96-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP નો ઉપયોગ કરીને MBEC એસે પ્રોટોકોલ

MBEC એસેનો ઉપયોગ પેગ લિડ્સ પર બનેલી બાયોફિલ્મ્સને દૂર કરવા માટે જરૂરી એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટોની સાંદ્રતા નક્કી કરવા માટે થાય છે. બાયોફિલ્મની કાર્યક્ષમતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે, બાયોફિલ્મ્સને સૌપ્રથમ 96-વેલ પ્લેટના પેગ લિડ્સમાંથી અલગ કરવા જોઈએ. આ ટુકડી માટે સોનિકેશન એ સૌથી વિશ્વસનીય અને કાર્યક્ષમ પદ્ધતિ છે. મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP ખાસ કરીને મહત્તમ કાર્યક્ષમતા અને સગવડતા સાથે, ઉચ્ચ-થ્રુપુટ MBEC એસેસને સુવ્યવસ્થિત કરવા અને વેગ આપવા માટે એસે પ્લેટની પ્રક્રિયા કરવા માટે ડિઝાઇન કરવામાં આવી છે.

બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ માટે સોનિકેશન

સોનિકેશન એ મિનિમમ બાયોફિલ્મ ઇરેડિકેશન કોન્સન્ટ્રેશન (MBEC) એસેસમાં એક નિર્ણાયક પગલું છે, જે બાયોફિલ્મ કોશિકાઓને તેમના સપાટીના જોડાણમાંથી અસરકારક રીતે દૂર કરવામાં સક્ષમ બનાવે છે. બાયોફિલ્મ્સ એ બાહ્યકોષીય મેટ્રિક્સમાં બંધાયેલ સુક્ષ્મસજીવોના સ્વાભાવિક રીતે સંરચિત સમુદાયો છે, જે તેમને પ્લાન્કટોનિક કોષોની તુલનામાં એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટો માટે નોંધપાત્ર રીતે વધુ પ્રતિરોધક બનાવે છે. MBEC assays દરમિયાન, sonication નિયંત્રિત પોલાણ પેદા કરવા માટે અલ્ટ્રાસોનિક તરંગોનો ઉપયોગ કરે છે, બાયોફિલ્મ મેટ્રિક્સને વિક્ષેપિત કરે છે અને સસ્પેન્શનમાં એમ્બેડેડ કોષોને મુક્ત કરે છે. આ પગલું સુનિશ્ચિત કરે છે કે બાયોફિલ્મ કોષો પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમમાં સમાનરૂપે વિખરાયેલા છે, પ્લેટિંગ, ડિલ્યુશન અથવા સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રિક પદ્ધતિઓ દ્વારા સચોટ સધ્ધરતા મૂલ્યાંકનની સુવિધા આપે છે. યોગ્ય બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ વિના, અવશેષ મેટ્રિક્સ ઘટકો કોષોને સુરક્ષિત કરી શકે છે, જે એન્ટિમાઇક્રોબાયલ અસરકારકતાને ઓછો અંદાજ તરફ દોરી જાય છે. તેથી, સોનિકેશન એ વિશ્વસનીય અને પુનઃઉત્પાદનક્ષમ MBEC મૂલ્યો મેળવવા માટે અનિવાર્ય છે, જે પરીક્ષણ કરેલ એજન્ટોની સાચી નાબૂદી સંભવિતતાને પ્રતિબિંબિત કરે છે. મલ્ટિ-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP એસે પ્લેટ્સમાં સરળ ઉચ્ચ-થ્રુપુટ નમૂનાની તૈયારી માટે પરવાનગી આપે છે.

ન્યૂનતમ બાયોફિલ્મ ઇરેડિકેશન કોન્સન્ટ્રેશન (MBEC) એસે પ્રોટોકોલ

પગલું 1: બાયોફિલ્મ રચના

1. બેક્ટેરિયલ સસ્પેન્શન તૈયાર કરો:
   લોગ-ફેઝ વૃદ્ધિ માટે યોગ્ય માધ્યમોમાં બેક્ટેરિયાનો વિકાસ કરો.
   બેક્ટેરિયલ સંસ્કૃતિને નિર્ધારિત ઓપ્ટિકલ ઘનતા (દા.ત., OD600 ~ 0.1) સુધી પાતળું કરો.
2. 96-વેલ પ્લેટને ઇનોક્યુલેટ કરો:
   પ્રમાણભૂત 96-વેલ માઇક્રોટાઇટર પ્લેટના દરેક કૂવામાં બેક્ટેરિયલ સસ્પેન્શન (દા.ત., 150–200 μL) ઉમેરો.
3. પેગ ઢાંકણ જોડો:
   ખીંટીની સપાટી પર બાયોફિલ્મ બનાવવા માટે ઇનોક્યુલેટેડ પ્લેટ પર પેગ ઢાંકણ મૂકો.
4. પ્લેટને ઉકાળો:
   બાયોફિલ્મની વૃદ્ધિને પ્રોત્સાહન આપવા માટે 24-48 કલાક માટે યોગ્ય તાપમાન (દા.ત., 37 ° સે) પર સેટઅપને ધ્રુજારી વગર ઉકાળો.

પગલું 2: એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટો સાથે સારવાર

• એન્ટિમાઇક્રોબાયલ સોલ્યુશન્સ તૈયાર કરો:
  તાજા માધ્યમોમાં એન્ટિમાઇક્રોબાયલ સાંદ્રતાની શ્રેણી તૈયાર કરો.
  બાયોફિલ્મ્સને એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટો માટે ખુલ્લા પાડો:
  બેક્ટેરિયલ કલ્ચરમાંથી ખીંટીનું ઢાંકણું દૂર કરો અને પ્લેન્કટોનિક કોષોને દૂર કરવા માટે તેને જંતુરહિત ખારા અથવા પીબીએસમાં કોગળા કરો.
  ખીંટીનું ઢાંકણું એન્ટિમાઇક્રોબાયલ સોલ્યુશન ધરાવતી નવી 96-વેલ પ્લેટમાં મૂકો.
• પ્લેટને ઉકાળો:
  એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એક્સપોઝરને મંજૂરી આપવા માટે નિર્ધારિત સમયગાળા (દા.ત., 24 કલાક) માટે સેવન કરો.

પગલું 3: 96-વેલ પ્લેટ સોનિકેટર UIP400MTP સાથે સોનિકેશન

સદ્ધરતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે પેગ લિડ્સમાંથી બાયોફિલ્મ્સને અલગ કરવા માટે સોનિકેશન પગલું મહત્વપૂર્ણ છે. UIP400MTP સોનિકેટર માટે આ પગલાં અનુસરો:

1. સેટઅપ તૈયાર કરો:
   દરેક કૂવામાં પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ (દા.ત., તટસ્થ સૂપ અથવા તાજા વૃદ્ધિ માધ્યમ) સાથે તાજી 96-વેલ પ્લેટ ભરો.
2. પેગ ઢાંકણને સ્થાનાંતરિત કરો:
   એન્ટિમાઇક્રોબાયલ ટ્રીટમેન્ટ પ્લેટમાંથી પેગનું ઢાંકણ દૂર કરો.
   અવશેષ એન્ટિમાઇક્રોબાયલ એજન્ટોને દૂર કરવા માટે પેગ ઢાંકણને જંતુરહિત ખારા અથવા પીબીએસમાં ધોઈ નાખો.
3. પ્લેટ અને સોનિકેટરને સ્થાન આપો:
   પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ પ્લેટ સાથે પેગ ઢાંકણને જોડો.
   પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ પ્લેટને UIP400MTP સોનિકેટર પ્લેટફોર્મ પર મૂકો, ખાતરી કરો કે પ્લેટ કેન્દ્રિત અને સ્થિર છે.
4. સોનિકેશન પરિમાણોને સમાયોજિત કરો:
   UIP400MTP પર સોનિકેશન પેરામીટર્સ સેટ કરો (સેટિંગ્સ બાયોફિલ્મમાં એડજસ્ટ કરી શકાય છે):
   કંપનવિસ્તાર: 70-100%.
   સોનિકેશન સમય: સાયકલ મોડ પર 1-3 મિનિટ (બાયોફિલ્મની મજબૂતતાને આધારે એડજસ્ટ કરો).
5. સોનિકેટ:
   Sonication પ્રક્રિયા શરૂ કરો. અલ્ટ્રાસોનિક કંપન ખીંટી સપાટીઓમાંથી બાયોફિલ્મ્સને પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમમાં દૂર કરશે.
6. પ્રક્રિયાનું નિરીક્ષણ કરો:
   કુવાઓમાં નમૂનાના તાપમાનનું નિરીક્ષણ કરવા માટે પ્લગેબલ તાપમાન સેન્સરનો ઉપયોગ કરો. UIP400MTP ને ઠંડક માટે લેબ ચિલર સાથે કનેક્ટ કરી શકાય છે.
7. પોસ્ટ-સોનિકેશન હેન્ડલિંગ:
   ડાઉનસ્ટ્રીમ વિશ્લેષણ માટે તરત જ પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ (હવે અલગ બાયોફિલ્મ્સ ધરાવે છે) ને તાજી જંતુરહિત પ્લેટમાં સ્થાનાંતરિત કરો.

(A) બાયોફિલ્મ રચના, કોષ પુનઃપ્રાપ્તિ માટે વપરાયેલ 2% ગ્લુકોઝ સાથે TSB ધરાવતી પ્લેટ
MIC અને MBCB ના નિર્ધારણ; (B) સ્ટેફાયલોકૉકલ બાયોફિલ્મ્સની રચના માટે પિન સાથે ઢાંકણ. MIC અને MBCB ના નિર્ધારણ; (B) સ્ટેફાયલોકૉકલ બાયોફિલ્મ્સની રચના માટે પિન સાથે ઢાંકણ.
પિન પર બનેલા બાયોફિલ્મ કોષોને સોનિકેશન (હિલ્સર અલ્ટ્રાસાઉન્ડ ટેક્નોલોજી) દ્વારા 5 મિનિટ માટે 96-વેલ પ્લેટમાં કોશિકાઓની પુનઃપ્રાપ્તિ માટે તાજા કલ્ચર માધ્યમ ધરાવતી પ્લેટોમાં વિખેરી નાખવામાં આવી હતી.
(ચિત્ર અને અભ્યાસ: ©de Oliveira et al., 2016)

પગલું 4: કાર્યક્ષમતા આકારણી

પ્લેટ અને કલ્ચર ડિટેચ્ડ બાયોફિલ્મ્સ:

1. વસાહત-રચના એકમો (CFU) ની ગણતરી કરવા માટે પુનઃપ્રાપ્તિ માધ્યમ અને પ્લેટને અગર પર સીરીયલ ડિલ્યુશન કરો.
   વૈકલ્પિક રીતે, કલરમિટ્રિક અથવા ફ્લોરોસેન્સ-આધારિત સદ્ધરતા એસેનો ઉપયોગ કરો.
2. રેકોર્ડ પરિણામો:
   MBEC ને એન્ટિમાઇક્રોબાયલની સૌથી ઓછી સાંદ્રતા તરીકે નક્કી કરો જેણે શોધી શકાય તેવી બાયોફિલ્મ સદ્ધરતા નાબૂદ કરી.

ડિઝાઇન, ઉત્પાદન અને કન્સલ્ટિંગ – જર્મનીમાં બનાવેલ ગુણવત્તા

Hielscher ultrasonicators તેમના ઉચ્ચતમ ગુણવત્તા અને ડિઝાઇન ધોરણો માટે જાણીતા છે. મજબુતતા અને સરળ કામગીરી ઔદ્યોગિક સુવિધાઓમાં અમારા અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સના સરળ એકીકરણને મંજૂરી આપે છે. ખરબચડી પરિસ્થિતિઓ અને માંગવાળા વાતાવરણને Hielscher sonicators દ્વારા સરળતાથી નિયંત્રિત કરવામાં આવે છે.

Hielscher Ultrasonics એ ISO પ્રમાણિત કંપની છે અને ઉચ્ચ-પ્રદર્શન અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ પર વિશેષ ભાર મૂકે છે જેમાં અત્યાધુનિક ટેકનોલોજી અને વપરાશકર્તા-મિત્રતા દર્શાવવામાં આવે છે. અલબત્ત, Hielscher અલ્ટ્રાસોનિકેટર્સ CE અનુરૂપ છે અને UL, CSA અને RoHs ની જરૂરિયાતોને પૂર્ણ કરે છે.

MBEC એસેનો ઉપયોગ કરીને સ્યુડોમોનાસ એરુગિનોસા બાયોફિલ્મ સામે જીવાણુનાશક અસરકારકતાના પરીક્ષણ માટે ASTM E2799 પ્રોટોકોલ દરમિયાન નમૂના તૈયારીના પગલા તરીકે બાયોફિલ્મ ડિટેચમેન્ટ માટે UIP400MTP નો ઉપયોગ કેવી રીતે થાય છે તે અહીં વાંચો.