Hüceyrə lizisi üçün sonikasiya: hüceyrələrin parçalanması və ekstraksiya
Ultrasəslə hüceyrə lizisi müasir biotexnologiya laboratoriyalarında geniş tətbiq olunan nümunə hazırlama üsuludur. Onun əsas məqsədi zülallar, nuklein turşuları və ya orqanoidlər kimi hüceyrədaxili komponentləri azad etmək üçün hüceyrə membranlarını və ya bütöv hüceyrələri parçalamaqdır. Gündəlik laboratoriya işində bu, sonikasiyanın hüceyrələrin nəzarətli parçalanması və biomolekulların səmərəli ekstraksiyası üçün standart üsul olması deməkdir. Sonikatorların əsas üstünlüyü ultrasəs intensivliyi, impulsların verilməsi və temperaturun idarə olunması daxil olmaqla mühüm proses parametrlərini dəqiq tənzimləmək qabiliyyətindədir. Bu nəzarət tədqiqatçılara həssas biomolekullara istilik və ya mexaniki təsirdən yaranan zədələnməni minimuma endirməklə etibarlı lizis əldə etməyə imkan verir və nəticədə yumşaq, lakin yüksək səmərəli ekstraksiya prosesi təmin olunur.
Sonikatorlardan istifadə etməklə hüceyrə lizisi
Ultrasəslə hüceyrə lizisi hüceyrə membranlarını parçalamaq və hüceyrədaxili molekulları azad etmək üçün akustik kavitasiyadan istifadə edir. Hielscher Ultrasonics klassik zond tipli sonikatorla yanaşı, steril emal üçün çoxnümunəli sonikatorlar da təklif edir: çoxsaylı sınaq şüşələri və flakonlar üçün VialTweeter və standart mikroplitələr üçün 96 yuvalı plitə sonikatoru UIP400MTP.
Hielscher Ultrasonics nümunələrin hazırlanması və klinik analiz üçün güclü təmassız sonikatorlar təchiz edir. Çoxyuvalı plitə sonikatoru UIP400MTP, VialTweeter, CupHorn və axın sonikatoru GDmini2 nümunələri steril şəraitdə emal edir.
Ultrasəs homogenizatorları UP100H (100 watts) və UP400St (400 watts): hüceyrə lizisi və ekstraksiya üçün sonikasiya.
Hüceyrə lizisi və ekstraksiya üçün ultrasəs homogenizatorları
| Ultrasəs cihazının növü | Əsas tətbiq sahəsi | Nümunənin həcmi | Tipik istifadə halı | Üstünlüklər | Model nümunələri |
|---|---|---|---|---|---|
| Zond tipli sonikatorlar | Tək nümunənin sonikasiyası | 0,1 mL-dən ~1000 mL-ə qədər | Hüceyrə lizisi, zülal ekstraksiyası, DNA/RNA fraqmentasiyası | Enerjiyə dəqiq nəzarət; müxtəlif sonotrodlar; kiçik və orta ölçülü nümunələr üçün optimaldır | UP100H, UP200St, UP400St |
| VialTweeter / CupHorn | Çoxsaylı kip bağlanmış flakonların paralel emalı | 8–10 flakon (hər biri ~1–20 mL) | Çoxsaylı hüceyrə suspenziyalarının standartlaşdırılmış lizisi | Bərabər sonikasiya; çarpaz kontaminasiyanın qarşısını alır; təkrarlana bilən nəticələr | VialTweeter, CupHorn |
| 96 yuvalı plitə sonikatoru | Çoxyuvalı və mikrotitr plitələrinin sonikasiyası | Mikroplitə formatı | Yüksək nümunə emal məhsuldarlığı ilə skrininq, proteomika, hüceyrə analizləri | Yuvalarda eyni vaxtda və bərabər sonikasiya; çoxnümunəli iş prosesləri üçün idealdır | UIP400MTP |
| Axın hüceyrəli reaktorlar | Daha böyük həcmlər üçün fasiləsiz sonikasiya | >1 L, miqyası artırıla bilər | Sənaye miqyasında hüceyrələrin parçalanması, ekstrakt istehsalı | Fasiləsiz emal; miqyası artırıla bilər; prosesə tam nəzarət (amplituda, təzyiq, temperatur) | UIP1000hdT, UIP2000hdT + axın hüceyrəsi |
| Steril / dolayı sonikasiya sistemləri | Nümunələrin kontaminasiyasız emalı | Flakondan/sınaq şüşəsindən/mikroplitədən asılıdır | Həssas nümunələr, steril mühitlər, normativ tələblərin tətbiq olunduğu şərait | Zondla təmas yoxdur; qalıqların növbəti nümunəyə keçməsinin qarşısını alır; təmizləmə üçün minimal səy tələb edir | VialTweeter, CupHorn, UIP400MTP |
Hüceyrə lizisi üçün sonikasiyadan istifadənin üstünlükləri
Digər hüceyrə lizisi və ekstraksiya üsulları ilə müqayisədə ultrasəslə hüceyrə lizisinin bir sıra üstünlükləri var:
- Sürət: Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya hüceyrələri bir neçə saniyə ərzində parçalaya bilən sürətli üsuldur. Bu, homogenləşdirmə, dondurub əritmə və ya muncuqlu dəyirmanda üyütmə kimi digər üsullardan xeyli sürətlidir.
- Səmərəlilik: Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya kiçik, böyük və ya çoxsaylı nümunələri eyni vaxtda emal etmək üçün istifadə oluna bilər; bu da onu kiçik nümunələrin ayrı-ayrılıqda emalını tələb edən digər üsullardan daha səmərəli edir.
- Kimyəvi maddələrsiz: Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya sərt təsirli kimyəvi maddələrin və ya fermentlərin istifadəsini tələb etməyən qeyri-invaziv üsuldur. Bu, onu hüceyrə möhtəviyyatının bütövlüyünün qorunmalı olduğu tətbiqlər üçün ideal edir. Nümunələrin arzuolunmaz kontaminasiyasının qarşısı alına bilər.
- Yüksək çıxım: Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya DNA, RNA və zülallar daxil olmaqla hüceyrə möhtəviyyatını yüksək çıxımla ekstraksiya edə bilər. Bunun səbəbi yüksək tezlikli səs dalğalarının hüceyrə divarlarını parçalayaraq möhtəviyyatı ətrafdakı məhlula azad etməsidir.
- Temperaturun idarə olunması: Təkmil ultrasəs cihazları nümunənin temperaturunu dəqiq idarə etməyə imkan verir. Hielscher rəqəmsal sonikatorları qoşula bilən temperatur sensoru və temperaturun monitorinqi üçün proqram təminatı ilə təchiz olunur.
- Təkrarlana bilmə: Ultrasəslə hüceyrə lizisi protokolları asanlıqla təkrarlana və hətta miqyasın sadə xətti artırılması yolu ilə müxtəlif daha böyük və ya daha kiçik nümunə həcmlərinə uyğunlaşdırıla bilər.
- Çoxfunksiyalılıq: Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya bakteriyalar, mayalar, göbələklər, bitki və məməli hüceyrələri daxil olmaqla geniş çeşidli hüceyrə növlərinin ekstraksiyası üçün istifadə oluna bilər. O, həmçinin zülallar, DNA, RNA və lipidlər daxil olmaqla müxtəlif növ molekulların ekstraksiyası üçün də istifadə oluna bilər.
- Çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda hazırlanması: Hielscher Ultrasonics çoxsaylı nümunələri tam eyni proses şəraitində rahatlıqla emal etmək üçün bir neçə həll təklif edir. Bu, nümunələrin hazırlanmasında lizis və ekstraksiya mərhələsini yüksək səmərəli edir və vaxta qənaət etməyə imkan verir.
- İstifadə rahatlığı: Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya avadanlığından istifadə asandır və minimal təlim tələb edir. Avadanlıq həm də qənaətlidir, çünki birdəfəlik sərmayə tələb edir və birdəfəlik sərf materiallarını yenidən almağa ehtiyac yoxdur. Bu, onu geniş tədqiqatçı və laboratoriya dairəsi üçün cəlbedici edir.
Ümumilikdə, ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya hüceyrə möhtəviyyatının ekstraksiyası üçün sürətli, səmərəli, dəqiq idarə oluna bilən və çoxfunksiyalı üsuldur. Alternativ üsullarla müqayisədə üstünlükləri onu geniş tədqiqat və sənaye tətbiqləri üçün cəlbedici seçim edir.
Ultrasəslə hüceyrə lizisinin iş prinsipi
Ultrasəslə hüceyrə lizisi və ekstraksiya hüceyrələri parçalamaq və onların möhtəviyyatını ekstraksiya etmək üçün yüksək tezlikli səs dalğalarından istifadə edir. Səs dalğaları ətrafdakı mayedə təzyiq dəyişiklikləri yaradır və kavitasiya adlanan prosesdə kiçik qabarcıqların əmələ gəlməsinə və çökməsinə səbəb olur. Bu qabarcıqlar hüceyrələri parçalaya və onların möhtəviyyatını ətrafdakı məhlula azad edə bilən yerli, yüksək intensivlikli mexaniki qüvvələr yaradır.
Ultrasəs cihazından istifadə etməklə hüceyrə lizisi adətən aşağıdakı addımları əhatə edir:
- Nümunə maye bufer olan sınaq şüşəsinə və ya qaba yerləşdirilir.
- Ultrasəs zondu nümunəyə daxil edilir və təxminən 20–30 kHz tezlikli səs dalğaları tətbiq olunur.
- Ultrasəs dalğaları ətrafdakı mayedə rəqslər və kavitasiya yaradır; nəticədə hüceyrələri parçalayan və onların möhtəviyyatını azad edən yerli qüvvələr əmələ gəlir.
- Hüceyrə qalıqlarını uzaqlaşdırmaq üçün nümunə sentrifuqalanır və ya süzülür, ekstraksiya edilmiş möhtəviyyat isə sonrakı analiz üçün toplanır.
Geniş yayılmış lizis üsullarının çatışmazlıqları
Laboratoriyalarda işləyərkən ənənəvi mexaniki və ya kimyəvi lizis protokolları ilə hüceyrə lizisinin çətinlikləri ilə artıq qarşılaşmış ola bilərsiniz.
- Mexaniki lizis: Həvəng və dəstə ilə əzmə və ya French press, muncuqlu dəyirman yaxud rotor-stator sistemi ilə homogenləşdirmə kimi mexaniki lizis üsullarında çox vaxt dəqiq nəzarət və tənzimləmə imkanları çatışmır. Bu o deməkdir ki, üyütmə və əzmə nümunəni zədələyə və zülalları denaturasiya edə bilən istilik və kəsilmə qüvvələrini tez bir zamanda yarada bilər. Bu üsullar həmçinin çox vaxt apara və böyük miqdarda başlanğıc material tələb edə bilər.
- Kimyəvi lizis: Detergent əsaslı lizis kimi kimyəvi lizis üsulları lipid ikiqat təbəqəsini parçalamaq və zülalları denaturasiya etməklə nümunəni zədələyə bilər. Onlar həmçinin bir neçə mərhələ tələb edə və sonrakı tətbiqlərə mane olan qalıq çirkləndiricilər buraxa bilər. Detergentin optimal dozasını tapmaq əlavə çətinlikdir.
- Dondurub əritmə dövrləri: Dondurub əritmə dövrləri hüceyrə membranlarının cırılmasına səbəb ola bilər, lakin təkrarlanan dövrlər zülalların denaturasiyasına və parçalanmasına da səbəb ola bilər. Bu üsul həmçinin bir neçə dövr tələb edə bilər ki, bu da çox vaxt apara və çox vaxt daha aşağı çıxımla nəticələnə bilər.
- Fermentativ lizis: Fermentativ lizis üsulları müəyyən hüceyrə növlərinə spesifik ola və bir neçə mərhələ tələb edə bilər; buna görə də onlar çox vaxt aparır. Onlar həmçinin tullantı yaradır və nümunənin parçalanmasının qarşısını almaq üçün diqqətli optimallaşdırma tələb edir. Fermentativ lizis dəstləri çox vaxt bahalıdır. Hazırkı fermentativ lizis prosedurunuz qənaətbəxş nəticələr vermirsə, hüceyrələrin parçalanmasını gücləndirmək üçün sonikasiya sinergik üsul kimi tətbiq oluna bilər.
Ənənəvi mexaniki və kimyəvi hüceyrə lizisi üsullarından fərqli olaraq, sonikasiya hüceyrələrin parçalanması üçün sonikasiya parametrlərinə tam nəzarət etməyə imkan verən çox səmərəli və etibarlı vasitədir. Bu, materialların azad edilməsində yüksək seçiciliyi və məhsulun təmizliyini təmin edir. [cf. Balasundaram et al., 2009]
O, bütün hüceyrə növləri üçün uyğundur və kiçik və böyük miqyasda asanlıqla tətbiq olunur – həmişə nəzarət olunan şəraitdə. Ultrasəs cihazlarını təmizləmək asandır. Ultrasəs homogenizatorunda həmişə yerində təmizləmə (CIP) və yerində sterilizasiya (SIP) funksiyası olur. Sonotrod bütöv titan rəqs gövdəsindən ibarətdir; onu silmək və ya su yaxud həlledici ilə yumaq olar (iş mühitindən asılı olaraq). Ultrasəs cihazları möhkəm olduğundan onlara texniki qulluq ehtiyacı demək olar ki, nəzərə alınmayacaq qədər azdır.
Ultrasəslə lizis və hüceyrələrin parçalanması
Ümumiyyətlə, laboratoriyada nümunələrin lizisi 15 saniyə ilə 2 dəqiqə arasında vaxt aparır. Sonikasiyanın intensivliyini amplitudanın və sonikasiya müddətinin tənzimlənməsi, eləcə də düzgün avadanlığın seçilməsi ilə çox asanlıqla dəyişmək mümkün olduğundan, hüceyrənin quruluşundan və lizisin məqsədindən asılı olaraq hüceyrə membranlarını çox yumşaq və ya çox kəskin şəkildə parçalamaq mümkündür (məsələn, DNA ekstraksiyası daha yumşaq sonikasiya tələb edir, bakteriyalardan zülalların tam ekstraksiyası isə daha intensiv ultrasəs emalı tələb edir). Proses zamanı temperatur inteqrasiya edilmiş temperatur sensoru ilə izlənə və soyutma (buz vannası və ya soyutma köynəkli axın hüceyrələri) yaxud impuls rejimində sonikasiya vasitəsilə asanlıqla idarə oluna bilər. İmpuls rejimində sonikasiya zamanı 1–15 saniyə davam edən qısa sonikasiya impuls dövrləri daha uzun fasilələr ərzində istiliyin yayılmasına və soyumaya imkan verir.
Ultrasəslə həyata keçirilən bütün proseslər tam təkrarlana bilir və onların miqyası xətti şəkildə artırıla bilər.
VialTweeter çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda, bərabər və sürətli steril hazırlanması üçün ultrasəs homogenizatorudur.
- Hüceyrə suspenziyasının hazırlanması: Hüceyrə çöküntüləri homogenləşdirmə yolu ilə bufer məhlulunda tam suspenziya halına gətirilməlidir (sonrakı analizlə, məsələn, müəyyən xromatoqrafiya üsulu ilə uyğun olan bufer məhlulunu seçin). Lazım gələrsə, lizozimlər və/ və ya digər əlavələr əlavə edin (onlar ayırma/ təmizləmə vasitələri ilə də uyğun olmalıdır). Tam suspenziya əldə edilənədək məhlulu zəif sonikasiya altında ehtiyatla qarışdırın/ homogenləşdirin.
Lizozimlərin sonikasiya ilə birləşdirilməsinin sinergik təsirləri haqqında daha ətraflı oxuyun! - Ultrasəslə lizis: Nümunəni buz vannasına yerləşdirin. Hüceyrələri parçalamaq üçün suspenziyaya 60–90 saniyəlik impulslarla sonikasiya tətbiq edin (sonikatorunuzun impuls rejimindən istifadə etməklə).
- Ayırma: Lizatı sentrifuqalayın (məsələn, 10 dəq. ərzində 10.000 x g-də; 4degC-də). Supernatantı hüceyrə çöküntüsündən ehtiyatla ayırın. Supernatant ümumi hüceyrə lizatıdır. Supernatantı süzdükdən sonra həll olan hüceyrə zülalını ehtiva edən durulaşdırılmış maye əldə edirsiniz.
Ultrasəs cihazlarının biologiya və biotexnologiyada ən geniş yayılmış tətbiqləri bunlardır:
- Hüceyrə ekstraktının hazırlanması
- Mayaların, bakteriyaların, bitki hüceyrələrinin, yumşaq və ya sərt hüceyrə toxumasının, nuklein materialının parçalanması
- Zülal ekstraksiyası
- Fermentlərin hazırlanması və təcrid edilməsi
- Antigenlərin istehsalı
- DNA ekstraksiyası və/ və ya məqsədyönlü fraqmentasiya
- Liposomların hazırlanması
Zond tipli ultrasəs cihazı ilə hüceyrələrin parçalanması səmərəli nümunə hazırlama üsuludur.
Ultrasəsin çoxsaylı tətbiqləri biotexnologiya, biomühəndislik, mikrobiologiya, molekulyar biologiya, biokimya, immunologiya, bakteriologiya, virusologiya, proteomika, genetika, fiziologiya, hüceyrə biologiyası, hematologiya və botanika sahələrini əhatə edir.
Lizis: hüceyrə strukturlarının parçalanması
Hüceyrələr fosfolipid ikiqat təbəqəsindən ibarət olan (həmçinin zülal-lipid ikiqat təbəqəsi; daxilində zülal molekulları yerləşən hidrofob lipidlərdən və hidrofil fosfor molekullarından əmələ gəlir) və hüceyrənin daxili mühiti (sitoplazma) ilə hüceyrəxarici mühit arasında maneə yaradan yarımkeçirici plazma membranı ilə qorunur. Bitki hüceyrələri və prokariot hüceyrələr hüceyrə divarı ilə əhatə olunur. Çoxqatlı qalın sellüloza hüceyrə divarına görə bitki hüceyrələrini lizisə uğratmaq heyvan hüceyrələrinə nisbətən daha çətindir. Orqanoidlər, nüvə və mitoxondri kimi hüceyrədaxili strukturlar sitoskelet tərəfindən sabitləşdirilir.
Hüceyrələrin lizisində məqsəd orqanoidləri, zülalları, DNA-nı, mRNA-nı və ya digər biomolekulları ekstraksiya etmək və ayırmaqdır.
Ənənəvi hüceyrə lizisi üsulları və onların çatışmazlıqları
Hüceyrələri lizisə uğratmaq üçün mexaniki və kimyəvi üsullara bölünə bilən bir neçə üsul mövcuddur; bunlara detergentlərin və ya həlledicilərin istifadəsi, yüksək təzyiqin tətbiqi, muncuqlu dəyirmandan və ya French press-dən istifadə daxildir. Bu üsulların ən problemli çatışmazlığı proses parametrlərinə və bununla da təsirə nəzarət etməyin və onları tənzimləməyin çətinliyidir.
Aşağıdakı cədvəl geniş yayılmış lizis üsullarının əsas çatışmazlıqlarını göstərir:
Cədvəl: ənənəvi hüceyrə lizisi üsullarının ciddi çatışmazlıqları var
Lizis proseduru
Lizis həssas prosesdir. Lizis zamanı hüceyrə membranının qoruyucu funksiyası məhv edilir, lakin ekstraksiya edilmiş zülalların qeyri-fizioloji mühit (pH qiymətindən kənaraçıxma) səbəbindən inaktivasiyasının, denaturasiyasının və parçalanmasının qarşısı alınmalıdır. Buna görə lizis ümumiyyətlə bufer məhlulunda aparılır. Çətinliklərin çoxu bütün hüceyrədaxili materialın məqsədyönlü olmayan azad edilməsinə və/ və ya hədəf məhsulun denaturasiyasına səbəb olan nəzarətsiz hüceyrə parçalanmasından yaranır.
Sonikasiya və hüceyrə lizisi haqqında tez-tez verilən suallar
- Sonikasiya ilə hüceyrələri lizisə uğratmaq olarmı? Bəli, sonikasiya kavitasiya yaradan yüksək tezlikli ultrasəs dalğalarından istifadə etməklə hüceyrələri effektiv şəkildə lizisə uğradır; kavitasiya hüceyrə suspenziyasında kiçik buxar qabarcıqlarının əmələ gəlməsi və şiddətlə çökməsi hadisəsidir. Yaranan mexaniki qüvvələr hüceyrə membranlarını parçalayır və hüceyrədaxili komponentlərin mayeyə azad edilməsini asanlaşdırır.
- Hüceyrə lizisi üçün sonikatordan necə istifadə olunur? Hüceyrə lizisi üçün sonikatordan istifadə sonikator zondunun hüceyrə suspenziyasına batırılmasını və amplituda, impuls müddəti kimi parametrlərin tənzimlənməsini əhatə edir. Zülalların denaturasiyasını və fermentlərin inaktivasiyasını minimuma endirməklə hüceyrələrin parçalanmasını optimallaşdırmaq üçün proses yaxından izlənməlidir.
- Hüceyrə lizisi üçün sonikasiyanın prinsipi nədir? Sonikasiya akustik kavitasiya prinsipi əsasında işləyir. Ultrasəs enerjisi maye mühitə ötürülür və mikroqabarcıqların əmələ gəlməsinə və içəriyə doğru çökməsinə səbəb olan sürətli təzyiq dəyişmələri yaradır. Bu çökmələr intensiv kəsilmə qüvvələri və yerli yüksək temperaturlar yaradaraq hüceyrə strukturlarını parçalayır və lizatın homogenliyini artırır.
- Hüceyrə lizisi üçün sonikasiya nə qədər vaxt aparır? Hüceyrə lizisi üçün sonikasiyanın müddəti hüceyrə növü, hüceyrə sıxlığı, sonikatorun gücü və istifadə olunan konkret protokol kimi amillərdən asılı olaraq əhəmiyyətli dərəcədə dəyişə bilər. Tipik prosedurlar bir neçə saniyədən bir neçə dəqiqəyə qədər davam edə bilər və istilik yaranmasını idarə etmək, hüceyrələrin bərabər parçalanmasını təmin etmək üçün çox vaxt dövrlərlə aparılır.
- Zülal ekstraksiyasında sonikasiyanın məqsədi nədir? Zülal ekstraksiyasında sonikasiya hüceyrə membranlarını səmərəli şəkildə cırmağa və zülalları həll olan hala gətirməyə xidmət edir. Bu üsul hüceyrədaxili bölmələrdən zülalların azad edilməsi üçün xüsusilə faydalıdır və buna görə zülalların təmizlənəcəyi və ya analiz ediləcəyi lizatların hazırlanması üçün vacibdir.
- Ekstraksiya üçün sonikasiyadan niyə istifadə olunur? Sonikasiya sürətli təsiri və enerjini məqsədyönlü tətbiq etmək qabiliyyəti sayəsində ekstraksiya üçün üstün tutulur; o, sərt təsirli kimyəvi emaldan istifadə etmədən bioaktiv molekulları azad etmək üçün hüceyrə strukturlarını parçalayır və bununla ekstraksiya edilmiş birləşmələrin funksional bütövlüyünü qoruyur.
- Sonikasiya zülal-zülal qarşılıqlı təsirlərini pozurmu? Sonikasiya hüceyrə membranlarını effektiv şəkildə parçalaya bilsə də, zülal-zülal qarşılıqlı təsirlərini də poza bilər. Pozulmanın dərəcəsi sonikasiyanın intensivliyindən və təsir müddətindən asılıdır və zülal komplekslərinin denaturasiyasına və ya dissosiasiyasına səbəb ola bilər; bu da sonrakı analitik və ya funksional tədqiqatlara təsir göstərə bilər.
- E. coli-ni lizisə uğratmaq üçün sonikasiyadan istifadə etmək olarmı? Hielscher sonikatorları möhkəm hüceyrə divarları olan E. coli kimi bakteriya hüceyrələrinin lizisi üçün xüsusilə effektivdir. Bu texnika hüceyrə divarını və membranını kəsilmə təsiri ilə parçalamaq üçün fiziki üsul təmin edir və buna görə molekulyar biologiya və biokimya laboratoriyalarında bakteriya lizatlarının hazırlanması üçün üstün tutulan üsuldur.
- Sonikasiya mərhələsindən sonra hansı proseslər aparılır?
Ultrasəslə lizisdən sonrakı mərhələlərə adətən lizatın fraksiyalaşdırılması, orqanoidlərin məqsədyönlü təcrid edilməsi və əlavə zülal ekstraksiyası və ya təmizlənməsi daxildir.
Daha sonra emal olunmuş lizat ayrılır və yüksək ayırdetmə qabiliyyətli proteomika, transkriptomika və ya reseptorlara bağlanma tədqiqatları kimi analitik və ya funksional tətbiqlər üçün hazırlanır.
Ədəbiyyat/İstinadlar
- Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Advances in product release strategies and impact on bioprocess design. Trends in Biotechnology 27/8, 2009. pp. 477-485.
- Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonic Recovery and Modification of Food ingredients. In: Feng/ Barbosa-Cánovas/ Weiss (2011): Ultrasound Technologies for Food and Bioprocessing. New York: Springer, 2011. pp. 345-368.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.