Hüceyrə lizisi üçün sonikasiya: Hüceyrələrin pozulması və çıxarılması
Ultrasəs hüceyrə lizisi müasir biotexnoloji laboratoriyalarda geniş tətbiq olunan nümunə hazırlama üsuludur. Onun əsas məqsədi zülallar, nuklein turşuları və ya orqanellər kimi hüceyrədaxili komponentləri sərbəst buraxmaq üçün hüceyrə membranlarını və ya bütün hüceyrələri pozmaqdır. Gündəlik laboratoriya işində bu o deməkdir ki, sonikasiya nəzarət edilən hüceyrənin pozulması və biomolekulların səmərəli çıxarılması üçün standart üsuldur. Sonicatorların əsas üstünlüyü ultrasəs intensivliyi, pulsasiya və temperatur nəzarəti daxil olmaqla, kritik proses parametrlərini dəqiq modulyasiya etmək qabiliyyətindədir. Bu nəzarət tədqiqatçılara həssas biomolekulların termal və ya mexaniki zədələnməsini minimuma endirməklə yanaşı, etibarlı lizisi əldə etməyə imkan verir ki, bu da yumşaq, lakin yüksək effektiv ekstraksiya prosesi ilə nəticələnir.
Sonicatorlardan istifadə edərək hüceyrə lizisi
Ultrasonik hüceyrə lizisi hüceyrə membranlarını pozmaq və hüceyrədaxili molekulları buraxmaq üçün akustik kavitasiyadan istifadə edir. Hielscher Ultrasonics klassik prob tipli sonikatoru, həmçinin steril emal üçün çox nümunəli sonikatorları təklif edir: çoxlu borular və flakonlar üçün VialTweeter və standart mikroplitələr üçün 96 Quyu Plitəli Sonicator UIP400MTP.
Hielscher Ultrasonics, nümunə hazırlamaq və klinik analiz üçün güclü təmassız sonikatorları təmin edir. Çox quyulu boşqab sonikatoru UIP400MTP, VialTweeter, kubok Horn və GDmini2 axın sonikatoru nümunələri steril şəraitdə emal edin.
Ultrasonik homojenizatorlar UP100H (100 vat) və UP400St (400 vat): Hüceyrə lizisi və çıxarılması üçün sonikasiya.
Hüceyrə lizisi və çıxarılması üçün ultrasəs homojenizatorları
| Ultrasonik Cihaz Tipi | Tətbiq Fokus | Nümunə Həcmi | Tipik istifadə halı | Üstünlüklər | Nümunə Modellər |
|---|---|---|---|---|---|
| Zond tipli Sonikatorlar | Tək nümunəli sonication | 0.1 ml-dən ~1000 ml-ə qədər | Hüceyrə lizisi, zülalların çıxarılması, DNT/RNT fraqmentasiyası | Dəqiq enerji nəzarəti; müxtəlif sonotrodlar; kiçik və orta nümunələr üçün optimaldır | UP100H, UP200 St, UP400St |
| VialTweeter / CupHorn | Çoxlu möhürlənmiş flakonların paralel işlənməsi | 8-10 flakon (hər biri ~1-20 ml) | Çox hüceyrə süspansiyonlarının standart lizisi | Uniform sonikasiya; çarpaz çirklənmənin qarşısını alır; təkrarlana bilən nəticələr | VialTweeter, kubok |
| 96 quyu Plitəsi Sonicator | Çoxqulu və mikrotiter plitələrin sonikasiyası | Mikroplaka formatı | Yüksək məhsuldarlıqlı skrininq, proteomika, hüceyrə analizləri | Quyular arasında eyni vaxtda, hətta sonikasiya; çox nümunəli iş axınları üçün idealdır | UIP400MTP |
| axın hüceyrə reaktorları | Daha yüksək həcmlər üçün davamlı sonication | >1 L, miqyaslı | Sənaye miqyasında hüceyrənin pozulması, ekstrakt istehsalı | Davamlı emal; miqyaslı; tam prosesə nəzarət (amplituda, təzyiq, temperatur) | UIP1000hdT, UIP2000hdT + axın hüceyrəsi |
| Steril / Dolayı Sonikasiya Sistemləri | Çirklənmədən nümunə emal | Flakon/boru/mikroplatdan asılıdır | Həssas nümunələr, steril mühitlər, tənzimləyici parametrlər | Zondla əlaqə yoxdur; daşınmasının qarşısını alır; minimum təmizləmə səyi | VialTweeter, kubok, UIP400MTP |
Hüceyrə lizisi üçün sonikasiyadan istifadənin üstünlükləri
Digər hüceyrə lizisi və ekstraksiya üsulları ilə müqayisədə ultrasəs hüceyrə lizisi bir sıra üstünlüklərə malikdir:
- Sürət: Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması bir neçə saniyə ərzində açıq hüceyrələri qıra bilən sürətli bir üsuldur. Bu, homogenləşdirmə, dondurma-əritma və ya muncuq frezeleme kimi digər üsullardan çox daha sürətlidir.
- Effektivlik: Ultrasəs hüceyrə lizisi və çıxarılması kiçik, böyük və ya çoxlu nümunələri eyni anda müalicə etmək üçün istifadə edilə bilər ki, bu da kiçik nümunələrin fərdi işlənməsini tələb edən digər üsullardan daha səmərəli edir.
- Kimyəvi tərkibsiz: Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması sərt kimyəvi maddələrin və ya fermentlərin istifadəsini tələb etməyən qeyri-invaziv bir üsuldur. Bu, onu hüceyrə məzmununun bütövlüyünün qorunub saxlanılması lazım olan tətbiqlər üçün ideal hala gətirir. Nümunələrin arzuolunmaz çirklənməsinin qarşısını almaq olar.
- Yüksək məhsuldarlıq: Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması DNT, RNT və zülallar da daxil olmaqla yüksək məhsuldar hüceyrə məzmununu çıxara bilər. Bunun səbəbi yüksək tezlikli səs dalğalarının hüceyrə divarlarını qıraraq ətrafdakı məhlulun içindəkiləri buraxmasıdır.
- Temperatur nəzarəti: Mürəkkəb ultrasəs cihazları nümunənin temperaturunu dəqiq idarə etməyə imkan verir. Hielscher rəqəmsal sonikatorları qoşula bilən temperatur sensoru və temperatur monitorinqi proqramı ilə təchiz edilmişdir.
- Təkrarlana bilən: Ultrasəs hüceyrə lizisi üçün protokollar asanlıqla çoxaldıla bilər və hətta sadə xətti miqyaslı böyütmə ilə müxtəlif daha böyük və ya daha kiçik nümunə həcmlərinə uyğunlaşdırıla bilər.
- Çox yönlü: Ultrasonik hüceyrə lizisi və ekstraksiyası bakteriya, maya, göbələk, bitki və məməli hüceyrələri də daxil olmaqla geniş çeşidli hüceyrə növlərini çıxarmaq üçün istifadə edilə bilər. O, həmçinin zülallar, DNT, RNT və lipidlər də daxil olmaqla müxtəlif növ molekulları çıxarmaq üçün istifadə edilə bilər.
- Çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda hazırlanması: Hielscher Ultrasonics, eyni proses şəraitində çoxsaylı nümunələri rahat şəkildə emal etmək üçün bir neçə həll təklif edir. Bu, lizis və ekstraksiya nümunəsinin hazırlanması mərhələsini yüksək səmərəli və vaxta qənaət edir.
- İstifadəsi asan: Ultrasəs hüceyrə lizisi və ekstraksiya avadanlığından istifadə etmək asandır və minimal təlim tələb edir. Avadanlıq həm də qənaətcildir, çünki o, təkrar satınalma tələb olunmayan tək investisiyadır. Bu, onu geniş tədqiqatçılar və laboratoriyalar üçün cəlbedici edir.
Ümumiyyətlə, ultrasəs hüceyrə lizisi və çıxarılması hüceyrə məzmununu çıxarmaq üçün sürətli, səmərəli, dəqiq idarə olunan və çox yönlü bir üsuldur. Alternativ üsullarla müqayisədə üstünlükləri onu geniş tədqiqat və sənaye tətbiqləri üçün cəlbedici seçim edir.
Ultrasonik Hüceyrə Lizisinin İş Prinsipi
Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması hüceyrələri pozmaq və onların məzmununu çıxarmaq üçün yüksək tezlikli səs dalğalarından istifadə edir. Səs dalğaları ətrafdakı mayedə təzyiq dəyişiklikləri yaradır, kiçik baloncukların əmələ gəlməsinə və kavitasiya kimi tanınan prosesdə çökməsinə səbəb olur. Bu qabarcıqlar açıq hüceyrələri sındıra və onların məzmununu ətrafdakı məhlula buraxa bilən lokallaşdırılmış yüksək intensiv mexaniki qüvvələr yaradır.
Bir ultrasəs cihazı istifadə edərək hüceyrə lizisi adətən aşağıdakı addımları əhatə edir:
- Nümunə maye tamponu olan bir boruya və ya konteynerə yerləşdirilir.
- Nümunəyə ultrasəs zondu və təqribən yüksək tezlikli səs dalğaları daxil edilir. 20-30 kHz tətbiq olunur.
- Ultrasəs dalğaları ətrafdakı mayedə salınım və kavitasiyaya səbəb olur, açıq hüceyrələri qıran və onların məzmununu buraxan lokallaşdırılmış qüvvələr yaradır.
- Nümunə hər hansı hüceyrə zibilini çıxarmaq üçün sentrifuqalanır və ya süzülür və çıxarılan məzmun aşağı axın analizi üçün toplanır.
Ümumi Lizis Metodlarının Dezavantajları
Laboratoriyalarda işlədiyiniz müddətdə ənənəvi mexaniki və ya kimyəvi lizis protokollarından istifadə edərək hüceyrə lizisi problemini artıq yaşamış ola bilərsiniz.
- Mexanik parçalanma: Mexanik lizis üsulları, məsələn, havan və havan ilə üyütmə və ya fransız presi, muncuq dəyirmanı və ya rotor-stator sistemindən istifadə edərək homogenləşdirmə çox vaxt dəqiq nəzarət və tənzimləmə seçimlərindən məhrumdur. Bu o deməkdir ki, frezeləmə və üyütmə üsulu tez bir zamanda nümunəyə zərər verə bilən və zülalları denatürasiya edə bilən istilik və kəsmə qüvvələri yarada bilər. Onlar həmçinin vaxt apara bilər və böyük miqdarda başlanğıc material tələb edə bilər.
- Kimyəvi liziz: Kimyəvi lizis üsulları, məsələn, yuyucu vasitələrə əsaslanan lizis, lipid iki qatını pozaraq və zülalları denaturasiya edərək nümunəyə zərər verə bilər. Onlar həmçinin bir neçə addım tələb edə bilər və aşağı axın tətbiqlərinə mane olan qalıq çirkləndiriciləri tərk edə bilər. Yuyucu vasitənin optimal dozasını tapmaq əlavə problemdir.
- Dondurma-ərimə dövrləri: Dondurma-ərimə dövrləri hüceyrə membranlarının qırılmasına səbəb ola bilər, lakin təkrarlanan dövrlər də zülalın denatürasiyası və deqradasiyasına səbəb ola bilər. Bu üsul həm də bir neçə dövrə tələb edə bilər ki, bu da çox vaxt apara bilər və çox vaxt aşağı məhsuldarlıqla nəticələnir.
- Enzimatik lizis: Enzimatik lizis üsulları müəyyən hüceyrə növlərinə xas ola bilər və bir neçə addım tələb edir, bu da onları vaxt aparan edir. Onlar həmçinin tullantı yaradır və nümunənin deqradasiyasının qarşısını almaq üçün diqqətli optimallaşdırma tələb edir. Enzimatik lizis dəstləri çox vaxt bahadır. Mövcud enzimatik lizis prosedurunuz qeyri-kafi nəticələr verirsə, hüceyrənin pozulmasını gücləndirmək üçün sinerji metod kimi sonication tətbiq oluna bilər.
Adi mexaniki və kimyəvi hüceyrə lizis üsullarından fərqli olaraq, sonication sonikasiya parametrləri üzərində tam nəzarət etməyə imkan verən hüceyrə parçalanması üçün çox səmərəli və etibarlı bir vasitədir. Bu, materialların buraxılması və məhsulun saflığı üzrə yüksək seçiciliyi təmin edir. [müq. Balasundaram və başqaları, 2009]
Bütün hüceyrə tiplərinə uyğundur və kiçik və böyük miqyasda asanlıqla tətbiq olunur – həmişə nəzarət altında olan şəraitdə. Ultrasonikatorları təmizləmək asandır. Ultrasəs homojenizatoru həmişə təmiz yerində (CIP) və yerində sterilizasiya (SIP) funksiyasına malikdir. Sonotrode, suda və ya həlledicidə (iş mühitindən asılı olaraq) silinə və ya yuyula bilən böyük bir titan buynuzundan ibarətdir. Ultrasonicators saxlanılması demək olar ki, laqeyd onların möhkəmlik bağlıdır.
Ultrasonik Lizis və Hüceyrələrin Dağılması
Ümumiyyətlə, laboratoriyada nümunələrin parçalanması 15 saniyə ilə 2 dəqiqə arasında davam edəcək. Sonikasiyanın intensivliyini amplituda tənzimləmək üçün sonikasiya vaxtını təyin etmək və həmçinin düzgün avadanlıq seçmək çox asan olduğundan, hüceyrə quruluşundan və lizisin məqsədindən asılı olaraq hüceyrə membranlarını çox yumşaq və ya çox kəskin şəkildə pozmaq mümkündür ( məsələn, DNT hasilatı daha yumşaq sonikasiya tələb edir, bakteriyaların tam zülal çıxarılması daha intensiv ultrasəs müalicəsi tələb edir). Proses zamanı temperatur inteqrasiya edilmiş temperatur sensoru ilə izlənilə bilər və asanlıqla soyutma (buz vannası və ya soyutma gödəkçələri olan axın hüceyrələri) və ya impuls rejimində sonikasiya ilə idarə oluna bilər. Nəbz rejimində sonikasiya zamanı, 1-15 saniyəlik qısa sonikasiya partlayış dövrləri daha uzun fasiləli dövrlərdə istilik yayılmasına və soyumağa imkan verir.
Bütün ultrasəslə idarə olunan proseslər tamamilə təkrarlana bilir və xətti olaraq miqyaslana bilir.
VialTweeter çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda, vahid və sürətli steril hazırlanması üçün ultrasəs homogenizatorudur.
- Hüceyrə süspansiyonunun hazırlanması: Hüceyrə qranulları homogenləşdirilməklə tampon məhlulunda asılmalıdır (aşağıdakı analizlərə uyğun olan bufer məhlulunuzu seçin, məsələn, xüsusi xromatoqrafiya üsulu). Lazım gələrsə, lizozimlər və/və ya digər əlavələr əlavə edin (onlar həmçinin ayırma/təmizləmə vasitələri ilə uyğun olmalıdır). Tam suspenziya əldə olunana qədər məhlulu yumşaq sonikasiya altında yumşaq bir şəkildə qarışdırın/homogenləşdirin.
Lizozimlərin sonikasiya ilə birləşdirilmiş sinerjiləri haqqında daha çox oxuyun! - Ultrasonik lizis: Nümunəni buz banyosuna qoyun. Hüceyrələrin pozulması üçün süspansiyonu 60-90 saniyəlik partlayışlarla sonikasiya edin (sonikatorun nəbz rejimindən istifadə etməklə).
- Ayırma: Lizatı sentrifuqa edin (məsələn, 10 dəq. 10,000 xg; 4degC). Süpernatantı hüceyrə peletindən diqqətlə ayırın. Supernatant ümumi hüceyrə lizatıdır. Supernatantın süzülməsindən sonra, həll olunan hüceyrə zülalının aydınlaşdırılmış mayesini əldə edirsiniz.
Biologiya və biotexnologiyada ultrasəs cihazları üçün ən ümumi tətbiqlər bunlardır:
- Hüceyrə ekstraktının hazırlanması
- Mayanın, bakteriyaların, bitki hüceyrələrinin, yumşaq və ya sərt hüceyrə toxumasının, nuklein materialın pozulması
- Protein çıxarılması
- Fermentlərin hazırlanması və təcrid edilməsi
- Antigenlərin istehsalı
- DNT hasilatı və/və ya hədəflənmiş parçalanma
- lipozomların hazırlanması
Zond tipli ultrasəs cihazı ilə hüceyrənin pozulması effektiv nümunə hazırlama üsuludur.
Ultrasəsin müxtəlif tətbiqləri biotexnologiya, biomühəndislik, mikrobiologiya, molekulyar biologiya, biokimya, immunologiya, bakteriologiya, virusologiya, proteomika, genetika, fiziologiya, hüceyrə biologiyası, hematologiya və botanika sektorlarında geniş yayılmışdır.
Lizis: Hüceyrə strukturlarının qırılması
Hüceyrələr fosfo-lipid ikiqatlı (həmçinin zülal-lipid ikiqat; hidrofobik lipidlər və zülal molekulları ilə hidrofilik fosfor molekulları tərəfindən əmələ gəlir) ibarət olan və hüceyrənin daxili hissələri (sitoplazma) arasında maneə yaradan yarı keçirici plazma membranı ilə qorunur. hüceyrədənkənar mühit. Bitki hüceyrələri və prokaryotik hüceyrələr hüceyrə divarı ilə əhatə olunmuşdur. Selülozun çox qatlı qalın hüceyrə divarına görə bitki hüceyrələri heyvan hüceyrələrindən daha çətin parçalanır. Orqanoidlər, nüvə, mitoxondri kimi hüceyrənin daxili hissəsi sitoskeleton tərəfindən sabitləşir.
Hüceyrələri parçalayaraq, orqanelləri, zülalları, DNT, mRNT və ya digər biomolekulları çıxarmaq və ayırmaq məqsədi daşıyır.
Hüceyrə lizizinin ənənəvi üsulları və onların çatışmazlıqları
Hüceyrələri lizatlaşdırmaq üçün bir neçə üsul var, bunlar mexaniki və kimyəvi üsullara bölünə bilər, bunlara yuyucu və ya həlledicilərin istifadəsi, yüksək təzyiqin tətbiqi və ya muncuq dəyirmanı və ya fransız presinin istifadəsi daxildir. Bu metodların ən problemli dezavantajı proses parametrlərinin çətin idarə edilməsi və tənzimlənməsi və bununla da təsirdir.
Aşağıdakı cədvəl ümumi lizis üsullarının əsas çatışmazlıqlarını göstərir:
Cədvəl: Hüceyrə parçalanmasının ənənəvi üsullarının böyük çatışmazlıqları var
Lizis proseduru
Lizis həssas bir prosesdir. Lizis zamanı hüceyrə membranının mühafizəsi pozulur, lakin ekstraksiya edilmiş zülalların qeyri-fizioloji mühitlə (pH-dəyərindən kənarlaşma) inaktivasiyası, denatürasiyası və deqradasiyasının qarşısı alınmalıdır. Buna görə də, ümumiyyətlə lizis tampon məhlulunda aparılır. Əksər çətinliklər hüceyrədaxili materialın məqsədsiz şəkildə sərbəst buraxılması və/və ya hədəf məhsulun denatürasiyası ilə nəticələnən nəzarətsiz hüceyrə pozulmasından yaranır.
Sonikasiya və Hüceyrə Lizisi Haqqında Tez-tez verilən suallar
- Hüceyrələri sonikasiya ilə parçalaya bilərsinizmi? Bəli, sonikasiya hüceyrə süspansiyonunda kiçik buxar qabarcıqlarının əmələ gəldiyi və şiddətlə çökdüyü bir fenomen olan kavitasiyaya səbəb olan yüksək tezlikli ultrasəs dalğalarından istifadə edərək hüceyrələri effektiv şəkildə parçalayır. Yaranan mexaniki qüvvələr hüceyrə membranlarını pozur və hüceyrədaxili komponentlərin mayeyə buraxılmasını asanlaşdırır.
- Hüceyrə lizisi üçün sonikatordan necə istifadə etmək olar? Hüceyrə lizisi üçün sonikatordan istifadə, sonikator zondunu hüceyrə asqısına batırmaq və amplituda və nəbz müddəti kimi parametrləri tənzimləməkdən ibarətdir. Zülal denatürasiyasını və fermentin inaktivasiyasını minimuma endirərkən hüceyrənin pozulmasını optimallaşdırmaq üçün proses yaxından izlənilməlidir.
- Hüceyrə lizisi üçün sonikasiya prinsipi nədir? Sonication akustik kavitasiya prinsipi ilə işləyir. Ultrasəs enerjisi maye mühitə ötürülür, bu da mikrobaloncukların əmələ gəlməsinə və partlamasına səbəb olan sürətli təzyiq dalğalanmalarına səbəb olur. Bu partlayışlar güclü kəsmə qüvvələri və lokallaşdırılmış yüksək temperatur yaradır, hüceyrə strukturlarını pozur və lizat homojenliyini artırır.
- Hüceyrə lizisi sonication nə qədər çəkir? Hüceyrə lizisi üçün sonikasiya müddəti hüceyrə növü, hüceyrə sıxlığı, sonikator gücü və istifadə olunan xüsusi protokol kimi amillərdən asılı olaraq əhəmiyyətli dərəcədə dəyişə bilər. Tipik prosedurlar bir neçə saniyədən bir neçə dəqiqəyə qədər dəyişə bilər, tez-tez istilik istehsalını idarə etmək və hüceyrənin vahid pozulmasını təmin etmək üçün dövrlərdə yerinə yetirilir.
- Zülal ekstraksiyasında sonikasiyanın məqsədi nədir? Zülal ekstraksiyasında sonikasiya hüceyrə membranlarını effektiv şəkildə qırmağa və zülalları həll etməyə xidmət edir. Bu üsul xüsusilə hüceyrə bölmələrindən zülalların sərbəst buraxılması üçün faydalıdır və bu, zülalların təmizlənəcəyi və ya təhlil ediləcəyi lizatların hazırlanması üçün vacib edir.
- Nə üçün sonikasiya hasilatı üçün istifadə olunur? Sonication sürətli hərəkət və məqsədyönlü enerji tətbiq etmək qabiliyyətinə görə ekstraksiya üçün üstünlük təşkil edir, sərt kimyəvi müalicələrdən istifadə etmədən bioaktiv molekulları buraxmaq üçün hüceyrə strukturlarını parçalayır və bununla da çıxarılan birləşmələrin funksional bütövlüyünü qoruyur.
- Sonikasiya zülal-zülal qarşılıqlı əlaqəsini pozurmu? Sonikasiya hüceyrə membranlarını effektiv şəkildə poza bilsə də, zülal-zülal qarşılıqlı təsirini də poza bilər. Kəsilmə səviyyəsi sonikasiya intensivliyindən və məruz qalma müddətindən asılıdır, potensial olaraq protein komplekslərinin denatürasiyasına və ya dissosiasiyasına gətirib çıxarır ki, bu da sonrakı analitik və ya funksional tədqiqatlara təsir göstərə bilər.
- E. coli lizis üçün sonication istifadə edilə bilərmi? Hielscher sonikatorları möhkəm hüceyrə divarları olan E. coli kimi bakterial hüceyrələrin parçalanması üçün xüsusilə təsirlidir. Texnika hüceyrə divarını və membranını kəsmək üçün fiziki bir üsul təqdim edir və bu, molekulyar biologiya və biokimya laboratoriyalarında bakterial lizatların hazırlanması üçün üstünlük verilən üsula çevrilir.
- Sonikasiya addımından sonra sonrakı proseslər hansılardır?
Ultrasəs lizizindən sonra aşağı axın addımları adətən lizatın fraksiyalaşdırılmasını, orqanellələrin məqsədyönlü şəkildə təcrid olunmasını və əlavə protein çıxarılmasını və ya təmizlənməsini əhatə edir.
Sonra emal edilmiş lizat ayrılır və yüksək ayırdetmə proteomikası, transkriptomikası və ya reseptorla bağlanma tədqiqatları kimi analitik və ya funksional tətbiqlər üçün hazırlanır.
Ədəbiyyat / İstinadlar
- Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Advances in product release strategies and impact on bioprocess design. Trends in Biotechnology 27/8, 2009. pp. 477-485.
- Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonic Recovery and Modification of Food ingredients. In: Feng/ Barbosa-Cánovas/ Weiss (2011): Ultrasound Technologies for Food and Bioprocessing. New York: Springer, 2011. pp. 345-368.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.