Βελτίωση της ανάλυσης HPLC με αξιόπιστη προετοιμασία δείγματος
Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) παραμένει μια από τις σημαντικότερες αναλυτικές τεχνικές για την ταυτοποίηση και τον ποσοτικό προσδιορισμό ενώσεων σε πολύπλοκες μήτρες. Από τον έλεγχο της ποιότητας των φαρμακευτικών προϊόντων έως την περιβαλλοντική παρακολούθηση και την ανάλυση τροφίμων, οι μέθοδοι HPLC εκτιμώνται για την ευαισθησία, την εκλεκτικότητα και την αναπαραγωγιμότητά τους. Ωστόσο, η αξιοπιστία των χρωματογραφικών δεδομένων εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από ένα κρίσιμο βήμα: την προετοιμασία του δείγματος HPLC.
Η έρευνα και οι ρουτίνες προετοιμασίας δειγμάτων αποδεικνύουν ότι η εκχύλιση και η προετοιμασία δειγμάτων με τη βοήθεια του ηχητικού καθαρισμού βελτιώνουν σημαντικά την αποτελεσματικότητα, την ακρίβεια και την ταχύτητα της ανάλυσης HPLC. Με τη χρήση ενέργειας υπερήχων για τη διάσπαση των μητρών και την ενίσχυση της μεταφοράς των αναλυτών στους διαλύτες, τα εργαστήρια μπορούν να επιτύχουν υψηλότερες ανακτήσεις, συντομότερους χρόνους εκχύλισης και πιο αναπαραγώγιμα αναλυτικά αποτελέσματα.
Γιατί η προετοιμασία του δείγματος έχει σημασία στην HPLC
Σε πολλές αναλυτικές ροές εργασίας, η μήτρα δείγματος – όπως φυτικό υλικό, βιολογικός ιστός, έδαφος ή νερό – περιέχει πολύπλοκα μείγματα ενώσεων που μπορούν να παρεμποδίσουν τον χρωματογραφικό διαχωρισμό. Συνεπώς, απαιτείται αποτελεσματική προετοιμασία του δείγματος για την απομόνωση των αναλυτών, την απομάκρυνση των ουσιών που παρεμβαίνουν και τη συγκέντρωση των ενώσεων-στόχων πριν από την έγχυση στο σύστημα HPLC.
Οι παραδοσιακές τεχνικές εκχύλισης συχνά περιλαμβάνουν χρονοβόρες διαδικασίες, μεγάλες ποσότητες οργανικών διαλυτών και πολλαπλά στάδια καθαρισμού. Αυτές οι μέθοδοι μπορούν να εισάγουν μεταβλητότητα, να αυξήσουν το λειτουργικό κόστος και να παρατείνουν το συνολικό χρόνο ανάλυσης.
Η προετοιμασία δείγματος με υπερήχους προσφέρει μια αποτελεσματική εναλλακτική λύση. Ο ηχοβολισμός εισάγει ακουστική ενέργεια υψηλής συχνότητας σε ένα υγρό μέσο, παράγοντας μικροσκοπικές φυσαλίδες σπηλαίωσης. Όταν αυτές οι φυσαλίδες καταρρέουν, δημιουργούν τοπικές διατμητικές δυνάμεις και φαινόμενα μικροανάμειξης που διαταράσσουν τις στερεές μήτρες και επιταχύνουν τη μεταφορά μάζας. Η διαδικασία αυτή βελτιώνει δραματικά την αποτελεσματικότητα της εκχύλισης.
UIP400MTP υπερήχων υψηλής απόδοσης με Tube-Rack για φιαλίδια αυτόματου δειγματολήπτη
Επιστημονικά στοιχεία: Βελτιώνει την αναλυτική απόδοση
Αρκετές μελέτες με κριτές έχουν καταδείξει τα πλεονεκτήματα της εκχύλισης με υπερήχους στις ροές εργασίας HPLC.
Για παράδειγμα, μια μέθοδος που αναπτύχθηκε για την παρακολούθηση των υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων σε δείγματα νερού χρησιμοποίησε τον ηχητικό καθαρισμό σε συνδυασμό με την ανάλυση LC-MS/MS για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων του φυτοφαρμάκου carbaryl. Στην προσέγγιση αυτή, τα δείγματα νερού εκχυλίστηκαν με ακετονιτρίλιο υπό επεξεργασία με υπερήχους πριν από τη χρωματογραφική ανάλυση. Η μέθοδος πέτυχε ισχυρές αναλυτικές επιδόσεις, συμπεριλαμβανομένων ανακτήσεων μεταξύ 89,53% και 101,72%, επιβεβαιώνοντας την ακρίβεια και την αξιοπιστία της διαδικασίας προετοιμασίας των δειγμάτων με υπερήχους.
Το στάδιο της εκχύλισης με υπερήχους επέτρεψε την αποτελεσματική μεταφορά των αναλυτών από την υδατική μήτρα στον οργανικό διαλύτη, μειώνοντας την κατανάλωση διαλύτη και εξαλείφοντας την ανάγκη για εκτεταμένες διαδικασίες καθαρισμού. Η επικυρωμένη αναλυτική μέθοδος επέδειξε εξαιρετική γραμμικότητα, ακρίβεια και όρια ποσοτικοποίησης, αναδεικνύοντας την αποτελεσματικότητα του ηχητικού καθαρισμού στις σύγχρονες χρωματογραφικές ροές εργασίας. (βλ. Roudani et al., 2018)
Μια άλλη μελέτη εισήγαγε τη διασπορά στερεάς φάσης μήτρας με υποβοήθηση υπερήχων (UA-MSPD) για τον προσδιορισμό της ελαιοευρωπαΐνης σε φύλλα ελιάς με ανάλυση HPLC. Σε αυτή την τεχνική, η φυτική σκόνη και το προσροφητικό υλικό αναμίχθηκαν και στη συνέχεια εκτέθηκαν σε υπερηχητικά κύματα κατά τη διάρκεια του σταδίου έκλουσης. Οι υπέρηχοι ενίσχυσαν την εκρόφηση του αναλύτη από την επιφάνεια του ροφητικού υλικού, ενώ ταυτόχρονα βελτίωσαν την εκχύλιση από τη μήτρα του δείγματος. (βλ. Rashidipour and Heydari, 2018)
Η βελτιστοποιημένη διαδικασία υπερήχων παρήγαγε σημαντικές αναλυτικές βελτιώσεις, όπως:
- Γραμμικές καμπύλες βαθμονόμησης με R² = 0,9979
- Όρια ανίχνευσης μόλις 0,03 μg ml-¹
- Ποσοστά ανάκτησης μεταξύ 90,2% και 96,7%
Τα αποτελέσματα αυτά επιβεβαιώνουν ότι η εκχύλιση με τη βοήθεια υπερήχων όχι μόνο επιταχύνει την προετοιμασία του δείγματος αλλά και αυξάνει την απόδοση της εκχύλισης σε σύγκριση με τις κλασικές τεχνικές διασποράς στερεάς φάσης σε μήτρα.
Υπερήχων τύπου καθετήρα UP200St για την προετοιμασία δειγμάτων HPLC
Βασικά πλεονεκτήματα της προετοιμασίας δειγμάτων με υπερήχους για HPLC
Η αυξανόμενη υιοθέτηση της εκχύλισης με υπερήχους στα αναλυτικά εργαστήρια οφείλεται σε διάφορα μετρήσιμα οφέλη.
- Υψηλότερη απόδοση εκχύλισης
Η ακουστική σπηλαίωση διασπά τις στερεές μήτρες και βελτιώνει τη διείσδυση του διαλύτη. Αυτό ενισχύει την απελευθέρωση αναλύσεων και αυξάνει τα ποσοστά ανάκτησης, ιδίως για ενώσεις σε επίπεδο ιχνών σε πολύπλοκα δείγματα. - Μειωμένος χρόνος προετοιμασίας δείγματος
Η εκχύλιση με υπερήχους μπορεί συχνά να ολοκληρώσει την προετοιμασία του δείγματος μέσα σε δευτερόλεπτα ή λεπτά. Για παράδειγμα, οι βελτιστοποιημένες παράμετροι υπερηχητικής εκχύλισης στο UA-MSPD πέτυχαν αποτελεσματική ανάκτηση αναλυτών σε περίπου 30 δευτερόλεπτα ηχητικής επεξεργασίας, αποδεικνύοντας πόσο δραματικά μπορούν να επιταχυνθούν οι ροές εργασίας ανάλυσης. - Χαμηλότερη κατανάλωση διαλυτών
Επειδή οι υπέρηχοι ενισχύουν τη μεταφορά μάζας, συνήθως απαιτούνται μικρότεροι όγκοι διαλύτη. Η μειωμένη χρήση διαλυτών βελτιώνει τη βιωσιμότητα του εργαστηρίου και μειώνει το λειτουργικό κόστος. - Βελτιωμένη αναπαραγωγιμότητα
Η ομοιόμορφη κατανομή ενέργειας υπερήχων εξασφαλίζει συνεπή διάσπαση και εκχύλιση του δείγματος σε όλες τις επαναλήψεις, οδηγώντας σε μεγαλύτερη ακρίβεια στις αναλυτικές μετρήσεις. - Συμβατότητα με σύγχρονες χρωματογραφικές μεθόδους
Η εκχύλιση με υπερήχους ενσωματώνεται εύκολα σε συστήματα HPLC, UHPLC και LC-MS, καθιστώντας την κατάλληλη για αναλυτικά περιβάλλοντα υψηλής απόδοσης.
HPLC χρωματογράφημα φαινολικών ενώσεων από υπερήχων απομονωμένο εκχύλισμα φύλλων Annona muricata χρησιμοποιώντας τον υπερηχητικό UP400S.
(Μελέτη και γράφημα: ©Nolasco-González et al., 2022)
Πρακτικές λύσεις Sonication για την προετοιμασία δειγμάτων HPLC
Για τα εργαστήρια που εφαρμόζουν εκχύλιση με υπερήχους, οι ηχοβολείς της Hielscher παρέχουν ακριβή έλεγχο παραμέτρων όπως το πλάτος, ο χρόνος και ο τρόπος παλμού. Ως εκ τούτου, οι εργαστηριακοί ηχοβολείς Hielscher είναι ιδιαίτερα κατάλληλοι για αναλυτικά εργαστήρια.
Επιλέξτε τον καταλληλότερο ηχοβολέα εργαστηρίου για τα δείγματά σας HPLC
| Μοντέλο Sonicator | Πλεονεκτήματα για την HPLC | Βέλτιστη χρήση στην προετοιμασία δειγμάτων HPLC |
| VialTweeter Υπερήχων πολλαπλών σωλήνων |
- Ταυτόχρονος ηχοβολισμός έως και 10 σφραγισμένων φιαλιδίων με την ίδια ενέργεια υπερήχων - Αποστειρωμένο: Δεν υπάρχει διασταυρούμενη μόλυνση επειδή τα δείγματα παραμένουν κλειστά - Εξαιρετικά αναπαραγώγιμες συνθήκες εκχύλισης σε όλες τις παρτίδες - Αποδοτική σπηλαίωση για αναλυτικά δείγματα μικρού όγκου |
- Προετοιμασία υψηλής απόδοσης περιβαλλοντικών, διατροφικών ή φαρμακευτικών δειγμάτων - Εκχύλιση ιχνοστοιχείων πριν από την ανάλυση με HPLC, UHPLC ή LC-MS - Τυποποιημένες ροές εργασίας που απαιτούν πανομοιότυπη επεξεργασία πολλαπλών δειγμάτων |
| Υπερήχων μικροπλακών UIP400MTP |
- Ηχοβολισμός χωρίς επαφή ολόκληρων μικροπλάκες (96-well, 384-well) - Ομοιόμορφη κατανομή ενέργειας υπερήχων σε όλα τα φρεάτια - Επιτρέπει την αυτοματοποίηση και τη ρομποτική ενσωμάτωση για αναλυτικές ροές εργασίας - Υψηλή απόδοση με ακριβή έλεγχο του πλάτους και του χρόνου ηχομόνωσης |
- Ροές εργασίας διαλογής υψηλής απόδοσης UHPLC - Φαρμακευτικές βιβλιοθήκες ενώσεων και προετοιμασία δειγμάτων μεταβολικής - Εκχύλιση με βάση την πλάκα για αναλυτικές σωληνώσεις LC-MS ή UHPLC |
| Εργαστηριακοί ηχοβολείς με micro-tip (άμεσος ηχοβολισμός) |
- Μέγιστη ένταση υπερήχων για αποτελεσματική διάσπαση της μήτρας - Πολύ γρήγορη εκχύλιση αναλυτών από στερεά, παχύρρευστα ή ετερογενή δείγματα - Ρυθμιζόμενο πλάτος και παράμετροι παλμού για βελτιστοποιημένες συνθήκες εκχύλισης - Η υψηλή ενέργεια σπηλαίωσης βελτιώνει την ανάκτηση αναλύσεων και την απόδοση εκχύλισης |
- Εκχύλιση από δύσκολες μήτρες, όπως φυτικοί ιστοί, δείγματα τροφίμων ή πολυμερή - Ομογενοποίηση πριν από SPE, διήθηση ή εκχύλιση υγρού-υγρού - Ανάπτυξη μεθόδου για την προετοιμασία δειγμάτων HPLC με υπερήχους |
| Cuphorn (“λουτρό υψηλής έντασης” για ποτήρια ζέσεως και σωλήνες) |
- Ο έμμεσος ηχοβολισμός αποτρέπει τη μόλυνση του καθετήρα - Ομοιόμορφο πεδίο υπερήχων για πολλούς σωλήνες ταυτόχρονα - Ιδανικό για αποστειρωμένα, επικίνδυνα ή πτητικά δείγματα που πρέπει να παραμείνουν σφραγισμένα - Απλοποιεί το χειρισμό, διατηρώντας παράλληλα ισχυρή ενέργεια σπηλαίωσης |
- Παράλληλη εκχύλιση πολλαπλών δειγμάτων HPLC σε σφραγισμένους σωλήνες φυγοκέντρησης - Προετοιμασία βιολογικών, φαρμακευτικών ή περιβαλλοντικών δειγμάτων - Ροές εργασίας όπου απαιτείται έμμεσος ηχοβολισμός χωρίς μόλυνση |
Επιστημονική σημασία για την Αναλυτική Χημεία
Καθώς η αναλυτική χημεία κινείται προς την κατεύθυνση ταχύτερων και πιο βιώσιμων εργαστηριακών πρακτικών, η προετοιμασία δειγμάτων με υπερήχους έχει γίνει μια ισχυρή τεχνολογία που επιτρέπει την εφαρμογή της. Ο ηχοβολισμός υποστηρίζει την ανάπτυξη ταχέων αναλυτικών μεθόδων με χαμηλότερη κατανάλωση διαλυτών, βελτιωμένη απόδοση εκχύλισης και ισχυρές παραμέτρους επικύρωσης.
Ο αυξανόμενος όγκος βιβλιογραφίας σχετικά με την εκχύλιση με υπερήχους καταδεικνύει ότι η προετοιμασία δειγμάτων HPLC με τη βοήθεια του υπερήχου δεν είναι απλώς μια ευκολία – είναι μια επιστημονικά επικυρωμένη προσέγγιση που ενισχύει την αναλυτική απόδοση. Συνδυάζοντας την εκχύλιση με υπερήχους με σύγχρονες χρωματογραφικές τεχνικές, τα εργαστήρια μπορούν να επιτύχουν αξιόπιστη ανίχνευση ιχνοστοιχείων σε όλο και πιο σύνθετες μήτρες δειγμάτων.
Ροές εργασίας HPLC ενισχυμένες με ηχοβολισμό
Με τη συνεχή πρόοδο των αναλυτικών οργάνων και των τεχνολογιών προετοιμασίας δειγμάτων, η εκχύλιση με υπερήχους είναι πιθανό να διαδραματίσει ακόμη μεγαλύτερο ρόλο στα χρωματογραφικά εργαστήρια. Η ικανότητά της να εξορθολογίζει τις ροές εργασίας, να βελτιώνει την ποιότητα των δεδομένων και να μειώνει τις περιβαλλοντικές επιπτώσεις ευθυγραμμίζεται με τις εξελισσόμενες απαιτήσεις της σύγχρονης αναλυτικής επιστήμης.
Για τους αναλυτικούς χημικούς και τα βιομηχανικά εργαστήρια που επιδιώκουν τη βελτιστοποίηση της προετοιμασίας δειγμάτων HPLC, η εκχύλιση με υπερήχους προσφέρει μια αποδεδειγμένη, επεκτάσιμη και επιστημονικά ισχυρή λύση. Με την ενσωμάτωση του ηχοβολισμού στα πρωτόκολλα προετοιμασίας δειγμάτων ρουτίνας, τα εργαστήρια μπορούν να βελτιώσουν σημαντικά τόσο την αποτελεσματικότητα όσο και την αξιοπιστία της χρωματογραφικής ανάλυσης.
Σχεδιασμός, Κατασκευή και Συμβουλευτική – Ποιότητα Made in Germany
Hielscher υπερήχων είναι γνωστή για την υψηλότερη ποιότητα και τα πρότυπα σχεδιασμού τους. Η ευρωστία και η εύκολη λειτουργία επιτρέπουν την ομαλή ενσωμάτωση των υπερήχων μας σε βιομηχανικές εγκαταστάσεις. Οι σκληρές συνθήκες και τα απαιτητικά περιβάλλοντα αντιμετωπίζονται εύκολα από τους υπερήχους Hielscher.
Hielscher Υπέρηχοι είναι μια πιστοποιημένη εταιρεία ISO και δίνουν ιδιαίτερη έμφαση σε υψηλής απόδοσης υπερήχων που διαθέτουν state-of-the-art τεχνολογία και φιλικότητα προς το χρήστη. Φυσικά, Hielscher υπερήχων είναι CE συμβατό και πληρούν τις απαιτήσεις των UL, CSA και RoHs.
Βιβλιογραφία / Αναφορές
- M. Rashidipour and R. Heydari (2018): Ultrasonic-Assisted Matrix Solid-Phase Dispersion and High-Performance Liquid Chromatography as an Improved Methodology for Determination of Oleuropein from Olive Leaves. Analytical and Bioanalytical Chemistry Research 52, 2018. 307-316.
- Roudani, A.; Rachid, Mamouni; Nabil, Saffaj; Laknifli, A.; Gharby, Said; Noureddine, El Baraka; Bakka, Abdelhamid; Abdellah, Faouzi (2018): Method validation in the determination of Carbaryl pesticide in water samples using sonication and liquid chromatography-tandem mass spectrometry. JMES 8 (7), 2017. 2409-2420.
- Bimakr M., Ganjloo A., Zarringhalami S., Ansarian E. (2017): Ultrasound-assisted extraction of bioactive compounds from Malva sylvestris leaves and its comparison with agitated bed extraction technique. Food Science and Biotechnology 2017 Nov 30;26(6):1481-1490.
Συχνές Ερωτήσεις
Τι είναι το HPLC;
Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) είναι μια αναλυτική τεχνική διαχωρισμού που χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση, τον ποσοτικό προσδιορισμό και τον καθαρισμό συστατικών σε ένα μείγμα. Στην HPLC, μια υγρή κινητή φάση μεταφέρει διαλυμένους αναλυτές μέσω μιας στήλης που είναι γεμάτη με μια σταθερή φάση υπό υψηλή πίεση. Οι διαφορές στις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των αναλυτών, της σταθερής φάσης και της κινητής φάσης προκαλούν το διαχωρισμό των ενώσεων καθώς ταξιδεύουν μέσω της στήλης. Ανιχνευτές όπως UV-Vis, φθορισμού ή φασματομετρίας μάζας μετρούν τις διαχωρισμένες ενώσεις, επιτρέποντας την ακριβή ποιοτική και ποσοτική ανάλυση.
Ποιοι είναι οι τύποι υγρής χρωματογραφίας;
Η υγρή χρωματογραφία μπορεί να ταξινομηθεί ανάλογα με το μηχανισμό διαχωρισμού που χρησιμοποιείται μεταξύ του αναλύτη, της σταθερής φάσης και της κινητής φάσης. Οι πιο συνηθισμένοι τύποι είναι η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης, όπου μια μη πολική στατική φάση διαχωρίζει τις ενώσεις με βάση τις υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις- η χρωματογραφία κανονικής φάσης, η οποία χρησιμοποιεί πολική στατική φάση και διαχωρίζει τις ενώσεις ανάλογα με την πολικότητα- η χρωματογραφία ιοντοανταλλαγής, όπου φορτισμένες στατικές φάσεις διαχωρίζουν τους αναλυτές με βάση τις ιοντικές αλληλεπιδράσεις- και η χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους, η οποία διαχωρίζει τα μόρια ανάλογα με το υδροδυναμικό τους μέγεθος και το μοριακό τους βάρος. Πρόσθετες εξειδικευμένες μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρωματογραφία συγγένειας και τη χρωματογραφία υδρόφιλης αλληλεπίδρασης (HILIC), οι οποίες στοχεύουν σε συγκεκριμένες μοριακές αλληλεπιδράσεις ή πολικές ενώσεις.
Τι φιαλίδια χρησιμοποιούνται για HPLC;
Οι αναλύσεις HPLC χρησιμοποιούν συνήθως μικρά γυάλινα ή πολυμερή φιαλίδια που έχουν σχεδιαστεί για να περιέχουν προετοιμασμένα δείγματα πριν από την έγχυση στο χρωματογραφικό σύστημα. Η πιο κοινή μορφή είναι το φιαλίδιο αυτόματου δειγματολήπτη των 2 ml, το οποίο είναι συμβατό με τους περισσότερους αυτόματους δειγματολήπτες HPLC. Αυτά τα φιαλίδια κατασκευάζονται συνήθως από βοριοπυριτικό γυαλί για να εξασφαλίζεται χημική αντοχή και ελάχιστη αλληλεπίδραση με τους διαλύτες και τους αναλυτές. Ανάλογα με τον τύπο του δείγματος, τα φιαλίδια μπορεί να περιλαμβάνουν ένθετα για δείγματα χαμηλού όγκου, βιδωτό καπάκι ή πρεσαριστό πώμα και διαφράγματα από υλικά όπως PTFE/σιλικόνη για τη διατήρηση της ακεραιότητας του δείγματος.
Τι είναι τα φιαλίδια αυτόματου δειγματολήπτη;
Τα φιαλίδια αυτόματης δειγματοληψίας είναι εξειδικευμένα δοχεία δειγμάτων σχεδιασμένα για συστήματα αυτόματης έγχυσης σε όργανα HPLC και UHPLC. Περιέχουν το προετοιμασμένο διάλυμα δείγματος και τοποθετούνται στο δίσκο αυτόματου δειγματολήπτη του οργάνου, όπου το σύστημα ανασύρει αυτόματα έναν καθορισμένο όγκο για έγχυση στη χρωματογραφική στήλη. Τα φιαλίδια αυτόματης δειγματοληψίας κατασκευάζονται με ακριβείς διαστάσεις για να εξασφαλίζεται η συμβατότητα με τις βελόνες ρομποτικής δειγματοληψίας και να ελαχιστοποιείται η εξάτμιση, η μόλυνση ή η προσρόφηση του δείγματος. Ο σχεδιασμός τους επιτρέπει την αναπαραγώγιμη ανάλυση υψηλής απόδοσης στα σύγχρονα χρωματογραφικά εργαστήρια.
Ποια είναι τα βήματα της HPLC;
Η τυπική ροή εργασίας της υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) αποτελείται από διάφορα διαδοχικά βήματα που εξασφαλίζουν τον αξιόπιστο διαχωρισμό και την ανίχνευση των αναλυτών.
- Πρώτον, γίνεται προετοιμασία του δείγματος για τη διάλυση του αναλύτη, την απομάκρυνση σωματιδίων και συχνά την εκχύλιση ή τη συμπύκνωση ενώσεων-στόχων από τη μήτρα του δείγματος. Το στάδιο αυτό μπορεί να περιλαμβάνει διήθηση, αραίωση ή τεχνικές εκχύλισης όπως εκχύλιση με υπερήχους, εκχύλιση στερεάς φάσης ή εκχύλιση υγρού-υγρού.
- Στη συνέχεια, το προετοιμασμένο δείγμα τοποθετείται σε φιαλίδιο HPLC και φορτώνεται στον αυτόματο δειγματολήπτη. Ο αυτόματος δειγματολήπτης εγχέει έναν ακριβή όγκο του δείγματος στη ρέουσα κινητή φάση.
- Στη συνέχεια, το στάδιο παροχής κινητής φάσης μεταφέρει το εγχυόμενο δείγμα μέσω του συστήματος χρησιμοποιώντας μια αντλία υψηλής πίεσης. Η κινητή φάση μεταφέρει τους αναλυτές μέσω της χρωματογραφικής στήλης με ελεγχόμενο ρυθμό ροής.
- Στο εσωτερικό της χρωματογραφικής στήλης πραγματοποιείται διαχωρισμός. Η στήλη περιέχει μια σταθερή φάση, συνήθως συσκευασμένα σωματίδια με καθορισμένες χημικές ιδιότητες. Καθώς οι αναλυτές ταξιδεύουν μέσω της στήλης, αλληλεπιδρούν διαφορετικά με τη στατική φάση και την κινητή φάση, με αποτέλεσμα να εκλούονται σε διαφορετικούς χρόνους.
- Μετά το διαχωρισμό, οι ενώσεις περνούν από έναν ανιχνευτή, όπως ανιχνευτή UV-Vis, φθορισμού ή φασματομετρίας μάζας. Ο ανιχνευτής μετρά την παρουσία και τη συγκέντρωση των ενώσεων που εκλούονται και μετατρέπει το σήμα σε ηλεκτρονικά δεδομένα.
- Τέλος, η συλλογή και η ανάλυση των δεδομένων πραγματοποιείται με τη χρήση λογισμικού χρωματογραφίας. Το σύστημα παράγει ένα χρωματογράφημα στο οποίο οι κορυφές αντιστοιχούν σε μεμονωμένες ενώσεις. Οι χρόνοι κατακράτησης των κορυφών βοηθούν στην ταυτοποίηση των αναλυτών, ενώ οι περιοχές ή τα ύψη των κορυφών επιτρέπουν τον ποσοτικό προσδιορισμό της συγκέντρωσής τους.
Hielscher Υπέρηχοι κατασκευάζει υψηλής απόδοσης υπερήχων ομογενοποιητές από εργαστήριο προς βιομηχανικό μέγεθος.