Giải pháp đệm chuẩn bị với Ultrasonication
Dung dịch đệm ly giải có thể được chuẩn bị hiệu quả và nhanh chóng bằng cách sử dụng máy đồng nhất mô siêu âm. Vì máy siêu âm là một công cụ mơ ước để trộn, hòa tan và phân tán, chúng cho phép chuẩn bị dung dịch đệm ly giải đáng tin cậy và thân thiện với người dùng.
Chuẩn bị siêu âm của dung dịch đệm ly giải
Máy đồng nhất mô siêu âm là một công cụ phổ biến để phá vỡ tế bào, ly giải và chiết xuất, do đó có sẵn trong hầu hết các phòng thí nghiệm. Một ứng dụng thứ cấp cho máy siêu âm kiểu đầu dò là chuẩn bị dung dịch đệm ly giải.
Dung dịch đệm ly giải là một dung dịch được sử dụng để phá vỡ các tế bào mở (ly-xé) và giải phóng nội dung của chúng để phân tích hạ lưu. Thành phần cụ thể của dung dịch đệm ly giải có thể khác nhau tùy thuộc vào loại tế bào được ly giải và ứng dụng xuôi dòng. Tuy nhiên, một dung dịch đệm ly giải điển hình có chứa các thành phần như chất tẩy rửa, muối và chất ức chế protease. Muối đệm (ví dụ: Tris-HCl) và muối ion (ví dụ: NaCl) thường được sử dụng để điều chỉnh độ pH và độ thẩm thấu của chất ly giải.
Để tạo ra dung dịch đệm ly giải, các thành phần được trộn với nhau ở nồng độ và độ pH thích hợp. Hỗn hợp thường được khuấy hoặc lắc cho đến khi các thành phần hòa tan và dung dịch đồng nhất.
Đồng nhất siêu âm là một phương pháp có thể được sử dụng để giúp tạo ra một bộ đệm ly giải tốt bằng cách cải thiện sự trộn và hòa tan của các thành phần. Trong phương pháp này, sóng siêu âm – thường trong khoảng từ 20 đến 30 kHz – được áp dụng cho hỗn hợp, tạo ra các bong bóng xâm thực sụp đổ và tạo ra năng lượng cục bộ mạnh mẽ, dẫn đến cắt cơ học và trộn các thành phần.
Quá trình đồng nhất siêu âm có thể giúp phá vỡ bất kỳ cụm hoặc cốt liệu nào của các thành phần và đảm bảo rằng dung dịch được trộn đều. Do đó, dung dịch đệm ly giải được cải thiện như vậy có thể dẫn đến sự phá vỡ tế bào hiệu quả hơn và năng suất cao hơn của vật liệu chiết xuất. Ngoài ra, đồng nhất siêu âm có thể giảm thời gian cần thiết để tạo dung dịch đệm ly giải so với các phương pháp khuấy hoặc lắc truyền thống.
Nhìn chung, đồng nhất siêu âm là một công cụ mạnh mẽ để cải thiện chất lượng và hiệu quả của việc chuẩn bị dung dịch đệm ly giải.
Máy đồng nhất phòng thí nghiệm siêu âm UP200Ht phổ biến trong các phòng thí nghiệm nghiên cứu để chuẩn bị mẫu, ly giải, chiết xuất, phân mảnh và hòa tan DNA.
Giao thức chuẩn bị đệm ly giải siêu âm
Đây là một giao thức chung để tạo ra một bộ đệm ly giải bằng cách sử dụng máy siêu âm kiểu đầu dò:
Vật liệu:
- (Các) chất tẩy rửa được lựa chọn (ví dụ: Triton X-100, SDS, CHAPS)
- (Các) muối lựa chọn (ví dụ: NaCl, KCl)
- Thuốc ức chế protease (ví dụ: PMSF, aprotinin, leupeptin)
- Siêu âm
- máy khuấy
- Nước khử ion
- Máy đo pH hoặc dải pH
Hướng dẫn từng bước:
- Xác định thành phần của dung dịch đệm ly giải dựa trên các tế bào hoặc mô bạn sẽ ly giải và các ứng dụng xuôi dòng mà bạn sẽ sử dụng dung dịch ly giải. Chuẩn bị dung dịch gốc của chất tẩy rửa, muối và chất ức chế protease ở nồng độ mong muốn.
- Thêm dung dịch gốc của chất tẩy rửa, muối và chất ức chế protease vào cốc hoặc bình.
- Thêm nước khử ion để tăng thể tích đến lượng đệm mong muốn.
- Trộn các thành phần bằng máy khuấy để có được dung dịch trộn sẵn.
- Đo độ pH của dung dịch đệm bằng máy đo pH hoặc dải pH, và điều chỉnh độ pH khi cần thiết với một lượng nhỏ axit hoặc bazơ.
- Sử dụng máy siêu âm dạng đầu dò để đồng nhất hóa dung dịch tiền trộn sao cho thu được dung dịch đồng nhất cao. Do đó, tiến hành siêu âm dung dịch trong vài giây cho đến khi dung dịch được trộn đều hoàn toàn và các cục hoặc tụ kết được phân hủy. Thời gian và công suất siêu âm có thể được tối ưu hóa dựa trên loại dung dịch ly giải và máy siêu âm được sử dụng.
- Sau khi siêu âm, đo lại độ pH của dung dịch đệm và điều chỉnh khi cần thiết.
- Lọc bộ đệm thông qua bộ lọc 0,2 micron để loại bỏ bất kỳ mảnh vụn hoặc cốt liệu nào có thể hình thành trong quá trình siêu âm.
- Bộ đệm ly giải hiện đã sẵn sàng để sử dụng.
Lưu ý: Thành phần chính xác và độ pH của dung dịch đệm ly giải có thể khác nhau tùy thuộc vào tế bào hoặc mô được ly giải và các ứng dụng xuôi dòng. Giao thức trên là một hướng dẫn chung và có thể cần được tối ưu hóa cho các ứng dụng cụ thể.
Máy đồng nhất siêu âm thường được sử dụng để phá vỡ tế bào và chiết xuất các phân tử nội bào. Do đó, nhiều ứng dụng ly giải sử dụng siêu âm kiểu đầu dò không chỉ để chuẩn bị dung dịch đệm ly giải mà còn để phá vỡ tế bào cơ học và chiết xuất.
Điều này làm cho máy đồng nhất mô siêu âm trở thành một công cụ linh hoạt cho các phòng thí nghiệm và giải thích việc sử dụng rộng rãi máy siêu âm trong vi sinh, công nghệ sinh học và khoa học đời sống.
siêu âm phòng thí nghiệm homogenizers
Hielscher Ultrasonics sản xuất và cung cấp máy đồng nhất siêu âm và đầu dò (sonotrodes) ở các định mức công suất và khối lượng mẫu khác nhau. Điều này cho phép chúng tôi cung cấp cho bạn chất gây rối sóng siêu âm phù hợp nhất để chuẩn bị mẫu của bạn. Chúng tôi tập trung vào chất lượng cao nhất, sự thoải mái vượt trội cho người dùng và kết quả siêu âm đáng tin cậy. Tất cả các máy siêu âm kỹ thuật số đều có phần mềm thông minh, lập trình và cài đặt trước các giao thức siêu âm, điều khiển từ xa trình duyệt, điều khiển nhiệt độ, chiếu sáng mẫu cũng như ghi dữ liệu tự động trên thẻ SD tích hợp.
Thiết kế, sản xuất và tư vấn – Chất lượng Sản xuất tại Đức
Hielscher ultrasonicators nổi tiếng với chất lượng cao nhất và tiêu chuẩn thiết kế của họ. Mạnh mẽ và hoạt động dễ dàng cho phép tích hợp trơn tru của ultrasonicators của chúng tôi vào các cơ sở công nghiệp. Điều kiện khắc nghiệt và môi trường đòi hỏi dễ dàng được xử lý bởi Hielscher ultrasonicators.
Hielscher Ultrasonics là một công ty được chứng nhận ISO và đặc biệt nhấn mạnh vào ultrasonicators hiệu suất cao có công nghệ tiên tiến và thân thiện với người dùng. Tất nhiên, Hielscher ultrasonicators là CE tuân thủ và đáp ứng các yêu cầu của UL, CSA và RoHs.
Bảng dưới đây cung cấp cho bạn cái nhìn tổng quan về các máy siêu âm phòng thí nghiệm khác nhau của chúng tôi:
| VialTweeter tại UP200St | 200 W | 26kHz | siêu âm các lọ nhỏ, ví dụ như Eppendorf 1,5mL |
| UP50H | 50W | 30kHz | Máy đồng nhất phòng thí nghiệm cầm tay hoặc đứng |
| UP100H | 100W | 30kHz | Máy đồng nhất phòng thí nghiệm cầm tay hoặc đứng |
| UP200Ht | 200 W | 26kHz | Máy đồng nhất phòng thí nghiệm cầm tay hoặc đứng |
| UP200St | 200 W | 26kHz | Máy đồng nhất phòng thí nghiệm đứng |
| UP400ST | 400W | 24kHz | Máy đồng nhất phòng thí nghiệm đứng |
| SonoStep | 200 W | 26kHz | kết hợp lò phản ứng phòng thí nghiệm, siêu âm, bơm, máy khuấy và bình |
| GDmini2 | 200 W | 26kHz | tế bào dòng chảy không ô nhiễm |
| Cuphorn | 200 W | 26kHz | Bồn tắm siêu âm cường độ cao cho lọ và cốc |
| UIP400MTP | 400W | 24kHz | Hệ thống siêu âm cho đĩa đa giếng / tấm microtiter |
Cuphorn siêu âm Đối với sonication cường độ cao của ống kín và lọ để đồng nhất vô trùng của các mẫu.
Liên hệ với chúng tôi! / Hãy hỏi chúng tôi!
Máy đồng nhất phòng thí nghiệm siêu âm UP400St thường được sử dụng để chuẩn bị dung dịch ly giải và phá vỡ tế bào sau đó.
Văn học / Tài liệu tham khảo
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher Ultrasonics sản xuất homogenizers siêu âm hiệu suất cao từ phòng thí nghiệm đến quy mô công nghiệp.