Ultrazvučne aplikacije u MonkeyPox virus

Ultrasonication je važna metoda obrade za izolaciju virusa majmunskih boginja (MPXV) od analitičkih uzoraka, za fragmentaciju DNA virusa, kao i za proizvodnju cjepiva protiv majmunskih boginja. Za pripremu uzorka prije dijagnostike i analize (PCR, ELISA itd.) ultrasonication se koristi za liza stanice kako bi se oslobodio virus majmunskih boginja iz unutrašnjosti stanice i / ili za fragmentiranje DNA. U proizvodnji cjepiva primjene se kreću od pripreme čestica virusa / DNA, enkapsulacije u nositeljima lijekova i formuliranja inokule.
U nastavku možete pronaći detaljne informacije o ultrazvučnoj pripremi uzorka virusa majmunskih boginja, kao i ultrazvučno potpomognutu proizvodnju MPXV cjepiva.

 

Što ćete pronaći na ovoj stranici:

Zahtjev za informacijama




Primijetite naše pravila o privatnosti,


High-performance ultrasonicators su kritični alat za obradu u proizvodnji mnogih cjepiva.

Ovaj sustav od 2x 1kW ultrasonicators za kontinuirani protok rada instaliran je u pogonu za proizvodnju cjepiva.

Ultrazvučna liza i FRAGMENTACIJA DNA prije lančane reakcije polimeraze (PCR)

Infekcija virusom majmunskih boginja otkriva se testiranjem pojačanja nukleinske kiseline (NAAT), koristeći lančanu reakciju polimeraze u stvarnom vremenu (PCR), za otkrivanje jedinstvenih sekvenci virusne DNK. Uzorak (npr. iz nazofaringealne zamjene ili biopsija kože) sadrži virus u stanicama.
Za analizu, virus mora biti pušten iz stanica i virusna DNA mora biti fragmentirana za PCR.

Ultrazvučna liza:

Ultrasonicator UP200Ht s mikrotipom S26d2 za ultrazvučnu lizu bioloških uzorakaUltrazvučni poremećaj stanica / liza je pouzdana i učinkovita metoda za izolaciju virusa iz uzoraka stanica, a time i poželjnija tehnika nad kemijskim sredstvima, kao što su lizozim, proteinaza K i različiti deterdženti koji se alternativno koriste za postizanje stanične lize i oslobađanje DNA.
Međutim, upotreba takvih kemijskih reagensa zahtijeva dugotrajnu pripremu uzorka u nekoliko koraka prije PCR analize kako bi se spriječila inhibicija PCR reakcije. Budući da PCR inhibitori utječu na učinkovitost pojačavanja, male varijacije količine inhibitora koji se ne uklanjaju mogu dovesti do velikih varijacija u pojačavanju PCR proizvoda (Diaco, 1995).
Prednost ultrazvuka za lizu je da su poželjni potpuni poremećaji staničnih struktura i oslobađanje DNA bez potrebe za lizanjem reagensa i dugotrajnom pripremom uzorka. (usp. Fykse et al., 2003)

Ultrazvučna fragmentacija DNA:

Ultrazvučna fragmentacija DNA je jednostavna i pouzdana kao što je proizvesti DNA fragmente tunable u duljinu (basepairs, bp). Pomoću ultrazvuka, DNK se može učinkovito fragmentirati na ciljanu duljinu DNA. Precizna kontrola nad ultrazvučnim parametrima i sofisticirane mogućnosti hlađenja sprječavaju razgradnju DNA.
Pročitajte više o ultrazvučnoj fragmentaciji DNA!

 

Video prikazuje ultrazvučni sustav pripreme uzoraka UIP400MTP, koji omogućuje pouzdanu pripremu uzorka bilo koje standardne ploče s više bušotina pomoću ultrazvuka visokog intenziteta. Tipične primjene UIP400MTP uključuju lizu stanica, DNA, RNA, i kromatina striženje, kao i ekstrakciju proteina.

Ultrasonicator UIP400MTP za ultrazvukom ploča s više bušotina

Zahtjev za informacijama




Primijetite naše pravila o privatnosti,


Ultrazvučne primjene u cjepivu protiv virusa majmunskih boginja

Ultrasonication se koristi za proizvodnju cjepiva kao što su majmunske boginje cjepiva. Cjepiva koja se koriste protiv virusa majmunskih boginja trenutno su živa cjepiva protiv virusa. Novorazvijena cjepiva mogla bi koristiti i druge platforme poput DNK-a Trenutno sadrži modificirani Vaccinia Ankara viurs, oslabljeni ortopoksivirus koji se ne replicira. Također sadrži Tris (tris-aminometan) i natrijev klorid. Cjepivo također može sadržavati male količine DNK i proteina iz fibroblast stanica pilećeg embrija, koje se koriste za uzgoj virusa cjepiva, benzonaze i antibiotskih spojeva kao što su gentamicin i ciprofloksacin.

Ultrazvučna homogenizacija koristi se u proizvodnji cjepiva protiv virusa ublaženih živim životom, DNK cjepiva, viševalentnih DNA koktela, mRNA cjepiva, rekombinantnih proteinskih cjepiva, cjepiva čestica sličnih virusu itd.

Primjena ultrazvuka u proizvodnji cjepiva kreće se od

  • disperzija čestica i agensa virusa
  • emulsification
  • inaktivacija virusa
  • formulacija nosača lijekova (NLC, SLN)
  • ovijanje
  • otapanje agenata
  • priprema adjuvansa
  • Degasing / De-Aeration

 

Možete pronaći detaljnije informacije o ultrazvučnim aplikacijama za poboljšanu proizvodnju cjepiva!

Protokol za ultrazvučnu izolaciju virusa majmunskih boginja

Istraživački tim Stittelaara (2005) koristio je ultrazvučnu lizu za oslobađanje virusa majmunskih boginja iz kulture stanica domaćina rasta, kao i iz stanica dobivenih zamjenom grla zaraženih primata.

Priprema cjepiva protiv majmunskih boginja:

Virusi majmunskih boginja uzgajani su na fibroblastnim stanicama pilećeg embrija bez patogena. Nakon inkubacije 1 do 2 dana, suspenzija virusnih stanica ubrana je jednim krugom zamrzavanja-odmrzavanja, a zatim koncentrirana centrifugiranjem. Kuglica je ponovno potrošena i podvrgnuta nekoliko krugova ultrazvučne homogenizacije.

Izolacija virusa majmunskih boginja od cijepljenih makakija:

Uzorci su zamrznuti-odmrznuti tri puta i ultrazvukom u ultrazvučnom CupHorn. Dva razrjeđivanja (1:10 i 1:100) u transportnom mediju dopunjena 1% fetalnim goveđim serumom korištena su za inokulaciju vero staničnih monosloja u pločama sa šest bušotina. Nakon 1 h inkubacije na 37°C, inokula je uklonjena i zamijenjena medijem kulture dopunjenom 1% fetalnim goveđim serumom. Monosloji su se obrađivali 5 dana na 37 °C i umrljali otopinom kristalne ljubičice.
(usp. Stittelaar i dr., 2005))

U ovom videu prikazujemo vam ultrazvučni sustav od 2 kilovata za rad u istoj liniji u ormaru koji se može pročistiti. Hielscher isporučuje ultrazvučnu opremu gotovo svim industrijama, kao što su kemijska industrija, farmaceutska industrija, kozmetika, petrokemijski procesi, kao i za procese ekstrakcije na bazi otapala. Ovaj ormar od nehrđajućeg čelika koji se može pročistiti dizajniran je za rad u opasnim područjima. U tu svrhu kupac može očistiti zatvoreni ormar dušikom ili svježim zrakom kako bi spriječio ulazak zapaljivih plinova ili para u ormar.

2x 1000 Watts Ultrasonicators u ormaru za pročišćavanje za ugradnju u opasnim područjima

Ultrasonicators za analizu virusa i proizvodnju cjepiva

Hielscher Ultrasonics široki portfelj proizvoda nudi idealan ultrasonicator za istraživanje i analitičke laboratorije, kao i za industrijsku proizvodnju cjepiva.
Hielscher Ultrasonics je specijaliziran za dizajn, proizvodnju i distribuciju visokoučinkovitih ultrasonicators i sono-bioreactors za uporabu u istraživačkim i analitičkim laboratorijima kao i za provedbu u industrijskoj proizvodnji cjepiva (npr. cjepiva, Api).
Precizna kontrola ultrazvučnih parametara procesa Hielscher Ultrasonics' inteligentni softverUltrazvukom se može primijeniti na otvorene posude, zatvorene reaktore koji se kontinuirano miješaju i reaktore kontinuiranog protoka. Svi dijelovi ultrazvučnih sustava, koji dolaze u kontakt s tekućim medijem, izrađeni su od nehrđajućeg čelika, titana ili stakla. Autoklavibilni dijelovi i sanitarna oprema osiguravaju proizvodnju pod uvjeti za farmaciju.
Automatsko snimanje podataka: Inteligentni softver bilježi parametre procesa ultrazvuka automatski na integriranom SD memorijsku karticu. Precizna kontrola svih parametara procesa osigurava obnovljivost, normizaciju proizvodnjei olakšava ispunjavanje standarda sigurnosti farmaceutskih proizvoda.
Hielscher Ultrasonics’ ultrazvučni procesori su vrlo pouzdani i mogu se precizno kontrolirati. Svi industrijski ultrasonicators mogu prilagoditi za isporuku punog raspona od nižih do vrlo visokih amplituda. Robusnost Hielscherovih ultrazvučnih sustava omogućuje 24/7 rad pod teškim uvjetima iu zahtjevnim okruženjima.

Tablica u nastavku daje vam pokazatelj približne mogućnosti obrade naših ultrazvučnih uređaja:

Batch Volumen Protok Preporučeni uređaji
multi-well / mikrotiter ploče N/a UIP400MTP
1 do 500 mL 10 do 200 mL / min UP100H
10 do 2000 ml 20 do 400 mL / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 do 20L 0.2 do 4L / min UIP2000hdT
10 do 100L 2 do 10 l / min UIP4000hdT
N/a 10 do 100 l / min UIP16000
N/a veći grozd UIP16000

Kontaktirajte nas! / Pitajte nas!

Zatražite dodatne informacije

Molimo koristite obrazac u nastavku kako biste zatražili dodatne informacije o ultrazvučnim procesorima, aplikacijama i cijeni. Rado ćemo razgovarati o vašem procesu s vama i ponuditi vam ultrazvučni sustav koji zadovoljava vaše zahtjeve!









Molimo, imajte na umu da je pravila o privatnosti,


Ultrazvučni homogenizatori su pouzdani za REZANJE DNA

Ultrasonic shearing DNA
Prilagođeno iz Jkwchuija pod CC-BY-SA.03



Književnost / Reference

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Činjenice koje vrijedi znati

Virus majmunskih boginja

Monkeypox (MPV, MPXV ili hMPXV) je vrsta dvolančanog DNA virusa, koji uzrokuje virusnu zoonotsku bolest. Ova bolest je poznata kao infekcija majmunskim boginjama i može se pojaviti kod ljudi i životinja. Pripada rodu Orthopoxvirus u obitelji Poxviridae. Virus majmunskih boginja jedan je od virusa humanog ortopoksa zajedno s virusima variole (VARV), kravljih boginja (CPX) i vakcinije (VACV). Ortopoksiviruse karakteriziraju velike čestice virusa u obliku opeke, koje sadrže dvolančani genom DNA od oko 200.000 bp.

ELISA Assay

ELISA je kratica za enzimski povezan imunosorbenti test i označen je imunoassay koji se smatra zlatnim standardom imunoassaysays. ELISA je imunološki test, cijenjen zbog svoje visoke dijagnostičke osjetljivosti, koristi se za otkrivanje i kvantificiranje molekula, uključujući antitijela, antigene, proteine, glikoproteine i hormone. Načelo ELISA-e temelji se na interakciji antigena i antitijela. Ovom interakcijom antigena i antitijela, specifična antitijela vežu se za ciljani antigen. Tek kada dođe do interakcije, supstrat se može vezati za enzim i može se primijetiti naknadna pretvorba supstrata, što znači da se dobiva pozitivan rezultat.


Visoke performanse ultrazvuka! Hielscherov asortiman pokriva cijeli spektar od kompaktnog laboratorijskog ultrasonicatora preko klupa-top jedinica do potpuno industrijskih ultrazvučnih sustava.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi Laboratorija do industrijske veličine.