راه حل های بافر تهیه شده با Ultrasonication
بافرهای لیز را می توان کارآمد و سریع با استفاده از هموژنایزرهای بافت اولتراسونیک آماده کرد. از آنجا که ultrasonicators یک ابزار رویایی برای مخلوط کردن ، حل و پراکنده شدن ، آنها اجازه می دهد تا برای آماده سازی قابل اعتماد و کاربر پسند از بافرهای لیز است.
آماده سازی التراسونیک از بافرهای لیز
هموژنایزرهای بافت اولتراسونیک یک ابزار مشترک برای اختلال سلول، لیز و استخراج هستند، بنابراین در اکثر آزمایشگاه ها در دسترس هستند. یک کاربرد ثانویه برای سونوگرافی نوع پروب آماده سازی بافرهای لیز است.
بافر لیز محلولی است که برای شکستن سلول های باز (لیز) و آزاد کردن محتویات آنها برای تجزیه و تحلیل پایین دست استفاده می شود. ترکیب خاص بافر لیز بسته به نوع سلول های لیز شده و کاربرد پایین دست می تواند متفاوت باشد. با این حال، یک بافر لیز معمولی حاوی اجزایی مانند مواد شوینده، نمک و مهارکننده های پروتئاز است. نمک های بافر (به عنوان مثال Tris-HCl) و نمک های یونی (به عنوان مثال NaCl) معمولا برای تنظیم pH و اسمولاریته لیز استفاده می شوند.
برای ساخت بافر لیز ، اجزا در غلظت ها و pH مناسب با هم مخلوط می شوند. مخلوط معمولا هم زده یا تکان داده می شود تا زمانی که اجزا حل شوند و محلول همگن شود.
همگن سازی اولتراسونیک روشی است که می تواند مورد استفاده قرار گیرد برای کمک به ایجاد یک بافر لیز خوب با بهبود مخلوط کردن و انحلال قطعات است. در این روش امواج فراصوت – به طور معمول در محدوده 20 تا 30 کیلوهرتز – روی مخلوط اعمال می شود ، که حباب های کاویتاسیون ایجاد می کند که فرو می ریزند و انرژی محلی شدیدی تولید می کنند و منجر به برش مکانیکی و اختلاط اجزا می شود.
فرآیند همگن سازی اولتراسونیک می تواند به شکستن هر گونه توده یا سنگدانه از اجزا کمک کند و اطمینان حاصل کند که محلول به طور یکنواخت مخلوط شده است. در نتیجه، چنین بافر لیز بهبود یافته می تواند منجر به اختلال سلولی کارآمدتر و بازده بالاتر مواد استخراج شده شود. علاوه بر این، همگن سازی اولتراسونیک می تواند زمان مورد نیاز برای ایجاد بافر لیز را در مقایسه با روش های سنتی هم زدن یا تکان دادن کاهش دهد.
به طور کلی، همگن سازی اولتراسونیک یک ابزار قدرتمند برای بهبود کیفیت و کارایی آماده سازی بافر لیز است.
هموژنایزر آزمایشگاه اولتراسونیک UP200Ht در آزمایشگاه های تحقیقاتی برای آماده سازی نمونه ، لیز ، استخراج ، تکه تکه شدن DNA و حل شدن محبوب است.
پروتکل برای آماده سازی بافر لیز اولتراسونیک
این یک پروتکل کلی برای ساخت یک بافر لیز با استفاده از یک اولتراسونیک نوع پروب است:
مواد:
- مواد شوینده(های) انتخابی (به عنوان مثال Triton X-100، SDS، CHAPS)
- نمک (های) انتخابی (به عنوان مثال NaCl، KCl)
- مهارکننده های پروتئاز (به عنوان مثال PMSF، آپروتینین، لوپپتین)
- ultrasonicator
- همزن
- آب دیونیزه
- pH متر یا نوارهای pH
دستورالعمل گام به گام:
- ترکیب بافر لیز را بر اساس سلول ها یا بافتی که لیز می کنید و برنامه های پایین دستی که از لیزات برای آنها استفاده خواهید کرد، تعیین کنید. محلول های استوک مواد شوینده، نمک و بازدارنده های پروتئاز را در غلظت های دلخواه آماده کنید.
- محلول های استوک مواد شوینده، نمک و بازدارنده های پروتئاز را به یک لیوان یا فلاسک اضافه کنید.
- آب دیونیزه را اضافه کنید تا حجم به مقدار دلخواه بافر برسد.
- اجزا را با استفاده از همزن مخلوط کنید تا محلول پیش مخلوط به دست آید.
- pH بافر را با استفاده از pH متر یا نوارهای pH اندازه گیری کنید و در صورت لزوم pH را با مقادیر کمی اسید یا باز تنظیم کنید.
- استفاده از مافوق صوت پروب نوع برای همگن کردن راه حل قبل از مخلوط به طوری که یک راه حل بسیار همگن به دست آمده است. بنابراین ، محلول را برای چند ثانیه فراصوت کنید تا محلول کاملا مخلوط شود و هر گونه توده یا سنگدانه شکسته شود. مدت زمان و قدرت فراصوت را می توان بر اساس بافر لیز خاص و مافوق صوت مورد استفاده بهینه سازی شده است.
- پس از امواج فراصوت ، PH بافر را دوباره اندازه گیری کرده و در صورت لزوم تنظیم کنید.
- فیلتر بافر از طریق یک فیلتر 0.2 میکرون برای حذف هر گونه زباله و یا سنگدانه است که ممکن است در طول فراصوت تشکیل شده است.
- بافر لیز اکنون آماده استفاده است.
توجه: ترکیب دقیق و pH بافر لیز بسته به سلول ها یا بافت لیز شده و کاربردهای پایین دست می تواند متفاوت باشد. پروتکل فوق یک دستورالعمل کلی است و ممکن است نیاز به بهینه سازی برای کاربردهای خاص داشته باشد.
هموژنایزرهای مافوق صوت معمولا برای اختلال سلولی و استخراج مولکول های داخل سلولی استفاده می شود. بنابراین بسیاری از برنامه های لیز استفاده از فراصوت پروب نوع نه تنها برای آماده سازی بافر لیز ، بلکه برای اختلال سلول مکانیکی و استخراج.
این باعث می شود هموژنایزرهای بافت اولتراسونیک یک ابزار همه کاره برای آزمایشگاه ها و استفاده گسترده ای از مافوق صوت در میکروبیولوژی، بیوتکنولوژی و علوم زیستی را توضیح می دهد.
هموژنایزر اولتراسونیک آزمایشگاهی
Hielscher مافوق صوت تولید و تامین هموژنایزرهای مافوق صوت و پروب (sonotrodes) در رتبه بندی های مختلف قدرت و حجم نمونه. این به ما اجازه می دهد تا مناسب ترین مختل کننده اولتراسونیک را برای آماده سازی نمونه شما به شما ارائه دهیم. ما در بالاترین کیفیت، برجسته کاربر راحتی و نتایج فراصوت قابل اعتماد تمرکز. همه ultrasonicators دیجیتال از ویژگی های نرم افزار هوشمند، برنامه نویسی و پیش تنظیم پروتکل های فراصوت، مرورگر کنترل از راه دور، کنترل دما، روشنایی نمونه و همچنین ضبط خودکار داده ها بر روی ساخته شده در کارت SD.
طراحی، ساخت و مشاوره – کیفیت ساخت آلمان
مافوق صوت Hielscher به خوبی برای بالاترین کیفیت و استانداردهای طراحی خود را شناخته شده. استحکام و بهره برداری آسان اجازه می دهد تا ادغام صاف از ultrasonicators ما به امکانات صنعتی. شرایط خشن و محیط های خواستار به راحتی توسط مافوق صوت Hielscher رسیده.
Hielscher اولتراسونیک یک شرکت دارای گواهینامه ISO است و تاکید ویژه ای بر مافوق صوت با کارایی بالا با ویژگی های دولت از هنر فن آوری و کاربر پسند قرار داده است. البته، مافوق صوت Hielscher مطابق با CE و دیدار با الزامات UL، CSA و RoHs.
جدول زیر به شما می دهد یک نمای کلی از مافوق صوت آزمایشگاه های مختلف ما:
| VialTweeter در UP200St | 200 وات | 26 کیلوهرتز | امواج فراصوت ویال های کوچک، به عنوان مثال Eppendorf 1.5 میلی لیتر |
| UP50H | 50 وات | 30 کیلوهرتز | هموژنایزر آزمایشگاهی دستی یا ایستاده |
| UP100H | 100 وات | 30 کیلوهرتز | هموژنایزر آزمایشگاهی دستی یا ایستاده |
| تا 200 هرتز | 200 وات | 26 کیلوهرتز | هموژنایزر آزمایشگاهی دستی یا ایستاده |
| 200 خیابان | 200 وات | 26 کیلوهرتز | دستگاه های هموژنایزر آزمایشگاهی عمود ایستا |
| UP400St | 400 وات | 24 کیلوهرتز | دستگاه های هموژنایزر آزمایشگاهی عمود ایستا |
| سونو استپ | 200 وات | 26 کیلوهرتز | راکتور آزمایشگاهی ترکیب کننده، امواج فراصوت، پمپ، همزن و لوله |
| GDmini2 | 200 وات | 26 کیلوهرتز | سلول جریانی بدون آلاینده |
| کاپ هورن | 200 وات | 26 کیلوهرتز | حمام اولتراسونیک شدید برای ویال ها و لیوان ها |
| UIP400MTP | 400 وات | 24 کیلوهرتز | سیستم اولتراسونیک برای صفحات چند چاه / صفحات میکروتیتر |
التراسونیک CupHorn برای فراصوت شدید لوله های بسته و ویال برای همگن سازی استریل نمونه.
تماس با ما! / از ما بپرسید!
هموژنایزر آزمایشگاه اولتراسونیک UP400St معمولا برای آماده سازی بافر لیز و اختلال بعدی سلول استفاده می شود.
ادبیات / منابع
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher مافوق صوت تولید کننده هموژنایزرهای مافوق صوت با کارایی بالا از ازمایشگاه ها تا اندازه صنعتی.