Βελτιώστε την ανάλυση HPLC με αξιόπιστη προετοιμασία δειγμάτων
Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) παραμένει μία από τις σημαντικότερες αναλυτικές τεχνικές για την ταυτοποίηση και τον ποσοτικό προσδιορισμό ενώσεων σε πολύπλοκες μήτρες. Από τον ποιοτικό έλεγχο φαρμάκων έως την περιβαλλοντική παρακολούθηση και την ανάλυση τροφίμων, οι μέθοδοι HPLC εκτιμώνται για την ευαισθησία, την εκλεκτικότητα και την αναπαραγωγιμότητά τους. Ωστόσο, η αξιοπιστία των χρωματογραφικών δεδομένων εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από ένα κρίσιμο στάδιο: την προετοιμασία δειγμάτων για HPLC.
Η έρευνα και οι συνήθεις διαδικασίες προετοιμασίας δειγμάτων καταδεικνύουν ότι η εκχύλιση και η προετοιμασία δειγμάτων με τη βοήθεια κατεργασίας με υπερήχους βελτιώνουν σημαντικά την αποδοτικότητα, την ακρίβεια και την ταχύτητα της ανάλυσης HPLC. Χρησιμοποιώντας την ενέργεια των υπερήχων για τη διάρρηξη των μητρών και την ενίσχυση της μεταφοράς των αναλυτών στους διαλύτες, τα εργαστήρια μπορούν να επιτύχουν υψηλότερες ανακτήσεις, μικρότερους χρόνους εκχύλισης και πιο αναπαραγώγιμα αναλυτικά αποτελέσματα.
Γιατί η προετοιμασία δειγμάτων είναι σημαντική στην HPLC
Σε πολλές αναλυτικές ροές εργασίας, η μήτρα του δείγματος – όπως φυτικό υλικό, βιολογικός ιστός, έδαφος ή νερό – περιέχει πολύπλοκα μείγματα ενώσεων που μπορούν να παρεμποδίσουν τον χρωματογραφικό διαχωρισμό. Επομένως, απαιτείται αποτελεσματική προετοιμασία δειγμάτων για την απομόνωση των αναλυτών, την απομάκρυνση των παρεμποδιζουσών ουσιών και τη συμπύκνωση των ενώσεων-στόχων πριν από την έγχυση στο σύστημα HPLC.
Οι παραδοσιακές τεχνικές εκχύλισης συχνά περιλαμβάνουν χρονοβόρες διαδικασίες, μεγάλους όγκους οργανικών διαλυτών και πολλαπλά στάδια καθαρισμού. Αυτές οι μέθοδοι μπορούν να εισαγάγουν μεταβλητότητα, να αυξήσουν το λειτουργικό κόστος και να παρατείνουν τον συνολικό χρόνο ανάλυσης.
Η προετοιμασία δειγμάτων με υπερήχους προσφέρει μια αποτελεσματική εναλλακτική λύση. Η κατεργασία με υπερήχους εισάγει ακουστική ενέργεια υψηλής συχνότητας σε ένα υγρό μέσο, δημιουργώντας μικροσκοπικές φυσαλίδες σπηλαίωσης. Όταν αυτές οι φυσαλίδες καταρρέουν, παράγουν τοπικές δυνάμεις διάτμησης και φαινόμενα μικροανάμειξης που διαρρηγνύουν τις στερεές μήτρες και επιταχύνουν τη μεταφορά μάζας. Αυτή η διαδικασία ενισχύει θεαματικά την αποδοτικότητα της εκχύλισης.
Συσκευή υπερήχων UIP400MTP υψηλής δυναμικότητας επεξεργασίας δειγμάτων με βάση στήριξης σωληναρίων για φιαλίδια αυτόματου δειγματολήπτη
Επιστημονικά τεκμήρια: Η κατεργασία με υπερήχους βελτιώνει την αναλυτική επίδοση
Αρκετές μελέτες που έχουν αξιολογηθεί από ομοτίμους έχουν καταδείξει τα πλεονεκτήματα της εκχύλισης με υπερήχους στις ροές εργασίας HPLC.
Για παράδειγμα, μια μέθοδος που αναπτύχθηκε για την παρακολούθηση υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων σε δείγματα νερού χρησιμοποίησε κατεργασία με υπερήχους σε συνδυασμό με ανάλυση LC–MS/MS για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων του φυτοφαρμάκου καρβαρύλη. Σε αυτή την προσέγγιση, τα δείγματα νερού υποβλήθηκαν σε εκχύλιση με ακετονιτρίλιο υπό κατεργασία με υπερήχους πριν από τη χρωματογραφική ανάλυση. Η μέθοδος πέτυχε υψηλή αναλυτική επίδοση, συμπεριλαμβανομένων ανακτήσεων μεταξύ 89,53% και 101,72%, επιβεβαιώνοντας την ακρίβεια και την αξιοπιστία της διαδικασίας προετοιμασίας δειγμάτων με υπερήχους.
Το στάδιο εκχύλισης με υπερήχους επέτρεψε την αποτελεσματική μεταφορά των αναλυτών από την υδατική μήτρα στον οργανικό διαλύτη, μειώνοντας την κατανάλωση διαλυτών και εξαλείφοντας την ανάγκη για εκτεταμένες διαδικασίες καθαρισμού. Η επικυρωμένη αναλυτική μέθοδος επέδειξε εξαιρετική γραμμικότητα, πιστότητα και όρια ποσοτικού προσδιορισμού, αναδεικνύοντας την αποτελεσματικότητα της κατεργασίας με υπερήχους στις σύγχρονες χρωματογραφικές ροές εργασίας. (βλ. Roudani et al., 2018)
Μια άλλη μελέτη εισήγαγε τη διασπορά μήτρας σε στερεά φάση με τη βοήθεια υπερήχων (UA-MSPD) για τον προσδιορισμό της ελευρωπαΐνης σε φύλλα ελιάς με ανάλυση HPLC. Σε αυτή την τεχνική, η φυτική σκόνη και το ροφητικό υλικό αναμείχθηκαν και στη συνέχεια εκτέθηκαν σε υπερηχητικά κύματα κατά το στάδιο της έκλουσης. Οι υπέρηχοι ενίσχυσαν την εκρόφηση του αναλύτη από την επιφάνεια του ροφητικού υλικού, βελτιώνοντας ταυτόχρονα την εκχύλιση από τη μήτρα του δείγματος. (βλ. Rashidipour και Heydari, 2018)
Η βελτιστοποιημένη διαδικασία κατεργασίας με υπερήχους επέφερε σημαντικές αναλυτικές βελτιώσεις, μεταξύ των οποίων:
- Γραμμικές καμπύλες βαθμονόμησης με R² = 0,9979
- Όρια ανίχνευσης που φθάνουν σε τιμές μόλις 0,03 µg mL⁻¹
- Ποσοστά ανάκτησης μεταξύ 90,2% και 96,7%
Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν ότι η εκχύλιση με τη βοήθεια υπερήχων όχι μόνο επιταχύνει την προετοιμασία δειγμάτων αλλά και αυξάνει την απόδοση εκχύλισης σε σύγκριση με τις κλασικές τεχνικές διασποράς μήτρας σε στερεά φάση.
Συσκευή υπερήχων τύπου ακίδας UP200St για την προετοιμασία δειγμάτων για HPLC
Βασικά πλεονεκτήματα της προετοιμασίας δειγμάτων με υπερήχους για HPLC
Η αυξανόμενη υιοθέτηση της εκχύλισης με υπερήχους στα αναλυτικά εργαστήρια οφείλεται σε διάφορα μετρήσιμα οφέλη.
- Υψηλότερη απόδοση εκχύλισης
Η ακουστική σπηλαίωση διασπά τις στερεές μήτρες και βελτιώνει τη διείσδυση του διαλύτη. Αυτό ενισχύει την απελευθέρωση των αναλυτών και αυξάνει τα ποσοστά ανάκτησης, ιδιαίτερα για ενώσεις που βρίσκονται σε επίπεδα ιχνών σε σύνθετα δείγματα. - Μειωμένος χρόνος προετοιμασίας δειγμάτων
Η εκχύλιση με υπερήχους μπορεί συχνά να ολοκληρώσει την προετοιμασία δειγμάτων μέσα σε δευτερόλεπτα ή λεπτά. Για παράδειγμα, οι βελτιστοποιημένες παράμετροι εκχύλισης με υπερήχους στην UA-MSPD επέτυχαν αποτελεσματική ανάκτηση αναλυτών με περίπου 30 δευτερόλεπτα κατεργασίας με υπερήχους, καταδεικνύοντας πόσο δραστικά μπορούν να επιταχυνθούν οι ροές εργασίας ανάλυσης. - Χαμηλότερη κατανάλωση διαλυτών
Επειδή οι υπέρηχοι ενισχύουν τη μεταφορά μάζας, συνήθως απαιτούνται μικρότεροι όγκοι διαλυτών. Η μειωμένη χρήση διαλυτών βελτιώνει τη βιωσιμότητα του εργαστηρίου και μειώνει το λειτουργικό κόστος. - Βελτιωμένη αναπαραγωγιμότητα
Η ομοιόμορφη κατανομή της ενέργειας υπερήχων διασφαλίζει συνεπή διάρρηξη και εκχύλιση των δειγμάτων μεταξύ επαναλήψεων, οδηγώντας σε καλύτερη πιστότητα των αναλυτικών μετρήσεων. - Συμβατότητα με σύγχρονες χρωματογραφικές μεθόδους
Η εκχύλιση με υπερήχους ενσωματώνεται εύκολα σε συστήματα HPLC, UHPLC και LC-MS, καθιστώντας την κατάλληλη για αναλυτικά περιβάλλοντα υψηλής διεκπεραιωτικής ικανότητας.
Χρωματογράφημα HPLC φαινολικών ενώσεων από εκχύλισμα φύλλων Annona muricata που απομονώθηκε με υπερήχους με χρήση της συσκευής υπερήχων UP400S.
(Μελέτη και γράφημα: ©Nolasco-González et al., 2022)
Πρακτικές λύσεις κατεργασίας με υπερήχους για την προετοιμασία δειγμάτων για HPLC
Για τα εργαστήρια που εφαρμόζουν εκχύλιση με υπερήχους, οι συσκευές υπερήχων Hielscher παρέχουν ακριβή έλεγχο παραμέτρων όπως το πλάτος ταλάντωσης, ο χρόνος και ο παλμικός τρόπος λειτουργίας. Επομένως, οι εργαστηριακές συσκευές υπερήχων Hielscher είναι ιδιαίτερα κατάλληλες για αναλυτικά εργαστήρια.
Επιλέξτε την καταλληλότερη εργαστηριακή συσκευή υπερήχων για τα δείγματά σας για HPLC
| Μοντέλο συσκευής υπερήχων | Πλεονεκτήματα για HPLC | Καταλληλότερη χρήση στην προετοιμασία δειγμάτων για HPLC |
| Συσκευή υπερήχων πολλαπλών σωληναρίων VialTweeter |
• Ταυτόχρονη κατεργασία με υπερήχους έως και 10 σφραγισμένων φιαλιδίων με ίδια ενέργεια υπερήχων • Στείρα κατεργασία: Χωρίς διασταυρούμενη επιμόλυνση, επειδή τα δείγματα παραμένουν κλειστά • Συνθήκες εκχύλισης υψηλής αναπαραγωγιμότητας μεταξύ παρτίδων • Αποτελεσματική σπηλαίωση για αναλυτικά δείγματα μικρού όγκου |
• Προετοιμασία περιβαλλοντικών, διατροφικών ή φαρμακευτικών δειγμάτων με υψηλή διεκπεραιωτική ικανότητα • Εκχύλιση αναλυτών σε επίπεδα ιχνών πριν από ανάλυση HPLC, UHPLC ή LC-MS • Τυποποιημένες ροές εργασίας που απαιτούν ίδια κατεργασία πολλαπλών δειγμάτων |
| Συσκευή υπερήχων μικροπλακών UIP400MTP |
• Κατεργασία ολόκληρων μικροπλακών με υπερήχους χωρίς επαφή (μορφές 96 και 384 βοθρίων) • Ομοιόμορφη κατανομή της ενέργειας υπερήχων σε όλα τα βοθρία • Επιτρέπει τον αυτοματισμό και την ενσωμάτωση ρομποτικών συστημάτων στις αναλυτικές ροές εργασίας • Υψηλή διεκπεραιωτική ικανότητα με ακριβή έλεγχο του πλάτους ταλάντωσης και του χρόνου κατεργασίας με υπερήχους |
• Ροές εργασίας διαλογής με UHPLC υψηλής διεκπεραιωτικής ικανότητας • Βιβλιοθήκες φαρμακευτικών ενώσεων και προετοιμασία δειγμάτων μεταβολομικής • Εκχύλιση σε πλάκες για αναλυτικές ακολουθίες εργασιών LC-MS ή UHPLC |
| Εργαστηριακές συσκευές υπερήχων με μικροακίδα (άμεση κατεργασία με υπερήχους) |
• Μέγιστη ένταση υπερήχων για αποτελεσματική διάρρηξη της μήτρας • Πολύ ταχεία εκχύλιση αναλυτών από στερεά, ιξώδη ή ετερογενή δείγματα • Ρυθμιζόμενες παράμετροι πλάτους ταλάντωσης και παλμών για βελτιστοποιημένες συνθήκες εκχύλισης • Η υψηλή ενέργεια σπηλαίωσης βελτιώνει την ανάκτηση αναλυτών και την απόδοση εκχύλισης |
• Εκχύλιση από δύσκολες μήτρες όπως φυτικοί ιστοί, δείγματα τροφίμων ή πολυμερή • Ομογενοποίηση πριν από SPE, διήθηση ή εκχύλιση υγρού–υγρού • Ανάπτυξη μεθόδων για την προετοιμασία δειγμάτων για HPLC με υπερήχους |
| CupHorn («λουτρό υψηλής έντασης» για ποτήρια ζέσεως και σωληνάρια) |
• Η έμμεση κατεργασία με υπερήχους αποτρέπει την επιμόλυνση της ακίδας • Ομοιόμορφο πεδίο υπερήχων για πολλαπλά σωληνάρια ταυτόχρονα • Ιδανικό για στείρα, επικίνδυνα ή πτητικά δείγματα που πρέπει να παραμένουν σφραγισμένα • Απλοποιεί τον χειρισμό διατηρώντας παράλληλα υψηλή ενέργεια σπηλαίωσης |
• Παράλληλη εκχύλιση πολλαπλών δειγμάτων για HPLC σε σφραγισμένα σωληνάρια φυγοκέντρησης • Προετοιμασία βιολογικών, φαρμακευτικών ή περιβαλλοντικών δειγμάτων • Ροές εργασίας στις οποίες απαιτείται έμμεση κατεργασία με υπερήχους χωρίς επιμόλυνση |
Επιστημονική σημασία για την αναλυτική χημεία
Καθώς η αναλυτική χημεία στρέφεται προς ταχύτερες και πιο βιώσιμες εργαστηριακές πρακτικές, η προετοιμασία δειγμάτων με υπερήχους έχει καταστεί μια ισχυρή τεχνολογία που διευκολύνει αυτή την εξέλιξη. Η κατεργασία με υπερήχους υποστηρίζει την ανάπτυξη ταχέων αναλυτικών μεθόδων με χαμηλότερη κατανάλωση διαλυτών, βελτιωμένη απόδοση εκχύλισης και αξιόπιστες παραμέτρους επικύρωσης.
Η αυξανόμενη βιβλιογραφία σχετικά με την εκχύλιση με υπερήχους καταδεικνύει ότι η υποβοηθούμενη από υπερήχους προετοιμασία δειγμάτων για HPLC δεν αποτελεί απλώς μια πρακτική διευκόλυνση – είναι μια επιστημονικά επικυρωμένη προσέγγιση που βελτιώνει την αναλυτική επίδοση. Συνδυάζοντας την εκχύλιση με υπερήχους με σύγχρονες χρωματογραφικές τεχνικές, τα εργαστήρια μπορούν να επιτύχουν αξιόπιστη ανίχνευση αναλυτών σε επίπεδα ιχνών σε ολοένα πιο σύνθετες μήτρες δειγμάτων.
Ροές εργασίας HPLC ενισχυμένες με κατεργασία με υπερήχους
Με τη συνεχή πρόοδο στον αναλυτικό εξοπλισμό και στις τεχνολογίες προετοιμασίας δειγμάτων, η εκχύλιση με υπερήχους είναι πιθανό να διαδραματίσει ακόμη μεγαλύτερο ρόλο στα χρωματογραφικά εργαστήρια. Η ικανότητά της να εξορθολογίζει τις ροές εργασίας, να βελτιώνει την ποιότητα των δεδομένων και να μειώνει τις περιβαλλοντικές επιπτώσεις ανταποκρίνεται στις εξελισσόμενες απαιτήσεις της σύγχρονης αναλυτικής επιστήμης.
Για τους αναλυτικούς χημικούς και τα βιομηχανικά εργαστήρια που επιδιώκουν τη βελτιστοποίηση της προετοιμασίας δειγμάτων για HPLC, η εκχύλιση με υπερήχους προσφέρει μια αποδεδειγμένη, κλιμακώσιμη και επιστημονικά τεκμηριωμένη λύση. Ενσωματώνοντας την κατεργασία με υπερήχους στα συνήθη πρωτόκολλα προετοιμασίας δειγμάτων, τα εργαστήρια μπορούν να βελτιώσουν σημαντικά τόσο την αποδοτικότητα όσο και την αξιοπιστία της χρωματογραφικής ανάλυσης.
Σχεδιασμός, κατασκευή και συμβουλευτικές υπηρεσίες – Ποιότητα κατασκευασμένη στη Γερμανία
Οι συσκευές υπερήχων της Hielscher είναι ευρέως γνωστές για τα ύψιστα πρότυπα ποιότητας και σχεδιασμού τους. Η στιβαρότητα και η ευκολία χειρισμού επιτρέπουν την ομαλή ενσωμάτωση των συσκευών υπερήχων μας σε βιομηχανικές εγκαταστάσεις. Οι συσκευές υπερήχων της Hielscher ανταποκρίνονται με ευκολία σε αντίξοες συνθήκες και απαιτητικά περιβάλλοντα.
Η Hielscher Ultrasonics είναι εταιρεία πιστοποιημένη κατά ISO και δίνει ιδιαίτερη έμφαση στις συσκευές υπερήχων υψηλής απόδοσης που διαθέτουν τεχνολογία αιχμής και ευχρηστία. Φυσικά, οι συσκευές υπερήχων της Hielscher συμμορφώνονται με τις απαιτήσεις CE και πληρούν τις απαιτήσεις των UL, CSA και RoHs.
Βιβλιογραφία / Αναφορές
- M. Rashidipour and R. Heydari (2018): Ultrasonic-Assisted Matrix Solid-Phase Dispersion and High-Performance Liquid Chromatography as an Improved Methodology for Determination of Oleuropein from Olive Leaves. Analytical and Bioanalytical Chemistry Research 52, 2018. 307-316.
- Roudani, A.; Rachid, Mamouni; Nabil, Saffaj; Laknifli, A.; Gharby, Said; Noureddine, El Baraka; Bakka, Abdelhamid; Abdellah, Faouzi (2018): Method validation in the determination of Carbaryl pesticide in water samples using sonication and liquid chromatography-tandem mass spectrometry. JMES 8 (7), 2017. 2409-2420.
- Bimakr M., Ganjloo A., Zarringhalami S., Ansarian E. (2017): Ultrasound-assisted extraction of bioactive compounds from Malva sylvestris leaves and its comparison with agitated bed extraction technique. Food Science and Biotechnology 2017 Nov 30;26(6):1481-1490.
Συχνές ερωτήσεις
Τι είναι η HPLC;
Η υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC) είναι μια αναλυτική τεχνική διαχωρισμού που χρησιμοποιείται για την ταυτοποίηση, τον ποσοτικό προσδιορισμό και τον καθαρισμό συστατικών ενός μείγματος. Στην HPLC, μια υγρή κινητή φάση μεταφέρει διαλυμένους αναλύτες υπό υψηλή πίεση μέσα από μια στήλη πληρωμένη με στατική φάση. Οι διαφορές στις αλληλεπιδράσεις μεταξύ των αναλυτών, της στατικής φάσης και της κινητής φάσης προκαλούν τον διαχωρισμό των ενώσεων καθώς αυτές διέρχονται από τη στήλη. Ανιχνευτές, όπως ανιχνευτές UV-Vis, φθορισμού ή φασματομετρίας μάζας, μετρούν τις διαχωρισμένες ενώσεις, επιτρέποντας ακριβή ποιοτική και ποσοτική ανάλυση.
Ποια είναι τα είδη υγρής χρωματογραφίας;
Η υγρή χρωματογραφία μπορεί να ταξινομηθεί σύμφωνα με τον μηχανισμό διαχωρισμού που χρησιμοποιείται μεταξύ του αναλύτη, της στατικής φάσης και της κινητής φάσης. Τα συνηθέστερα είδη είναι η χρωματογραφία αντίστροφης φάσης, στην οποία μια μη πολική στατική φάση διαχωρίζει τις ενώσεις βάσει υδρόφοβων αλληλεπιδράσεων· η χρωματογραφία κανονικής φάσης, η οποία χρησιμοποιεί πολική στατική φάση και διαχωρίζει τις ενώσεις σύμφωνα με την πολικότητά τους· η χρωματογραφία ιοντοανταλλαγής, στην οποία φορτισμένες στατικές φάσεις διαχωρίζουν τους αναλύτες βάσει ιοντικών αλληλεπιδράσεων· και η χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους, η οποία διαχωρίζει τα μόρια σύμφωνα με το υδροδυναμικό τους μέγεθος και το μοριακό τους βάρος. Πρόσθετες εξειδικευμένες μέθοδοι περιλαμβάνουν τη χρωματογραφία συγγένειας και τη χρωματογραφία υδρόφιλων αλληλεπιδράσεων (HILIC), οι οποίες στοχεύουν σε συγκεκριμένες μοριακές αλληλεπιδράσεις ή πολικές ενώσεις.
Ποια φιαλίδια χρησιμοποιούνται για την HPLC;
Οι αναλύσεις HPLC χρησιμοποιούν συνήθως μικρά γυάλινα ή πολυμερή φιαλίδια, σχεδιασμένα να περιέχουν προετοιμασμένα δείγματα πριν από την έγχυσή τους στο χρωματογραφικό σύστημα. Ο συνηθέστερος τύπος είναι το φιαλίδιο αυτόματου δειγματολήπτη των 2-mL, το οποίο είναι συμβατό με τους περισσότερους αυτόματους δειγματολήπτες HPLC. Τα φιαλίδια αυτά κατασκευάζονται συνήθως από βοριοπυριτικό γυαλί, ώστε να εξασφαλίζονται χημική αντοχή και ελάχιστη αλληλεπίδραση με διαλύτες και αναλύτες. Ανάλογα με τον τύπο του δείγματος, τα φιαλίδια μπορεί να περιλαμβάνουν ένθετα για δείγματα μικρού όγκου, βιδωτά ή πρεσαριστά πώματα και διαφράγματα από υλικά όπως PTFE/σιλικόνη για τη διατήρηση της ακεραιότητας του δείγματος.
Τι είναι τα φιαλίδια αυτόματου δειγματολήπτη;
Τα φιαλίδια αυτόματου δειγματολήπτη είναι εξειδικευμένοι περιέκτες δειγμάτων, σχεδιασμένοι για αυτοματοποιημένα συστήματα έγχυσης σε όργανα HPLC και UHPLC. Περιέχουν το προετοιμασμένο διάλυμα δείγματος και τοποθετούνται στον δίσκο του αυτόματου δειγματολήπτη του οργάνου, όπου το σύστημα αναρροφά αυτόματα έναν καθορισμένο όγκο για έγχυση στη χρωματογραφική στήλη. Τα φιαλίδια αυτόματου δειγματολήπτη κατασκευάζονται με ακριβείς διαστάσεις, ώστε να εξασφαλίζεται η συμβατότητα με ρομποτικές βελόνες δειγματοληψίας και να ελαχιστοποιούνται η εξάτμιση, η επιμόλυνση ή η προσρόφηση του δείγματος. Ο σχεδιασμός τους επιτρέπει αναπαραγώγιμες αναλύσεις μεγάλου αριθμού δειγμάτων στα σύγχρονα χρωματογραφικά εργαστήρια.
Ποια είναι τα στάδια της HPLC;
Η τυπική ροή εργασίας της υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) αποτελείται από διάφορα διαδοχικά στάδια που εξασφαλίζουν τον αξιόπιστο διαχωρισμό και την ανίχνευση των αναλυτών.
- Αρχικά, πραγματοποιείται προετοιμασία του δείγματος για τη διάλυση του αναλύτη, την απομάκρυνση των σωματιδίων και, συχνά, την εκχύλιση ή τη συμπύκνωση των ενώσεων-στόχων από τη μήτρα του δείγματος. Το στάδιο αυτό μπορεί να περιλαμβάνει διήθηση, αραίωση ή τεχνικές εκχύλισης, όπως εκχύλιση με υπερήχους, εκχύλιση στερεάς φάσης ή εκχύλιση υγρού–υγρού.
- Στη συνέχεια, το προετοιμασμένο δείγμα τοποθετείται σε φιαλίδιο HPLC και εισάγεται στον αυτόματο δειγματολήπτη. Ο αυτόματος δειγματολήπτης εγχέει έναν ακριβή όγκο του δείγματος στη ρέουσα κινητή φάση.
- Στο επόμενο στάδιο, η τροφοδοσία της κινητής φάσης μεταφέρει το εγχυθέν δείγμα μέσα από το σύστημα με τη χρήση αντλίας υψηλής πίεσης. Η κινητή φάση μεταφέρει τους αναλύτες μέσα από τη χρωματογραφική στήλη με ελεγχόμενη παροχή.
- Μέσα στη χρωματογραφική στήλη πραγματοποιείται ο διαχωρισμός. Η στήλη περιέχει μια στατική φάση, συνήθως σωματίδια τοποθετημένα σε πυκνή διάταξη με καθορισμένες χημικές ιδιότητες. Καθώς οι αναλύτες διέρχονται μέσα από τη στήλη, αλληλεπιδρούν διαφορετικά με τη στατική και την κινητή φάση, με αποτέλεσμα να εκλούονται σε διαφορετικούς χρόνους.
- Μετά τον διαχωρισμό, οι ενώσεις διέρχονται από έναν ανιχνευτή, όπως ανιχνευτή UV-Vis, φθορισμού ή φασματομετρίας μάζας. Ο ανιχνευτής μετρά την παρουσία και τη συγκέντρωση των εκλουόμενων ενώσεων και μετατρέπει το σήμα σε ηλεκτρονικά δεδομένα.
- Τέλος, πραγματοποιούνται συλλογή και ανάλυση δεδομένων με τη χρήση λογισμικού χρωματογραφίας. Το σύστημα δημιουργεί ένα χρωματογράφημα στο οποίο οι κορυφές αντιστοιχούν σε επιμέρους ενώσεις. Οι χρόνοι κατακράτησης των κορυφών βοηθούν στην ταυτοποίηση των αναλυτών, ενώ τα εμβαδά ή τα ύψη των κορυφών επιτρέπουν τον ποσοτικό προσδιορισμό της συγκέντρωσής τους.
Η Hielscher Ultrasonics κατασκευάζει ομογενοποιητές υπερήχων υψηλής απόδοσης από εργαστηριακή έως βιομηχανική κλίμακα.