Poboljšana proizvodnja proteina insekata sa ultrazvučnicima

Insekti su održivi, lako rastući izvor visokokvalitetnih nutritivnih proteina i lipida. Kako bi se proteini i lipidi odvojili od insekata, ultrazvučna ekstrakcija se koristi kao visoko efikasna i pouzdana tehnologija. Ultrasonikacija je dokazana za visoke stope ekstrakcije, visoke prinose proteina i lipida, te brzu obradu sastojaka insekata vrhunskog kvaliteta.

Zašto izvlačiti proteine insekata sa energetskim ultrazvukom?

Mealsworms se koriste kao izvor za proizvodnju proteina i lipida za prehranu ljudi i životinja. ULtrasonična ekstrakcija se koristi za oslobađanje i odvajanje lipida i proteina od insekata.Ekstrakt proteina insekata obično se smatra kvalitetnijim od obroka insekata jer sadrži veći procenat proteina i manji procenat drugih neželjenih materijala kao što su hitin i masti.
Obrok od insekata se obično pravi brušenjem celih insekata u prah, koji može da sadrži značajnu količinu neprobavljivih materijala kao što su hitin, egzoskeleti i druge nehranljive komponente. Nasuprot tome, ekstrakt proteina insekata obično se dobija ekstrakcijom proteina iz insekata, što rezultira čistijim i koncentriranijim proteinskim proizvodom. Ultrazvučna ekstrakcija je dokazana kao visoko efikasna proizvodna tehnika za visokokvalitetne proteine insekata.
Veća koncentracija proteina u ekstraktu proteina insekata znači da može da obezbedi više proteina po gramu nego obrok insekata, što ga čini efikasnijim izvorom proteina. Pored toga, uklanjanje nehranljivih komponenti može učiniti ekstrakt proteina insekata lakšim za probavljivim i može smanjiti rizik od probavnih problema kod životinja i ljudi koji ga konzumiraju.
Pored toga, ekstrakt proteina insekata može imati blaži ukus i miris u poređenju sa obrokom insekata, što ga čini privlačnijim potrošačima. Takođe ima raznovrsniju primenu, jer se može koristiti kao sastojak u širokom spektru hrane i proizvoda za životinje.
 

Video prikazuje dezintegraciju i ekstrakciju larve mušice vojnika sonikacijom sa sonikatorom Hielscher UP200Ht sonde.

Ekstrakcija larve muhe vojnika u vodi pomoću sonde tipa sonicator UP200Ht

Video sličica

 

Ultrazvučni procesor UIP2000hdT (2kW) sa uzburkanom reaktorom

Ultrazvučni ekstraktor UIP2000hdT (2kW) sa serijskom reaktorom za ekstrakciju proteina insekata

Ultrazvučno ekstrakcija proteina insekata

Ultrazvučna ekstrakcija može se lako implementirati u redovnu preradu obroka insekata i omogućava nadogradnju na finalni proizvod. Ultrazvučno ekstrahirani protein insekata je vrhunskog kvaliteta od obroka insekata koji nudi veće nutritivne vrijednosti, poboljšan okus i bolje funkcionalnosti.

Opšti protokol za ekstrakciju proteina insekata pomoću ultrazvučnika tipa sonde

opći protokol za ekstrakciju proteina prehrambenog razreda iz larvi vojničkih mušica pomoću ultrazvučne sonde:
Materijali i oprema:

  • Larve vojničkih mušica ili drugih vrsta insekata kao što su larve crva (Tenebrio molitor), odrasli kriket (Gryllus bimaculatus) i lutka svilenih crva (Bombyx mori) – Prethodno kulturan i ubran
  • Sonda tipa ultrasonicator
  • Blender ili procesor hrane
  • Destilovana voda koja sadrži 9,46 mM askorbinske kiseline ili drugi rastvarač po izboru
  • centrifuga
  • Staklene ili plastične posude
  • Filter papir ili mrežni filteri

 

Korak po korak za ekstrakciju proteina insekata

  1. Priprema larvi insekata:

    • Poberite larve muve vojnika iz sistema za uzgoj.
    • Larve oprati destilovanom vodom kako bi se uklonili ostaci ili nečistoće.
    • Zamrznite larve na -20 °C ili niže kako biste deaktivirali enzime i očuvali kvalitet proteina.
  2. Poremećaj larve:

    • Odmrznite smrznute larve i prebacite ih u blender ili procesor hrane.
    • Dodajte odgovarajući volumen destilovane vode ili puferskog rastvora da biste postigli željenu koncentraciju proteina (npr. 10% w/v).
    • Mešajte ili prerađujte larve dok se ne dobije homogena kaša.
    • Prebacite kašu u staklenu ili plastičnu posudu.
  3. Brisanje (opciono):

    • Demastivanje obroka od insekata je opcioni korak koji pomaže u povećanju prinosa i kvaliteta proteina. Sadržaj masti u obroku insekata se smanjuje heksanskim tretmanom. Sve u svemu, za većinu ekstrakata proteina insekata za ljudsku ishranu, preporučuje se defatiranje kako bi se poboljšao kvalitet proteina. Konvencionalni proces defatiranja heksana je dugotrajan. Ultrazvučnost može značajno ubrzati defatiranje obroka insekata!
  4. Ultrazvučnost:

    • Uronite sondu ultrazvučnika, npr. UIP2000hdT, u larvu kašu.
    • Podesite parametre ultrazvučnika, npr. 100% amplitudu i vreme sonifikacije u skladu sa zapreminom i gnojnicom.
    • Nanesite ultrazvučne talase na kašu larve uz održavanje konstantne temperature kako bi se izbegla denaturacija proteina.
    • Proces ultrazvučnosti pomaže u ometanju ćelija i oslobađanju proteina iz larvi.
    • Pratite temperaturu tokom sonicacije. Hielscher ultrazvučni sistemi su opremljeni senzorom temperature i kontrolom temperature.
  5. Centrifugiranje:

    • Nakon ultrazvučnosti, prebacite zvučnu larvu kašu u centrifugne cijevi.
    • Centrifugirajte cijevi odgovarajućom brzinom i trajanjem kako biste odvojili supernatant koji sadrži proteine od čvrstih ostataka i neslomljenih ćelija.
    • Sakupite supernatant, koji sadrži ekstrahovane proteine, i prebacite ga u čistu posudu.
    • Opcionalno, ponovite korak centrifugiranja ako je potrebno za uklanjanje preostalih čvrstih čestica. Alternativno, filtracija se može koristiti kao tehnika odvajanja proteina.
  6. Proteinska analiza i skladištenje:

    • Izvršite analizu proteina kako biste procenili kvalitet i sastav ekstrahovanih proteina.
  7. skladištenje:

    • Ekstrahovane proteine skladištite u odgovarajućim kontejnerima na hladnom, suvom i tamnom mestu.

 
Insekti kao izvor hrane Insekti kao što su cvrčci, crvi, muhe i larve su bogati proteinima. Kako bi se ispunila rastuća potražnja za visokokvalitetnim proteinima, insekti su se cijenili kao zdrav, održiv i ekološki prijatan izvor bjelančevina, koji se koristi za ljudsku hranu, hranu za kućne ljubimce i stoku. Insekti su ektotermični (što znači da su hladnokrvni i ne rasipao energiju da bi proizveli toplotu kako bi povećali tjelesnu temperaturu), ne zahtijevaju puno prostora, a mogu se hraniti koristeći otpad kao supstrat rasta. To čini proteine insekata i lipide obećavajućim izvorom hrane, koji može pomoći da se popuni "proteinski jaz", koji se mora prevazići kako bi se prehranila rastuća svetska populacija i njegova potražnja za visokokvalitetnim hranjivim materijama, posebno proteinima.
Uzgoj insekata: Insekti se uzgajaju na farmama insekata, gdje se uzgajaju u kontejnerima ili reaktorima. Uz prednost brzorastućih organizama, oni zahtijevaju relativno nisku njegu, mogu se hraniti organskim otpadom, i brzo se uzgajaju do veličine žetve ili zrelosti. Posebno ličinke mušica, crvi i cvrčci se lako razmnožavaju. Što se tiče efikasnosti, ličinke mušice crnog vojnika prepoznaju se po odličnoj transformaciji organskog rasipa u visokokvalitetete proteine. zbog toga je crna vojniиka muha poznata i kao "kraljica transformacije otpadom" pod poljoprivrednicima kukaca.
 
Koraci prerade obroka insekata: Kada insekti dostigne ciljnu veličinu ili stadion, oni se beru. To znači da su spremni da se prerađuju u sastojke hrane. Prije obrade, insekti se umru u vodi, sijaju i žive čuvaju na 4°C oko jedan dan bez ikakve hrane.
Nakon toga, insekti se kuhaju, a zatim suše vrlo vrućim zrakom ili zagrijavanjem u posudi. Toplotni tretman je takođe potreban da bi se ubile bakterije. Konačno, insekti se melju u obrok od suvog insekta (takođe poznat kao brašno insekata). Obrok od insekata može se koristiti kao sastojak hrane ili aditiv u hrani za životinje. No, da bi se rafinirao i nadogradio obrok od insekata, izdvajaju se najvrijedniji sastojci, odnosno proteini i lipidi. Posebno se čisti protein insekata cijeni kao visoko prehrambeni sastojak, koji se koristi u proteinskim pločicama, proteinskim prahovima i kao aditiv u mnogim prehrambenim proizvodima kao što su peciva, čips, krekeri itd.
 
Koristite ekstraktore ultrazvučnog sonde za proizvodnju visokokvalitetnih proteina insekata!
 
Ultrazvučna ekstrakcija visoko kvalitetnih proteina iz insekata:
Ultrazvučna ekstrakcija se koristi za proizvodnju proteinskih prahova, hidrolizata, i izolata proteina iz mnogih insekata, uključujući muhe, crve, bube, cvrčake i larve. Izdvajanjem visokokvalitetnih proteina iz insekata, ultrasonication proizvodi funkcionalne sastojke hrane sa superiornim nutricionim profilom.

Prednosti ultrazvučnog ekstrakcije proteina iz insekata

Ultrazvučni ekstraktor za ekstrakciju proteina insekataUltrasonication se široko primjenjuje za izdvajanje i liječenje proteina iz raznih izvora kao što su botanici (npr. iz soje, riže, repice, suncokreta, bundeve i dr.), mljekarija (npr. koncentrat bjelančevina sirutine (WPC), bjelančevina sirutine, Retentati mlečnih proteina, kalcijevi caseinati), alge (npr. morske alge), plodovi mora (npr. riblji ostvareni proizvodi i otpad od plodova mora), i insekti (npr. crvi, ličinke, muhe, crvi, bube, cvrčci, žohari itd.).
Kao visoko efikasna, i zelena tehnologija ekstrakcije, ultrazvučna ekstrakcija proteina insekata je nađena na svom mjestu u proizvodnji proteina insekata u prahu, hidrolizata i izolata. Zbog velike pouzdanosti procesa, ponovenosti i linearnog up-skaliranja, ultrasonication se koristi za izdvajanje proteina iz insekata, za modificiranje proteinskih struktura i za poboljšanje fiziohemijskih svojstava proteina.
Na primjer, Mintha et al. (2020) je primijenila ultrazvučno izvlačenje na ličinke mušica crnih vojnika (H. illucens). Oni izvještavaju da je sonication poboljšao strukturu proteina, izmijenjene proteinske funkcionalnosti, i time koristan za proizvodnju H. illucens proteina / hidrolize. Posebno, zeta potencijal, disperzičnost, i tiol vrijednosti su povećani ultrasonication. Nadalje, turbiditet i veličina čestica proteina su se nakon sonikacije snizili. Ultrasonication je značajno povećao lakoću (L*) izolata proteina za x 7,46% u odnosu na ne-soniciranu kontrolu.

U ovom videu vam pokazujemo 2 kilovat ultrazvučnog sistema za inline rad u ormaru za čistu. Hielscher snabdijeva ultrazvučnu opremu gotovo svim industrijama, kao što su hemijska industrija, farmaceutska, kozmetika, petrokemijski procesi kao i za procese ekstrakcije na bazi otapila. Ovaj ormarić od nehranjivog čelika je dizajniran za rad u opasnim područjima. U tu svrhu, zatvoreni ormar može biti prečišćen od strane kupca sa dušikom ili svježim zrakom kako bi se spriječio ulazak zapaljivih plinova ili para u ormar.

2x 1000 Watts Ultrasonicators in Purgeable Cabinet for Installation in Hazardous Areas

Video sličica

Industrijski ultrazvučni ekstraktor za izolaciju proteina insekata

Ultrazvučni sistem ekstrakcije za proizvodnju visokokvalitetnih proteina insekata

High-Performance Ultrasonicators for Insect Protein Processing

Ultrazvučna ekstrakcija i homogenizacije je pouzdana tehnologija obrade, koja olakšava i ubrzava proizvodnju visokokvalitetnih proteina insekata. Hielscher Ultrasonics portfolio pokriva cijeli raspon od kompaktnih laboratorijskih ultrasonicatora do industrijskih sistema ekstrakcije. Time, mi u Hielscheru vam možemo ponuditi najpo odgovarajući ultrasonikator za vaš predviđeni procesni kapacitet. Naše iskusno osoblje će vam pomoći od testova izvodljivosti i optimizacije procesa do instalacije vašeg ultrazvučnog sistema na završnom nivou proizvodnje.
Mali otisak stopala naših ultrazvučnih ekstraktora kao i njihova svestranost u mogućnostima instalacije čine da se uklapaju čak i u postrojenja za preradu proteina insekta malog prostora. Ultrazvučni procesori se u cijelom svijetu ugrade u pogone za proizvodnju hrane i nutricionih dodataka kao i za proizvodnju hrane za kućne ljubimce i stoku. Nadalje, ultrazvučni visoko smiksači su idealni za formuliranje proteina insekata u proizvode ljudske hrane kao i u hranu za kućne ljubimce za prateće životinje i stoku za životinje na farmi.

Hielscher Ultrazvuk – Sofisticirana oprema za izvlačenje

Hielscher Ultrasonics portfolio proizvoda pokriva cijeli raspon ultrazvučnih ekstraktora visokih performansi od malih do velikih razmjera. Dodatni dodaci omogućavaju lakši sklop najposlanije konfiguracije ultrazvučnih uređaja za vaš proces proteina insekata. Optimalno ultrazvučno podešavanje zavisi od zavidnog kapaciteta, volumena, sirovine, batch ili inline procesa i timeline.

Ultrazvučna ekstrakcija insekata – Batch i inline obradu

Hielscher ultrasonicators se može koristiti za ser i kontinuiranu obradu protoka. Ultrazvučna obrada grupa idealna je za testiranje procesa, optimiziranje i mali do srednji nivo proizvodnje. Za proizvodnju velikih volumena proteina insekata, inline obrada bi mogla biti po prednosti. Dok je za batching potrebna samo vrlo jednostavna namještaljka, to je više vremena- i radne intenzivne. Kontinuirani proces inline miješanja zahtijeva sofisticirano podešavanje – koja se sastoji u pumpi, crijevima ili cijevima i spremnicima -, ali je efikasnija, brža i zahtijeva znatno manje radne snage. Hielscher Ultrasonics ima najposkladnije podešavanje ekstrakcije za vaš volumen vađenja i procesne ciljeve.

Ultrazvučni ekstraktori za svaki proizvod kapacitet

UIP4000hdT protok ćelija za automatsko sonicaciju na industrijskoj skaliHielscher Ultrasonics proizvodni raspon pokriva puni spektar ultrazvučnih procesora od kompaktnih lab ultrasonicatora preko bench-top i pilot sistema do potpuno industrijskih ultrazvučnih procesora sa kapacitetom za obradu tereta kamiona na sat. Cijeli proizvodni raspon nam omogućava da vam ponudimo najpo odgovaraći ultrazvučni ekstraktor za vašu sirovinu, kapacitet procesa i ciljeve proizvodnje.
Ultrazvučni benchtop sistemi su idealni za testove izvodljivosti i optimizaciju procesa. Linearna skala-up na osnovu utvrđenih parametara procesa čini vrlo lako povećati kapacitete obrade od manjih lotova do potpuno komercijalne proizvodnje. Up-skaliranje se može učiniti ili instaliranjem snažnije ultrazvučne ekstraktorske jedinice ili grupiranjem nekoliko ultrazvučnikatora paralelno. Sa UIP16000, Hielscher nudi najmoćniji ultrazvučni ekstraktor širom svijeta.

Precizno kontrolisane amplitude za optimum rezultate

Svi Hielscherovi ultrasonicatori su precizno kontrolisani i time pouzdani konji u proizvodnji. Amplituda je jedan od presudnih parametara procesa koji utiču na efikasnost i učinkovitost ultrazvučnog ekstrakcije hranjivih tvari iz insekata.
Hielscher ultrasonicators se može daljinski kontrolirati putem kontrole preglednika. Parametri sonikacije se mogu pratiti i podesiti upravo na procesne zahtjeve.Materijal insekata kao što su larve i muve zahtevaju blažu sonikaciju i niže amplitude, dok cvrčci i insekti sa debelom egzoskeletnom ljuskom zahtevaju sonicaciju na višim amplitudama da bi se oslobodile ciljane hranljive materije. Svi Hielscher Ultrasonics procesori omogućavaju precizno podešavanje amplitude. Sonotrodes i booster rogovi su dodaci koji omogućavaju modificiranje amplitude u još širem rasponu. Hielscher industrijski ultrazvučni procesori mogu isporučiti vrlo visoke amplitude i isporučiti potreban ultrazvučni intenzitet za zahtjevne primjene. Amplitude do 200 μm mogu se lako kontinuirano pokretati u 24/7 radu.
Precizne postavke amplitude i stalno praćenje parametara ultrazvučnog procesa putem pametnog softvera daju vam mogućnost da tretirate vaše seje sa najucinkovitim ultrazvučnim uslovima. Optimalno sonication za najbolje rezultate izvlačenja!
Robusnost Hielscher ultrazvučne opreme omogućava 24/7 rad u teškim uslovima i u zahtevnim okruženjima. Ovo čini Hielscher ultrazvučnu opremu pouzdanim radnim alatom koji ispunjava vaše zahteve za ekstrakciju.

Jednostavan i bezrizičan proces testiranja

Ultrazvučni procesi mogu biti potpuno linearno skalirani. To znači da se svaki rezultat koji ste postigli pomoću laboratorijskog ili bench-top ultrazvučnika, može skalirati na potpuno isti izlaz koristeći potpuno iste parametre procesa. To čini ultrazvučnost idealnom za testiranje izvodljivosti bez rizika, optimizaciju procesa i naknadnu implementaciju u komercijalnu proizvodnju. Kontaktirajte nas da saznate kako sonikacija može povećati proizvodnju proteina insekata!

Najkvalitetnije – Dizajniran i proizveden u Njemačkoj

Kao porodično i porodično preduzeće, Hielscher daje prioritet najvišim standardima kvaliteta za svoje ultrazvučne procesore. Svi ultrazvučnici su dizajnirani, proizvedeni i temeljno testirani u našem sjedištu u Teltowu blizu Berlina, Njemačka. Robusnost i pouzdanost Hielscher ultrazvučne opreme čine ga radnim konjem u vašoj proizvodnji. 24/7 rad pod punim opterećenjem i u zahtjevnim okruženjima prirodna je karakteristika Hielscher miksera visokih performansi.

Tabela u nastavku daje naznaku približan kapacitet prerade naših ultrasonicators:

Batch Volumen protok Preporučeni uređaji
1 do 500 ml 10 do 200 ml/min UP100H
10 do 2000 ml 20 do 400 ml/min Uf200 ः t, UP400St
0.1 do 20 l 00,2 do 4 l/min UIP2000hdT
10 do 100 l 2 do 10 l/min UIP4000hdT
15 do 150 l 3 do 15 l/min UIP6000hdT
N / A. 10 do 100 l/min UIP16000
N / A. veći klaster UIP16000
Ultrazvučni sistem od 4kW za industrijsku ekstrakciju proteina od insekata, kao i za preradu hitina/hitozana

UIP4000hdT ultrazvučni sistem ekstrakcije za izolaciju visokokvalitetnih proteina od insekata.

 



Činjenice vredi znati

Entomofagija

Upotreba insekata kao nutricionog spoja za hranjenje ljudi i životinja naziva se "entomofagija". Oxford Online Dictionary definiše pojam "entomofagija" kao "praksa jedenja insekata, posebno od strane ljudi." Budući da su insekti održiv izvor bogat visokokvalitetnim proteinima i lipidima, insekti kao što su cvrčci, muhe, larve, crvi, crvi, bube i žohari uzgajaju se i obrađuju za proizvodnju proteina i masnih kiselina za prehranu ljudi i životinja.

Insekti kao izvor nutricionnih proteina

Insekti su poznati kao izvor visoko kvalitetnih proteina, koji sadrže mnoge esencijalnih aminokiselina. Stoga se brojni cvrčci, skakavci, kukci, moljci, crvi, muhe i razni drugi insekti gaje kako bi se proizveli proteini za ljudsku i životinjsku potrošnju. Osim što su bogati proteinima, insekti su i značajan izvor masnih kiselina, minerala (npr. željeza, cinka, kalija, selena i bakra) i vitamina (uglavnom B vitamina). Na primer, insekti kao što su cvrčci i crvi imaju visoku koncentraciju kompletnog proteina, vitamina B12, riboflavina i vitamina A.
Za suprotnosti sa proizvodima životinjskog izvedenog, insekti sadrže i dijetalna vlakna. Vlakna insekata se uglavnom nađu u obliku chitina, bitnog gradivnog bloka egzoskeleta.
Obično odgajeni insekti za proizvodnju proteina su sljedeće vrste:

  • Jelo crv (Tenebrio Molitor L.) je ličinka oblik vrste tamnih buba (Coleoptera). Optimalna temperatura inkubacije je 25 ̊C – 27 ̊C i njegov embrionski razvoj traje 4 – 6 dana. Ima dug period ličinki od oko pola godine sa optimalnom temperaturom i niskom vlagom se prekida. Sadržaj proteina ličinki Tenebrio Molitor i odrasle osobe su 46,44% odnosno 63,34%.
  • Kućni kriket (Acheta domesticus) je najčešće vrste kriket koji se koristi za ljudsku konzumaciju. Poznato je da je kriket jedan od najhranljivijih jestivih insekata. Cvrčci se mogu konzumirati suho pečeni, pečeni, duboko prženi, kuhani ili se koriste kao sastojak hrane. Za integraciju cvrčaka u funkcionalnu hranu, formulacije hrane ili recepte, koristi se jelo od kriket ili brašno. Jelo od kriket je prah suhih i finih samljetih cvrčaka. Cvrčci brzo sazrijevaju i obično se puno uzgajaju u roku od 3 -4 sedmice. Pojedinačna ženka može ležati od 1.200 do 1.500 jaja u 3-4 sedmice. Zbog brzog i jednostavnog uzgoja, cvrčci se uzgajaju za ljudsku prehranu kao i za životinjsku hranu. Cvrčci se obično ubijaju dubokim smrzavanjem, gdje ne osjećaju bol i sediraju sediraju prije neurološke smrti.
  • Crna muha vojnika (Hermetia illucens) je česta i rasprostranjena muha porodice Stratiomyidae. Muhe crnih vojnika su u širokoj obradi zbog njihovog izuzetnog visokog sadržaja proteina i niskih zahtjeva tokom faze uzgoja i uzgoja. Oni zahtijevajusvemalo resursa, što olakšava efikasno liječenje bio-otpad. Ličinke muha crnog vojnika (BSFL) sadrže do 43% proteina, 35% masnih kiselina, a bogate su kalcijem i drugim mikrohranjenim tvarima. Pošto ličinke imaju najveći sadržaj proteina, muhe crnih vojnika se gaje samo cca. 18 dana dok ne stignu do stadiona ličinki, a zatim se beru. Kompletan životni ciklus muhe crnog vojnika je samo 6 sedmica kratak.
    Pročitajte više o prednostima ultrazvučne ekstrakcije proteina iz larvi vojničke muhe!
    Ličinke crne muhe vojnike (Hermetia illucens) se takođe uspešno koriste kao izvor lipida, koji su kasnije nano-emulgira ultrasonication.
Heelscher Ultrasonics proizvodi visokokvalitetne Ultrasonične homogenizere za raspršavanje, emulsifikaciju i izvlačenje ćelija.

Visoko napajanje ultrasonični homogenizeri iz laboratorija u Pilot i Industrijski razmjera.

Književnost/reference


Ultrazvučni efekti visokih performansi! Hielscher asortiman proizvoda pokriva čitav spektar od kompaktnog laboratorijskog ultrazvučnika preko bench-top jedinica do potpuno industrijskih ultrazvučnih sistema.

Hielscher Ultrasonics proizvodi ultrazvučne homogenizatore visokih performansi od laboratorija u industrijske veličine.


Biće nam drago da razgovaramo o vašem procesu.

Stupimo u kontakt.