Προετοιμασία δειγμάτων με υπερήχους για ανάλυση THC
- Η εκχύλιση με υπερήχους είναι μια αποδεδειγμένη μέθοδος για την παραγωγή THC, αλλά μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για αναλυτικούς σκοπούς.
- Η κατεργασία με υπερήχους είναι μια συνήθης μέθοδος προετοιμασίας δειγμάτων που χρησιμοποιείται για την ανάλυση της συνολικής περιεκτικότητας των προϊόντων κάνναβης σε THC.
- Η εκχύλιση με υπερήχους εφαρμόζεται στα δείγματα πριν από την ανάλυση με TLC, GC και HPLC.
Εκχύλιση THC με υπερήχους
Η THC, ή τετραϋδροκανναβινόλη (δέλτα-9-τετραϋδροκανναβινόλη), είναι η χημική ουσία που προκαλεί τις περισσότερες ψυχολογικές επιδράσεις της μαριχουάνας. Για το είδος της κάνναβης είναι γνωστές περισσότερες από 400 διαφορετικές ποικιλίες. Ανάλογα με τη συγκεκριμένη ποικιλία κάνναβης, η περιεκτικότητα σε THC μπορεί να είναι μόλις 0,3 wt%. Σε άλλες ποικιλίες, η περιεκτικότητα σε THC μπορεί να φτάσει έως και 20 wt%.
Τα διάφορα προϊόντα κάνναβης επίσης διαφέρουν σημαντικά: η μέση συγκέντρωση THC στη μαριχουάνα κυμαίνεται από 1 έως 5%· στο χασίς, η περιεκτικότητα σε THC κυμαίνεται από 5 έως 15%, ενώ στο χασισέλαιο ανέρχεται κατά μέσο όρο σε 20%. Η ποσότητα THC στις δόσεις μαριχουάνας για ψυχαγωγική χρήση ποικίλλει σημαντικά και, όσο χαμηλότερη είναι η περιεκτικότητα της μαριχουάνας σε THC, τόσο μεγαλύτερη ποσότητα πρέπει να καταναλώσει ο χρήστης για να αισθανθεί τις επιθυμητές επιδράσεις.
Η προετοιμασία δειγμάτων με υπερήχους χρησιμοποιείται για την ανάλυση της περιεκτικότητας σε THC
- για τον ποιοτικό έλεγχο προϊόντων THC για ψυχαγωγική χρήση,
- για τον προσδιορισμό της ποιότητας φαρμακευτικών προϊόντων THC,
- για τη διάκριση της κάνναβης για ναρκωτική χρήση από την κάνναβη για παραγωγή ινών.
Για την ανάλυση της THC χρησιμοποιούνται συνήθως οι ακόλουθες χρωματογραφικές μέθοδοι: χρωματογραφία λεπτής στιβάδας (TLC), αέρια χρωματογραφία (GC) και υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC)
Πρωτόκολλο προετοιμασίας δειγμάτων με υπερήχους για ανάλυση TLC
Προετοιμασία δειγμάτων: Για την προετοιμασία των δειγμάτων, το αποξηραμένο φυτικό υλικό πρέπει να υποβληθεί σε διαβροχή και να αλεστεί σε ομοιογενή σκόνη. Για την εκχύλιση με υπερήχους, αναμειγνύονται σε ένα φιαλίδιο 500mg σκόνης φυτικού υλικού κάνναβης και 5mL μείγματος μεθανόλης-χλωροφορμίου (σε αναλογία 9 : 1). Η κατεργασία με υπερήχους μπορεί να εφαρμοστεί χρησιμοποιώντας έναν επεξεργαστή υπερήχων με μικροακίδα, το VialTweeter ή το σύστημα υπερήχων CupHorn. Η κατεργασία με υπερήχους διαρκεί περίπου 5 min. Στη συνέχεια, αφήστε το δείγμα σε ηρεμία για τουλάχιστον 5 min. Αραιώστε το διαυγές υπερκείμενο με το μείγμα εκχύλισης (v/v: 1 : 10). Ελεύθερη THC: 1μL στην πλάκα TLC
Αποκαρβοξυλίωση: 100μL του εκχυλίσματος εξατμίζονται μέχρι ξηρού. Το υπόλειμμα θερμαίνεται στους 180℃ για 4 min. Προσθέστε 500μL μεθανόλης-χλωροφορμίου (v/v 9 : 1). Υποβάλετε σε κατεργασία με υπερήχους για 5 min. Αραιώστε το διαυγές υπερκείμενο με το μείγμα εκχύλισης (v/v: 1 : 10).
Βαθμονόμηση: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
Πηκτή πυριτίας TLC F-254, Merck 5729
Σαρωτής TLC II, λογισμικό CATS3, Camag Muttenz Εκλουστικό:
Οξικός αιθυλεστέρας : Τολουόλιο : Χλωροφόρμιο = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Μεταχρωματογραφική παραγωγοποίηση: άλας Fast Blue 0,1% σε NaOH 0,1 M
Πυκνομετρία στα 550 nm
Τετραϋδροκανναβινόλη (Δ9-THC) για ανάλυση και εκχύλιση
Πρωτόκολλο προετοιμασίας δειγμάτων με υπερήχους για ανάλυση GC
Προετοιμασία δειγμάτων: Το αποξηραμένο φυτικό υλικό υποβάλλεται σε διαβροχή και αλέθεται σε ομοιογενή σκόνη. Για την εκχύλιση, αναμειγνύονται σε ένα φιαλίδιο 500mg σκόνης φυτικού υλικού κάνναβης και 10mL μείγματος μεθανόλης-εξανίου (σε αναλογία 9 : 1). Η κατεργασία με υπερήχους μπορεί να εφαρμοστεί χρησιμοποιώντας μια συσκευή υπερήχων τύπου καθετήρα με μικροακίδα, το VialTweeter ή το σύστημα υπερήχων CupHorn. Υποβάλετε το δείγμα σε κατεργασία με υπερήχους για 15–20 min. Ανακινήστε το δείγμα και αφήστε το σε ηρεμία για τουλάχιστον 5 min. Αραιώστε το διαυγές υπερκείμενο με το μείγμα εκχύλισης (v/v 1: 20).
Αποκαρβοξυλίωση: στο ένθετο
Θερμοκρασία εγχυτήρα 250℃
Βαθμονόμηση: 5 ng/μL έως 250 ng/μL
GC: HP 6890 με 5973 MSD και αυτόματο δειγματολήπτη 7683 έγχυση: 1μL, χρόνος χωρίς διαίρεση ροής: 2 min.
Στήλη: HP-5 MS, 30m, διάμετρος 250 μm, πάχος υμενίου 0,25 μm
Φέρον αέριο: He, 35 psi, σταθερή παροχή: 4 mL/min.
Κλίβανος: 100℃ για 1min.· αύξηση θερμοκρασίας κατά 15℃ /min. έως τους 280℃· 280℃ για 5 min. MSD: ΣΑΡΩΣΗ: m/e 35 – 550
Πρωτόκολλο προετοιμασίας δειγμάτων με υπερήχους για ανάλυση HPLC
Προετοιμασία δειγμάτων (ανάλογη με την προετοιμασία για GC): Το αποξηραμένο φυτικό υλικό υποβάλλεται σε διαβροχή και αλέθεται σε ομοιογενή σκόνη. Για την εκχύλιση, αναμειγνύονται σε ένα φιαλίδιο 500mg σκόνης φυτικού υλικού κάνναβης και 10mL μείγματος μεθανόλης-εξανίου (σε αναλογία 9 : 1). Η κατεργασία με υπερήχους μπορεί να εφαρμοστεί χρησιμοποιώντας έναν επεξεργαστή υπερήχων τύπου καθετήρα με μικροακίδα, το VialTweeter ή το σύστημα υπερήχων CupHorn. Υποβάλετε το δείγμα σε κατεργασία με υπερήχους για 15–20 min. Ανακινήστε το δείγμα και αφήστε το σε ηρεμία για τουλάχιστον 5 min. Αραιώστε το διαυγές υπερκείμενο με το μείγμα εκχύλισης (v/v 1: 20).
VialTweeter για προετοιμασία δειγμάτων με υπερήχους
Προστήλη: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Στήλη: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Εκλουστικό: ισοκρατική έκλουση με 36% TEAP 25 mmol/L, 64% ακετονιτρίλιο ποσοτικός προσδιορισμός στα 210nm
Βαθμονόμηση: 0,001 – 0,10 μg/μL
Βαθμονόμηση: 0,01 – 0,50 μg/μL
Χρόνος κατακράτησης: για CBD: 6,2 min.· για CBN: 8,0 min.· για THC: 9,4 min.· για THC-A: 11,0 min
Όριο ανίχνευσης (LOD): CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St με μικροακίδα για κατεργασία δειγμάτων με υπερήχους
Βιβλιογραφία/Αναφορές
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Δικαστικές χημικές αναλύσεις φυτικού υλικού κάνναβης που περιέχει THC. Από τη χρωματογραφία λεπτής στιβάδας μέσω της GC στη μέθοδο HPLC. Applica 2006.
Χρήσιμες πληροφορίες
Η μαριχουάνα αποτελείται από τα αποξηραμένα άνθη και τα υποκείμενα φύλλα και στελέχη του θηλυκού φυτού κάνναβης. Αυτή είναι η μορφή που καταναλώνεται ευρύτερα και περιέχει περίπου 3% έως 20% THC. Συγκεκριμένες μορφές μαριχουάνας, που έχουν προκύψει από εντατική επιλεκτική αναπαραγωγή, φτάνουν σε περιεκτικότητα THC άνω του 30%. Η μαριχουάνα αποτελεί την πρώτη ύλη για όλες τις άλλες μορφές προϊόντων κάνναβης που περιέχουν THC. Για να μετατραπεί το κανναβινοειδές που υπάρχει σε μεγαλύτερη αφθονία, το τετραϋδροκανναβινολικό οξύ (THCA), στην ψυχοδραστική THC, πρέπει να ξεκινήσει μια διαδικασία αποκαρβοξυλίωσης. Επομένως, η κάνναβη και τα εκχυλίσματά της πρέπει να θερμανθούν ή να αφυδατωθούν ώστε να προκληθεί αποκαρβοξυλίωση.
Το κιφ είναι μια σκόνη πλούσια σε τριχώματα, η οποία λαμβάνεται με κοσκίνισμα των φύλλων και των ανθέων της κάνναβης. Καταναλώνεται είτε σε μορφή σκόνης είτε συμπιέζεται και χρησιμοποιείται σε πλάκες χασίς.
Το χασίς είναι μια συμπυκνωμένη πλάκα ή σφαίρα ρητίνης που παράγεται είτε από συμπιεσμένο κιφ είτε από τη ρητίνη που αποξέεται από την επιφάνεια του φυτού και πλάθεται σε σφαίρες. Εμφανίζεται σε διάφορα χρώματα, από μαύρο έως χρυσοκάστανο, ανάλογα με την καθαρότητα και την προέλευση. Μπορεί να καταναλωθεί από το στόμα ή να καπνιστεί, π.χ. σε πίπα, ναργιλέ, μπονγκ, μικρή υδρόψυκτη πίπα ή ατμοποιητή, με χρήση θερμού μαχαιριού, σε τσιγάρα κάνναβης, αναμεμειγμένο με ανθούς κάνναβης ή καπνό, με εισπνοή καπνού μέσω μπουκαλιού ή να χρησιμοποιηθεί ως συστατικό σε τρόφιμα.
Το βάμμα κάνναβης είναι το εκχύλισμα κανναβινοειδών σε αλκοόλη. Τα κανναβινοειδή εκχυλίζονται από το φυτό κάνναβης με χρήση αποσταγμάτων υψηλού αλκοολικού βαθμού (κυρίως αλκοόλης από σιτηρά) για την παρασκευή του βάμματος.
Το χασισέλαιο είναι μια ρητινώδης μήτρα κανναβινοειδών που παράγεται με εκχύλιση με διαλύτη και σχηματίζει μια σκληρυμένη ή παχύρρευστη μάζα. Το χασισέλαιο είναι ένα από τα ισχυρότερα προϊόντα κάνναβης λόγω της υψηλής περιεκτικότητάς του σε ψυχοδραστική ένωση. Η χρήση χασισελαίου που εκχυλίζεται με βουτάνιο και υπερκρίσιμο διοξείδιο του άνθρακα έχει γίνει ολοένα και πιο δημοφιλής πρόσφατα.
Τα εγχύματα περιλαμβάνουν διάφορα είδη εγχυμάτων κάνναβης, τα οποία διαφέρουν μεταξύ τους λόγω της μεγάλης ποικιλίας μη πτητικών διαλυτών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την παραγωγή ενός εγχύματος κάνναβης. Για την παρασκευή ενός τέτοιου εγχύματος, το φυτικό υλικό κάνναβης αναμειγνύεται με έναν διαλύτη και στη συνέχεια συμπιέζεται και διηθείται, ώστε τα έλαια να μεταφερθούν από το φυτό στον διαλύτη. Το βούτυρο κακάο, το βούτυρο γάλακτος, το μαγειρικό έλαιο, η γλυκερίνη και τα ενυδατικά προϊόντα δέρματος είναι διαλύτες που χρησιμοποιούνται συνήθως.
Η ιατρική μαριχουάνα αναφέρεται στη χρήση του φυτού κάνναβης ως φυτικής θεραπείας κατόπιν ιατρικής σύστασης, καθώς και στη χρήση συνθετικής THC και κανναβινοειδών. Αυτή η χρήση απαιτεί γενικά συνταγή και η διάθεση γίνεται συνήθως εντός ενός πλαισίου που ορίζεται από την τοπική νομοθεσία. Αρκετές ερευνητικές μελέτες έχουν δείξει ότι η χρήση κάνναβης ή παραγώγων της δρα κατά, για παράδειγμα, της ναυτίας και του εμέτου που προκαλούνται από τη χημειοθεραπεία, του νευροπαθητικού πόνου και της πολλαπλής σκλήρυνσης.