Lizis üçün sonikasiya: Hüceyrələrin pozulması və çıxarılması

Hüceyrə parçalanması və ya lizisi biotexnoloji laboratoriyalarda gündəlik nümunənin hazırlanmasının ümumi hissəsidir. Lizisin məqsədi bioloji molekulları buraxmaq üçün hüceyrə divarının hissələrini və ya tam hüceyrəni pozmaqdır. Ultrasəs homojenizatorları uğurlu hüceyrə lizisi üçün geniş istifadə olunur. Mürəkkəb ultrasəs aparatlarının əsas üstünlüyü intensivlik və temperatur kimi proses parametrlərinə dəqiq nəzarətdir ki, bu da hüceyrənin yumşaq, lakin yüksək effektiv şəkildə pozulmasına və çıxarılmasına imkan verir.

Ultrasəs istifadə edərək hüceyrə lizisi

UP200St kimi zond tipli ultrasəs cihazları etibarlı toxuma homojenizatorlarıdır və genetikada nümunə hazırlamaq üçün geniş istifadə olunur, məsələn, Sonication-Assisted Agrobacterium-Vasited Transformation (SAAT) üçün.Ultrasonik hüceyrə parçalanması və çıxarılması yüksək tezlikli səs dalğalarından, yəni ultrasəsdən istifadə edərək açıq hüceyrələri sındırmaq və içindəkiləri çıxarmaq üçün istifadə edilən bir üsuldur. Sonikasiya, hüceyrənin parçalanması və hüceyrədaxili materialın çıxarılmasının müəyyən edilmiş və etibarlı üsulları kimi geniş istifadə olunan bir liziz üsuludur. Ultrasəs lizis, məsələn, plazmid, reseptor analizləri, zülallar, DNT, RNT və s. ehtiva edən lizat hazırlamaq üçün etibarlı bir texnikadır. Ultrasəs intensivliyi proses parametrlərini tənzimləməklə düzəldilə bildiyi üçün, çox yumşaqdan intensivə qədər optimal sonikasiya intensivliyi fərdi olaraq təyin edilə bilər. xüsusi tətbiq tələblərinə cavab vermək üçün hər bir maddə və mühit. Lizisin sonrakı mərhələləri fraksiyalaşdırma, orqanellərin izolyasiyası və/və ya zülalın çıxarılması və təmizlənməsidir. Çıxarılan material (= lizat) ayrılmalıdır və əlavə araşdırmalara və ya tətbiqlərə, məsələn, proteomik tədqiqatlara məruz qalır.

Nümunə hazırlamaq üçün ultrasəs laboratoriya dismembratatorları UP100H və UP400St (homogenləşmə, liziz, ekstraksiya).

Ultrasonik homojenizatorlar UP100H (100 vatt)UP400St (400 vat) liziz və ekstraksiya kimi nümunələrin hazırlanması üçün.

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


Digər hüceyrə lizisi və ekstraksiya üsulları ilə müqayisədə ultrasəs hüceyrə lizisi bir sıra üstünlüklərə malikdir:

  1. Sürət: Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması bir neçə saniyə ərzində açıq hüceyrələri qıra bilən sürətli bir üsuldur. Bu, homogenləşdirmə, dondurma-əritma və ya muncuq frezeleme kimi digər üsullardan çox daha sürətlidir.
  2. səmərəlilik: Ultrasəs hüceyrə lizisi və çıxarılması kiçik, böyük və ya çoxlu nümunələri bir anda müalicə etmək üçün istifadə edilə bilər ki, bu da kiçik nümunələrin fərdi işlənməsini tələb edən digər üsullardan daha səmərəlidir.
  3. Kimyəvi tərkibsiz: Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması sərt kimyəvi maddələrin və ya fermentlərin istifadəsini tələb etməyən qeyri-invaziv bir üsuldur. Bu, onu hüceyrə məzmununun bütövlüyünün qorunub saxlanılması lazım olan tətbiqlər üçün ideal hala gətirir. Nümunələrin arzuolunmaz çirklənməsinin qarşısını almaq olar.
  4. Yüksək produktivlik: Ultrasonik hüceyrə lizisi və çıxarılması DNT, RNT və zülallar da daxil olmaqla yüksək məhsuldar hüceyrə məzmununu çıxara bilər. Bunun səbəbi yüksək tezlikli səs dalğalarının hüceyrə divarlarını qıraraq ətrafdakı məhlulun içinə buraxmasıdır.
  5. Temperatur nəzarət: Mürəkkəb ultrasəs cihazları nümunənin temperaturunu dəqiq idarə etməyə imkan verir. Hielscher rəqəmsal sonikatorları qoşula bilən temperatur sensoru və temperatur monitorinqi proqramı ilə təchiz edilmişdir.
  6. Təkrarlana bilən: Ultrasəs hüceyrə lizisi üçün protokollar asanlıqla çoxaldıla bilər və hətta sadə xətti miqyaslı böyütmə ilə müxtəlif daha böyük və ya daha kiçik nümunə həcmlərinə uyğunlaşdırıla bilər.
  7. Çox yönlü: Ultrasonik hüceyrə lizisi və ekstraksiyası bakteriya, maya, göbələk, bitki və məməli hüceyrələri də daxil olmaqla geniş çeşidli hüceyrə növlərini çıxarmaq üçün istifadə edilə bilər. O, həmçinin zülallar, DNT, RNT və lipidlər də daxil olmaqla müxtəlif növ molekulları çıxarmaq üçün istifadə edilə bilər.
  8. Çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda hazırlanması: Hielscher Ultrasonics, eyni proses şəraitində çoxsaylı nümunələri rahat şəkildə emal etmək üçün bir neçə həll təklif edir. Bu, lizis və ekstraksiya nümunəsinin hazırlanması mərhələsini yüksək səmərəli və vaxta qənaət edir.
  9. İstifadəsi asan: Ultrasəs hüceyrə lizisi və ekstraksiya avadanlığından istifadə etmək asandır və minimal təlim tələb edir. Avadanlıq həm də qənaətcildir, çünki o, təkrar satınalma tələb olunmayan tək investisiyadır. Bu, onu geniş tədqiqatçılar və laboratoriyalar üçün cəlbedici edir.

Ümumiyyətlə, ultrasəs hüceyrə lizisi və çıxarılması hüceyrə məzmununu çıxarmaq üçün sürətli, səmərəli, dəqiq idarə olunan və çox yönlü bir üsuldur. Alternativ üsullarla müqayisədə üstünlükləri onu geniş tədqiqat və sənaye tətbiqləri üçün cəlbedici seçim edir.

Ultrasonik Hüceyrə Lizisinin İş Prinsipi

Ultrasəs hüceyrə lizisi və çıxarılması hüceyrələri pozmaq və onların məzmununu çıxarmaq üçün yüksək tezlikli səs dalğalarından istifadə edir. Səs dalğaları ətrafdakı mayedə təzyiq dəyişiklikləri yaradır, kiçik baloncukların əmələ gəlməsinə və kavitasiya kimi tanınan prosesdə çökməsinə səbəb olur. Bu qabarcıqlar açıq hüceyrələri sındıra və onların məzmununu ətrafdakı məhlula buraxa bilən lokallaşdırılmış yüksək intensiv mexaniki qüvvələr yaradır.

Bir ultrasəs cihazı istifadə edərək hüceyrə lizisi adətən aşağıdakı addımları əhatə edir:

  • Nümunə maye tamponu olan bir boruya və ya konteynerə yerləşdirilir.
  • Nümunəyə ultrasəs zondu və təqribən yüksək tezlikli səs dalğaları daxil edilir. 20-30 kHz tətbiq olunur.
  • Ultrasəs dalğaları ətrafdakı mayedə salınım və kavitasiyaya səbəb olur, açıq hüceyrələri qıran və onların məzmununu buraxan lokallaşdırılmış qüvvələr yaradır.
  • Nümunə hər hansı hüceyrə zibilini çıxarmaq üçün sentrifuqalanır və ya süzülür və çıxarılan məzmun aşağı axın analizi üçün toplanır.
Ultrasonik ekstraksiya hüceyrə strukturlarını pozaraq və kütləvi köçürməni təşviq etməklə işləyir

Güclü ultrasəs dalğaları bioloji strukturların hüceyrə matrisini pozur və bioaktiv birləşmələri buraxır. Bitki materialı ilə həlledici (məsələn, tampon) arasında kütlə ötürülməsi güclənir. (qrafik: ©Vilkhu et al., 2006)

Bu video klipdə laboratoriyalarda nümunə hazırlamaq üçün geniş istifadə olunan ultrasəs cihazı olan Hielscher ultrasəs homogenizatoru UP100H göstərilir.

Ultrasonik Homojenizator UP100H

Video Miniatür

Ümumi Lizis Metodlarının Dezavantajları

Laboratoriyalarda işlədiyiniz müddətdə ənənəvi mexaniki və ya kimyəvi lizis protokollarından istifadə edərək hüceyrə lizisi problemini artıq yaşamış ola bilərsiniz.

  • Mexanik parçalanma: Mexaniki lizis üsulları, məsələn, havan və havan ilə üyütmə və ya fransız presi, muncuq dəyirmanı və ya rotor-stator sistemindən istifadə edərək homogenləşdirmə çox vaxt dəqiq nəzarət və tənzimləmə seçimlərindən məhrumdur. Bu o deməkdir ki, frezeləmə və üyütmə üsulu tez bir zamanda nümunəyə zərər verə bilən və zülalları denatürasiya edə bilən istilik və kəsmə qüvvələri yarada bilər. Onlar həmçinin vaxt apara bilər və böyük miqdarda başlanğıc material tələb edə bilər.
  • Kimyəvi liziz: Kimyəvi lizis üsulları, məsələn, yuyucu vasitələrə əsaslanan lizis, lipid iki qatını pozaraq və zülalları denaturasiya edərək nümunəyə zərər verə bilər. Onlar həmçinin bir neçə addım tələb edə bilər və aşağı axın tətbiqlərinə mane olan qalıq çirkləndiriciləri tərk edə bilər. Yuyucu vasitənin optimal dozasını tapmaq əlavə problemdir.
  • Dondurma-ərimə dövrləri: Dondurma-ərimə dövrləri hüceyrə membranlarının qırılmasına səbəb ola bilər, lakin təkrar dövrlər də zülalın denatürasiyasına və deqradasiyasına səbəb ola bilər. Bu üsul həm də bir neçə dövrə tələb edə bilər ki, bu da vaxt apara bilər və tez-tez aşağı məhsuldarlıqla nəticələnir.
  • Enzimatik lizis: Enzimatik lizis üsulları müəyyən hüceyrə növlərinə xas ola bilər və bir neçə addım tələb edir, bu da onları vaxt aparan edir. Onlar həmçinin tullantı yaradır və nümunənin deqradasiyasının qarşısını almaq üçün diqqətli optimallaşdırma tələb edir. Enzimatik lizis dəstləri çox vaxt bahadır. Mövcud enzimatik lizis prosedurunuz qeyri-kafi nəticələr verirsə, hüceyrənin pozulmasını gücləndirmək üçün sinergik metod kimi sonikasiya tətbiq oluna bilər.

Adi mexaniki və kimyəvi hüceyrə lizis üsullarından fərqli olaraq, sonication sonikasiya parametrləri üzərində tam nəzarət etməyə imkan verən hüceyrə parçalanması üçün çox səmərəli və etibarlı bir vasitədir. Bu, materialların buraxılması və məhsulun saflığı üzrə yüksək seçiciliyi təmin edir. [müq. Balasundaram və başqaları, 2009]
Bütün hüceyrə tiplərinə uyğundur və kiçik və böyük miqyasda asanlıqla tətbiq olunur – həmişə nəzarət altında olan şəraitdə. Ultrasonikatorları təmizləmək asandır. Ultrasəs homojenizatoru həmişə təmiz yerində (CIP) və yerində sterilizasiya (SIP) funksiyasına malikdir. Sonotrode, suda və ya həlledicidə (iş mühitindən asılı olaraq) silinə və ya yuyula bilən böyük bir titan buynuzundan ibarətdir. Ultrasonicators saxlanılması demək olar ki, laqeyd onların möhkəmlik bağlıdır.

 

Bu dərslik lizis, hüceyrənin pozulması, zülal izolyasiyası, laboratoriyalarda DNT və RNT fraqmentasiyası, analiz və tədqiqat kimi nümunə hazırlama tapşırıqlarınız üçün hansı tip sonikatorun ən yaxşı olduğunu izah edir. Tətbiqiniz, nümunə həcmi, nümunə sayı və ötürmə qabiliyyəti üçün ideal sonikator tipini seçin. Hielscher Ultrasonics sizin üçün ideal ultrasəs homojenizatoruna malikdir!

Elm və təhlildə hüceyrənin pozulması və zülal çıxarılması üçün mükəmməl sonikatoru necə tapmaq olar

Video Miniatür

 

Ultrasonik lizis və hüceyrə pozulması

Ümumiyyətlə, laboratoriyada nümunələrin ləğv edilməsi 15 saniyə ilə 2 dəqiqə arasında aparılacaqdır. Sonication intensivliyi amplituda bir sonikasiya müddəti və doğru avadanlıq seçilməsi ilə tənzimləmək üçün çox asandır, çünki hüceyrə strukturuna və lizis məqsədinə görə hüceyrə membranlarını çox yumşaq və ya çox ani bir şəkildə pozmaq mümkündür ( məsələn, DNT hasilatı daha yumşaq sonikasiya tələb edir, bakteriyaların tam protein çıxarılması daha sıx bir ultrasəs müalicəsi tələb edir). Proses zamanı temperatur bir inteqrasiya temperatur sensoru ilə izlənə və asanlıqla soyutma (buzlu hamam və soyuducu gödəkcikli axın hüceyrələri) və ya pulsed rejimdə sonikasiya ilə nəzarət edilə bilər. Pulse-rejimi sonication zamanı, 1-15 saniyəlik qısa sonication burst dövrü, daha uzun aralıklı dövrlərdə istilik yayılması və soyutma üçün imkan verir.
Bütün ultrasəs idarə prosesləri tamamilə reproducible və xətti genişlənən edir.

İnformasiya tələbi




Bizimlə əlaqə saxlayın Gizlilik Siyasəti.


VialTweeter, steril şəraitdə nümunənin etibarlı homojenləşdirilməsinə imkan verən MultiSample Ultraonicatordur.

VialTweeter çoxsaylı nümunələrin eyni vaxtda, vahid və sürətli steril hazırlanması üçün ultrasəs homogenizatordur.

Hüceyrə lizisi və çıxarılması üçün ultrasəs homojenizatorları

Müxtəlif növ ultrasəs cihazları nümunə hazırlamaq məqsədinə uyğun gəlməyə və istifadəçinin rahatlığını və əməliyyat rahatlığını təmin etməyə imkan verir. Prob tipli ultrasəs cihazları laboratoriyada ən çox yayılmış cihazlardır. Onlar həcmi 0,1 ml-dən 1000 ml-ə qədər olan kiçik və orta ölçülü nümunələrin hazırlanması üçün ən uyğundur. Müxtəlif güc ölçüləri və sonotrodlar ultrasonikatoru nümunə həcminə və ən effektiv və səmərəli sonikləşdirmə nəticələrinə görə gəmiyə uyğunlaşdırmağa imkan verir. Ultrasəs zond cihazı tək nümunələr hazırlanmalı olduqda ən yaxşı seçimdir.

Daha çox nümunə hazırlamaq lazımdırsa, məsələn, 8-10 flakon hüceyrə məhlulu, VialTweeter və ya ultrasəs kuboku kimi ultrasəs sistemləri ilə intensiv dolayı sonikasiya effektiv lizis üçün ən uyğun homojenləşdirmə üsuludur. Bir neçə flakon eyni vaxtda, eyni intensivlikdə səslənir. Bu, nəinki vaxta qənaət edir, həm də bütün nümunələrin eyni işlənməsini təmin edir ki, bu da nümunələr arasında nəticələri etibarlı və müqayisə edilə bilən edir. Bundan əlavə, ultrasəs sonotrodu (həmçinin ultrasəs zond, buynuz, uc və ya barmaq kimi tanınır) batırmaqla dolayı sonikasiya zamanı çarpaz çirklənmənin qarşısı alınır. Ayrı-ayrılıqda nümunə ölçüsünə uyğun flakonlar istifadə edildiyi üçün, vaxt aparan təmizləmə və qabların boşaldılması nəticəsində nümunə itkisi nəzərə alınmır. Multiwell və ya mikrotiter plitələrin vahid sonikasiyası üçün Hielscher UIP400MTP təklif edir.
ali həcmdə, məsələn mobil çıxarışların kommersiya istehsalı üçün, bir axın mobil reaktoru ilə fasiləsiz ultrasəs sistemləri ən uygundur. emal material davamlı və hətta axını daha sonication təmin edir. ultrasəs dağılma prosesinin bütün parametrləri optimize və tətbiqi və xüsusi mobil material tələblərinə düzəlişlər edilə bilər.
 
 
bakterial hüceyrələri ultrasəs təsviri üçün nümunəvi qaydası:

  • mobil dayandırılması hazırlanması: Cell qranullar tamamilə (aşağıdakı analiz, məsələn xüsusi xromatoqrafiya üsulu ilə uyğun sizin bufer həll seçin) homogenizing bir bufer həll dayandırılıb olmalıdır. lazım gələrsə lysozymes və / və ya digər əlavələri əlavə, (onlar ayrılması / təmizləyici vasitələrlə də uyğun olmalıdır). / Mix tam dayandırılması əldə qədər mülayim sonication altında yumşaq həll homogenize.
  • Ultrasonik lizisi: buz vanna nümunə qoyun. mobil pozulması üçün (sizin ultrasonicator nin pulse rejimi istifadə edərək,) 60-90 ikinci bursts da dayandırılması sonicate.
  • (. Məsələn 10 min 10,000 x g; 4degC at): Separation Centrifuge lysate. diqqətlə mobil kürəcik olan supernatant ayırın. supernatant ümumi hüceyrə lysate edir. supernatant süzülmə sonra, həll mobil protein aydınlıq maye almaq.

 

Videoda UIP400MTP ultrasəs nümunəsi hazırlama sistemi göstərilir ki, bu da yüksək intensivlikli ultrasəsdən istifadə etməklə istənilən standart çoxquyulu lövhələrdən etibarlı nümunə hazırlamağa imkan verir. UIP400MTP-nin tipik tətbiqlərinə hüceyrə lizisi, DNT, RNT və xromatinin kəsilməsi, həmçinin zülal çıxarılması daxildir.

Çox yaxşı boşqablı sonikasiya üçün UIP400MTP Ultrasonicator

Video Miniatür

 
biologiya və biotexnologiya ultrasonicators üçün ən ümumi applications var:

  • Cell çıxarış hazırlanması
  • Mayanın, bakteriyaların, bitki hüceyrələrinin, yumşaq və ya sərt hüceyrə toxumasının, nuklein materialın pozulması
  • zülal hasilatı
  • Hazırlanması və fermentlərin təcrid
  • antigenləri istehsalı
  • və / və ya hədəf parçalanma DNA hasilatı
  • liposom hazırlanması
Hüceyrələrin pozulması, lizisi və ultrasəs ilə çıxarılması laboratoriyalarda effektiv nümunə hazırlama üsuludur.

Zond tipli ultrasəs cihazı ilə hüceyrənin pozulması effektiv nümunə hazırlama üsuludur.

Aşağıdakı cədvəl hüceyrənin pozulması və çıxarılması üçün ultrasəs aparatlarımız haqqında ümumi məlumat verir. Hər bir ultrasəs homojenizatoru haqqında daha çox məlumat əldə etmək üçün cihaz növünə klikləyin. Bizim yaxşı təlim keçmiş və uzunmüddətli təcrübəyə malik texniki heyətimiz nümunələriniz üçün ən uyğun ultrasəs aparatını seçməkdə sizə kömək etməkdən məmnun olacaqlar!
 

Partiyanın həcmi Axın tövsiyə Cihazlar
10 flakon və ya boruya qədər na VialTweeter
çoxqulu / mikrotitr plitələr na UIP400MTP
çoxlu borular / damarlar na Cuphorn
1 500ml 10 200ml / dəq UP100H
10 ilə 1000 ml 20-200 ml/dəq Uf200 ः t, UP200St
10 2000ml üçün 20 400ml / dəq UP400St

Daha çox məlumat üçün xahiş edirik

Hüceyrə liziziniz və ekstraksiya prosesiniz haqqında bizimlə danışın. Biz sizə hüceyrənin pozulması üçün ən uyğun ultrasəs cihazı və emal parametrlərini tövsiyə edəcəyik.





Xahiş edirik unutmayın Gizlilik Siyasəti.


 

Müştərilərin tətbiqlərinin qiymətləndirilməsi və optimallaşdırılması üçün Hielscher Ultrasonics tam təchiz olunmuş ultrasəs proses laboratoriyası təklif edir. Əlavə məlumat üçün bizimlə əlaqə saxlayın!
Bu videoda botanikaların çıxarılması üçün 100 vatt ultrasəs homogenizatoru UP100H göstərilir.

Bioaktiv birləşmələrin ultrasəs çıxarılması

Video Miniatür



biotexnologiya, Biyomühendislik, mikrobiologiya, molekulyar biologiya, biokimya, immunologiya, bakteriologiya, virusologiya, proteomics, genetika, fiziologiya, mobil biologiya, hematoloji, və botanika sahələrində həyata ultrasəs filiallarının manifold applications.

Lizis: Hüceyrə strukturlarının qırılması

Cells bir phospho-lipid ikiqatlı (həmçinin protein-lipid ikiqatlı, hidrofob lipid və əlaqədar zülal molekulları ilə hydrophilic fosfor molekulları ilə formalaşır) ibarət olan yarı keçirici plazma membran qorunur və mobil daxili arasında bir sədd (cytoplasm) yaradır və extracellular mühit. Plant hüceyrələri və prokariot hüceyrələrin mobil divar ilə əhatə olunur. Due neçə qat sellüloza qalın mobil divar, bitki hüceyrələri heyvan hüceyrələri daha Lyse zordur. Belə orqanoidləri, nüvə, mitoxondri kimi mobil daxili, cytoskeleton ilə sabitləşib.
hüceyrələri təsviri, bu çıxarılması və orqanoid, zülal, DNT, mRNA və ya digər biomolecules ayıran yönəlmişdir.

Hüceyrə lizizinin ənənəvi üsulları və onların çatışmazlıqları

yuyucu və ya həlledicilər istifadə, yüksək təzyiq tətbiqi və ya bead dəyirman və ya bir Fransız mətbuat istifadə daxildir mexaniki və kimyəvi üsullarla, bölünə bilər hüceyrələri lysate üçün bir neçə üsulları var. Bu üsulların ən problemli əlverişsiz çətin nəzarət və proses parametrlərinin tənzimlənməsi və bununla da təsir edir.
Aşağıdakı cədvəl ümumi lizis üsullarının əsas çatışmazlıqlarını göstərir:

Cədvəldə ənənəvi hüceyrə parçalanması və parçalanma üsulları verilmiş və hər bir metodun əsas çatışmazlıqları göstərilmişdir.

Cədvəl: mobil lizisi ənənəvi üsulları əsas mənfi cəhətləri var

 

Lizis proseduru

Lizisi həssas prosesdir. lizisi zamanı mobil membran qorunması bir unphysiological mühitdə (pH dəyərinin sapma) tərəfindən hasil zülalların lakin ləğvi, denaturation və deqradasiyası qarşısı alınmalıdır, məhv edilir. Buna görə də, ümumi lizisi bir bufer həll həyata keçirilir. Ən çətinliklər bütün hüceyrədaxili maddi və / və ya hədəf məhsulun denaturation bir hədəfsiz azad nəticəsində nəzarətsiz hüceyrə pozulması yaranır.

Ədəbiyyat / Referanslar

Prosesinizi müzakirə etməkdən məmnun olarıq.

Əlaqə saxlayaq.