-ը լուծարվել է 20 մլ ավտոկլավացված DI ջրի մեջ հորձանուտով խառնելով, որին հաջորդել է 30 րոպե նուրբ ձայնային ախտահանում ուլտրաձայնային լոգանքի միջոցով (տես CupHorn) Ավելացվեց ավտոկլավացված մագնիսական խառնիչ ձող, և լուծույթը խառնվեց 600 RPM-ով 30 րոպե, մինչդեռ մյուս լուծույթները պատրաստվեցին: Պլաստիկ լաբորատոր սարքավորումները ապակյա իրերի փոխարեն օգտագործվել են ԴՆԹ-ի ոչ հատուկ կլանումը նվազագույնի հասցնելու համար: DMF-ում լուծված PLGA-ի (44,48 մգ/մլ) և THF-ում լուծված TIPS պենտացենի (0,667 մգ/մլ) լուծույթները պատրաստվել են առանձին: PLGA-ն 30 րոպե հանգիստ թողնվեց DMF-ում թրջվելու համար, նախքան 30 րոպե հնչյունավորելը: (Ամբողջական արձանագրության համար տե՛ս Jo et al., 2020)
- ԴՆԹ-ի արդյունահանում
- ԴՆԹ-ի էկապսուլյացիա
- Նանոմասնիկներով պատված ԴՆԹ-ի ցրում
- Պլազմիդային ԴՆԹ-ի առաքում բջիջներին
UP200St CupHorn-ը նմուշների անուղղակի ձայնային ախտորոշման համար, օրինակ՝ ԴՆԹ-ի արդյունահանման և մասնատման համար:
Պլազմիդային ԴՆԹ-ի պաշտպանություն Sonication-ի ժամանակ
ԴՆԹ-ն, ներառյալ պլազմիդները և գերոլորված պլազմիդները, շատ զգայուն դեգրադացիա են: Բոլոր առկա մասնատման մեթոդները հայտնի են որոշակի թերություններով: Ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի մասնատումը նախընտրելի մեթոդներից մեկն է, քանի որ վերահսկվող ձայնային ախտահանումը պաշտպանիչ միջոցների հետ համատեղ թույլ է տալիս նվազեցնել ԴՆԹ-ի շղթաների կտրվածքից և ջերմությունից առաջացած վնասը:
Բացի ցածր ամպլիտուդային պարամետրերից, պուլսացիայի ռեժիմից և ջերմաստիճանի վերահսկումից ԴՆԹ-ի ուլտրաձայնային կտրման ժամանակ, որոշ գործակալների օգտագործումը ցույց տվեց զգալի պաշտպանիչ ազդեցություն ԴՆԹ-ի քայքայման դեմ: Օրինակ, տարբեր պոլիմերներ, պեպտիդներ և լիպիդներ պաշտպանում են պլազմիդային ԴՆԹ-ն ուլտրաձայնային ազդեցության ժամանակ:
Պլազմիդային ԴՆԹ-ի և պլազմիդային ԴՆԹ/ԻԼ նանոհամալիրների կայունությունը ուլտրաձայնային կտրվածքային սթրեսի նկատմամբ հետազոտվել է ագարոզայի գելային էլեկտրոֆորեզի վերլուծության միջոցով: Ե՛վ պլազմիդային ԴՆԹ-ն, և՛ պլազմիդային ԴՆԹ/ԻԼ նանոհամալիրները ենթարկվել են ուլտրաձայնային կտրվածքային սթրեսի տարբեր ժամանակային կետերի համար: Պլազմիդային ԴՆԹ-ն ենթարկվել է ուլտրաձայնային կտրվածքային սթրեսի 0, 10, 20, 30 և 40 րոպե: Այնուամենայնիվ, պլազմիդային ԴՆԹ/ԻԼ նանոհամալիրները ենթարկվել են ուլտրաձայնային կտրվածքային սթրեսի 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90 և 120 րոպե:
(ուսումնասիրություն և նկար՝ ©Sarker et al., 2019)
Սարկերը և այլք: (2019 թ.) ցույց է տվել, որ երբ պլազմիդային ԴՆԹ/իոնային հեղուկի (pDNA/IL) նանոկառուցվածքները ենթարկվել են ուլտրաձայնային կտրվածքի սթրեսի 0, 10, 20, 30, 40, 60, 90 և 120 րոպե և կոմպլեքսավորվել են առևտրային հասանելի կատիոնային գենի հետ։ առաքիչ լիպոֆեկտամին, լյումինեսցենտային դրական բջիջների տոկոսը համապատասխանաբար կազմել է 80%, 98%, 97%, 85%, 78%, 65%, 65% և 50% (տես ստորև բերված գծապատկերը): Լյումինեսցենտային դրական բջիջների տոկոսն աճել է, երբ նանոկառուցվածքները ենթարկվել են ուլտրաձայնային կտրվածքային սթրեսի 10 և 20 րոպե, իսկ հետո դանդաղորեն նվազել են:
Իոնային հեղուկի [Bmim][PF6] ազդեցությունը պլազմիդային ԴՆԹ-ի COS7 բջիջներին հասցնելու վրա: Պլազմիդային ԴՆԹ/ԻԼ (իոնային հեղուկ) նանոհամալիրները ենթարկվել են ուլտրաձայնային կտրվածքի սթրեսի մինչև 120 րոպե և կոմպլեքսավորվել են LA-ի հետ՝ նախքան COS7 բջիջներ հասցնելը: Տվյալները ցույց են տալիս GFP դրական HeLa բջիջների միջին թիվը (%), որոնք հաշվվել են 10 տարբեր մանրադիտակային դաշտերում, և փորձն իրականացվել է մի քանի անգամ երեք տարբեր օրերի ընթացքում: (Ուսումնասիրություն և գծապատկեր՝ ©Sarker et al., 2019)
Պլազմիդային ԴՆԹ-ն կարող է պաշտպանվել՝ ավելացնելով գործակալ մինչև ուլտրաձայնային մասնատումը. մերկ pDNA-ի (A) և pDNA-ի դեգրադացիան առաջացած ձայնային ազդեցությամբ, որը ձևակերպված է 1,5 մՄ CaCl2-ով և 20% (v/v) t-butanol (B)
Նմուշները ձայնագրվել են 20 Վտ հզորությամբ զոնդով մինչև 120 վրկ, ինչպես նշված է յուրաքանչյուր գոտու վերևում: H գիծը համապատասխանում է Hyperladder I ™️ նշիչին: Նշված են OC և SC պլազմիդային շերտերը:
(ուսումնասիրություն և նկարներ՝ ©Wu et al., 2009)
Ուլտրաձայնային լիզատի պատրաստում
Ուլտրաձայնային բջիջների լիզի արձանագրություն
Սկսեք բջիջների հարստացված նմուշից, որը պատրաստվել է բջիջների տարանջատման մեթոդով (օրինակ՝ իմունոմագնիսական բջիջների տարանջատում, ֆլյուորեսցենտով ակտիվացված բջիջների տեսակավորում (FACS), խտության գրադիենտ ցենտրիֆուգացիա, իմունային խտության բջիջների մեկուսացում):
Բջջային նմուշները պետք է ցույց տան լիզի բուֆերի ծավալը, որը համապատասխանում է փորձարարական նպատակին և զոնդի տիպի ուլտրաձայնային սարքին:
Հիպոտոնիկ բուֆերները նախընտրելի են, քանի որ դրանք ուժեղացնում են ուլտրաձայնային բջիջների լիզը: Կարևոր է, որ հավելումները և աղի կոնցենտրացիան պատշաճ կերպով օգտագործվեն:
Ընտրեք ձեր ուլտրաձայնային լիզի սարքը. սրվակների անուղղակի հնչյունավորման համար խորհուրդ է տրվում VialTweeter-ը կամ CupHorn-ը: Բազմափոր թիթեղների համար UIP400MTP-ը իդեալական ուլտրաձայնային սարք է: Եվ դասական զոնդի տիպի sonication-ը, ուլտրաձայնային հոմոգենիզատորը, ինչպես UP100H կամ UP200Ht միկրո ծայրով, ամենահարմարն են:
Արձանագրություն զոնդի տիպի ձայնագրման համար. Տեղադրեք ուլտրաձայնային զոնդը նմուշի ծավալի մեջ միկրոցենտրիֆուգային խողովակի մեջ և ձայնավորեք մոտավորապես մոտավորապես: 10 վայրկյան. Կախված ԴՆԹ-ի նմուշից, ձայնային ախտահանումը կարող է կրկնվել ևս մեկ կամ երկու անգամ: Պահանջվող ուլտրաձայնային էներգիայի մուտքագրումը (Ws/mL) կախված է նմուշի մածուցիկությունից և ԴՆԹ-ի տեսակից: Սառցե բաղնիքի միջոցով սառեցումը և ուլտրաձայնային սարքի պուլսացիոն ռեժիմը օգնում են կանխել նմուշի ջերմային քայքայումը:
Ուլտրաձայնային լուծույթից հետո նմուշը ցենտրիֆուգվում է, որպեսզի առանձնացնեն գնդիկների մնացորդները (պարունակում են չլուծված բջիջներ, միջուկներ և չլուծված օրգանելներ)
Եթե նմուշն անմիջապես հետագա մշակման չի ենթարկվում, այն կարող է պահպանվել համապատասխան ջերմաստիճանում, որպեսզի պահպանվի իր կենսունակությունը:
Ուլտրաձայնային սարքեր ԴՆԹ-ի մասնատման համար
Hielscher Ultrasonics- ն առաջարկում է տարբեր ուլտրաձայնային հարթակներ ԴՆԹ-ի, ՌՆԹ-ի և քրոմատինի մասնատման համար: Այս տարբեր հարթակները ներառում են ուլտրաձայնային զոնդեր (սոնոտրոդներ), անուղղակի ձայնամեկուսիչ լուծույթներ `մի քանի խողովակների կամ բազմահոր սալերի նմուշի պատրաստման համար (օր. ՝ 96 հորատանցք, միկրոիտրիտային թիթեղներ), սոնորեակտորներ և ուլտրաձայնային գավազաններ: ԴՆԹ-ի կտրման բոլոր հարթակները սնուցվում են հաճախականությամբ կարգավորվող, բարձրորակ ուլտրաձայնային պրոցեսորներով, որոնք ճշգրիտ վերահսկելի են և տալիս են վերարտադրելի արդյունքներ:
Ուլտրաձայնային պրոցեսորներ ցանկացած նմուշի և չափի համար
Hielscher-ի բազմակի նմուշների ուլտրաձայնային VialTweeter (մինչև 10 փորձանոթների համար) և UIP400MTP (միկրոափսեների/բազմափոր թիթեղների համար) հեշտությամբ հնարավոր է դառնում կրճատել նմուշների մշակման ժամանակը ինտենսիվ և ճշգրիտ վերահսկելի ուլտրաձայնային աշխատանքի շնորհիվ՝ միաժամանակ ստանալով ԴՆԹ-ի հատվածի ցանկալի չափի բաշխումը և ելքը: . Ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի մասնատումը պլազմիդի պատրաստման քայլերը դարձնում է արդյունավետ, հուսալի և մասշտաբային: Արձանագրությունները կարող են գծային մասշտաբավորվել մեկից մինչև բազմաթիվ նմուշներ՝ կիրառելով մշտական ուլտրաձայնային պարամետրեր:
Մեկից հինգ մատներով ուլտրաձայնային զոնդերը իդեալական են ավելի փոքր նմուշների համարներ պատրաստելու համար: Hielscher-ի լաբորատոր ուլտրաձայնային սարքերը հասանելի են հզորության տարբեր մակարդակներով, որպեսզի դուք կարողանաք ընտրել իդեալական ուլտրաձայնային խանգարող ձեր ԴՆԹ-ի հետ կապված կիրառման համար:
Ուլտրաձայնային բազմակի նմուշների պատրաստման միավոր VialTweeter թույլ է տալիս միաժամանակյա sonication մինչև 10 սրվակի: Ամրացուցիչ սարքի VialPress- ի միջոցով կարող է սեղմվել մինչև 4 լրացուցիչ խողովակ `ինտենսիվ ձայնազերծման համար:
ճշգրիտ գործընթացը հսկող
Սոնիկացիայի ճշգրիտ վերահսկելի կարգավորումները վճռորոշ նշանակություն ունեն, քանի որ սպառիչ սոնֆիկացիան կարող է ոչնչացնել ԴՆԹ -ն, ՌՆԹ -ն և քրոմատինը, սակայն ուլտրաձայնային կտրվածքի անբավարար արդյունքը հանգեցնում է ԴՆԹ -ի և քրոմատինի չափազանց երկար բեկորների: Hielscher- ի թվային ուլտրաձայնային սարքերը կարելի է հեշտությամբ սահմանել ճշգրիտ ձայնամեկուսացման պարամետր: Ձայնայնացման հատուկ կարգավորումները կարող են պահպանվել նաև որպես ծրագրավորված կարգավորում ՝ նույն ընթացակարգի արագ կրկնության համար:
Բոլոր ձայնագրությունները ինքնաբերաբար պրոտոկոլացվում են և պահվում են որպես CSV ֆայլ ՝ ներկառուցված SD քարտի վրա: Սա թույլ է տալիս ճշգրիտ փաստաթղթավորել կատարված փորձարկումները և հնարավորություն է տալիս հեշտությամբ վերանայել ձայնագրման աշխատանքները:
Browserննարկչի հեռակառավարման վահանակի միջոցով բոլոր թվային ուլտրաձայնային սարքերը կարող են գործարկվել և վերահսկվել ցանկացած ստանդարտ բրաուզերի միջոցով: Լրացուցիչ ծրագրաշարի տեղադրում չի պահանջվում, քանի որ LAN կապը շատ պարզ plug-n-play կարգավորում է:
Օգտագործողի համար ամենաբարձր հարմարությունը ուլտրաձայնային ԴՆԹ-ի պատրաստման ժամանակ
Բոլոր Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը նախագծված են բարձրորակ ուլտրաձայնային հետազոտություն իրականացնելու համար, միևնույն ժամանակ միշտ լինելով շատ օգտագործողի համար հարմար և հեշտ աշխատելի: Բոլոր պարամետրերը լավ կառուցված են հստակ ընտրացանկում, որը հեշտությամբ հասանելի է գունավոր հպման էկրանով կամ դիտարկիչի հեռակառավարմամբ: Խելացի ծրագրաշարը `ծրագրավորվող պարամետրերով և տվյալների ավտոմատ գրանցմամբ, ապահովում է ձայնայնացման օպտիմալ կարգավորումներ` հուսալի և վերարտադրելի արդյունքների համար: Մաքուր և հեշտ օգտագործվող ընտրացանկի միջերեսը Hielscher ուլտրաձայնային սարքերը վերածում է օգտագործողի համար հարմար և արդյունավետ սարքերի:
Ստորև բերված աղյուսակը ցույց է տալիս մեր լաբորատոր ուլտրաձայնային սարքերի մոտավոր մշակման հզորությունը բջիջների լիզի և ԴՆԹ-ի մասնատման համար.
| խմբաքանակի Volume | Ծախսի Rate | Առաջարկվող սարքեր |
|---|---|---|
| բազմաբնակարան ջրհորի թիթեղներ | հ/հ | UIP400MTP |
| սրվակներ, փոքր բաժակ | հ/հ | Ուլտրաձայնային cuphorn |
| մինչև 10 սրվակ | հ/հ | VialTweeter- ը |
| 1-ից 500 մլ | 10-ից մինչեւ 200 մլ / վրկ | UP100H |
| 10-ից մինչեւ 2000 մլ | 20-ից 400 մլ / վրկ | Uf200 ः տ,, UP400St |
Կապ մեզ հետ | / Հարցրեք մեզ!
Գրականություն / Հղումներ
- Mark D. Thompson, Kelly G. Aukema, Dana M. O’Bryan, Stephen D. Rader, Brent W. Murray (2008): Plasmid sonication improves sequencing efficiency and quality in the Beckman Coulter CEQ system. BioTechniques 2008, 45:3, 327-329
- Fykse, Else; Olsen, Jaran; Skogan, Gunnar (2003): Application of sonication to release DNA from Bacillus cereus for quantitative detection by real-time PCR. Journal of microbiological methods 55, 2003. 1-10.
- Ming L. Wu; Sindélia S. Freitas; Gabriel A. Monteiro; Duarte M. F. Prazeres; José A. L. Santos (2009). Stabilization of naked and condensed plasmid DNA against degradation induced by ultrasounds and high-shear vortices. Biotechnology Applied Biochemistry 53(4), 2009.
- Sarker, Satya Ranjan; Ball, Andrew S.; Bhargava, Suresh Kumar; Soni., Sarvesh K. (2019): Evaluation of plasmid DNA stability against ultrasonic shear stress and its in vitro delivery efficiency using ionic liquid [Bmim][PF6]. RSC Advances 9, 2019. 29225-29231.
- Miguel Larguinho, Hugo M. Santos, Gonçalo Doria, H. Scholz, Pedro V. Baptista, José L. Capelo (2010): Development of a fast and efficient ultrasonic-based strategy for DNA fragmentation. Talanta, Volume 81, Issue 3, 2010. 881-886.
- Julie Ann Wyber; Julie Andrews; Antony D’Emanuele (1997): The Use of Sonication for the Efficient Delivery of Plasmid DNA into Cells. Pharmaceutical Research 14(6), 1997. 750–756.
Փաստեր Worth Իմանալով
Ինչ են պլազմիդները:
Պլազմիդը փոքր շրջանաձև ԴՆԹ մոլեկուլ է, որը ֆիզիկապես առանձնացված է քրոմոսոմային ԴՆԹ-ից և կրկնօրինակվում է անկախ: Պլազմիդները հաճախ կապված են գեների հետ, որոնք նպաստում են օրգանիզմի գոյատևմանը և տալիս են հատուկ առավելություններ, օրինակ՝ հակաբիոտիկների նկատմամբ կայունություն: Պլազմիդներն առավել հաճախ հայտնաբերվում են որպես փոքր շրջանաձև, երկշղթա ԴՆԹ մոլեկուլներ բակտերիաներում; Այնուամենայնիվ, պլազմիդները երբեմն առկա են արխեայում և էուկարիոտիկ օրգանիզմներում: Պլազմիդները կարևոր գործիքներ են մոլեկուլային կենսաբանության, գենետիկայի, կենսաքիմիայի և կենսագիտության մեջ: Գենային ճարտարագիտության մեջ հայտնի որպես վեկտորներ՝ պլազմիդներն օգտագործվում են որոշակի գեներ վերարտադրելու կամ արտահայտելու համար։ Վեկտորի նպատակային փոփոխությունը կոչվում է վեկտորի ձևավորում:
GFP-ի վերլուծություն բջջային հետազոտության մեջ
Կանաչ լյումինեսցենտ սպիտակուցը (GFP) բազմակողմանի կենսաբանական մարկեր է՝ ֆիզիոլոգիական պրոցեսների մոնիտորինգի, սպիտակուցի տեղայնացման վիզուալացման և տրանսգենային արտահայտման in vivo հայտնաբերման համար: GFP-ն կարող է գրգռվել 488 նմ լազերային գծով և օպտիմալ կերպով հայտնաբերել 510 նմ:
Hielscher Ultrasonics- ը արտադրում է բարձրորակ ուլտրաձայնային հոմոգենացնողներից ` Լաբորատորիա դեպի արդյունաբերական չափը