96-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP વડે MBEC પરીક્ષણની કાર્યપદ્ધતિ

પેગવાળા ઢાંકણ પર બનેલી બાયોફિલ્મને નાબૂદ કરવા માટે જરૂરી પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકોની સાંદ્રતા નક્કી કરવા MBEC પરીક્ષણનો ઉપયોગ થાય છે. બાયોફિલ્મની જીવંતતા આંકવા માટે પહેલાં બાયોફિલ્મને 96-વેલ પ્લેટનાં પેગવાળા ઢાંકણથી અલગ કરવી જરૂરી છે. આ રીતે અલગ કરવા માટે સોનિકેશન સૌથી વિશ્વસનીય અને કાર્યક્ષમ પદ્ધતિ છે. મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP ખાસ કરીને મહત્તમ કાર્યક્ષમતા અને સુવિધા સાથે પરીક્ષણ પ્લેટો પર પ્રક્રિયા કરવા માટે રચાયેલું છે, જે ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતાવાળાં MBEC પરીક્ષણોને સુવ્યવસ્થિત અને ઝડપી બનાવે છે.

બાયોફિલ્મને અલગ કરવા માટે સોનિકેશન

ન્યૂનતમ બાયોફિલ્મ નાબૂદી સાંદ્રતા (MBEC) પરીક્ષણોમાં સોનિકેશન એક નિર્ણાયક પગલું છે, જે બાયોફિલ્મના કોષોને તેમની જોડાયેલી સપાટી પરથી અસરકારક રીતે અલગ કરવાનું શક્ય બનાવે છે. બાયોફિલ્મ સ્વાભાવિક રીતે બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સમાં ઘેરાયેલા સૂક્ષ્મજીવોના સુવ્યવસ્થિત સમુદાયો છે, જેના કારણે તેઓ મુક્તપણે તરતા કોષોની સરખામણીમાં પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકો સામે નોંધપાત્ર રીતે વધુ પ્રતિરોધક હોય છે. MBEC પરીક્ષણો દરમિયાન સોનિકેશનમાં અલ્ટ્રાસોનિક તરંગોનો ઉપયોગ કરીને નિયંત્રિત કેવિટેશન ઉત્પન્ન કરવામાં આવે છે, જે બાયોફિલ્મના મેટ્રિક્સને વિક્ષેપિત કરે છે અને તેમાં રહેલા કોષોને નિલંબનમાં મુક્ત કરે છે. આ પગલું બાયોફિલ્મના કોષો પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમમાં સમાન રીતે વિખેરાય તે સુનિશ્ચિત કરે છે, જેથી પ્લેટિંગ, મંદન અથવા સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રિક પદ્ધતિઓ દ્વારા જીવંતતાનું સચોટ મૂલ્યાંકન સરળ બને છે. બાયોફિલ્મને યોગ્ય રીતે અલગ કરવામાં ન આવે તો મેટ્રિક્સના અવશેષ ઘટકો કોષોને રક્ષણ આપી શકે છે, જેના કારણે પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી અસરકારકતા ઓછી આંકવામાં આવી શકે છે. તેથી પરીક્ષણ કરાયેલા કારકોની વાસ્તવિક નાબૂદી ક્ષમતા દર્શાવતાં વિશ્વસનીય અને પુનરુત્પાદનીય MBEC મૂલ્યો મેળવવા માટે સોનિકેશન અનિવાર્ય છે. મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP પરીક્ષણ પ્લેટોમાં ઉચ્ચ નમૂના પ્રક્રિયા ક્ષમતા સાથે સહેલાઈથી નમૂના તૈયાર કરવાનું શક્ય બનાવે છે.

ન્યૂનતમ બાયોફિલ્મ નાબૂદી સાંદ્રતા (MBEC) પરીક્ષણની કાર્યપદ્ધતિ

પગલું 1: બાયોફિલ્મનું નિર્માણ

1. બેક્ટેરિયાનું નિલંબન તૈયાર કરો:
   યોગ્ય માધ્યમોમાં બેક્ટેરિયાને લઘુગણકીય વૃદ્ધિ તબક્કા સુધી ઉછેરો.
   બેક્ટેરિયલ સંવર્ધનને નિર્ધારિત પ્રકાશીય ઘનતા (દા.ત., OD600 ~0.1) સુધી મંદ કરો.
2. 96-વેલ પ્લેટમાં બેક્ટેરિયાનું નિવેશન કરો:
   પ્રમાણભૂત 96-વેલ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટના દરેક વેલમાં બેક્ટેરિયાનું નિલંબન (દા.ત., 150–200 µL) ઉમેરો.
3. પેગવાળું ઢાંકણ લગાવો:
   પેગની સપાટીઓ પર બાયોફિલ્મ બની શકે તે માટે નિવેશન કરેલી પ્લેટ પર પેગવાળું ઢાંકણ મૂકો.
4. પ્લેટને ઇન્ક્યુબેટ કરો:
   બાયોફિલ્મની વૃદ્ધિને પ્રોત્સાહન આપવા માટે આ ગોઠવણીને હલાવ્યા વિના યોગ્ય તાપમાને (દા.ત., 37°C) 24–48 કલાક સુધી ઇન્ક્યુબેટ કરો.

પગલું 2: પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકો વડે ઉપચાર

• પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી દ્રાવણો તૈયાર કરો:
  તાજાં માધ્યમોમાં વિવિધ સાંદ્રતાવાળાં પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી દ્રાવણો તૈયાર કરો.
  બાયોફિલ્મને પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકોના સંપર્કમાં લાવો:
  બેક્ટેરિયલ સંવર્ધનમાંથી પેગવાળું ઢાંકણ કાઢો અને મુક્તપણે તરતા કોષોને દૂર કરવા તેને જંતુરહિત સેલાઇન અથવા PBSમાં ધુઓ.
  પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી દ્રાવણો ધરાવતી નવી 96-વેલ પ્લેટમાં પેગવાળું ઢાંકણ મૂકો.
• પ્લેટને ઇન્ક્યુબેટ કરો:
  પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકો સાથે સંપર્ક થઈ શકે તે માટે નિર્ધારિત સમયગાળા (દા.ત., 24 કલાક) સુધી ઇન્ક્યુબેટ કરો.

પગલું 3: 96-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP વડે સોનિકેશન

જીવંતતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે પેગવાળા ઢાંકણથી બાયોફિલ્મને અલગ કરવામાં સોનિકેશનનું પગલું નિર્ણાયક છે. UIP400MTP સોનિકેટર માટે આ પગલાં અનુસરો:

1. ગોઠવણી તૈયાર કરો:
   નવી 96-વેલ પ્લેટના દરેક વેલમાં પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ (દા.ત., તટસ્થીકરણ કરતું બ્રોથ અથવા તાજું વૃદ્ધિ માધ્યમ) ભરો.
2. પેગવાળું ઢાંકણ સ્થાનાંતરિત કરો:
   પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી ઉપચારની પ્લેટમાંથી પેગવાળું ઢાંકણ કાઢો.
   અવશેષ પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકોને દૂર કરવા માટે પેગવાળા ઢાંકણને જંતુરહિત સેલાઇન અથવા PBSમાં ધુઓ.
3. પ્લેટ અને સોનિકેટરને યોગ્ય સ્થાને ગોઠવો:
   પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ ધરાવતી પ્લેટ પર પેગવાળું ઢાંકણ લગાવો.
   પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ ધરાવતી પ્લેટને UIP400MTP સોનિકેટરના પ્લેટફોર્મ પર મૂકો અને પ્લેટ મધ્યમાં તથા સ્થિર હોય તે સુનિશ્ચિત કરો.
4. સોનિકેશનનાં પરિમાણો સમાયોજિત કરો:
   UIP400MTP પર સોનિકેશનનાં પરિમાણો સેટ કરો (સેટિંગ્સ બાયોફિલ્મ અનુસાર સમાયોજિત કરી શકાય છે):
   કંપવિસ્તાર: 70–100%.
   સોનિકેશનનો સમય: ચક્ર મોડમાં 1–3 મિનિટ (બાયોફિલ્મની મજબૂતીના આધારે સમાયોજિત કરો).
5. સોનિકેશન કરો:
   સોનિકેશનની પ્રક્રિયા શરૂ કરો. અલ્ટ્રાસોનિક કંપન બાયોફિલ્મને પેગની સપાટીઓ પરથી અલગ કરીને પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમમાં મુક્ત કરશે.
6. પ્રક્રિયા પર નજર રાખો:
   વેલમાં રહેલા નમૂનાના તાપમાન પર નજર રાખવા માટે પ્લગથી જોડી શકાય તેવા તાપમાન સેન્સરનો ઉપયોગ કરો. ઠંડક માટે UIP400MTP ને લેબ ચિલર સાથે જોડી શકાય છે.
7. સોનિકેશન પછીની કામગીરી:
   આગળના વિશ્લેષણ માટે પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમને (જેમાં હવે અલગ કરેલી બાયોફિલ્મ છે) તરત જ નવી જંતુરહિત પ્લેટમાં સ્થાનાંતરિત કરો.

(A) 2% ગ્લુકોઝવાળું TSB ધરાવતી પ્લેટ, જેનો ઉપયોગ બાયોફિલ્મના નિર્માણ, કોષોની પુનઃપ્રાપ્તિ અને
MIC તથા MBCB ના નિર્ધારણ માટે થાય છે; (B) સ્ટેફિલોકોકલ બાયોફિલ્મના નિર્માણ માટે પિનવાળું ઢાંકણ. MIC તથા MBCB નું નિર્ધારણ; (B) સ્ટેફિલોકોકલ બાયોફિલ્મના નિર્માણ માટે પિનવાળું ઢાંકણ.
પિન પર બનેલા બાયોફિલ્મના કોષોને કોષોની પુનઃપ્રાપ્તિ માટે તાજું સંવર્ધન માધ્યમ ધરાવતી 96-વેલ પ્લેટોમાં 5 min સુધી સોનિકેશન (Hielscher Ultrasound Technology) કરીને અલગ કરવામાં આવ્યા હતા.
(ચિત્ર અને અભ્યાસ: ©de Oliveira et al., 2016)

પગલું 4: જીવંતતાનું મૂલ્યાંકન

અલગ કરેલી બાયોફિલ્મનું પ્લેટિંગ અને સંવર્ધન કરો:

1. કોલોની બનાવતા એકમો (CFU)ની ગણતરી કરવા માટે પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમનું ક્રમિક મંદન કરો અને અગર પર પ્લેટિંગ કરો.
   વૈકલ્પિક રીતે, વર્ણમિતીય અથવા પ્રતિદીપ્તિ આધારિત જીવંતતા પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરો.
2. પરિણામો નોંધો:
   બાયોફિલ્મની શોધી શકાય તેવી જીવંતતાને નાબૂદ કરનારી પ્રતિસૂક્ષ્મજીવી કારકની સૌથી ઓછી સાંદ્રતાને MBEC તરીકે નક્કી કરો.

ડિઝાઇન, ઉત્પાદન અને પરામર્શ – જર્મનીમાં નિર્મિત ગુણવત્તા

Hielscher અલ્ટ્રાસોનિકેટરો તેમની સર્વોચ્ચ ગુણવત્તા અને ડિઝાઇનનાં ધોરણો માટે જાણીતા છે. મજબૂતી અને સરળ સંચાલનને કારણે અમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટરોનું ઔદ્યોગિક સુવિધાઓમાં સરળતાથી એકીકરણ થઈ શકે છે. Hielscher સોનિકેટરો કઠોર પરિસ્થિતિઓ અને પડકારજનક વાતાવરણનો સરળતાથી સામનો કરે છે.

Hielscher Ultrasonics એક ISO પ્રમાણિત કંપની છે અને અત્યાધુનિક ટેકનોલોજી તથા વપરાશની સરળતા ધરાવતા ઉચ્ચ કાર્યક્ષમતાવાળા અલ્ટ્રાસોનિકેટરો પર વિશેષ ભાર મૂકે છે. અલબત્ત, Hielscher અલ્ટ્રાસોનિકેટરો CEને અનુરૂપ છે અને UL, CSA તથા RoHsની આવશ્યકતાઓ પૂરી કરે છે.

MBEC પરીક્ષણનો ઉપયોગ કરીને Pseudomonas aeruginosa બાયોફિલ્મ સામે જંતુનાશકની અસરકારકતા તપાસવાની ASTM E2799 કાર્યપદ્ધતિ દરમિયાન નમૂના તૈયારીના એક પગલા તરીકે બાયોફિલ્મને અલગ કરવા UIP400MTP નો કેવી રીતે ઉપયોગ થાય છે તે અહીં વાંચો.