راه حل های بافر اماده با امواج فراصوت
بافر لیز می تواند کارامد و سریع اماده با استفاده از اسیاب بافت مافوق صوت. از انجا که ultrasonicators یک ابزار رویایی برای مخلوط کردن، حل و پراکنده، انها برای اماده سازی قابل اعتماد و کاربر پسند از بافر لیز اجازه می دهد.
اماده سازی التراسونیک از بافر لیز
هموژنایزر بافت التراسونیک یک ابزار رایج برای اختلال سلول، لیز و استخراج است، بنابراین در اکثر ازمایشگاه ها در دسترس است. یک برنامه ثانویه برای ultrasonicators پروب نوع اماده سازی بافر لیز است.
بافر لیز یک راه حل مورد استفاده برای شکستن سلول های باز (لیز) و انتشار محتویات خود را برای تجزیه و تحلیل پایین دست است. ترکیب خاص بافر لیز می تواند بسته به نوع سلول های لیز و کاربرد پایین دست متفاوت باشد. با این حال، یک بافر لیز معمولی حاوی اجزایی مانند مواد شوینده، نمک و مهار کننده های پروتئاز است. نمک های بافر (به عنوان مثال Tris-HCl) و نمک های یونی (به عنوان مثال NaCl) معمولا برای تنظیم pH و اسمولاریته لیز استفاده می شود.
برای ایجاد یک بافر لیز، اجزای با هم در غلظت مناسب و pH مخلوط می شوند. مخلوط معمولا هم زده یا تکان داده می شود تا اجزای ان حل شوند و محلول همگن باشد.
همگن التراسونیک یک روش است که می تواند مورد استفاده قرار گیرد برای کمک به ایجاد یک بافر لیز خوب با بهبود مخلوط کردن و انحلال قطعات است. در این روش، امواج اولتراسوند – به طور معمول در محدوده 20 تا 30 کیلوهرتز – به مخلوط اعمال می شود، که حباب های کاویتاسیون را ایجاد می کند که سقوط می کنند و انرژی شدید محلی را تولید می کنند و منجر به برش مکانیکی و مخلوط کردن اجزای ان می شوند.
فرایند همگن مافوق صوت می تواند کمک به شکستن هر توده یا سنگدانه از اجزای، و اطمینان حاصل شود که راه حل یکنواخت مخلوط شده است. در نتیجه، چنین بافر لیز بهبود یافته می تواند منجر به اختلال سلول کارامد تر و بازده بالاتر مواد استخراج شده شود. علاوه بر این، همگن مافوق صوت می تواند زمان مورد نیاز برای ایجاد یک بافر لیز در مقایسه با روش های تکان دهنده یا تکان دادن سنتی را کاهش دهد.
به طور کلی، همگن مافوق صوت یک ابزار قدرتمند برای بهبود کیفیت و بهره وری از اماده سازی بافر لیز است.
هموژنایزر ازمایشگاه اولتراسونیک UP200Ht محبوب در ازمایشگاه های تحقیقاتی برای اماده سازی نمونه، لیز، استخراج، تکه تکه شدن DNA و حل است.
پروتکل برای التراسونیک لیز بافر اماده سازی
این یک پروتکل کلی برای ساخت یک بافر لیز با استفاده از یک پروب نوع ultrasonicator است:
مواد:
- مواد شوینده انتخابی (به عنوان مثال Triton X-100، SDS، CHAPS)
- نمک (ها) انتخابی (به عنوان مثال NaCl، KCl)
- مهار کننده های پروتئاز (به عنوان مثال PMSF، aprotinin، leupeptin)
- اولتراسونیکاتور
- همزن
- اب دیونیزه
- pH متر یا نوار pH
دستورالعمل گام به گام:
- تعیین ترکیب بافر لیز بر اساس سلول ها یا بافت شما خواهد شد lysing، و برنامه های کاربردی پایین دست شما خواهد شد با استفاده از لیزیت برای. راه حل های موجود مواد شوینده، نمک ها و مهار کننده های پروتئاز را در غلظت های مورد نظر اماده کنید.
- راه حل های مواد شوینده، نمک ها و مهار کننده های پروتئاز را به یک فنجان یا فلاسک اضافه کنید.
- اب دیونیزه را اضافه کنید تا حجم را به مقدار مورد نظر بافر افزایش دهد.
- قطعات را با استفاده از یک همزن مخلوط کنید تا یک محلول از قبل مخلوط کنید.
- pH بافر را با استفاده از یک pH متر یا نوارهای pH اندازه گیری کنید و pH را در صورت لزوم با مقادیر کمی اسید یا باز تنظیم کنید.
- استفاده از پروب نوع ultrasonicator به همگن راه حل قبل از مخلوط به طوری که یک راه حل بسیار همگن به دست امده است. بنابراین، محلول را برای چند ثانیه فراصوت دهید تا محلول کاملا مخلوط شود و هر توده یا سنگدانه شکسته شود. مدت زمان و قدرت فراصوت را می توان بر اساس بافر لیز خاص و ultrasonicator مورد استفاده بهینه سازی شده است.
- پس از امواج فراصوت، دوباره اندازه گیری pH بافر و تنظیم در صورت لزوم.
- فیلتر بافر را از طریق یک فیلتر 0.2 میکرون برای حذف هر گونه باقی مانده و یا مصالح که ممکن است در طول فراصوت تشکیل شده است.
- بافر لیز در حال حاضر اماده برای استفاده است.
توجه: ترکیب دقیق و pH بافر لیز می تواند بسته به سلول ها یا بافت های در حال لیز و برنامه های کاربردی پایین دست متفاوت باشد. پروتکل فوق یک دستورالعمل کلی است و ممکن است نیاز به بهینه سازی برای برنامه های خاص داشته باشد.
اسیاب التراسونیک معمولا برای اختلال سلول و استخراج مولکول های داخل سلولی استفاده می شود. بنابراین بسیاری از برنامه های کاربردی لیز استفاده از فراصوت پروب نوع نه تنها برای اماده سازی بافر لیز، بلکه برای اختلال سلول مکانیکی و استخراج.
این باعث می شود اسیاب بافت اولتراسونیک یک ابزار همه کاره برای ازمایشگاه ها و توضیح می دهد استفاده گسترده ای از ultrasonicators در میکروب شناسی، بیوتکنولوژی و علوم زیستی.
هموژنایزر اولتراسونیک آزمایشگاهی
Hielscher فرا صوت تولید و تامین اسیاب مافوق صوت و پروب (sonotrodes) در رتبه بندی های مختلف قدرت و حجم نمونه. این اجازه می دهد تا ما را به شما مناسب ترین اخلالگر اولتراسونیک برای اماده سازی نمونه خود را ارائه دهد. ما بر روی بالاترین کیفیت، راحتی کاربر برجسته و نتایج فراصوت قابل اعتماد تمرکز می کنیم. تمام ultrasonicators دیجیتال ویژگی های نرم افزار هوشمند، برنامه نویسی و پیش تنظیم پروتکل های فراصوت، کنترل از راه دور مرورگر، کنترل دما، روشنایی نمونه و همچنین ضبط داده های خودکار بر روی ساخته شده است در کارت SD.
طراحی، ساخت و مشاوره – کیفیت ساخته شده در آلمان
Ultrasonicators Hielscher به خوبی برای بالاترین کیفیت و استانداردهای طراحی خود شناخته شده است. استحکام و عملیات آسان اجازه می دهد ادغام صاف از مافوق صوت ما را به امکانات صنعتی. شرایط خشن و محیط های خواستار به راحتی توسط Ultrasonicators Hielscher رسیدگی می شود.
Hielscher Ultrasonics یک شرکت گواهی ایزو و تاکید ویژه ای بر مافوق صوت با عملکرد بالا شامل دولت از هنر فن آوری و کاربر دوستی است. البته، سونوگرافی Hielscher سازگار CE و دیدار با الزامات UL، CSA و RoHs.
The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators:
| VialTweeter در UP200St | 200 وات | 26 کیلوهرتز | امواج فراصوت از ویال های کوچک، به عنوان مثال، اپندورف 1.5mL |
| UP50H | 50 وات | 30kHz | دستی یا standmounted هموژنایزر آزمایشگاه |
| UP100H | 100 وات | 30kHz | دستی یا standmounted هموژنایزر آزمایشگاه |
| UP200Ht | 200 وات | 26 کیلوهرتز | دستی یا standmounted هموژنایزر آزمایشگاه |
| UP200St | 200 وات | 26 کیلوهرتز | دستگاه های هموژنایزر آزمایشگاهی عمود ایستا |
| UP400St | 400 وات | 24 کیلوهرتز | دستگاه های هموژنایزر آزمایشگاهی عمود ایستا |
| SonoStep | 200 وات | 26 کیلوهرتز | راکتور آزمایشگاهی ترکیب کننده، امواج فراصوت، پمپ، همزن و لوله |
| GDmini2 | 200 وات | 26 کیلوهرتز | سلول جریانی بدون آلاینده |
| Cuphorn | 200 وات | 26 کیلوهرتز | حمام اولتراسونیک شدید برای ویال و فنجان |
| UIP400MTP | 400 وات | 24 کیلوهرتز | سیستم اولتراسونیک برای صفحات چند خوب / صفحات microtiter |
cuphorn التراسونیک برای فراصوت شدید لوله های بسته و ویال برای همگن سازی استریل نمونه.
تماس با ما! / از ما بپرسید!
هموژنایزر ازمایشگاه التراسونیک UP400St معمولا برای اماده سازی بافر لیز و اختلال سلول های بعدی استفاده می شود.
ادبیات/منابع
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics تولید هموژنیزرهای مافوق صوت با کارایی بالا از ازمایشگاه ها تا اندازه صنعتی.