Soluciones tampón preparadas con ultrasonidos

Los tampones de lisis pueden prepararse de forma rápida y eficaz utilizando homogeneizadores tisulares ultrasónicos. Dado que los ultrasonicadores son una herramienta de ensueño para mezclar, disolver y dispersar, permiten preparar tampones de lisis de forma fiable y sencilla.

Preparación ultrasónica de tampones de lisis

Los homogeneizadores tisulares ultrasónicos son una herramienta habitual para la disrupción, lisis y extracción celular, por lo que están disponibles en la mayoría de los laboratorios. Una aplicación secundaria de los ultrasonicadores tipo sonda es la preparación de tampones de lisis.

El tampón de lisis es una solución que se utiliza para romper (lisar) las células y liberar su contenido para su posterior análisis. La composición específica del tampón de lisis puede variar en función del tipo de células que se lisen y de la aplicación posterior. Sin embargo, un tampón de lisis típico contiene componentes como detergentes, sales e inhibidores de proteasas. Las sales tampón (por ejemplo, Tris-HCl) y las sales iónicas (por ejemplo, NaCl) se utilizan habitualmente para regular el pH y la osmolaridad del lisado.
Para hacer un tampón de lisis, se mezclan los componentes en las concentraciones y pH adecuados. La mezcla suele agitarse hasta que los componentes se disuelven y la solución es homogénea.
La homogeneización ultrasónica es un método que puede utilizarse para ayudar a elaborar un buen tampón de lisis mejorando la mezcla y la disolución de los componentes. En este método, las ondas ultrasónicas – normalmente en el rango de 20 a 30 kHz – se aplican a la mezcla, lo que crea burbujas de cavitación que colapsan y generan una intensa energía local, dando lugar a un cizallamiento mecánico y a la mezcla de los componentes.
El proceso de homogeneización por ultrasonidos puede ayudar a romper los grumos o agregados de los componentes y garantizar que la solución se mezcle uniformemente. En consecuencia, este tampón de lisis mejorado puede conducir a una disrupción celular más eficaz y a un mayor rendimiento del material extraído. Además, la homogeneización ultrasónica puede reducir el tiempo necesario para preparar un tampón de lisis en comparación con los métodos tradicionales de agitación o agitación.
En general, la homogeneización ultrasónica es una potente herramienta para mejorar la calidad y la eficacia de la preparación del tampón de lisis.

Protocolo de preparación del tampón de lisis por ultrasonidos

Este es un protocolo general para hacer un tampón de lisis utilizando un ultrasonido tipo sonda:
 
Materiales:

• Detergente(s) de elección (por ejemplo, Triton X-100, SDS, CHAPS)
• Sal(es) de elección (por ejemplo, NaCl, KCl)
• Inhibidores de la proteasa (por ejemplo, PMSF, aprotinina, leupeptina)
• Ultrasonicador
• Agitador
• Agua desionizada
• pH-metro o tiras de pH

 
 
Instrucciones paso a paso:

1. Determine la composición del tampón de lisis en función de las células o tejidos que vaya a lisar y de las aplicaciones posteriores para las que vaya a utilizar el lisado. Prepare las soluciones madre de detergentes, sales e inhibidores de proteasa a las concentraciones deseadas.
2. Añada las soluciones madre de detergentes, sales e inhibidores de proteasa a un vaso de precipitados o matraz.
3. Añadir agua desionizada para llevar el volumen hasta la cantidad deseada de tampón.
4. Mezclar los componentes utilizando un agitador para obtener una solución premezclada.
5. Mida el pH del tampón utilizando un medidor de pH o tiras de pH, y ajuste el pH según sea necesario con pequeñas cantidades de ácido o base.
6. Utilizar el ultrasonicador tipo sonda para homogeneizar la solución de premezcla de modo que se obtenga una solución muy homogénea. Por lo tanto, sonicar la solución durante unos segundos hasta que la solución esté completamente mezclada y se rompan los grumos o agregados. La duración y la potencia de la sonicación pueden optimizarse en función del tampón de lisis específico y del ultrasonicador utilizado.
7. Después de la ultrasonicación, vuelva a medir el pH del tampón y ajústelo según sea necesario.
8. Filtrar el tampón a través de un filtro de 0,2 micras para eliminar los restos o agregados que puedan haberse formado durante la sonicación.
9. El tampón de lisis ya está listo para su uso.

 
Nota: La composición exacta y el pH del tampón de lisis pueden variar en función de las células o tejidos que se lisen y de las aplicaciones posteriores. El protocolo anterior es una guía general y puede ser necesario optimizarlo para aplicaciones específicas.
 
Los homogeneizadores ultrasónicos se utilizan habitualmente para la disrupción celular y la extracción de moléculas intracelulares. Por lo tanto, muchas aplicaciones de lisis utilizan la sonicación de tipo sonda no sólo para la preparación del tampón de lisis, sino también para la disrupción celular mecánica y la extracción.
Esto convierte a los homogeneizadores ultrasónicos de tejidos en una herramienta versátil para los laboratorios y explica el amplio uso de los ultrasonicadores en microbiología, biotecnología y ciencias de la vida.

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