FFPE Yüksek Verimli Numune Hazırlama: Protein Ekstraksiyonu ve Nükleik Asit Kesme

Yüksek verimli ultrasonicator UIP400MTP ile Hielscher Ultrasonics, formalin fiksasyonu ve parafin gömülü (FFPE) doku hazırlığının zorluklarını ele alır. Ultrasonication'ın FFPE deparafinizasyonu, doku lizisi, homojenizasyon, protein ekstraksiyonu ve DNA / RNA kesme için FFPE örneğini çok sayıda nasıl işlediğini öğrenin! Ultrasonik FFPE doku hazırlığından yararlanın – Çok kuyulu plakalarda büyük numune sayılarının işlenmesi! Güvenilir araştırma sonuçları için yüksek kaliteli numuneler elde edin ve yüksek numune sayıları elde edin! Ve son olarak, zamandan ve paradan tasarruf edin!

Yüksek Verimli Sonikasyon ile Kolaylaştırılan FFPE Numune Hazırlama

Formalin fiksasyonu ve parafin gömme (FFPE), katı dokuların korunması ve arşivlenmesi için en yaygın yöntemdir. FFPE doku örneklerinden biyomoleküllerin ekstraksiyonu, depolanan örneklerin kalitesi nedeniyle genellikle önemli zorluklar ortaya çıkarır. Moleküler biyoloji ve klinik araştırmalarda paha biçilmez varlıklar olan bu örnekler, retrospektif çalışmalar ve tanısal biyobelirteç validasyonu için zengin bir biyolojik bilgi kaynağı sağlar. Bununla birlikte, formalin fiksasyonu ve parafin gömme işlemi, doku mimarisini ve morfolojisini korurken, yüksek kaliteli nükleik asitlerin ve proteinlerin ekstraksiyonunu zorlaştırır. Formalin, nükleik asitlerin ve proteinlerin çapraz bağlanmasını indükleyerek moleküler parçalanmaya ve kimyasal modifikasyonlara yol açar. Yüksek verimli ultrasonicator UIP400MTP FFPE numune hazırlama zorluklarının üstesinden nasıl geldiğini öğrenin!

Verimli FFPE Numune Hazırlama için Ultrasonikatör

  • Kullanımı Kolay İş Akışı: Kullanıcı dostu basitleştirilmiş süreçler.
  • Deparafinizasyon, Protein Ekstraksiyonu, DNA / RNA Kesme
  • Hızlı Yüksek Verimli İşleme: Çok kuyulu plakaların verimli kullanımı.
  • Etkili Deparafinizasyon: Proteinlerin geliştirilmiş çözünürlüğü.
  • Toksik Olmayan Çözücüler: Ksilen gibi zararlı organik çözücülerin kullanımını önler.

 

UIP400MTP çok kuyulu plaka ultrasonicator protein ekstraksiyonu ve DNA ve RNA kesme için yüksek verimde FFPE örnekleri işleyebilir

UIP400MTP yüksek verimli sonikatör çok kuyulu plakalarda yüksek verimli FFPE numune işleme için

Bilgi talebi





 
Ultrasonikasyon kullanarak FFPE Örnek Hazırlama - Hielscher tarafından UIP400MTP multwell plaka sonicator
 

FFPE Dokusundan Protein Ekstraksiyon Tekniklerindeki Gelişmeler

Hielscher Ultrasonics, yüksek verimli FFPE numune hazırlamadaki zorlukları ele alır. Sonikasyon, mekanik titreşimler ve odaklanmış kavitasyon oluşturmak için ultrasonik dalgalar kullanır, hücresel yapıları etkili bir şekilde bozar ve biyomoleküllerin çözünürlüğünü arttırır. Bu teknik, FFPE dokularından nükleik asit ve protein ekstraksiyonunun verimliliğini ve verimini artırmanın yanı sıra kütüphane hazırlığı için DNA ve RNA kesmeyi artırma kabiliyeti nedeniyle popülerlik kazanmıştır. UIP400MTP çok kuyulu plaka sonikatörü kullanarak ultrasonikasyonun aşağı akış uygulamaları için bu biyomoleküllerin bütünlüğünü koruduğunu vurgulamak çok önemlidir.

 

Video, yüksek yoğunluklu ultrason kullanarak herhangi bir standart çok kuyulu plakanın güvenilir numune hazırlanmasına izin veren ultrasonik numune hazırlama sistemi UIP400MTP'yi göstermektedir. UIP400MTP'nin tipik uygulamaları arasında hücre lizisi, DNA, RNA ve kromatin kesmenin yanı sıra protein ekstraksiyonu sayar.

Ultrasonicator UIP400MTP çok iyi plaka sonication için

Video Küçük Resmi

 

Yüksek Verimli Ultrasonikasyon kullanarak Nükleik Asit Kesme

96 oyuklu plakalar ve diğer çok kuyulu plakalar en iyi sonikatör UIP400MTP kullanılarak işlenir. Bu ultrasonik sistem, yüksek verimli numunelerde lizis, DNA parçalanması ve hücre çözündürme işleme örnekleri için idealdir.Yüksek verimli ayarlarda kullanım için çok kuyulu ultrasonicator UIP400MTP, FFPE örneklerinin hazırlanmasını yeni bir seviyeye getiriyor. Bu çok kuyulu plaka sonikasyon yöntemi, birden fazla numunenin aynı anda işlenmesi için verimli ve güvenilir bir çözüm sunar. Yeni nesil dizileme (NGS), kantitatif PCR ve proteomik analizler dahil olmak üzere çeşitli analitik teknikler için kritik olan DNA, RNA ve proteinlerin hızlı ve tekrarlanabilir ekstraksiyonunu kolaylaştırır. Genlik, süre ve sıcaklık gibi sonikasyon parametrelerinin optimizasyonu, ekstrakte edilen biyomoleküllerin kalitesini ve miktarını daha da artırır.

Çok kuyulu plakalar için UIP400MTP sonikatörü, DNA ve RNA'nın FFPE dokusundan parçalanması ve kesilmesi için önemli avantajlar sunar. Bu sistemin göze çarpan özelliklerinden biri, 150-200 baz çiftinin (bp) kısa parçalarını veya 15-20 kilobaz çiftinin (kbp) daha uzun parçalarını elde etmek için sonikasyon yoğunluğunun hassas ayarlanabilirliğini sağlayan DNA ve RNA'nın dar parça boyutlarına ulaşma yeteneğidir. Bu çok yönlülük, UIP400MTP hem kısa okuma hem de uzun okuma dizileme uygulamaları için vazgeçilmez kılar ve yeni nesil dizileme (NGS) ve tüm genom dizileme (WGS) için yüksek kaliteli sonuçlar sağlar. Parça boyutu üzerindeki hassas kontrolü, numunelerin spesifikasyonlara göre hazırlanmasına izin verdiği için genomiğin tüm alanlarındaki araştırmacılar için çok önemlidir.

FFPE Kağıt Mendillerde Gelişmiş Çözümler İçin Bize Ulaşın

FFPE numunelerinden verimli biyomolekül geri kazanımı için UIP400MTP çok kuyulu plakalı sonikatörü keşfedin, ekstrakte edilen nükleik asitlerin ve proteinlerin bütünlüğünü koruyun ve sonuçların tekrarlanabilirliğini sağlayın. Bu teknoloji, diğer hazırlayıcı ve analitik iş akışlarıyla sorunsuz bir şekilde entegre olarak FFPE doku arşivlerini kullanarak moleküler araştırmaları kolaylaştırır ve geliştirir.

Bilgi talebi





Fiksatifler ve etkileri

Fiksasyon, numune hazırlamada hücresel yapıları koruyan, biyokimyasal reaksiyonları durduran ve bozulmayı önleyen çok önemli bir adımdır. Spesifik deneysel gereksinimlere bağlı olarak çeşitli fiksatifler kullanılır. En yaygın iki fiksatif, proteinleri ve nükleik asitleri çapraz bağlayan, hücrelerin ve dokuların morfolojisini ve antijenikliğini koruyan formaldehit ve paraformaldehittir. Etanol, metanol ve glutaraldehit gibi diğer fiksatifler özel uygulamalar için kullanılır.

Formaldehit ve paraformaldehit fiksatifleri, amino grupları arasında metilen köprüleri oluşturarak protein çapraz bağlanmasına neden olur. Bu işlem, sonraki analiz adımları sırasında bütünlüklerini koruyarak hücresel bileşenleri etkili bir şekilde hareketsiz hale getirir. Bu fiksatiflerin etkileri konsantrasyon, pH ve sıcaklık gibi faktörlerden etkilenebilir ve bu parametrelerin optimize edilmesi, hücresel yapıların en iyi şekilde korunmasını sağlamak için çok önemlidir.

 
Ultrasonik FFPE Hazırlamanın Avantajları
 

Ultrasonikasyon, geleneksel tekniklerden üstün olan fikse edilmiş hücreleri ve dokuları bozmak için güçlü bir tekniktir. Geleneksel lizis yöntemlerine göre birkaç önemli avantaj sunar:

  • Hız ve Verimlilik: Ultrasonik lizis, hücrelerin ve dokuların hızlı bir şekilde bozulmasını sağlar, mekanik veya kimyasal lizis yöntemlerine kıyasla işlem süresini önemli ölçüde azaltır. Ultrasonik prob tarafından üretilen yüksek frekanslı ses dalgaları, mekanik kesme kuvvetleri oluşturarak sabitlenmiş hücresel yapıların bozulmasına neden olur. Bu hızlı ve verimli kesinti, araştırmacıların büyük numune hacimlerini kısa bir zaman dilimi içinde işlemesini sağlar.
  • Nazik ve Ayarlanabilir: Ultrasonik lizis, proteinler, nükleik asitler ve enzimler gibi hassas biyomoleküllere verilen zararı en aza indiren nazik bir bozulma mekanizması sunar. Aşırı ısı veya kesme kuvvetleri üreten mekanik yöntemlerin aksine, ultrasonik lizis, hücre içi bileşenlerin bütünlüğünü ve işlevselliğini korurken hücreleri bozmak için kontrollü kavitasyon kullanır.
  • Çok yönlü -lük: Ultrasonik lizis, araştırmacıların çok çeşitli fiksasyonlu numunelerle çalışmasına izin veren çeşitli fiksatiflere uygulanabilir. Formaldehit, paraformaldehit veya alternatif fiksatifler kullanılıp kullanılmadığı, ultrasonik lizis sürekli olarak verimli bozulma sağlar ve hücresel bileşenlerin optimum şekilde geri kazanılmasını sağlar.
  • Yüksek Verim ve Kalite: Ultrasonik lizis, sabitlenmiş hücreleri ve dokuları düzgün bir şekilde bozma kabiliyeti nedeniyle bozulmamış hücresel bileşenlerin yüksek verimini kolaylaştırır. Bu, protein analizi, nükleik asit ekstraksiyonu ve enzimatik tahliller gibi aşağı akış uygulamalarının güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar vermesini sağlar.
  • Otomasyon Uyumluluğu: Ultrasonik lizis, otomatik sistemlere kolayca entegre edilebilir ve yüksek verimli numune işlemeye izin verir. Bu uyumluluk, araştırmacıların özellikle büyük ölçekli çalışmalarda iş akışlarını düzene koymalarına ve üretkenliği artırmalarına olanak tanır.
96 Kuyulu Plaka Sonikatörü hücre lizizi, DNA ekstraksiyonu, DNA fragmantasyonu, hücre çözünürlüğü ve protein saflaştırması için UIP400MTP.

96 Kuyulu Plaka Sonikatör UIP400MTP mikrotitre ve çok kuyulu plakaların sonikasyonu için

Ultrasonik lizis, fikse edilmiş hücrelerin ve dokuların bozulmasında devrim yaratmıştır ve geleneksel lizis yöntemlerine göre sayısız avantaj sunmaktadır. Hızı, verimliliği, seçiciliği, çok yönlülüğü, yüksek verimi ve otomasyon uyumluluğu onu moleküler biyoloji ve biyoteknoloji araştırmalarında vazgeçilmez bir araç haline getirmektedir. Temassız sonikatörlerin yanı sıra prob tipi sonikatör sunan Hielscher Ultrasonics, yaşam bilimleri uygulamanız için en uygun ultrasonik homojenizatörü sunar. Tek numuneleri, birden fazla numuneyi veya çok yüksek numune numaralarını aynı anda işlemek isteyip istemediğinizi, size araştırma ve teşhis gereksinimlerinize uygun en iyi sonikatörü sunacağız.
Çoklu numune ve yüksek verimli numune hazırlama için Hielscher temassız sonikatörler hakkında daha fazla bilgi edinin!

UIP400MTP Çok Kuyulu Plakalı Sonikatör ile FFPE Numune Hazırlama

  • Tek seferlik yatırım
  • Kendi sarf malzemelerinizi kullanın
  • Tescilli aksesuarlar ve sarf malzemeleri için tekrarlanan maliyetler yok
  • Yüksek verimli
  • Hassas kontrol
  • Son teknoloji
  • güvenilirlik & sağlamlık
  • Ayarlanabilir, hassas proses kontrolü
  • Endüstriyel Sınıf: 7/24 sürekli çalıştırılabilir
  • Kullanımı Kolay ve Güvenli
  • Düşük bakım

 
Sonikatörlerin yaşam bilimlerindeki uygulamaları hakkında daha fazla bilgi edinin!

Yüksek verimli numune hazırlama için sonikatör! UIP400MTP plakalı sonikatör, 96 oyuklu plakalarda biyolojik numunelerin parçalanmasını, protein ekstraksiyonunu, DNA parçalanmasını ve hücre çözünmesini kolaylaştırır.

Plaka sonikatörü UIP400MTP 96 oyuklu plakalar, mikrotitre plakalar ve çok kuyulu plakalar içindir.

Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite

Hielscher ultrasonicators iyi onların en yüksek kalite ve tasarım standartları için bilinir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicator'larımızın endüstriyel tesislere sorunsuz entegrasyonunu sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar kolayca Hielscher ultrasonicators tarafından ele alınır.

Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve state-of-the-son teknoloji ve kullanıcı dostu özelliğine sahip yüksek performanslı ultrasonicator'lara özel önem vermektedir. Tabii ki, Hielscher ultrasonicators CE uyumlu ve UL, CSA ve RoHs gereksinimlerini karşılamak.

Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!

Daha fazla bilgi isteyin

UIP400MTP çok kuyulu plaka ultrasonicator, FFPE numune hazırlama uygulamaları ve fiyatları hakkında ek bilgi istemek için lütfen aşağıdaki formu kullanın. Genomik ve proteomik alanındaki başvurunuzu sizinle tartışmaktan memnuniyet duyarız!









Lütfen dikkat Gizlilik Politikası.


Çok kuyulu plakada yüksek verimli RNA dizilimi

UIP400MTP Ultrasonikatör: Çok Kuyulu Plakada Yüksek Verimli FFPE numune hazırlama



SSS
Aşağıda, FFPE doku hazırlığı ve FFPE örneklerinin ultrasonikasyonu ile ilgili sık sorulan soruları yanıtlıyoruz.

FFPE dokusu nasıl hazırlanır?

FFPE Doku Hazırlama Adımları: Taze dokunun titiz bir şekilde işlenmesi ve işlenmesi, yüksek kaliteli FFPE numuneleri oluşturmak için kritik öneme sahiptir. Hücresel mimarinin, nükleik asitlerin ve proteinlerin korunmasını sağlamak, doğru aşağı akış analizi için çok önemlidir. Toplamadan gömmeye kadar her adım, histolojik inceleme, immünohistokimya ve moleküler çalışmalar dahil olmak üzere çeşitli analizler için numunenin bütünlüğünü korumak için hassasiyet gerektirir. Düzgün bir şekilde yürütülen bu fiksasyon ve gömme işlemi, korunan dokunun in vivo durumu doğru bir şekilde yansıtmasını sağlayarak güvenilir teşhis ve araştırma sonuçları sağlar.
FFPE doku örneklerinin gömülmesi sürecinin 6 ana adımında size yol gösteriyoruz.

  • Doku Toplama
    Canlı memelilerden ve doku kültürlerinden alınan biyopsiler, FFPE numunesinin hazırlanması için taze doku elde etmek için uygun kaynaklardır.
    Aseptik bir teknik kullanmak önemlidir: Kontaminasyonu önlemek için steril aletler ve eldivenler kullanın. İdeal olarak, dokuları cerrahi süit veya laminer akış başlığı gibi steril bir ortamda toplayın.
    Numune çok kırılgan olduğundan, hassas kullanımı esastır: İşlemedeki gecikmeleri en aza indirin ve eksizyondan hemen sonra doku işlemeye başlayın. Bu, otoliz ve bozulmayı önlemek için çok önemlidir. Dokuyu oda sıcaklığında tutun; Buz kristali oluşumuna ve doku hasarına neden olabileceğinden donmaktan kaçının.
  • Doku Fiksasyonu
    İlk olarak, doku fiksatif bir çözelti ile muamele edilir: Sudaki %4 formaldehite eşdeğer olan  nötr tamponlu formalin (NBF) kullanın, nötr bir pH'a tamponlayın.
    Dokuyu tamamen formaline batırın. Fiksatif-doku hacim oranının en az 10:1 olduğundan emin olun. Fiksasyon süresi, doku tipine ve boyutuna bağlı olarak tipik olarak 6 ila 24 saat arasında değişir. Fiksatifin dokuya iyice nüfuz edebilmesi önemlidir. Bununla birlikte, aşırı fiksasyon, antijen alımını zorlaştıran çapraz bağlanmaya yol açabilirken, yetersiz fiksasyon, zayıf doku korumasına neden olabilir.
  • Doku Kırpma
    İkinci olarak, fiksatifin yeterli penetrasyonuna izin vermek için dokuyu yaklaşık 3-5 mm kalınlığa kadar kesin. İlgili histolojik yapıları yakalamak için dokunun doğru yönlendirilmesini sağlayın. Bu, doku daha sonra analiz için kullanıldığında ekstraksiyon işlemini kolaylaştırır.
  • Sabitlenmiş Numunenin İşlenmesi
    Şimdi, sabit doku susuz bırakılmalıdır: Fiksasyondan sonra, parafin mumunun tam olarak nüfuz etmesini sağlamak için dokunun kurutulması gerekir. Suyu çıkarmak için dokuyu kademeli bir etanol serisinden (p, �, � ve 0) geçirin.
    Ksilen ile temizleme: Parafin mumu suda çözünmez, ancak ksilen içinde çözünür. Bu nedenle, dokudaki su ksilen ile değiştirilmelidir. Bununla birlikte, ksilenin kendisi suda çözünmez, ancak alkolde çözünür, bu da suyun ilk önce alkolle değiştirildiği bir ara adım gerektirir. Etanolü çıkarmak ve dokuyu parafin infiltrasyonu için hazırlamak için dokuyu ksilen veya ksilen ikamesine daldırın.
    Parafin kullanarak sızma: Dokuyu erimiş parafin mumuna gömün ve tam sızmayı sağlayın. Bu adım tipik olarak, tam bir emprenye sağlamak için birkaç parafin değişikliğini içerir.
  • Dokunun Gömülmesi
    Bu adımda, doku bir doku bloğu halinde kalıplanır: Dokuyu istenen yönde bir kalıba yerleştirin ve üzerine erimiş parafin dökün. Parafinin oda sıcaklığında veya soğuk bir tabakta soğutularak katılaşmasına izin verin.
  • Kesit Alma ve Montaj
    Mikrotomi: Gömülü dokuyu dilimlemek için, parafin bloğundan ince kesitler (tipik olarak 4-5 mikrometre) kesmek için bir mikrotom kullanın. Daha sonra numune monte edilir ve sonraki boyama ve mikroskobik analiz için bölümler cam slaytlara yerleştirilir.
    Son olarak, histolojinin kalitesini kontrol edin: Uygun fiksasyon ve işlemeyi sağlamak için ilk bölümleri mikroskop altında değerlendirin. Protokolleri doku tipine ve gözlemlenen kaliteye göre gerektiği gibi ayarlayın.

 
FFPE dokuları, RNA, DNA ve proteinleri geri kazanmanın yanı sıra kanser veya diğer hastalık belirtilerini keşfetmek için kullanılabilir. Yıllarca saklanabilirler ve araştırmacıların ve doktorların teşhis ve araştırma için doku örneklerinden nasıl yararlandıklarının önemli bir parçasıdırlar.

FFPE dokusu ile ilgili yaygın sorunlar ve zorluklar nelerdir?

Formalinle Sabitlenmiş, Parafine Gömülü (FFPE) doku örnekleri araştırma ve teşhiste yaygın olarak kullanılmaktadır, ancak çeşitli zorluklar ve yaygın sorunlar sunarlar:

  • Biyomoleküllerin Bozunması: Uzun süreli fiksasyon, DNA, RNA ve proteinlerin bozulmasına yol açabilir ve bu da aşağı akış uygulamaları için yüksek kaliteli nükleik asitlerin veya proteinlerin çıkarılmasını zorlaştırabilir. Dokunun korunması için doğru fiksasyon (eksik ve fazla fiksasyondan kaçınmak) esastır.
  • Çapraz bağlantı: Formalin fiksasyonu, proteinlerin ve nükleik asitlerin çapraz bağlanmasına neden olur, bu da moleküler analizi engelleyebilir ve immünohistokimya ve diğer tahlillerin doğruluğunu etkileyebilir.

  • Antijen Maskeleme: Fiksasyon işlemi, antijenik bölgeleri maskeleyebilir, immünohistokimyada ve diğer immünolojik testlerde antikor bağlanmasının etkinliğini azaltabilir. Bu genellikle antijen alımını gerektirir, bu da bir epitopun maskelenmesinin tersine çevrildiği ve epitop-antikor bağlanmasının geri yüklendiği bir prosedürdür. Bununla birlikte, tam antijenite her zaman geri yüklenemeyebilir.
  • Değişken Fiksasyon Kalitesi: Fiksasyon süreleri ve koşullarındaki farklılıklar, sonuçların tekrarlanabilirliğini ve karşılaştırılabilirliğini etkileyerek tutarsız numune kalitesine yol açabilir. Güvenilir sabitleme protokolleri kullanın ve eksik ve aşırı sabitlemeden kaçının.
  • DNA Hasarı ve Parçalanması: FFPE örneklerinin formalin fiksasyonu, sitozin deaminasyonu (C'den T'ye mutasyonlar), oksidatif hasar (örneğin, G'den T'ye mutasyonlara yol açan 8-okso-guanin) dahil olmak üzere çeşitli DNA hasarlarına neden olabilir. Formalin fiksasyon işlemi, DNA'nın parçalanmasına neden olarak PCR ve dizileme gibi genetik ve genomik analizleri karmaşıklaştırabilir.
  • RNA Kalitesi: FFPE dokularından ekstrakte edilen RNA genellikle parçalanır ve kimyasal olarak modifiye edilir, bu da yüksek kaliteli transkriptomik analizlerin yapılmasını zorlaştırır.
  • Protein Modifikasyonları: Formalin, proteinlerde kimyasal modifikasyonlara neden olabilir, yapılarını ve işlevlerini etkileyebilir ve bu da proteomik analizlere müdahale edebilir.
  • Örnek İşleme Yapıtları: Gömme ve kesit alma işlemi sırasında, mekanik stres ve ısı artefaktlara neden olabilir ve dokuya daha fazla zarar verebilir.
  • Partiden Partiye Değişkenlik: Farklı partiler arasındaki fiksasyon ve gömme protokollerindeki farklılıklar, sonuçlarda önemli değişkenliğe yol açarak çalışmalar arasındaki karşılaştırmaları zorlaştırabilir.
  • Depolama Sorunları: FFPE bloklarının uzun süreli depolanması, zaman içinde ek bozulmaya ve nükleik asit bütünlüğünün kaybına yol açarak arşiv örneklerinin retrospektif çalışmalar için uygulanabilirliğini etkileyebilir.

Optimize edilmiş protokollerin kullanılması, numunelerin dikkatli bir şekilde işlenmesi ve gelişmiş tekniklerin uygulanması, FFPE dokularından elde edilen verilerin kalitesini ve güvenilirliğini artırmaya yardımcı olur.

FFPE ve donmuş doku arasındaki fark nedir?

FFPE (Formalin-Sabit, Parafin Gömülü) doku, dokuyu sabitlemek için formalin kullanılarak korunur ve daha sonra parafin mumuna gömülür, bu da doku morfolojisini korurken oda sıcaklığında uzun süreli depolamaya izin verir. Buna karşılık, donmuş doku, nükleik asitlerin ve proteinlerin bütünlüğünü daha iyi koruyan ancak çok düşük sıcaklıklarda depolama gerektiren dondurma ile hızla korunur.

FFPE gömme için hangi kimyasallar kullanılır?

FFPE gömme için kullanılan kimyasallar normalde sabitleme için formalin ve gömme için parafin mumu içerir. FFPE gömme için, dokular tipik olarak  (h/h) nötr tamponlu formalin (FA) veya paraformaldehit tozundan yapılmış taze hazırlanmış %4 (a/h) formaldehit çözeltisi (PFA) kullanılarak sabitlenir. Sudaki bir formaldehit çözeltisi olan formalin, doku morfolojisini korumak ve aşırı çapraz bağlanmayı önlemek için nötr bir pH'a tamponlanır. Paraformaldehit bazlı çözelti ayrıca proteinleri çapraz bağlayarak etkili fiksasyon sağlar, böylece daha sonra parafin mumuna gömülmek üzere doku yapısını stabilize eder. Bu kimyasallar, fiksasyon ve gömme işlemi sırasında doku bütünlüğünü ve morfolojisini korumak için gereklidir.

FFPE örneklerinden parafin nasıl çıkarılır?

FFPE örneklerinden parafini çıkarmak için, doku kesitleri tipik olarak bir dizi ksilen yıkamasına ve ardından kademeli bir dizi alkol ve son olarak su yoluyla rehidrasyona tabi tutulur. Ksilen oldukça toksik olduğundan, solunum sorunları, cilt tahrişi ve tekrarlanan maruz kalma ile potansiyel uzun vadeli etkiler gibi sağlık riskleri oluşturduğundan, ultrasonik parafin giderimi birçok laboratuvarda umut verici bir alternatif olarak ortaya çıkmaktadır. Bu yöntem, ksilen gibi toksik çözücülere ihtiyaç duymadan parafini verimli ve güvenli bir şekilde çıkarmak için yoğun ultrasonik dalgalar kullanır, böylece laboratuvar personeli için riski azaltır ve daha güvenli bir çalışma ortamı yaratır.

İyi bir FFPE numune kalitesi için dokularımı ne kadar süre sabitlemeliyim?

Fiksasyon süresi için genel öneriler tipik olarak doku örneklerinin 24 ila 48 saat boyunca formalin içinde sabitlenmesini önerir. Bu süre genellikle doku morfolojisini ve hücresel yapıları korumak için yeterlidir ve aşırı fiksasyonu en aza indirir, bu da nükleik asitlerin ve proteinlerin aşırı çapraz bağlanmasına ve bozulmasına yol açabilir. Bununla birlikte, optimum fiksasyon süresi, dokunun boyutuna ve tipine bağlı olarak değişebilir ve daha küçük veya daha hassas numuneler daha kısa fiksasyon süreleri gerektirir. Aşağı akış moleküler analizlerini karmaşıklaştırabilecek uzun süreli fiksasyondan kaçınırken, doku otolizini ve bozulmasını önlemek için yeterli fiksasyonu dengelemek çok önemlidir.

Sürecinizi konuşmanızdan memnuniyet duyarız.

İletişime geçelim.