Ultrasonication je važna metoda obrade za izolaciju virusa majmunskih boginja (MPXV) od analitičkih uzoraka, za fragmentaciju DNA virusa, kao i za proizvodnju cjepiva protiv majmunskih boginja. Za pripremu uzorka prije dijagnostike i analize (PCR, ELISA itd.) ultrasonication se koristi za liza stanice kako bi se oslobodio virus majmunskih boginja iz unutrašnjosti stanice i / ili za fragmentiranje DNA. U proizvodnji cjepiva primjene se kreću od pripreme čestica virusa / DNA, enkapsulacije u nositeljima lijekova i formuliranja inokule.
U nastavku možete pronaći detaljne informacije o ultrazvučnoj pripremi uzorka virusa majmunskih boginja, kao i ultrazvučno potpomognutu proizvodnju MPXV cjepiva.

Što ćete pronaći na ovoj stranici:

• Ultrazvučna liza za ekstrakciju virusa majmunskih boginja
• Ultrazvučna fragmentacija DNA virusa majmunskih boginja
• Ultrazvučne primjene u MPXV cjepivu proizvodnja

Ultrazvučna liza i FRAGMENTACIJA DNA prije lančane reakcije polimeraze (PCR)

Infekcija virusom majmunskih boginja otkriva se testiranjem pojačanja nukleinske kiseline (NAAT), koristeći lančanu reakciju polimeraze u stvarnom vremenu (PCR), za otkrivanje jedinstvenih sekvenci virusne DNK. Uzorak (npr. iz nazofaringealne zamjene ili biopsija kože) sadrži virus u stanicama.
Za analizu, virus mora biti pušten iz stanica i virusna DNA mora biti fragmentirana za PCR.

Ultrazvučna liza:

Ultrazvučni poremećaj stanica / liza je pouzdana i učinkovita metoda za izolaciju virusa iz uzoraka stanica, a time i poželjnija tehnika nad kemijskim sredstvima, kao što su lizozim, proteinaza K i različiti deterdženti koji se alternativno koriste za postizanje stanične lize i oslobađanje DNA.
Međutim, upotreba takvih kemijskih reagensa zahtijeva dugotrajnu pripremu uzorka u nekoliko koraka prije PCR analize kako bi se spriječila inhibicija PCR reakcije. Budući da PCR inhibitori utječu na učinkovitost pojačavanja, male varijacije količine inhibitora koji se ne uklanjaju mogu dovesti do velikih varijacija u pojačavanju PCR proizvoda (Diaco, 1995).
Prednost ultrazvuka za lizu je da su poželjni potpuni poremećaji staničnih struktura i oslobađanje DNA bez potrebe za lizanjem reagensa i dugotrajnom pripremom uzorka. (usp. Fykse et al., 2003)

Ultrazvučna fragmentacija DNA:

Ultrazvučna fragmentacija DNA je jednostavna i pouzdana kao što je proizvesti DNA fragmente tunable u duljinu (basepairs, bp). Pomoću ultrazvuka, DNK se može učinkovito fragmentirati na ciljanu duljinu DNA. Precizna kontrola nad ultrazvučnim parametrima i sofisticirane mogućnosti hlađenja sprječavaju razgradnju DNA.
Pročitajte više o ultrazvučnoj fragmentaciji DNA!

Ultrazvučne primjene u cjepivu protiv virusa majmunskih boginja

Cjepiva koja se koriste protiv virusa majmunskih boginja trenutno su živa cjepiva protiv virusa. Novorazvijena cjepiva mogla bi koristiti i druge platforme poput DNK-a Trenutno sadrži modificirani Vaccinia Ankara viurs, oslabljeni ortopoksivirus koji se ne replicira. Također sadrži Tris (tris-aminometan) i natrijev klorid. Cjepivo također može sadržavati male količine DNK i proteina iz fibroblast stanica pilećeg embrija, koje se koriste za uzgoj virusa cjepiva, benzonaze i antibiotskih spojeva kao što su gentamicin i ciprofloksacin.

Ultrazvučna homogenizacija koristi se u proizvodnji cjepiva protiv virusa ublaženih živim životom, DNK cjepiva, viševalentnih DNA koktela, mRNA cjepiva, rekombinantnih proteinskih cjepiva, cjepiva čestica sličnih virusu itd.

Možete pronaći detaljnije informacije o ultrazvučnim aplikacijama za poboljšanu proizvodnju cjepiva!

Protokol za ultrazvučnu izolaciju virusa majmunskih boginja

Istraživački tim Stittelaara (2005) koristio je ultrazvučnu lizu za oslobađanje virusa majmunskih boginja iz kulture stanica domaćina rasta, kao i iz stanica dobivenih zamjenom grla zaraženih primata.

Priprema cjepiva protiv majmunskih boginja:

Virusi majmunskih boginja uzgajani su na fibroblastnim stanicama pilećeg embrija bez patogena. Nakon inkubacije 1 do 2 dana, suspenzija virusnih stanica ubrana je jednim krugom zamrzavanja-odmrzavanja, a zatim koncentrirana centrifugiranjem. Kuglica je ponovno potrošena i podvrgnuta nekoliko krugova ultrazvučne homogenizacije.

Izolacija virusa majmunskih boginja od cijepljenih makakija:

Uzorci su zamrznuti-odmrznuti tri puta i ultrazvukom u ultrazvučnom CupHorn. Dva razrjeđivanja (1:10 i 1:100) u transportnom mediju dopunjena 1% fetalnim goveđim serumom korištena su za inokulaciju vero staničnih monosloja u pločama sa šest bušotina. Nakon 1 h inkubacije na 37°C, inokula je uklonjena i zamijenjena medijem kulture dopunjenom 1% fetalnim goveđim serumom. Monosloji su se obrađivali 5 dana na 37 °C i umrljali otopinom kristalne ljubičice.
(usp. Stittelaar i dr., 2005))

Ultrasonicators za analizu virusa i proizvodnju cjepiva

Hielscher Ultrasonics široki portfelj proizvoda nudi idealan ultrasonicator za istraživanje i analitičke laboratorije, kao i za industrijsku proizvodnju cjepiva.
Hielscher Ultrasonics je specijaliziran za dizajn, proizvodnju i distribuciju visokoučinkovitih ultrasonicators i sono-bioreactors za uporabu u istraživačkim i analitičkim laboratorijima kao i za provedbu u industrijskoj proizvodnji cjepiva (npr. cjepiva, Api).
Ultrazvukom se može primijeniti na otvorene posude, zatvorene reaktore koji se kontinuirano miješaju i reaktore kontinuiranog protoka. Svi dijelovi ultrazvučnih sustava, koji dolaze u kontakt s tekućim medijem, izrađeni su od nehrđajućeg čelika, titana ili stakla. Autoklavibilni dijelovi i sanitarna oprema osiguravaju proizvodnju pod uvjeti za farmaciju.
Automatsko snimanje podataka: Inteligentni softver bilježi parametre procesa ultrazvuka automatski na integriranom SD memorijsku karticu. Precizna kontrola svih parametara procesa osigurava obnovljivost, normizaciju proizvodnjei olakšava ispunjavanje standarda sigurnosti farmaceutskih proizvoda.
Hielscher Ultrasonics’ ultrazvučni procesori su vrlo pouzdani i mogu se precizno kontrolirati. Svi industrijski ultrasonicators mogu prilagoditi za isporuku punog raspona od nižih do vrlo visokih amplituda. Robusnost Hielscherovih ultrazvučnih sustava omogućuje 24/7 rad pod teškim uvjetima iu zahtjevnim okruženjima.

Tablica u nastavku daje vam pokazatelj približne mogućnosti obrade naših ultrazvučnih uređaja: