Ultrazvučna priprema seruma bogatog trombocitima

• Plazma bogata trombocitima (PRP) je krvna plazma obogaćena trombocitima koja se koristi za medicinske i estetske tretmane.
• Ultrazvučna liza i kondicioniranje vrlo je učinkovita metoda za pripremu plazme bogate trombocitima.
• Hielscher Ultrasonics nudi različite ultrazvučne sustave koji odgovaraju zahtjevima obrade krvi (npr. za unutarnju i vanjsku pripremu čiste sobe).

serum bogat trombocitima

Sonikacija je pouzdana i jednostavna metoda za lizu trombocita u autolognom krvnom serumu kako bi se oslobodili faktori rasta. Frakcije koje potječu od trombocita – poznat i kao autologni kondicionirani serum (ACS) – koriste se za popravak tkiva ili estetske tretmane. Za postizanje optimalnih rezultata, PRP se obogaćuje prije ubrizgavanja.
Kako bi se pripremila obogaćena plazma faktorima rasta stanica, sonikacija je vrlo djelotvorna i djelotvorna metoda za lizu staničnih membrana i oslobađanje gotovo svih faktora rasta stanica iz trombocita. Ultrazvučnom lizom i kondicioniranjem može se koristiti čak i antikoagulirana krv.
Kondicioniranje PRP-a sonikacijom je prikladan i isplativ način za dobivanje koncentriranih faktora rasta.

Ultrazvučna liza plazme bogate trombocitima (PRP)

Učinci ultrazvučne lize

Ultrazvučni tretman krvnog seruma rezultira homogenom lizom trombocita kako bi se oslobodili zarobljeni faktori rasta (faktor rasta AB (PDGF-AB), faktor rasta AA (PDGF-AA), faktor rasta BB (PDGF-BB), vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), transformirajući faktor rasta β (TGF-β), epidermalni faktor rasta (EGF), inzulinu sličan faktor rasta (IGF), faktor rasta epitelnih stanica ECGF i fibroblastični faktor rasta (FGF)). Trombociti i njihove alfa-granule se razbijaju ultrazvukom, koristeći fenomen akustična kavitacija. Korištenje ultrazvučne kavitacije za lizu trombocita umanjuje mogući negativni učinak metode ponovljenog zamrzavanja-odmrzavanja na aktivnost faktora rasta.

Protokol za ultrazvučnu PRP pripremu

Cca. 16 mL svježe prikupljenog uzorka autologne krvi lagano se okrene 8-10 puta u epruveti tako da se krv i antikoagulansi dobro pomiješaju. Nakon toga, uzorak se centrifugira na 1800 g tijekom 20 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon centrifugiranja, trombociti i mononuklearne stanice grade bjelkasti sloj na dnu sloja plazme, koji je poznat kao plazma bogata trombocitima (PRP). Gornji sloj poznat je kao plazma siromašna trombocitima (PPP). Mononuklearne stanice mogu se ukloniti ili ostati u uzorku. Često mononuklearne stanice ostaju u PRP uzorku kako bi se izbjegli dodatni koraci koji nose rizik od kontaminacije.
Napomena: Ultrazvučni tretman autolognog PRP-a mora se provoditi u sterilnim uvjetima.
PRP i PPP se odvajaju i skupljaju. U PPP se dodaje 1,5 mL 10% otopine kalcijevog klorida, dok se u PRP dodaje 0,5 mL 5% etanola. Obje suspenzije su lagano promiješane i ostavljene stajati 5 minuta na sobnoj temperaturi. Na kraju, 1 mL PPP se dodaje u PRP suspenziju i ostavi da stoji dok se ne formira fibrinski ugrušak.
Ultrazvučni tretman: Budući da formirani trombocitni gel djeluje kao spremnik za oslobođene čimbenike rasta, fibrinski gel mora biti prekinut kako bi se oslobodili dostupni čimbenici rasta. Parametri za ultrazvučnu lizu i oslobađanje faktora rasta su sljedeći: Sonicate s an UP200Ht ili UP200St (200W, 26kHz) sa sonotrodom S26d2 uzorak u cijevi. Kako bi se izbjeglo pregrijavanje uzorka krvi, sonikacija se može izvesti u ciklusima pulsiranja (npr. 10 sekundi uključeno, 30 sekundi isključeno). Uzorak treba staviti na led radi hlađenja tako da se temperatura optimalno održava između 2 – 5°C. Nakon sonikacije, uzorak se centrifugira na 16000 g tijekom 5 minuta. na sobnoj temperaturi. Supernatant se prikupi i može se pohraniti na -70°C.
Koncentracija trombocita u PRP frakciji bila je obogaćena 1,7 – 4,5 puta veći u ultrazvučnoj metodi u usporedbi s literaturnim prosječnim brojem trombocita u punoj krvi.

PRP je kombiniran s terapijom matičnim stanicama dobivenim iz masnog tkiva (ultrazvučno oslobođene autologne matične stanice iz masnog tkiva, pomiješan s PRP-om i ubrizgan natrag u tkivo pacijenta radi popravka).

Ultrazvučna oprema

Hielscher Ultrasonics je stručnjak za sofisticiranu i pouzdanu ultrazvučnu tehnologiju. Naši ultrazvučni uređaji koriste se diljem svijeta za lizu, ekstrakciju i pripremu uzoraka – izravnim i neizravnim. Može se autoklavirati kao i za jednokratnu upotrebu pribor osigurati a bez kontaminacije obrada uzoraka autologne krvi. Većina naših sustava može se koristiti za ultrazvučnu lizu Matične stanice i PRP, što naše ultrazvučne uređaje čini ekonomski još učinkovitijima.
Ova tablica u nastavku navodi naše ultrazvučne uređaje koji su prikladni za pripremu plazme bogate trombocitima i njihov preporučeni volumen uzorka. Dostupni su i veći ultrazvučni uređaji i prilagođeni sustavi.

Kontaktirajte nas danas! Rado ćemo Vam pomoći pronaći optimalan ultrazvučni uređaj!