Hielscher Ultrasonics
Vi diskuterar gärna din process.
Ring oss: +49 3328 437-420
Maila oss: info@hielscher.com

Ultraljudstillämpningar i MonkeyPox Virus

Ultraljud är en viktig bearbetningsmetod för isolering av apkoppsvirus (MPXV) från analytiska prover, för virus-DNA-fragmentering samt vid tillverkning av apkoppsvaccin. För provberedning före diagnostik och analys (PCR, ELISA etc.) används ultraljud för att lysera celler för att frigöra apkoppsviruset från cellens inre och / eller för att fragmentera DNA. Inom vaccinproduktion sträcker sig applikationerna från förberedelse av viruspartiklar/DNA, inkapsling i läkemedelsbärare och formulering av inokulat.
Nedan hittar du detaljerad information om provberedning av ultraljudsapkoppsvirus samt ultraljudsassisterad MPXV-vaccinproduktion.

 

Vad du hittar på den här sidan:

Begäran om information




Observera vår integritetspolicy.




Högpresterande ultraljudsapparater är ett kritiskt bearbetningsverktyg vid produktion av många vacciner.

Detta system med 2x 1kW ultraljudsapparater för kontinuerlig flödesdrift är installerat i en vaccinproduktionsanläggning.

Ultraljudslys och DNA-fragmentering före polymeraskedjereaktion (PCR)

En infektion med apkoppsvirus detekteras genom nukleinsyraamplifieringstestning (NAAT), med hjälp av realtids- eller konventionell polymeraskedjereaktion (PCR), för detektion av unika sekvenser av viralt DNA. Provet (t.ex. från nasofarynxbyte eller hudbiopsier) innehåller viruset i celler.
För analys måste viruset frisättas från cellerna och virusets DNA måste fragmenteras för PCR.

Ultraljud lys:

Ultraljudsapparat UP200Ht med mikrospets S26d2 för ultraljudslys av biologiska proverUltraljud cell disruption / lys är en pålitlig och effektiv metod för att isolera virus från cellprover och därmed en föredragen teknik framför kemiska medel, såsom lysozym, proteinas K och olika rengöringsmedel som alternativt används för att uppnå celllys och frisättning av DNA.
Användningen av sådana kemiska reagenser kräver dock tidskrävande provberedning i flera steg före PCR-analys för att förhindra hämning av PCR-reaktionen. Eftersom PCR-hämmare påverkar effektiviteten av amplifiering kan små variationer av mängden inhibitorer som inte avlägsnas leda till stora variationer i PCR-produktförstärkningen (Diaco, 1995).
Fördelen med ultraljud för lys är att fullständig störning av cellulära strukturer och frisättning av DNA utan behov av lysering reagenser och tidskrävande provberedning är önskvärda. (jfr Fykse et al., 2003)

Fragmentering av ultraljud DNA:

Ultraljud DNA-fragmentering är enkel och pålitlig eftersom den producerar DNA-fragment som är justerbara i längd (baspar, bp). Med hjälp av ultraljud kan DNA effektivt fragmenteras till den avsedda DNA-längden. Exakt kontroll över ultraljudsparametrar och sofistikerade kylningsalternativ förhindrar DNA-nedbrytning.
Läs mer om DNA-fragmentering med ultraljud!

 

Videon visar ultraljudsprovberedningssystemet UIP400MTP, vilket möjliggör tillförlitlig provberedning av alla vanliga multibrunnsplattor med hjälp av ultraljud med hög intensitet. Typiska tillämpningar av UIP400MTP inkluderar celllys, DNA-, RNA- och kromatinskjuvning samt proteinextraktion.

Ultraljudsapparat UIP400MTP för ultraljudsbehandling med flera brunnar

Miniatyr av video

Begäran om information




Observera vår integritetspolicy.




Ultraljudstillämpningar i vaccin mot apkoppsvirus

Ultraljud används för att producera vacciner som vaccin mot apkoppor. De vacciner som används mot apkoppsviruset är för närvarande levande virusvacciner. Nyutvecklade vacciner kan komma att använda andra plattformar, t.ex. DNA-baserade vacciner som för närvarande innehåller ett modifierat Vaccinia Ankara viurs, ett försvagat, icke-replikerande orthopoxvirus. Den innehåller också Tris (tris-aminometan) och natriumklorid. Vaccinet kan också innehålla små mängder DNA och protein från fibroblastceller från kycklingembryon, som används för att odla vaccinviruset, bensonas och antibiotikaföreningar som gentamicin och ciprofloxacin.

Ultraljudshomogenisering används vid produktion av levande försvagade virusvacciner, DNA-vacciner, multivalenta DNA-cocktails, mRNA-vacciner, rekombinanta proteinvacciner, virusliknande partikelvacciner, etc.

Tillämpningarna av ultraljud i vaccinproduktion sträcker sig från

  • Spridning av viruspartiklar och agens
  • emulgering
  • Inaktivering av virus
  • formulering av läkemedelsbärare (NLC, SLN)
  • inkapsling
  • Upplösning av medel
  • Beredning av adjuvans
  • Avgasning / Avluftning

 

Du kan hitta mer djupgående information om ultraljudsapplikationer för förbättrad vaccintillverkning!

Protokoll för ultraljudsisolering av apkoppsviruset

Forskargruppen i Stittelaar (2005) använde ultraljudslys för att frigöra apkoppsviruset från tillväxtvärdcellkulturen samt från celler som erhållits via halsbyten från infekterade primater.

Förberedelse av vaccin mot apkoppor:

Apkoppsvirus odlades på fibroblastceller från kycklingembryon som är specifika patogenfria. Efter inkubation i 1 till 2 dagar skördades virus-cellsuspensionen genom en omgång frys-upptining och koncentrerades sedan genom centrifugering. Pelleten återsuspenderades och utsattes för flera omgångar av ultraljudshomogenisering.

Isolering av apkoppsvirus från vaccinerade makaker:

Proverna frystes upp tre gånger och sonikerades i en ultraljuds-CupHorn. Två spädningar (1:10 och 1:100) i transportmedium kompletterat med 1 % fetalt bovint serum användes för att inokulera Vero-cellmonolager i plattor med sex brunnar. Efter 1 timmes inkubation vid 37 °C avlägsnades inokuleringen och ersattes med odlingsmedium kompletterat med 1 % fetalt bovint serum. Monolagren odlades i 5 dagar vid 37°C och färgades med en kristallviolett lösning.
(jfr Stittelaar et al., 2005)

I den här videon visar vi dig ett ultraljudssystem på 2 kilowatt för inline-drift i ett rensbart skåp. Hielscher levererar ultraljudsutrustning till nästan alla industrier, såsom den kemiska industrin, läkemedel, kosmetika, petrokemiska processer samt för lösningsmedelsbaserade extraktionsprocesser. Detta rensningsbara skåp i rostfritt stål är designat för drift i farliga områden. För detta ändamål kan det förseglade skåpet rensas av kunden med kväve eller frisk luft för att förhindra att brandfarliga gaser eller ångor kommer in i skåpet.

2x 1000 watt ultraljudsapparater i rensbart skåp för installation i farliga områden

Miniatyr av video

Ultraljudsapparater för virusanalys och vaccinproduktion

Hielscher Ultrasonics breda produktportfölj erbjuder den perfekta ultraljudsapparaten för forskning och analytiska laboratorier samt för industriell vaccintillverkning.
Hielscher Ultrasonics är specialiserat på design, tillverkning och distribution av högpresterande ultraljudsapparater och sono-bioreaktorer för användning i forsknings- och analyslaboratorier samt för implementering i industriell vaccinproduktion (t.ex. Vacciner, Api).
Exakt kontroll över ultraljudsprocessparametrarna av Hielscher Ultrasonics' Intelligent programvaraUltraljudsbehandling kan tillämpas på öppna kärl, slutna kontinuerligt omrörda reaktorer och kontinuerliga genomströmningsreaktorer. Alla delar av ultraljudssystemen, som kommer i kontakt med det flytande mediet, är gjorda av rostfritt stål, titan eller glas. Autoklaverbara delar och sanitetskopplingar säkerställer produktionen under Tillstånd av farmaceutisk kvalitet.
Automatisk dataregistrering: Intelligent programvara registrerar parametrarna för ultraljudsbehandling processen automatiskt på det integrerade SD-minneskortet. Den exakta kontrollen av alla processparametrar säkerställer reproducerbarhet, Standardisering av produktionenoch underlättar uppfyllandet av säkerhetsstandarder för farmaceutiska produkter.
Hielscher Ultrasonics’ Ultraljudsprocessorer är mycket tillförlitliga och kan styras exakt. Alla industriella ultraljudsapparater kan justeras för att leverera hela intervallet från lägre till mycket höga amplituder. Robustheten hos Hielschers ultraljudssystem möjliggör 24/7 drift under tung belastning och i krävande miljöer.

Tabellen nedan ger dig en indikation på den ungefärliga bearbetningskapaciteten hos våra ultraljudsapparater:

Batchvolym Flöde Rekommenderade enheter
Multi-brunnar / mikrotiterplattor n/a UIP400MTP
1 till 500 ml 10 till 200 ml/min UP100H
10 till 2000 ml 20 till 400 ml/min UP200Ht, UP400St
0.1 till 20L 0.2 till 4L/min UIP2000hdT
10 till 100L 2 till 10L/min UIP4000hdT
n/a 10 till 100 L/min UIP16000
n/a Större kluster av UIP16000

Kontakta oss! / Fråga oss!

Be om mer information

Använd formuläret nedan för att begära ytterligare information om ultraljudsprocessorer, applikationer och pris. Vi diskuterar gärna din process med dig och erbjuder dig ett ultraljudssystem som uppfyller dina krav!









Observera våra integritetspolicy.




Ultraljudshomogenisatorer är tillförlitliga för DNA-klippning

Ultraljud DNA-klippning
Anpassad från Jkwchui under CC-BY-SA.03



Litteratur / Referenser

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Fakta som är värda att veta

apkoppsvirus

Apkoppor (MPV, MPXV eller hMPXV) är en art av dubbelsträngat DNA-virus som orsakar en viral zoonotisk sjukdom. Denna sjukdom är känd som apkoppsinfektion och kan förekomma hos människor och djur. Den tillhör släktet Orthopoxvirus i familjen Poxviridae. Apkoppsvirus är ett av de humana orthopoxvirusen tillsammans med variola (VARV), kokoppor (CPX) och vaccinia (VACV) virus. Orthopoxvirus karakteriseras av stora tegelformade viruspartiklar som innehåller ett dubbelsträngat DNA-genom på cirka 200 000 bp.

ELISA-analys

ELISA står för Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay och är en märkt immunanalys som anses vara guldstandarden för immunanalyser. ELISA är ett immunologiskt test, uppskattat för sin höga diagnostiska känslighet, som används för att detektera och kvantifiera molekyler, inklusive antikroppar, antigener, proteiner, glykoproteiner och hormoner. Principen för ELISA bygger på en interaktion mellan antigen och antikropp. Genom denna antigen-antikroppsinteraktion binder de specifika antikropparna till sitt målantigen. Först när interaktionen sker kan substratet binda till enzymet och en efterföljande substratomvandling kan observeras, vilket innebär att ett positivt resultat erhålls.


Högpresterande ultraljud! Hielschers produktsortiment täcker hela spektrumet från den kompakta laboratorieultraljudsapparaten över bänkenheter till fullindustriella ultraljudssystem.

Hielscher Ultrasonics tillverkar högpresterande ultraljudshomogenisatorer från labb till industriell storlek.

Vi diskuterar gärna din process.

Låt oss ta kontakt.