Ultraljud applikationer i MonkeyPox Virus

Ultraljud är en viktig bearbetningsmetod för isolering av monkeypox-viruset (MPXV) från analytiska prover, för virus-DNA-fragmentering samt vid tillverkning av monkeypox-vaccin. För provberedning före diagnostik och analys (PCR, ELISA etc.) ultraljud används för att lysera celler för att frigöra monkeypox-viruset från cellens inre och / eller för att fragmentera DNA. Vid vaccinproduktion sträcker sig applikationerna från viruspartikel / DNA-beredning, inkapsling i läkemedelsbärare och formulering av inokula.
Nedan hittar du detaljerad information om ultraljud monkeypox virus provberedning samt ultraljud assisterad MPXV-vaccinproduktion.

 

Vad du hittar på den här sidan:

Informationsförfrågan




Notera vår Integritetspolicy.


Högpresterande ultrasonicators är ett kritiskt bearbetningsverktyg vid produktion av många vacciner.

Detta system av 2x 1kW ultrasonicators för kontinuerlig flödesdrift installeras i en vaccinproduktionsanläggning.

Ultraljud lys och DNA-fragmentering före polymeraskedjereaktion (PCR)

En monkeypox-virusinfektion detekteras genom nukleinsyraförstärkningstestning (NAAT), med användning av realtid eller konventionell polymeraskedjereaktion (PCR), för detektion av unika sekvenser av viralt DNA. Provet (t.ex. från nasofaryngeal swap eller hudbiopsier) innehåller viruset i celler.
För analys måste viruset frigöras från cellerna och virus-DNA måste fragmenteras för PCR.

Ultraljud Lysis:

Ultrasonicator UP200Ht med microtip S26d2 för ultraljud lys av biologiska proverUltraljud cellstörning / lys är en pålitlig och effektiv metod för att isolera virus från cellprover och därmed en föredragen teknik framför kemiska medel, såsom lysozym, proteinas K och olika tvättmedel som alternativt används för att uppnå celllys och frisättning av DNA.
Användningen av sådana kemiska reagenser kräver dock tidskrävande provberedning i flera steg före PCR-analys för att förhindra hämning av PCR-reaktionen. Eftersom PCR-hämmare påverkar effektiviteten av förstärkning kan små variationer av mängden hämmare som inte avlägsnas leda till stora variationer i PCR-produktförstärkningen (Diaco, 1995).
Fördelen med ultraljud för lys är att fullständig störning av cellulära strukturer och frisättning av DNA utan behov av lyserande reagens och tidskrävande provberedning är önskvärda. (jfr Fykse m.fl., 2003)

Ultraljud DNA-fragmentering:

Ultraljud DNA-fragmentering är enkel och pålitlig som producerar DNA-fragment avstämbara i längd (basepairs, bp). Med hjälp av ultraljud kan DNA effektivt fragmenteras till den riktade DNA-längden. Exakt kontroll över ultraljudsparametrar och sofistikerade kylalternativ förhindrar DNA-nedbrytning.
Läs mer om ultraljud DNA-fragmentering!

 

Videon visar ultraljud provberedningssystemet UIP400MTP, vilket möjliggör tillförlitlig provberedning av alla standard multi-brunnsplattor med högintensiv ultraljud. Typiska tillämpningar av UIP400MTP inkluderar celllys, DNA, RNA och kromatinspjuvning samt proteinutvinning.

Ultrasonicator UIP400MTP för multi-well platta ultraljudsbehandling

Informationsförfrågan




Notera vår Integritetspolicy.


Ultraljud applikationer i Monkeypox Virus Vaccin

Ultraljud används för att producera vacciner såsom monkeypox vacciner. Vacciner som används mot monkeypox-viruset är för närvarande levande virusvacciner. Nyutvecklade vacciner kan använda andra plattformar som DNA-baserade Den innehåller för närvarande en modifierad Vaccinia Ankara-viurs, ett försvagat, icke-replikerande ortokoppsvirus. Den innehåller också Tris (tris-aminometan) och natriumklorid. Vaccinet kan också innehålla små mängder DNA och protein från kycklingembryon fibroblastcellerna, som används för att odla vaccinviruset, bensonas och antibiotikaföreningar såsom gentamicin och ciprofloxacin.

Ultraljudshomogenisering används vid produktion av levande försvagade virusvacciner, DNA-vacciner, multivalenta DNA-cocktails, mRNA-vacciner, rekombinanta proteinvacciner, virusliknande partikelvacciner etc.

Tillämpningarna av ultraljud i vaccinproduktion sträcker sig från

  • spridning av viruspartiklar och virusmedel
  • emulgering
  • inaktivering av virus
  • läkemedelsbärarformulering (NLC, SLN)
  • Inkapsling
  • upplösning av medel
  • beredning av adjuvanser
  • Avgasning / De-Aeration

 

Du kan hitta mer djupgående information om ultraljudsapplikationer för förbättrad vaccintillverkning!

Protokoll för ultraljud isolering av Monkeypox Virus

Forskargruppen i Stittelaar (2005) använde ultraljudslys för att frigöra monkeypox-viruset från tillväxtvärdcellkulturen samt från celler som erhållits via halsbyten från infekterade primater.

Monkeypox vaccinberedning:

Monkeypox-virus odlades på specifika patogenfria kycklingembryemfibroblastceller. Efter inkubation i 1 till 2 dagar skördades viruscellssuspensionen genom en omgång frys-upptining och koncentrerades sedan genom centrifugering. Pelleten återsuspenderades och utsattes för flera omgångar av ultraljudshomogenisering.

Monkeypox Virusisolering från vaccinerade makaker:

Prover frys-tinades tre gånger och sonicated i en ultraljud CupHorn. Två utspädningar (1:10 och 1:100) i transportmedium kompletterat med 1% fetalt bovint serum användes för att inokulera Vero-cellmonolager i sexbrunnsplattor. Efter 1 timmes inkubation vid 37 °C avlägsnades inokula och ersattes med odlingsmedium kompletterat med 1 % fetalt bovint serum. Monolagren odlades i 5 dagar vid 37 ° C och färgades med en kristallviolett lösning.
(jfr Stittelaar m.fl., 2005)

I den här videon visar vi dig ett ultraljudssystem på 2 kilowatt för inline-drift i ett rensningsbart skåp. Hielscher levererar ultraljud utrustning till nästan alla industrier, såsom kemisk industri, läkemedel, kosmetika, petrokemiska processer samt för lösningsmedelsbaserade extraktionsprocesser. Detta rengöringsbara skåp i rostfritt stål är konstruerat för drift i farliga områden. För detta ändamål kan det förseglade skåpet rensas av kunden med kväve eller frisk luft för att förhindra att brandfarliga gaser eller ångor kommer in i skåpet.

2x 1000 watt ultrasonicators i rensningsskåp för installation i farliga områden

Ultrasonicators för virusanalys och vaccinproduktion

Hielscher Ultrasonics breda produktportfölj erbjuder den perfekta ultrasonicator för forskning och analytiska laboratorier samt för industriell vaccintillverkning.
Hielscher Ultrasonics är specialiserat på design, tillverkning och distribution av högpresterande ultrasonicators och sono-bioreaktorer för användning i forsknings- och analyslaboratorier samt för implementering i industriell vaccinproduktion (t.ex. Vacciner, Api).
Exakt kontroll över ultraljudprocessparametrarna av Hielscher Ultrasonics' intelligent programvaraUltraljudsbehandling kan appliceras på öppna kärl, stängda kontinuerligt omrörda reaktorer och kontinuerliga genomströmningsreaktorer. Alla delar av ultraljudssystemen, som kommer i kontakt med det flytande mediet, är gjorda av rostfritt stål, titan eller glas. Autoklaverbara delar och sanitetsbeslag säkerställer produktionen under villkor av läkemedelsklass.
Automatisk dataregistrering: Intelligent program vara registrerar parametrarna för ultraljudsbehandling processen automatiskt på den integrerade SD-minneskort. Den exakta styrningen av alla process parametrar säkerställer Reproducerbarhet, standardisering av produktionen, och underlättar uppfyllandet av säkerhetsstandarder för läkemedelsprodukter.
Hielscher Ultrasonics’ ultraljud processorer är mycket tillförlitliga och kan kontrolleras exakt. Alla industriella ultrasonicators kan justeras för att leverera hela intervallet från lägre till mycket höga amplituder. Robustheten hos Hielschers ultraljudssystem möjliggör 24/7 drift under tunga och i krävande miljöer.

Nedanstående tabell ger dig en indikation på hur mycket våra ultraljudsapparater kan hantera:

batch Volym Flödeshastighet Rekommenderade Devices
multi-well / microtiter plattor Ej tillämpligt UIP400MTP
1 till 500 ml 10 till 200 ml / min UP100H
10 till 2000 ml 20 till 400 ml / min Uf200 ः t, UP400St
0.1 till 20L 0.2 till 4L / min UIP2000hdT
10 till 100 liter 2 till 10 1 / min UIP4000hdT
Ej tillämpligt 10 till 100 l / min UIP16000
Ej tillämpligt större kluster av UIP16000

Kontakta oss! / Fråga oss!

Be om mer information

Använd formuläret nedan för att begära ytterligare information om ultraljudprocessorer, applikationer och pris. Vi kommer gärna att diskutera din process med dig och att erbjuda dig ett ultraljudssystem som uppfyller dina krav!









Observera att våra Integritetspolicy.


Ultraljud homogenisatorer är tillförlitliga för DNA-klippning

Ultraljud-DNA Shearing
Anpassad från Jkwchui under CC-BY-SA.03



Litteratur / Referenser

  • Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
  • Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidovudine in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
  • J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
  • Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
  • Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.

Fakta Värt att veta

Monkeypox Virus

Monkeypox (MPV, MPXV eller hMPXV) är en art av dubbelsträngat DNA-virus, vilket orsakar en viral zoonotisk sjukdom. Denna sjukdom är känd som monkeypox infektion och kan förekomma hos människor och djur. Det tillhör släktet Orthopoxvirus i familjen Poxviridae. Monkeypox-virus är ett av de mänskliga ortopoxvirusen tillsammans med variola (VARV), kokoppor (CPX) och vaccinia (VACV) virus. Orthopoxvirus kännetecknas av stora tegelformade viruspartiklar, innehållande ett dubbelsträngat DNA-genom på cirka 200 000 bp.

ELISA-analys

ELISA står för Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay och är en märkt immunoassay som anses vara guldstandarden för immunanalyser. ELISA är ett immunologiskt test, värderat för sin höga diagnostiska känslighet, används för att detektera och kvantifiera molekyler, inklusive antikroppar, antigener, proteiner, glykoproteiner och hormoner. Principen för ELISA är baserad på en antigen-antikroppsinteraktion. Genom denna antigen-antikroppsinteraktion binder de specifika antikropparna till dess målantigen. Endast när interaktionen äger rum kan substratet binda till enzymet och en efterföljande substratomvandling kan observeras, vilket innebär att ett positivt resultat erhålls.


Högpresterande ultraljud! Hielschers produktsortiment täcker hela spektrumet från den kompakta labb ultrasonicator över bänkenheter till fullindustriella ultraljudssystem.

Hielscher Ultrasonics tillverkar högpresterande ultraljud homogenisatorer från Labb till industriell storlek.