Siêu âm để ly giải tế bào: Phá vỡ tế bào và chiết xuất
Ly giải tế bào bằng siêu âm là kỹ thuật chuẩn bị mẫu được ứng dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm công nghệ sinh học hiện đại. Mục đích chính của kỹ thuật này là phá vỡ màng tế bào hoặc toàn bộ tế bào để giải phóng các thành phần nội bào như protein, axit nucleic hoặc bào quan. Trong công việc phòng thí nghiệm hằng ngày, điều này có nghĩa là xử lý bằng siêu âm là phương pháp tiêu chuẩn để phá vỡ tế bào có kiểm soát và chiết xuất hiệu quả các phân tử sinh học. Ưu điểm chính của máy siêu âm nằm ở khả năng điều chỉnh chính xác các thông số quan trọng của quá trình, bao gồm cường độ siêu âm, chế độ xung và kiểm soát nhiệt độ. Khả năng kiểm soát này cho phép các nhà nghiên cứu ly giải tế bào một cách đáng tin cậy, đồng thời giảm thiểu tổn thương do nhiệt hoặc cơ học đối với các phân tử sinh học nhạy cảm, tạo nên quá trình chiết xuất nhẹ nhàng nhưng có hiệu quả cao.
Ly giải tế bào bằng máy siêu âm
Ly giải tế bào bằng siêu âm sử dụng hiện tượng xâm thực âm để phá vỡ màng tế bào và giải phóng các phân tử nội bào. Hielscher Ultrasonics cung cấp máy siêu âm dạng đầu dò truyền thống cũng như các máy siêu âm đa mẫu để xử lý trong điều kiện vô trùng: VialTweeter dành cho nhiều ống và lọ mẫu cùng máy siêu âm đĩa 96 giếng UIP400MTP dành cho các đĩa vi giếng tiêu chuẩn.
Hielscher Ultrasonics cung cấp các máy siêu âm không tiếp xúc mạnh mẽ để chuẩn bị mẫu và phân tích lâm sàng. Máy siêu âm đĩa nhiều giếng UIP400MTP, VialTweeter, CupHorn và máy siêu âm dòng chảy GDmini2 xử lý các mẫu trong điều kiện vô trùng.
Máy đồng nhất hóa siêu âm UP100H (100 oát) và UP400St (400 oát): Siêu âm để ly giải tế bào và chiết xuất.
Máy đồng nhất hóa siêu âm để ly giải tế bào và chiết xuất
| Loại thiết bị siêu âm | Ứng dụng trọng tâm | Thể tích mẫu | Trường hợp sử dụng điển hình | Ưu điểm | Các mẫu máy ví dụ |
|---|---|---|---|---|---|
| Máy siêu âm dạng đầu dò | Xử lý siêu âm từng mẫu | 0,1 mL đến ~1000 mL | Ly giải tế bào, chiết xuất protein, phân mảnh DNA/RNA | Kiểm soát năng lượng chính xác; nhiều loại đầu sonotrode; tối ưu cho mẫu có thể tích nhỏ đến trung bình | UP100H, UP200St, UP400St |
| VialTweeter / CupHorn | Xử lý song song nhiều lọ mẫu đóng kín | 8–10 lọ mẫu (~1–20 mL mỗi lọ) | Ly giải theo quy trình chuẩn hóa nhiều huyền phù tế bào | Xử lý siêu âm đồng đều; tránh nhiễm chéo; kết quả có thể tái lập | VialTweeter, CupHorn |
| Máy siêu âm đĩa 96 giếng | Xử lý siêu âm đĩa nhiều giếng và đĩa vi chuẩn độ | Định dạng đĩa vi giếng | Sàng lọc thông lượng cao, nghiên cứu hệ protein, xét nghiệm tế bào | Xử lý siêu âm đồng thời, đồng đều trên các giếng; lý tưởng cho quy trình xử lý nhiều mẫu | UIP400MTP |
| Thiết bị phản ứng dạng buồng dòng chảy | Xử lý siêu âm liên tục cho thể tích lớn hơn | >1 L, có thể mở rộng quy mô | Phá vỡ tế bào ở quy mô công nghiệp, sản xuất dịch chiết | Xử lý liên tục; có thể mở rộng quy mô; kiểm soát toàn bộ quá trình (biên độ, áp suất, nhiệt độ) | UIP1000hdT, UIP2000hdT + buồng dòng chảy |
| Hệ thống siêu âm vô trùng / gián tiếp | Xử lý mẫu không nhiễm bẩn | Tùy thuộc vào lọ mẫu/ống mẫu/đĩa vi giếng | Mẫu nhạy cảm, môi trường vô trùng, môi trường chịu sự quản lý theo quy định | Không tiếp xúc với đầu dò; tránh nhiễm tồn dư từ mẫu trước; cần rất ít công sức vệ sinh | VialTweeter, CupHorn, UIP400MTP |
Ưu điểm của việc sử dụng siêu âm để ly giải tế bào
So với các phương pháp ly giải tế bào và chiết xuất khác, ly giải tế bào bằng siêu âm có một số ưu điểm:
- Tốc độ: Ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm là phương pháp nhanh, có thể phá vỡ tế bào chỉ trong vài giây. Phương pháp này nhanh hơn nhiều so với các phương pháp khác như đồng nhất hóa, đông lạnh–rã đông hoặc nghiền bi.
- Hiệu quả: Ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm có thể được sử dụng để xử lý mẫu nhỏ, mẫu lớn hoặc nhiều mẫu cùng lúc, nhờ đó hiệu quả hơn các phương pháp khác đòi hỏi phải xử lý riêng lẻ từng mẫu nhỏ.
- Không dùng hóa chất: Ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm là phương pháp không xâm lấn, không đòi hỏi sử dụng hóa chất mạnh hoặc enzyme. Điều này khiến phương pháp trở nên lý tưởng cho các ứng dụng cần duy trì tính toàn vẹn của các thành phần bên trong tế bào. Có thể tránh được tình trạng nhiễm bẩn mẫu không mong muốn.
- Hiệu suất thu hồi cao: Ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm có thể thu hồi các thành phần bên trong tế bào với hiệu suất cao, bao gồm DNA, RNA và protein. Điều này là do sóng âm tần số cao phá vỡ thành tế bào và giải phóng các thành phần bên trong vào dung dịch xung quanh.
- Kiểm soát nhiệt độ: Các thiết bị siêu âm tiên tiến cho phép kiểm soát chính xác nhiệt độ mẫu. Các thiết bị siêu âm kỹ thuật số của Hielscher được trang bị cảm biến nhiệt độ dạng cắm và phần mềm giám sát nhiệt độ.
- Khả năng tái lập: Các quy trình ly giải tế bào bằng siêu âm có thể dễ dàng được tái lập và thậm chí được điều chỉnh cho phù hợp với các thể tích mẫu lớn hơn hoặc nhỏ hơn khác nhau bằng cách thay đổi quy mô tuyến tính đơn giản.
- Tính đa năng: Ly giải và chiết xuất bằng siêu âm có thể được sử dụng để chiết xuất từ nhiều loại tế bào, bao gồm vi khuẩn, nấm men, nấm, tế bào thực vật và tế bào động vật có vú. Phương pháp này cũng có thể được sử dụng để chiết xuất các loại phân tử khác nhau, bao gồm protein, DNA, RNA và lipid.
- Chuẩn bị đồng thời nhiều mẫu: Hielscher Ultrasonics cung cấp nhiều giải pháp để xử lý thuận tiện nhiều mẫu trong các điều kiện quy trình hoàn toàn giống nhau. Điều này giúp bước chuẩn bị mẫu bằng ly giải và chiết xuất đạt hiệu quả cao và tiết kiệm thời gian.
- Dễ sử dụng: Thiết bị ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm dễ sử dụng và chỉ cần đào tạo tối thiểu. Thiết bị cũng có tính kinh tế vì chỉ cần đầu tư một lần mà không cần mua lại vật tư dùng một lần. Điều này khiến thiết bị trở thành lựa chọn hấp dẫn đối với nhiều nhà nghiên cứu và phòng thí nghiệm.
Nhìn chung, ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm là phương pháp nhanh, hiệu quả, có thể kiểm soát chính xác và đa năng để chiết xuất các thành phần bên trong tế bào. Những ưu điểm so với các phương pháp thay thế khiến phương pháp này trở thành lựa chọn hấp dẫn cho nhiều ứng dụng nghiên cứu và công nghiệp.
Nguyên lý hoạt động của phương pháp ly giải tế bào bằng siêu âm
Ly giải tế bào và chiết xuất bằng siêu âm sử dụng sóng âm tần số cao để phá vỡ tế bào và chiết xuất các thành phần bên trong. Sóng âm tạo ra sự thay đổi áp suất trong chất lỏng xung quanh, khiến các bọt nhỏ hình thành và sụp đổ trong một quá trình được gọi là xâm thực. Các bọt này tạo ra các lực cơ học cục bộ có cường độ rất cao, có thể phá vỡ tế bào và giải phóng các thành phần bên trong vào dung dịch xung quanh.
Ly giải tế bào bằng thiết bị siêu âm thường bao gồm các bước sau:
- Mẫu được đặt trong ống hoặc vật chứa có dung dịch đệm.
- Một đầu dò siêu âm được đưa vào mẫu và sóng âm tần số cao khoảng 20–30 kHz được áp dụng.
- Sóng siêu âm gây ra dao động và xâm thực trong chất lỏng xung quanh, tạo ra các lực cục bộ phá vỡ tế bào và giải phóng các thành phần bên trong.
- Mẫu được ly tâm hoặc lọc để loại bỏ mọi mảnh vụn tế bào, và các thành phần đã chiết xuất được thu thập để phân tích ở các bước tiếp theo.
Nhược điểm của các phương pháp ly giải thông dụng
Trong quá trình làm việc tại phòng thí nghiệm, bạn có thể đã gặp những phiền phức khi ly giải tế bào bằng các quy trình ly giải cơ học hoặc hóa học truyền thống.
- Ly giải cơ học: Các phương pháp ly giải cơ học, chẳng hạn như nghiền bằng cối và chày hoặc đồng nhất hóa bằng máy ép French, máy nghiền bi hay hệ thống rôto–stato, thường thiếu các tùy chọn kiểm soát và điều chỉnh chính xác. Điều này có nghĩa là việc xay và nghiền có thể nhanh chóng tạo ra nhiệt và lực cắt có thể làm hỏng mẫu và gây biến tính protein. Các phương pháp này cũng có thể tốn thời gian và đòi hỏi lượng lớn nguyên liệu ban đầu.
- Ly giải hóa học: Các phương pháp ly giải hóa học, chẳng hạn như ly giải bằng chất tẩy rửa, có thể làm hỏng mẫu do phá vỡ lớp kép lipid và gây biến tính protein. Các phương pháp này cũng có thể đòi hỏi nhiều bước và có thể để lại các chất nhiễm bẩn tồn dư gây cản trở các ứng dụng ở các bước tiếp theo. Việc tìm ra liều lượng chất tẩy rửa tối ưu là một thách thức bổ sung.
- Các chu kỳ đông lạnh–rã đông: Các chu kỳ đông lạnh–rã đông có thể làm vỡ màng tế bào, nhưng việc lặp lại các chu kỳ cũng có thể gây biến tính và phân hủy protein. Phương pháp này cũng có thể đòi hỏi nhiều chu kỳ, điều này có thể tốn thời gian và thường dẫn đến hiệu suất thu hồi thấp hơn.
- Ly giải bằng enzyme: Các phương pháp ly giải bằng enzyme có thể đặc hiệu cho một số loại tế bào và đòi hỏi nhiều bước, khiến chúng tốn thời gian. Chúng cũng tạo ra chất thải và cần được tối ưu hóa cẩn thận để tránh làm phân hủy mẫu. Các bộ kit ly giải bằng enzyme thường đắt tiền. Nếu quy trình ly giải bằng enzyme hiện tại của bạn cho kết quả chưa đạt yêu cầu, có thể áp dụng xử lý siêu âm như một phương pháp hiệp đồng để tăng cường phá vỡ tế bào.
So với các phương pháp ly giải tế bào cơ học và hóa học thông thường, xử lý siêu âm là một công cụ phân rã tế bào rất hiệu quả và đáng tin cậy, cho phép kiểm soát hoàn toàn các thông số xử lý siêu âm. Điều này đảm bảo tính chọn lọc cao trong việc giải phóng các chất và độ tinh khiết cao của sản phẩm. [cf. Balasundaram et al., 2009]
Phương pháp này phù hợp với mọi loại tế bào và dễ dàng áp dụng ở quy mô nhỏ cũng như lớn – luôn trong điều kiện được kiểm soát. Các thiết bị siêu âm dễ vệ sinh. Máy đồng nhất siêu âm luôn có chức năng vệ sinh tại chỗ (CIP) và tiệt trùng tại chỗ (SIP). Đầu phát siêu âm gồm một khối titan dạng sừng, có thể được lau hoặc rửa bằng dòng nước hay dung môi (tùy thuộc vào môi trường làm việc). Nhờ độ bền chắc, nhu cầu bảo trì của các thiết bị siêu âm gần như không đáng kể.
Ly giải và phá vỡ tế bào bằng siêu âm
Thông thường, quá trình ly giải mẫu trong phòng thí nghiệm mất từ 15 giây đến 2 phút. Vì cường độ xử lý siêu âm rất dễ điều chỉnh thông qua việc thiết lập biên độ và thời gian xử lý siêu âm cũng như lựa chọn thiết bị phù hợp, có thể phá vỡ màng tế bào rất nhẹ nhàng hoặc rất đột ngột, tùy theo cấu trúc tế bào và mục đích ly giải (ví dụ: chiết xuất DNA cần xử lý siêu âm nhẹ hơn, còn chiết xuất hoàn toàn protein từ vi khuẩn cần xử lý siêu âm mạnh hơn). Nhiệt độ trong quá trình này có thể được theo dõi bằng cảm biến nhiệt độ tích hợp và dễ dàng kiểm soát bằng cách làm mát (bể nước đá hoặc buồng dòng chảy có áo làm mát) hoặc xử lý siêu âm ở chế độ xung. Khi xử lý siêu âm ở chế độ xung, các chu kỳ phát siêu âm ngắn kéo dài 1–15 giây cho phép tản nhiệt và làm mát trong các khoảng nghỉ dài hơn.
Tất cả các quy trình sử dụng siêu âm đều có khả năng tái lập hoàn toàn và mở rộng quy mô theo tuyến tính.
VialTweeter là máy đồng nhất siêu âm dùng để chuẩn bị đồng thời nhiều mẫu một cách đồng đều, nhanh chóng và vô trùng.
- Chuẩn bị huyền phù tế bào: Phải phân tán hoàn toàn cặn tế bào thành huyền phù trong dung dịch đệm bằng cách đồng nhất hóa (chọn dung dịch đệm tương thích với phép phân tích tiếp theo, ví dụ: một phương pháp sắc ký cụ thể). Bổ sung lysozyme và/ hoặc các chất phụ gia khác nếu cần (chúng cũng phải tương thích với các phương pháp tách/ tinh sạch). Trộn/ đồng nhất hóa dung dịch nhẹ nhàng dưới tác động siêu âm nhẹ cho đến khi tạo được huyền phù hoàn toàn.
Đọc thêm về tác dụng hiệp đồng của lysozyme khi kết hợp với xử lý siêu âm! - Ly giải bằng siêu âm: Đặt mẫu trong bể nước đá. Để phá vỡ tế bào, xử lý huyền phù bằng siêu âm theo từng đợt kéo dài 60–90 giây (sử dụng chế độ xung của thiết bị siêu âm).
- Tách: Ly tâm dịch ly giải (ví dụ: 10 phút ở 10.000 x g; ở 4degC). Cẩn thận tách dịch nổi khỏi cặn tế bào. Dịch nổi là dịch ly giải tế bào toàn phần. Sau khi lọc dịch nổi, bạn thu được dịch trong chứa protein tế bào hòa tan.
Các ứng dụng phổ biến nhất của thiết bị siêu âm trong sinh học và công nghệ sinh học là:
- Chuẩn bị dịch chiết tế bào
- Phá vỡ nấm men, vi khuẩn, tế bào thực vật, mô tế bào mềm hoặc cứng, vật chất nhân
- Chiết xuất protein
- Chuẩn bị và phân lập enzyme
- Sản xuất kháng nguyên
- Chiết xuất DNA và/ hoặc phân mảnh có mục tiêu
- Chuẩn bị liposome
Phá vỡ tế bào bằng thiết bị siêu âm dạng đầu dò là một phương pháp chuẩn bị mẫu hiệu quả.
Các ứng dụng đa dạng của siêu âm trải rộng trong các lĩnh vực công nghệ sinh học, kỹ thuật sinh học, vi sinh vật học, sinh học phân tử, hóa sinh, miễn dịch học, vi khuẩn học, virus học, hệ protein học, di truyền học, sinh lý học, sinh học tế bào, huyết học và thực vật học.
Ly giải: Phá vỡ cấu trúc tế bào
Tế bào được bảo vệ bởi một màng sinh chất bán thấm, gồm một lớp kép phospholipid (còn gọi là lớp kép protein–lipid; được hình thành từ các lipid kỵ nước và các phân tử phốt pho ưa nước, với các phân tử protein nằm xen kẽ), tạo thành hàng rào giữa phần bên trong tế bào (tế bào chất) và môi trường ngoại bào. Tế bào thực vật và tế bào nhân sơ được bao quanh bởi thành tế bào. Do có thành tế bào cellulose dày nhiều lớp, tế bào thực vật khó ly giải hơn tế bào động vật. Các cấu trúc bên trong tế bào, như bào quan, nhân và ty thể, được ổn định bởi bộ xương tế bào.
Việc ly giải tế bào nhằm chiết xuất và phân tách các bào quan, protein, DNA, mRNA hoặc các phân tử sinh học khác.
Các phương pháp ly giải tế bào thông thường và nhược điểm của chúng
Có nhiều phương pháp ly giải tế bào, có thể chia thành phương pháp cơ học và phương pháp hóa học, bao gồm sử dụng chất tẩy rửa hoặc dung môi, áp dụng áp suất cao, hoặc sử dụng máy nghiền bi hay máy ép French. Nhược điểm gây nhiều khó khăn nhất của các phương pháp này là khó kiểm soát và điều chỉnh các thông số quá trình, từ đó khó kiểm soát và điều chỉnh tác động của chúng.
Bảng dưới đây trình bày những nhược điểm chính của các phương pháp ly giải phổ biến:
Bảng: Các phương pháp ly giải tế bào thông thường có những nhược điểm lớn
Quy trình ly giải
Ly giải là một quá trình nhạy cảm. Trong quá trình ly giải, chức năng bảo vệ của màng tế bào bị phá hủy; tuy nhiên, phải ngăn ngừa sự bất hoạt, biến tính và phân hủy các protein được chiết xuất do môi trường không phù hợp với điều kiện sinh lý (sai lệch giá trị pH). Vì vậy, quá trình ly giải thường được thực hiện trong dung dịch đệm. Phần lớn khó khăn phát sinh từ việc phá vỡ tế bào không được kiểm soát, dẫn đến giải phóng không có chọn lọc toàn bộ vật chất nội bào hoặc/và làm biến tính sản phẩm mục tiêu.
Các câu hỏi thường gặp về xử lý siêu âm và ly giải tế bào
- Có thể ly giải tế bào bằng siêu âm không? Có, xử lý siêu âm ly giải tế bào hiệu quả bằng sóng siêu âm tần số cao gây ra hiện tượng xâm thực, trong đó các bọt hơi cực nhỏ hình thành và sụp đổ dữ dội trong huyền phù tế bào. Các lực cơ học sinh ra phá vỡ màng tế bào và tạo điều kiện giải phóng các thành phần nội bào vào chất lỏng.
- Sử dụng thiết bị siêu âm để ly giải tế bào như thế nào? Việc sử dụng thiết bị siêu âm để ly giải tế bào bao gồm nhúng đầu dò siêu âm vào huyền phù tế bào và điều chỉnh các thông số như biên độ và thời lượng xung. Cần theo dõi chặt chẽ quá trình để tối ưu hóa việc phá vỡ tế bào đồng thời giảm thiểu sự biến tính protein và bất hoạt enzyme.
- Nguyên lý của việc ly giải tế bào bằng siêu âm là gì? Xử lý siêu âm hoạt động dựa trên nguyên lý xâm thực âm. Năng lượng siêu âm được truyền vào môi trường lỏng, gây ra các biến động áp suất nhanh, dẫn đến sự hình thành và sụp đổ của các vi bọt. Những lần sụp đổ này tạo ra lực cắt mạnh và nhiệt độ cao cục bộ, phá vỡ các cấu trúc tế bào và tăng độ đồng nhất của dịch ly giải.
- Xử lý siêu âm để ly giải tế bào mất bao lâu? Thời gian xử lý siêu âm để ly giải tế bào có thể thay đổi đáng kể tùy thuộc vào các yếu tố như loại tế bào, mật độ tế bào, công suất thiết bị siêu âm và quy trình cụ thể được sử dụng. Các quy trình điển hình có thể kéo dài từ vài giây đến vài phút, thường được thực hiện theo chu kỳ để kiểm soát sự sinh nhiệt và đảm bảo phá vỡ tế bào đồng đều.
- Mục đích của xử lý siêu âm trong chiết xuất protein là gì? Trong chiết xuất protein, xử lý siêu âm giúp phá vỡ màng tế bào hiệu quả và hòa tan protein. Phương pháp này đặc biệt hữu ích trong việc giải phóng protein từ bên trong các khoang tế bào, khiến nó trở thành một phương pháp thiết yếu để chuẩn bị dịch ly giải dùng cho tinh sạch hoặc phân tích protein.
- Tại sao siêu âm được sử dụng để chiết xuất? Xử lý siêu âm được ưa chuộng trong chiết xuất nhờ tác động nhanh và khả năng đưa năng lượng đến mục tiêu, phá vỡ các cấu trúc tế bào để giải phóng các phân tử có hoạt tính sinh học mà không cần sử dụng các biện pháp xử lý hóa học mạnh, qua đó bảo toàn tính toàn vẹn về chức năng của các hợp chất được chiết xuất.
- Xử lý bằng siêu âm có phá vỡ tương tác protein–protein không? Mặc dù xử lý bằng siêu âm có thể phá vỡ màng tế bào một cách hiệu quả, phương pháp này cũng có thể phá vỡ tương tác protein–protein. Mức độ phá vỡ phụ thuộc vào cường độ siêu âm và thời gian tiếp xúc, có khả năng dẫn đến sự biến tính hoặc phân ly của các phức hợp protein, từ đó có thể ảnh hưởng đến các nghiên cứu phân tích hoặc chức năng tiếp theo.
- Có thể sử dụng siêu âm để ly giải E. coli không? Các máy siêu âm Hielscher đặc biệt hiệu quả trong việc ly giải các tế bào vi khuẩn như E. coli, vốn có thành tế bào bền chắc. Kỹ thuật này cung cấp một phương pháp vật lý để cắt phá thành và màng tế bào, khiến nó trở thành một phương pháp được ưu tiên để chuẩn bị dịch ly giải vi khuẩn trong các phòng thí nghiệm sinh học phân tử và hóa sinh.
- Những công đoạn nào được thực hiện sau bước xử lý bằng siêu âm?
Các bước xử lý tiếp theo sau khi ly giải bằng siêu âm thường bao gồm phân đoạn dịch ly giải, phân lập có mục tiêu các bào quan, và tiếp tục chiết xuất hoặc tinh sạch protein.
Dịch ly giải đã xử lý sau đó được phân tách và chuẩn bị cho các ứng dụng phân tích hoặc chức năng, chẳng hạn như nghiên cứu hệ protein có độ phân giải cao, nghiên cứu hệ phiên mã hoặc nghiên cứu gắn kết thụ thể.
Tài liệu/Tài liệu tham khảo
- Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Advances in product release strategies and impact on bioprocess design. Trends in Biotechnology 27/8, 2009. pp. 477-485.
- Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonic Recovery and Modification of Food ingredients. In: Feng/ Barbosa-Cánovas/ Weiss (2011): Ultrasound Technologies for Food and Bioprocessing. New York: Springer, 2011. pp. 345-368.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.