יישומים קוליים בנגיף אבעבועות הקוף

אולטרה-סוניקציה היא שיטת עיבוד חשובה לבידוד נגיף אבעבועות הקוף (MPXV) מדגימות אנליטיות, לפיצול DNA של הנגיף וכן לייצור חיסונים נגד אבעבועות הקוף. להכנת דגימה לפני אבחון וניתוח (PCR, ELISA וכו ') אולטרסוניקציה משמשת כדי lyse תאים על מנת לשחרר את וירוס אבעבועות הקוף מן פנים התא ו / או כדי לשבור DNA. בייצור חיסונים, היישומים נעים בין הכנת חלקיקי וירוס/DNA, אנקפסולציה בנשאי תרופות וניסוח החיסון.
להלן תוכלו למצוא מידע מפורט על הכנת דגימת נגיף אבעבועות הקוף קולי, כמו גם ייצור חיסון MPXV בסיוע אולטרה-סאונד.

מה תמצאו בעמוד זה:

• ליזה קולית למיצוי נגיף אבעבועות הקוף
• פיצול קולי של DNA וירוס אבעבועות הקוף
• יישומים קוליים בייצור חיסון MPXV

ליזה קולית ופיצול DNA לפני תגובת שרשרת פולימראז (PCR)

זיהום בנגיף אבעבועות הקוף מזוהה על ידי בדיקת הגברת חומצות גרעין (NAAT), באמצעות תגובת שרשרת פולימראז קונבנציונלית בזמן אמת (PCR), לזיהוי רצפים ייחודיים של DNA נגיפי. הדגימה (למשל מהחלפת אף ולוע או ביופסיות עור) מכילה את הנגיף בתאים.
לצורך ניתוח, הנגיף חייב להשתחרר מהתאים והדנ"א הנגיפי חייב להיות מקוטע עבור PCR.

ליזה קולית:

שיבוש תאים אולטראסוני / ליזה היא שיטה אמינה ויעילה לבידוד וירוסים מדגימות תאים ובכך טכניקה עדיפה על פני חומרים כימיים, כגון ליזואנזים, פרוטאינאז K ודטרגנטים שונים המשמשים לחילופין להשגת ליזה תאית ושחרור DNA.
עם זאת, השימוש בריאגנטים כימיים כאלה דורש הכנת דגימה גוזלת זמן במספר שלבים לפני ניתוח PCR כדי למנוע עיכוב של תגובת PCR. מכיוון שמעכבי PCR משפיעים על יעילות ההגברה, וריאציות קטנות של כמות המעכבים שאינן מוסרות יכולות להוביל לשינויים גדולים בהגברת מוצר ה- PCR (Diaco, 1995).
היתרון של אולטרה-סוניקציה עבור ליזה הוא כי שיבוש מוחלט של מבנים תאיים ושחרור של DNA ללא צורך ריאגנטים שקר והכנת דגימה זמן רב רצויים. (ראה: Fykse et al., 2003)

פיצול DNA קולי:

פיצול דנ"א על-קולי הוא פשוט ואמין ומייצר מקטעי DNA באורך (basepairs, bp). באמצעות אולטרסאונד, DNA יכול להיות מקוטע ביעילות לאורך ה- DNA הממוקד. שליטה מדויקת בפרמטרים על-קוליים ואפשרויות קירור מתוחכמות מונעות התפרקות DNA.
קרא עוד על פיצול DNA קולי!

יישומים קוליים בחיסון נגד נגיף אבעבועות הקוף

חיסונים המשמשים נגד נגיף אבעבועות הקוף הם כיום חיסונים נגד וירוסים חיים. חיסונים חדשים שפותחו עשויים להשתמש בפלטפורמות אחרות כגון מבוסס DNA כיום מכיל חיסון שונה אנקרה viurs, וירוס אורתו-אבעבועות מוחלש, שאינו משתכפל. הוא מכיל גם Tris (tris-aminomethane) ונתרן כלורי. החיסון עשוי להכיל גם כמויות קטנות של DNA וחלבון מתאי פיברובלסט עוברי תרנגולות, המשמשים לגידול נגיף החיסון, בנזונאז ותרכובות אנטיביוטיות כגון גנטמיצין וציפרופלוקסצין.

הומוגניזציה על-קולית משמשת לייצור חיסונים נגד וירוסים חיים מוחלשים, חיסוני DNA, קוקטיילים רב-ערכיים של DNA, חיסוני mRNA, חיסונים נגד חלבונים רקומביננטיים, חיסונים נגד חלקיקים דמויי וירוס ועוד.

אתה יכול למצוא מידע מעמיק יותר על יישומים קוליים לייצור חיסונים משופרים!

פרוטוקול בידוד אולטראסוני של נגיף אבעבועות הקוף

צוות המחקר של Stittelaar (2005) השתמש בליזה קולית כדי לשחרר את נגיף אבעבועות הקוף מתרבית התאים המארחת הגדלה, כמו גם מתאים שהתקבלו באמצעות חילופי גרון מפרימטים נגועים.

הכנת החיסון נגד אבעבועות הקוף:

נגיפי אבעבועות הקוף גודלו על תאי פיברובלסטים ספציפיים של עוברי תרנגולות נטולי פתוגנים. לאחר דגירה של יום עד יומיים, תרחיף תאי הנגיף נקצר בסבב אחד של הפשרה בהקפאה ולאחר מכן רוכז על ידי צנטריפוגה. הגלולה הושעתה מחדש והייתה נתונה למספר סבבים של הומוגניזציה קולית.

בידוד נגיף אבעבועות הקוף מקופי מקוק מחוסנים:

הדגימות הופשרו בהקפאה שלוש פעמים ועברו סוניקציה ב-CupHorn על-קולי. שני דילולים (1:10 ו-1:100) בתווך הובלה בתוספת נסיוב בקר עוברי 1% שימשו לחיסון חד-שכבות של תאי ורו בצלחות בעלות שש בארות. לאחר שעה של דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, החיסון הוסר והוחלף במדיום תרבית בתוספת סרום בקר עוברי 1%. החד-שכבות גודלו בתרבית במשך 5 ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ונצבעו בתמיסה סגולה קריסטלית.
(ראה: Stittelaar et al., 2005)

אולטרסאונד לניתוח וירוסים וייצור חיסונים

תיק המוצרים הרחב של Hielscher Ultrasonics מציע את האולטרסאונד האידיאלי למעבדות מחקר ואנליטיקה, כמו גם לייצור חיסונים תעשייתיים.
Hielscher Ultrasonics מתמחה בתכנון, ייצור והפצה של ultrasonicators ביצועים גבוהים ו sono-bioreactors לשימוש במחקר ומעבדות אנליטיות, כמו גם ליישום בייצור חיסונים תעשייתיים (למשל. חיסונים, ממשקי API).
ניתן ליישם סוניקציה על כלי שיט פתוחים, כורים סגורים המופעלים ברציפות וכורים זורמים דרך זרימה רציפה. כל חלקי המערכות העל-קוליות, אשר באים במגע עם המדיום הנוזלי, עשויים מנירוסטה, טיטניום או זכוכית. חלקים הניתנים להרכבה ואביזרים סניטריים מבטיחים את הייצור תחת תנאים ברמת פארמה.
רישום נתונים אוטומטי: תוכנה חכמה מתעדת את הפרמטרים של תהליך הסוניקציה באופן אוטומטי בכרטיס זיכרון SD משולב. הבקרה המדויקת של כל פרמטרי התהליך מבטיחה את יכולת שחזור, סטנדרטיזציה של הייצורומקל על עמידה בתקני בטיחות של מוצרים פרמצבטיים.,
Hielscher Ultrasonics’ מעבדים קוליים הם אמינים מאוד וניתן לשלוט במדויק. כל האולטרסאונד התעשייתי יכול להתאים כדי לספק את הטווח המלא ממשרעת נמוכה עד גבוהה מאוד. החוסן של המערכות הקוליות של Hielscher מאפשר פעולה 24/7 תחת חובה כבדה ובסביבות תובעניות.

הטבלה הבאה נותנת לך אינדיקציה ליכולת העיבוד המשוערת של האולטרסאונד שלנו: