การสกัดเบต้ากลูแคนจากเห็ดเพื่อการทดสอบในห้องปฏิบัติการหรือการผลิตเกี่ยวข้องกับการรวมกันของการสับบดหรือบดเห็ดการสกัดด้วยอัลตราโซนิกและการตกตะกอนของเบต้ากลูแคน นี่คือโครงร่างที่เรียบง่ายของกระบวนการสกัดเบต้ากลูแคน พร้อมกับตัวอย่างปริมาตรและน้ําหนักสําหรับการทดลองในห้องปฏิบัติการ โปรดทราบว่าเงื่อนไขและการวัดเฉพาะอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดของเห็ดและความบริสุทธิ์ของเบต้ากลูแคนที่ต้องการ

วัสดุและอุปกรณ์

• เห็ด (เช่น เห็ดสับหรือหั่นบาง ๆ 100 กรัม)
• น้ํากลั่นเย็น (เช่น 500 มล.)
• เครื่องปั่นหรือเครื่องบด
• บีกเกอร์แก้วหรือขวดแก้ว
• กระดาษกรองหรือการตั้งค่าการกรองสูญญากาศ
• เครื่องหมุนเหวี่ยง (อุปกรณ์เสริม)
• แอลกอฮอล์ (เช่น เอทานอล) สําหรับการตกตะกอน
• ตู้เย็น
• เตาอบแห้ง

โปรโตคอลการสกัดเบต้ากลูแคน

1. บดหรือบดเห็ด (เช่น Chaga หรือ Lion’ เห็ดแผงคอ) เป็นอนุภาคหยาบประมาณ 1 ถึง 3 มิลลิเมตร ตัวอย่างเช่นใช้อนุภาคเห็ดแห้ง 100 กรัม
2. จากนั้นเพิ่มอนุภาคเห็ดลงในบีกเกอร์แก้วหรือขวด
3. จากนั้นเติมน้ํากลั่น 500 มล. ลงในบีกเกอร์ที่มีอนุภาคเห็ดที่จะสกัด อัตราส่วนน้ําต่อเห็ดอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดของเห็ดและขนาดอนุภาคที่เฉพาะเจาะจง
4. หลังจากที่คุณกวนสารละลายแล้ว ให้ผสมสารผสมโดยใช้โฮโมจีไนเซอร์ในห้องปฏิบัติการอัลตราโซนิก (เช่น UP400St ที่มีโซโนโทรด 22 มม. ที่แอมพลิจูด 100% หรือ UP200Ht พร้อมโซโนโทรด 14 มม. ที่แอมพลิจูด 100%) และรักษาอุณหภูมิให้ต่ํากว่า 90°C อุณหภูมิที่ต่ํากว่าช่วยรักษาสารประกอบที่ไวต่อความร้อนเช่นเบต้ากลูแคนในระหว่างการสกัด Sonicate ประมาณ 5 ถึง 10 นาทีเมื่อใช้ UP400St และ 10 ถึงนาทีเมื่อใช้ UP200Ht ตามลําดับ โปรดทราบว่าอุณหภูมิและเวลาในการสกัดอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับพลังงานอัลตราโซนิกที่ใช้ แน่นอนว่าปริมาณที่มากขึ้นจะต้องใช้เวลาในการแยกเสียงนานขึ้น
5. กรองส่วนผสม sonicated ผ่านกระดาษกรองหรือใช้การตั้งค่าการกรองสูญญากาศเพื่อแยกของเหลว (ที่มีเบต้ากลูแคนที่สกัดแล้ว) ออกจากเศษเห็ดที่เป็นของแข็ง
6. จากนั้นตกตะกอนเบต้ากลูแคนจากของเหลวโดยเติมแอลกอฮอล์ (เช่นเอทานอล) โดยทั่วไปคุณสามารถใช้แอลกอฮอล์ 2-3 ปริมาตรสําหรับการตกตะกอน
7. หลังจากนั้นเก็บส่วนผสมไว้ในตู้เย็นเป็นเวลาหลายชั่วโมงเพื่อให้เบต้ากลูแคนตกตะกอน
8. หลังจากการตกตะกอนคุณสามารถ decant ของเหลวอย่างระมัดระวังและรวบรวมตะกอนเบต้ากลูแคน
9. สุดท้ายให้แห้งเบต้ากลูแคนในเตาอบที่อุณหภูมิต่ํา (เช่น 40-50 °C) จนกว่าแอลกอฮอล์ทั้งหมดจะถูกลบออกและคุณได้รับผงแห้ง

เห็ดแสดงการเปลี่ยนแปลงในลักษณะของพวกเขา ดังนั้นกระบวนการสกัดเบต้ากลูแคนอาจแตกต่างกันไปตามปัจจัยต่างๆเช่นเห็ดชนิดเฉพาะสถานะของเห็ด (แห้งหรือสด) ขนาดอนุภาคและอุณหภูมิการสกัด เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพขั้นตอนการสกัดของคุณให้พิจารณาทดลองกับพารามิเตอร์ต่างๆรวมถึงการเปลี่ยนแปลงอัตราส่วนของแข็งต่อของเหลวการปรับอุณหภูมิการสํารวจตัวทําละลายต่างๆและการทดสอบระยะเวลา sonication ที่หลากหลายและการตั้งค่าแอมพลิจูด

การสกัดด้วยเอนไซม์ช่วยด้วยอัลตราโซนิกของเบต้ากลูแคน

การสกัดเอนไซม์ด้วยอัลตราโซนิกเป็นวิธีการที่ใช้ในการสกัดเบต้ากลูแคนจากเห็ดโดยใช้เอนไซม์และคลื่นอัลตราโซนิกร่วมกัน กระบวนการนี้ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการสกัดโดยการทําลายผนังเซลล์ของเห็ดและอํานวยความสะดวกในการปล่อยเบต้ากลูแคน

การขยายขนาดของการสกัดเบต้ากลูแคนจากเห็ด

เมื่อคุณสร้างโปรโตคอลการสกัดเบต้ากลูแคนที่ตรงตามความต้องการของคุณแล้วการขยายกระบวนการสกัดอาจเป็นความพยายามที่ตรงไปตรงมา

การขยายขนาดการสกัดแบทช์

หากคุณวางแผนที่จะขยายขนาดโดยใช้วิธีการสกัดแบบแบทช์เราขอแนะนําให้เพิ่มปริมาณแบทช์ในขณะที่รักษาอัตราส่วนของแข็งต่อของเหลวและพารามิเตอร์อื่น ๆ ทั้งหมดให้คงที่ หากคุณยังคงใช้ homogenizer อัลตราโซนิกเดียวกันให้แน่ใจว่าได้เพิ่มเวลา sonication ตามสัดส่วน สําหรับแบทช์ที่เกิน 1 ลิตรคุณอาจต้องการพิจารณาใช้เครื่องกวนช้าเพื่อรักษาสารแขวนลอยของอนุภาคและปรับปรุงความสม่ําเสมอของการสกัด ภาพด้านล่างแสดงการตั้งค่าการสกัดแบบแบทช์ขนาด 8 ลิตรโดยใช้เครื่องทําโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิก UP400St ร่วมกับเครื่องกวนในห้องปฏิบัติการ

การสกัดเห็ดแบบอินไลน์

สําหรับผู้ที่สนใจในการสกัดเบต้ากลูแคนจํานวนมากจากเห็ดอย่างต่อเนื่อง Hielscher Ultrasonics นําเสนอเครื่องปฏิกรณ์เซลล์ไหลที่ออกแบบมาสําหรับการสกัดวัสดุทางพฤกษศาสตร์ หากสิ่งนี้มีผลกับคุณเราขอแนะนําให้คุณติดต่อเราโดยตรงเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติม ทีมเทคนิคของเรายินดีที่จะช่วยเหลือในการพิจารณาการตั้งค่าที่เหมาะสมที่สุดสําหรับความต้องการเฉพาะของคุณ อย่างไรก็ตามการทําการทดลองระดับห้องปฏิบัติการที่กล่าวถึงก่อนหน้านี้กับสายพันธุ์เห็ดเฉพาะของคุณอาจมีค่ามากในการทําความเข้าใจข้อกําหนดของกระบวนการที่แม่นยํา ภาพด้านล่างแสดงเครื่องปฏิกรณ์เซลล์ไหลขนาดใหญ่ที่มีโฮโมจีไนเซอร์อัลตราโซนิก UIP4000hdT สําหรับการสกัดเบต้ากลูแคนที่สารละลายเห็ดและตัวทําละลายประมาณ 50 ถึง 200 ลิตรต่อชั่วโมง

ความเข้มข้นของเบต้ากลูแคนเชิงประจักษ์ของสายพันธุ์เห็ด

ด้านล่างนี้คุณจะพบรายการความเข้มข้นของเบต้ากลูแคนเชิงประจักษ์ที่สกัดจากเห็ดสายพันธุ์ต่างๆ

สายพันธุ์เห็ด	เบต้ากลูแคน (% น้ําหนัก)
ปลวก fuliginosus R. Heim	1%
Boletus ยักษ์ใหญ่ R. Heim	3%
Russula densifolia Secr. อดีต Gillet	25%
Russula cyanoxantha (Schaeff.) Fr.	29%
Russula alboareolata Hongo	42%
Russula emetica (Schaeff.) Pers.	10%
Russula delica Fr.	38%
Pycnoporus cinnabarinus (Jacq.) พี.	35%
Amanita hemibapha (เบิร์ค. & บรูม) แซค.	5%
มุม Amanita princeps & บาส	9%
Amanita caesarea (Scop.) Pers.	4%
Heimiella retispora (แพท. & C.F. Baker) Boedijn	19%
Cortinarius claricolor var. turmalis (Fr.) ควอดร์	13%
Termitomyces tylerianus Otieno	12%
Termitomyces microcarpus (เบิร์ค. & บรูม) R. Heim	8%
Termitomyces eurhizus (Berk.) R. Heim	7%
Polyporellus varius (Pers.) P. Karst.	2%
Pycnoporus coccineus (Fr.) Bondartsev & นักร้อง	45%
Lentinus squarrosulus Mont.	2%
Daedaleopsis confragosa (โบลตัน) J. Schröt	3%
Pycnoporus sanguineus (L.) Fr.	35%
Amanita hemibapha (เบิร์ค. & บรูม) แซค.	5%
Amanita virgineoides บาส	1%
Agaricus silvaticus Schaeff	3%
คลอโรฟิลลัมโมลิบดีส (G. Mey.) แมสซี	3%
เห็ดหลินจือ (Curtis) P. Karst.	33%
rugosum Amauroderma (บลูม) & T. Nees) ทอร์เรนด์	4%
Suillus bovinus var. bovinus (Pers.) คุนตเซ	1%
Clitocybe suaveolens (Schumach.) P. Kumm. S	9%
Cleroderma verrucosum (กระทิง) Pers.	9%
Heimiella retispora (แพท. & ซี.เอฟ.เบเกอร์)	19%
Lentinula edodes (Berk.) เพ็กเลอร์	34%
Pycnoporus cinnabarinus (Jacq.) พี.	35%

ความเข้มข้นของเบต้ากลูแคนของเห็ดป่า ที่มา: Boonyanuphap, Jaruntorn & หรรษาสวัสดิ์, ชนิดา. (2558). (2553). การกระจายเชิงพื้นที่ของเบต้ากลูแคนที่มีชุมชนเห็ดป่าในป่าแห้งกึ่งเขตร้อน, ประเทศไทย. ความหลากหลายของเชื้อรา 46. 29-42. 10.1007/ส 13225-010-0067-8.