Ultrazvučna priprema seruma bogatog trombocitima

• Plazma bogata trombocitima (PRP) krvna je plazma obogaćena trombocitima koja se koristi za medicinske i estetske tretmane.
• Ultrazvučna liza i kondicioniranje vrlo su učinkovita metoda za pripremu plazme bogate trombocitima.
• Hielscher Ultrasonics nudi različite ultrazvučne sustave koji zadovoljavaju zahtjeve obrade krvi (npr. za pripremu unutar i izvan čiste sobe).

Serum bogat trombocitima

Sonikacija je pouzdana i jednostavna metoda za lizu trombocita u autolognom krvnom serumu radi oslobađanja čimbenika rasta. Frakcije dobivene iz trombocita – poznate i kao autologni kondicionirani serum (ACS) – koriste se za obnovu tkiva ili estetske tretmane. Za postizanje optimalnih rezultata PRP se obogaćuje prije injiciranja.
Za pripremu plazme obogaćene čimbenicima staničnog rasta sonikacija je vrlo djelotvorna i učinkovita metoda za lizu staničnih membrana i oslobađanje gotovo svih čimbenika staničnog rasta iz trombocita. Ultrazvučnom lizom i kondicioniranjem može se upotrijebiti čak i krv kojoj je dodan antikoagulans.
Kondicioniranje PRP-a sonikacijom praktičan je i isplativ način dobivanja koncentriranih čimbenika rasta.

Ultrazvučna liza plazme bogate trombocitima (PRP)

Učinci ultrazvučne lize

Ultrazvučna obrada krvnog seruma dovodi do homogene lize trombocita radi oslobađanja u njima sadržanih čimbenika rasta (čimbenika rasta AB (PDGF-AB), čimbenika rasta AA (PDGF-AA), čimbenika rasta BB (PDGF-BB), čimbenika rasta vaskularnog endotela (VEGF), transformirajućeg čimbenika rasta β (TGF-β), epidermalnog čimbenika rasta (EGF), čimbenika rasta sličnog inzulinu (IGF), čimbenika rasta epitelnih stanica ECGF i čimbenika rasta fibroblasta (FGF)). Trombociti i njihove alfa-granule razaraju se sonikacijom, primjenom pojave akustične kavitacije. Primjena ultrazvučne kavitacije za lizu trombocita smanjuje mogući negativni utjecaj metode ponavljanog zamrzavanja i odmrzavanja na aktivnost čimbenika rasta.

Protokol za ultrazvučnu pripremu PRP-a

Približno 16mL svježe prikupljenog uzorka autologne krvi u epruveti nježno se preokrene 8–10 puta kako bi se krv i antikoagulansi dobro pomiješali. Zatim se uzorak centrifugira pri 1800 g tijekom 20 min na sobnoj temperaturi. Nakon centrifugiranja trombociti i mononuklearne stanice tvore bjelkasti sloj na dnu sloja plazme, poznat kao plazma bogata trombocitima (PRP). Gornji sloj poznat je kao plazma siromašna trombocitima (PPP). Mononuklearne stanice mogu se ukloniti ili ostaviti u uzorku. Mononuklearne stanice često ostaju u uzorku PRP-a kako bi se izbjegli dodatni koraci koji nose rizik od kontaminacije.
Napomena: Ultrazvučna obrada autolognog PRP-a mora se provoditi u sterilnim uvjetima.
PRP i PPP odvajaju se i prikupljaju. PPP-u se dodaje 1,5mL 10% otopine kalcijeva klorida, dok se PRP-u dodaje 0,5mL 5% etanola. Obje se suspenzije nježno promiješaju i ostave stajati 5 min na sobnoj temperaturi. Naposljetku se suspenziji PRP-a dodaje 1mL PPP-a te se ostavi stajati dok se ne stvori fibrinski ugrušak.
Ultrazvučna obrada: Budući da nastali trombocitni gel djeluje kao spremnik oslobođenih čimbenika rasta, fibrinski gel mora se razoriti kako bi se oslobodili dostupni čimbenici rasta. Parametri za ultrazvučnu lizu i oslobađanje čimbenika rasta su sljedeći: Sonikaciju uzorka u epruveti provedite uređajem UP200Ht ili UP200St (200W, 26kHz) sa sonotrodom S26d2. Kako bi se izbjeglo pregrijavanje uzorka krvi, sonikacija se može provoditi u pulsirajućim ciklusima (npr. 10 sek. uključeno, 30 sek. isključeno). Uzorak treba staviti na led radi hlađenja kako bi se temperatura optimalno održavala između 2 i 5°C. Nakon sonikacije uzorak se centrifugira pri 16.000 g tijekom 5 min. na sobnoj temperaturi. Supernatant se prikuplja i može se čuvati na -70°C.
Koncentracija trombocita u frakciji PRP-a primjenom metode sonikacije povećana je 1,7–4,5 puta u usporedbi s prosječnim brojem trombocita u punoj krvi navedenim u literaturi.

PRP se kombinirao s terapijom matičnim stanicama dobivenima iz masnog tkiva (autologne matične stanice ultrazvučno se oslobađaju iz masnog tkiva, miješaju s PRP-om i injiciraju natrag u tkivo pacijenta radi obnove).

Ultrazvučna oprema

Hielscher Ultrasonics stručnjak je za naprednu i pouzdanu ultrazvučnu tehnologiju. Naši ultrazvučni uređaji koriste se diljem svijeta za lizu, ekstrakciju i pripremu uzoraka – izravno i neizravno. Pribor koji se može autoklavirati kao i jednokratni pribor osiguravaju obradu bez kontaminacije autolognih uzoraka krvi. Većina naših sustava može se koristiti za ultrazvučnu lizu matičnih stanica i PRP-a, što naše ultrazvučne uređaje čini još isplativijima.
U tablici u nastavku navedeni su naši ultrazvučni uređaji prikladni za pripremu plazme bogate trombocitima te preporučeni volumen uzorka za svaki od njih. Dostupni su i veći ultrazvučni uređaji te prilagođeni sustavi.

Obratite nam se već danas! Rado ćemo vam pomoći pronaći optimalan ultrazvučni uređaj!