Bộ đệm ly giải có thể được chuẩn bị hiệu quả và nhanh chóng bằng cách sử dụng máy đồng nhất mô siêu âm. Kể từ khi ultrasonicators là một công cụ mơ ước để trộn, hòa tan và phân tán, họ cho phép một sự chuẩn bị đáng tin cậy và thân thiện với người dùng của bộ đệm ly giải.

Chuẩn bị siêu âm của bộ đệm ly giải

Đồng nhất mô siêu âm là một công cụ phổ biến cho sự gián đoạn tế bào, ly giải và khai thác, do đó có sẵn trong hầu hết các phòng thí nghiệm. Một ứng dụng thứ cấp cho ultrasonicators loại thăm dò là việc chuẩn bị bộ đệm ly giải.

Bộ đệm ly giải là một giải pháp được sử dụng để phá vỡ các tế bào mở (lyse) và giải phóng nội dung của chúng để phân tích xuôi dòng. Thành phần cụ thể của dung dịch đệm ly giải có thể khác nhau tùy thuộc vào loại tế bào được phân giải và ứng dụng hạ lưu. Tuy nhiên, một chất đệm ly giải điển hình có chứa các thành phần như chất tẩy rửa, muối và chất ức chế protease. Muối đệm (ví dụ Tris-HCl) và muối ion (ví dụ NaCl) thường được sử dụng để điều chỉnh độ pH và độ thẩm thấu của lysate.
Để tạo ra dung dịch đệm ly giải, các thành phần được trộn với nhau ở nồng độ và pH thích hợp. Hỗn hợp thường được khuấy hoặc lắc cho đến khi các thành phần được hòa tan và dung dịch đồng nhất.
Đồng nhất siêu âm là một phương pháp có thể được sử dụng để giúp tạo ra một bộ đệm ly giải tốt bằng cách cải thiện sự pha trộn và hòa tan của các thành phần. Trong phương pháp này, sóng siêu âm – thường trong khoảng 20 đến 30 kHz – được áp dụng cho hỗn hợp, tạo ra bong bóng xâm thực sụp đổ và tạo ra năng lượng cục bộ mạnh, dẫn đến cắt cơ học và trộn các thành phần.
Quá trình đồng nhất siêu âm có thể giúp phá vỡ bất kỳ khối hoặc tập hợp của các thành phần, và đảm bảo rằng các giải pháp được trộn đều. Do đó, bộ đệm ly giải được cải thiện như vậy có thể dẫn đến sự gián đoạn tế bào hiệu quả hơn và năng suất cao hơn của vật liệu chiết xuất. Ngoài ra, đồng nhất siêu âm có thể làm giảm thời gian cần thiết để tạo bộ đệm ly giải so với phương pháp khuấy hoặc lắc truyền thống.
Nhìn chung, siêu âm đồng nhất là một công cụ mạnh mẽ để cải thiện chất lượng và hiệu quả của việc chuẩn bị đệm ly giải.

Giao thức chuẩn bị đệm ly giải siêu âm

Đây là một giao thức chung để tạo bộ đệm ly giải bằng cách sử dụng máy siêu âm loại đầu dò:
 
Vật liệu:

• (Các) chất tẩy rửa được lựa chọn (ví dụ: Triton X-100, SDS, CHAPS)
• (Các) muối được lựa chọn (ví dụ: NaCl, KCl)
• Thuốc ức chế protease (ví dụ: PMSF, aprotinin, leupeptin)
• Máy siêu âm
• máy khuấy
• Nước khử ion
• Máy đo pH hoặc dải pH

 
 
Hướng dẫn từng bước:

1. Xác định thành phần của bộ đệm ly giải dựa trên các tế bào hoặc mô bạn sẽ nói dối và các ứng dụng hạ nguồn bạn sẽ sử dụng lysate. Chuẩn bị các dung dịch dự trữ chất tẩy rửa, muối và chất ức chế protease ở nồng độ mong muốn.
2. Thêm dung dịch dự trữ chất tẩy rửa, muối và chất ức chế protease vào cốc hoặc bình.
3. Thêm nước khử ion để đưa thể tích lên đến lượng đệm mong muốn.
4. Trộn các thành phần bằng máy khuấy để có được dung dịch trộn sẵn.
5. Đo độ pH của dung dịch đệm bằng máy đo pH hoặc dải pH, và điều chỉnh độ pH khi cần thiết với một lượng nhỏ axit hoặc bazơ.
6. Sử dụng ultrasonicator loại đầu dò để đồng nhất hóa dung dịch trộn sẵn để thu được dung dịch đồng nhất cao. Do đó, sonicate dung dịch trong vài giây cho đến khi dung dịch được trộn kỹ và bất kỳ khối hoặc cốt liệu nào bị phá vỡ. Thời gian và sức mạnh của sonication có thể được tối ưu hóa dựa trên bộ đệm ly giải cụ thể và ultrasonicator được sử dụng.
7. Sau khi siêu âm, đo lại độ pH của bộ đệm và điều chỉnh khi cần thiết.
8. Lọc bộ đệm thông qua bộ lọc 0,2 micron để loại bỏ bất kỳ mảnh vụn hoặc cốt liệu nào có thể đã hình thành trong quá trình sonication.
9. Bộ đệm ly giải hiện đã sẵn sàng để sử dụng.

 
Lưu ý: Thành phần chính xác và độ pH của dung dịch đệm ly giải có thể khác nhau tùy thuộc vào các tế bào hoặc mô được phân giải và các ứng dụng hạ nguồn. Giao thức trên là một hướng dẫn chung và có thể cần được tối ưu hóa cho các ứng dụng cụ thể.
 
Siêu âm homogenizers thường được sử dụng cho sự gián đoạn tế bào và khai thác các phân tử nội bào. Do đó, nhiều ứng dụng ly giải sử dụng sonication kiểu thăm dò không chỉ để chuẩn bị bộ đệm ly giải, mà còn cho sự gián đoạn tế bào cơ học và chiết xuất.
Điều này làm cho homogenizers mô siêu âm một công cụ linh hoạt cho các phòng thí nghiệm và giải thích việc sử dụng rộng rãi của ultrasonicators trong vi sinh, công nghệ sinh học và khoa học đời sống.

siêu âm phòng thí nghiệm homogenizers

Hielscher Ultrasonics sản xuất và cung cấp siêu âm homogenizers và thăm dò (sonotrodes) ở mức độ công suất khác nhau và khối lượng mẫu. Điều này cho phép chúng tôi cung cấp cho bạn chất phá vỡ siêu âm phù hợp nhất để chuẩn bị mẫu của bạn. Chúng tôi tập trung vào chất lượng cao nhất, sự thoải mái người dùng vượt trội và kết quả sonication đáng tin cậy. Tất cả các ultrasonicators kỹ thuật số tính năng phần mềm thông minh, lập trình và pre-setting của các giao thức sonication, trình duyệt điều khiển từ xa, điều khiển nhiệt độ, chiếu sáng mẫu cũng như ghi dữ liệu tự động trên một thẻ SD tích hợp.

Thiết kế, Sản xuất và Tư vấn – Chất lượng Sản xuất tại Đức

Hielscher ultrasonicators nổi tiếng với chất lượng cao nhất và tiêu chuẩn thiết kế. Mạnh mẽ và hoạt động dễ dàng cho phép tích hợp trơn tru của ultrasonicators của chúng tôi vào các cơ sở công nghiệp. Điều kiện khắc nghiệt và môi trường đòi hỏi khắt khe dễ dàng được xử lý bởi ultrasonicators Hielscher.

Hielscher Ultrasonics là một công ty được chứng nhận ISO và đặc biệt nhấn mạnh vào ultrasonicators hiệu suất cao có công nghệ hiện đại và thân thiện với người dùng. Tất nhiên, Hielscher ultrasonicators là CE tuân thủ và đáp ứng các yêu cầu của UL, CSA và RoHs.

The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators: