એન્ટિમાઇક્રોબાયલ મૂલ્યાંકન માટે ASTM E2799-22 પ્રોટોકોલ

Hielscher UIP400MTP એ ASTM E2799-22 પ્રોટોકોલમાં સોનિકેશન સ્ટેપને સુવ્યવસ્થિત કરવા માટે રચાયેલ શક્તિશાળી અને કાર્યક્ષમ મલ્ટી-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર છે. સમગ્ર માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ પર એકસમાન અલ્ટ્રાસોનિક ઉર્જા પહોંચાડીને, UIP400MTP કોષોને નુકસાન પહોંચાડ્યા વિના અથવા નમૂનાની અખંડિતતા સાથે સમાધાન કર્યા વિના પેગ લિડ્સમાંથી બાયોફિલ્મ્સની સુસંગત અને વિશ્વસનીય ટુકડીને સુનિશ્ચિત કરે છે. તેની ઉચ્ચ-થ્રુપુટ ક્ષમતા અને વપરાશકર્તા-મૈત્રીપૂર્ણ કામગીરી પ્રજનનક્ષમતા વધારતી વખતે પ્રક્રિયાના સમયને નોંધપાત્ર રીતે ઘટાડે છે, જે તેને બાયોફિલ્મ સધ્ધરતા પરીક્ષણો અને એન્ટિમાઇક્રોબાયલ અસરકારકતા પરીક્ષણનું સંચાલન કરતી પ્રયોગશાળાઓ માટે એક આદર્શ ઉકેલ બનાવે છે.

ASTM E2799

ASTM E2799 એ બાયોફિલ્મ સામે એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટોની અસરકારકતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે રચાયેલ પ્રમાણિત પરીક્ષણ પદ્ધતિ છે, ખાસ કરીને સ્યુડોમોનાસ એરુગિનોસા પર ધ્યાન કેન્દ્રિત કરે છે. બાયોફિલ્મ્સ એ જટિલ માઇક્રોબાયલ સમુદાયો છે જે સપાટીને વળગી રહે છે અને એન્ટિમાઇક્રોબાયલ સારવાર માટે ઉચ્ચ પ્રતિકાર દર્શાવે છે, જે તેમને આરોગ્યસંભાળ, ઔદ્યોગિક અને પર્યાવરણીય સંદર્ભોમાં નોંધપાત્ર પડકાર બનાવે છે. વાસ્તવિક બાયોફિલ્મ શરતો હેઠળ જંતુનાશકોનું પરીક્ષણ કરવા માટે વિશ્વસનીય અને પુનઃઉત્પાદનક્ષમ માળખું પૂરું પાડવા માટે આ પદ્ધતિ ન્યૂનતમ બાયોફિલ્મ ઇરેડિકેશન કોન્સન્ટ્રેશન (MBEC) એસેનો ઉપયોગ કરે છે.

ASTM E2799 માં Sonication કેવી રીતે ફાળો આપે છે?

સોનિકેશન એ ASTM E2799 પ્રોટોકોલમાં પરીક્ષણ સપાટીથી બાયોફિલ્મ્સને અલગ કરવાની સુવિધા આપીને, સારવાર પછી માઇક્રોબાયલ સદ્ધરતાનું ચોક્કસ મૂલ્યાંકન સુનિશ્ચિત કરીને નિર્ણાયક ભૂમિકા ભજવે છે. નિયંત્રિત અલ્ટ્રાસોનિક ઉર્જાનો ઉપયોગ કરીને, પ્રોટોકોલ કોષોને નુકસાન પહોંચાડ્યા વિના કાર્યક્ષમ અને સુસંગત બાયોફિલ્મ વિક્ષેપ પ્રાપ્ત કરે છે, ચોક્કસ અને પુનઃઉત્પાદન પરિણામોને સક્ષમ કરે છે. આ ASTM E2799 ને બાયોફિલ્મ સંશોધનને આગળ વધારવા અને અસરકારક એન્ટિમાઇક્રોબાયલ વ્યૂહરચના વિકસાવવા માટે એક આવશ્યક સાધન બનાવે છે.

ASTM E2799-22 અનુસાર MBEC પરીક્ષા કેવી રીતે ચલાવવી

ASTM E2799-22 પ્રોટોકોલ બાયોફિલ્મ્સ સામે એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટોની અસરકારકતાના મૂલ્યાંકન માટેના પગલાંની રૂપરેખા આપે છે. Hielscher UIP400MTP માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ સોનીકેટરનો ઉપયોગ કરતી વખતે, પ્રોટોકોલને બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ માટે આ અદ્યતન સોનિકેશન પદ્ધતિને સમાવિષ્ટ કરવા માટે અનુકૂલિત કરી શકાય છે. નીચે માઇક્રોપ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP નો ઉપયોગ કરવા માટે તૈયાર કરેલ પગલાંઓનું વર્ણન છે:

1. બાયોફિલ્મની તૈયારી
   અલગ કરી શકાય તેવા પેગ ઢાંકણા સાથે જંતુરહિત 96-વેલ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ તૈયાર કરો.
   યોગ્ય વૃદ્ધિ માધ્યમમાં પ્રમાણિત બેક્ટેરિયલ સસ્પેન્શન સાથે કુવાઓને ઇનોક્યુલેટ કરો.
   ખીંટીનું ઢાંકણ પ્લેટ પર મૂકો, ખાતરી કરો કે ડટ્ટા બેક્ટેરિયલ સસ્પેન્શનમાં સંપૂર્ણ રીતે ડૂબી ગયા છે.
   પ્લેટને અંકુશિત સ્થિતિમાં (દા.ત., તાપમાન અને સમય) માં ઉકાળો જેથી ડટ્ટા પર બાયોફિલ્મ રચાય.
2. એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટો સાથે સારવાર
   બાયોફિલ્મની રચના પછી, વિવિધ સાંદ્રતામાં પરીક્ષણ એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટો ધરાવતા તાજા માધ્યમથી માધ્યમને બદલો.
   ખીંટીનું ઢાંકણું ફરીથી જોડો અને પરીક્ષણ ડિઝાઇનમાં ઉલ્લેખિત શરતો હેઠળ ઉકાળો.
3. બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ માટેની તૈયારી
   સારવાર પછી, શેષ એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટો અને ઢીલી રીતે વળગી રહેલા પ્લાન્કટોનિક કોષોને દૂર કરવા માટે જંતુરહિત રિન્સ સોલ્યુશનમાં ડૂબીને ખીંટીના ઢાંકણને કોગળા કરો.
4. UIP400MTP સોનિકેટરનો ઉપયોગ કરીને બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ
   પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ ધરાવતી તાજી 96-વેલ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટ તૈયાર કરો (દા.ત., તટસ્થ સૂપ).
   પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ પ્લેટના કૂવામાં ખીંટીનું ઢાંકણું મૂકીને બાયોફિલ્મ્સને અલગ કરો.
   પ્લેટને UIP400MTP સોનિકેટરમાં દાખલ કરો, ઢાંકણ અને પ્લેટ યોગ્ય રીતે સંરેખિત છે તેની ખાતરી કરો.
   સેલ લિસિસ વિના સતત બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટની ખાતરી કરવા માટે, સોનિકેટરને 70%-80% કંપનવિસ્તાર પર સેટ કરો અને સાયકલ મોડ પર 3-4 મિનિટ માટે સોનિકેટ કરો.
5. બાયોફિલ્મ સધ્ધરતાનું મૂલ્યાંકન
   સોનિકેશન પછી, પ્રમાણભૂત માઇક્રોબાયોલોજીકલ અથવા વિશ્લેષણાત્મક તકનીકોનો ઉપયોગ કરીને ડિટેચ્ડ બાયોફિલ્મ કોષો ધરાવતા પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમની પ્રક્રિયા કરો, જેમ કે:
   • કોલોની-ફોર્મિંગ યુનિટ (CFU) ગણતરીઓ: સક્ષમ કોષની ગણતરી માટે અગર પર સીરીયલ ડિલ્યુશન અને પ્લેટ કરો.
   • ઓપ્ટિકલ ડેન્સિટી (OD) માપ: સેલ ડેન્સિટીનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રિક વિશ્લેષણનો ઉપયોગ કરો.
   • ફ્લોરોસેન્સ-આધારિત કાર્યક્ષમતા પરીક્ષણો: ફ્લોરોસન્ટ રંગોનો ઉપયોગ કરીને જીવંત અને મૃત કોષોનું પ્રમાણ નક્કી કરો.
6. માહિતી વિશ્લેષણ
   એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટોની અસરકારકતા નક્કી કરવા માટે સારવાર કરેલ અને સારવાર ન કરાયેલ બાયોફિલ્મની સદ્ધરતા ડેટાની તુલના કરો.
   સધ્ધર બાયોફિલ્મ કોષોને દૂર કરવા માટે જરૂરી એકાગ્રતાના આધારે ન્યૂનતમ બાયોફિલ્મ નાબૂદી સાંદ્રતા (MBEC) ની ગણતરી કરો.
7. ગુણવત્તા નિયંત્રણ
   નિયમિતપણે UIP400MTP નું માપાંકન કરીને અને બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ પ્રક્રિયા નોંધપાત્ર સેલ લિસિસ અથવા વિનાશમાં પરિણમી નથી તેની ચકાસણી કરીને સુસંગત સોનિકેશન શરતોની ખાતરી કરો.
   પરિણામોને માન્ય કરવા માટે યોગ્ય નિયંત્રણો, જેમ કે સારવાર ન કરાયેલ બાયોફિલ્મ્સ અને મધ્યમ-માત્ર ખાલી જગ્યાઓ શામેલ કરો.

પિન પર બનેલા બાયોફિલ્મ કોષોને સોનિકેશન (Hielscher Ultrasound Technology, Teltow, Germany, UIP250MTP) દ્વારા કોશિકાઓની પુનઃપ્રાપ્તિ માટે તાજા સંસ્કૃતિ માધ્યમ ધરાવતી 96-વેલ પ્લેટમાં 5 મિનિટ માટે વિખેરી નાખવામાં આવી હતી.
(ચિત્ર અને અભ્યાસ: ©de Oliveira et al., 2016)

UIP400MTP ને ASTM E2799-22 વર્કફ્લોમાં એકીકૃત કરીને, બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટની પ્રક્રિયા સુસંગતતા, કાર્યક્ષમતા અને ઉચ્ચ-થ્રુપુટ એપ્લિકેશન્સ માટે ઑપ્ટિમાઇઝ કરવામાં આવે છે.