Ultraljud är en viktig bearbetningsmetod för isolering av monkeypox-viruset (MPXV) från analytiska prover, för virus-DNA-fragmentering samt vid tillverkning av monkeypox-vaccin. För provberedning före diagnostik och analys (PCR, ELISA etc.) ultraljud används för att lysera celler för att frigöra monkeypox-viruset från cellens inre och / eller för att fragmentera DNA. Vid vaccinproduktion sträcker sig applikationerna från viruspartikel / DNA-beredning, inkapsling i läkemedelsbärare och formulering av inokula.
Nedan hittar du detaljerad information om ultraljud monkeypox virus provberedning samt ultraljud assisterad MPXV-vaccinproduktion.

Vad du hittar på den här sidan:

• Ultraljud Lysis för Monkeypox Virus utvinning
• Ultraljud fragmentering av Monkeypox Virus DNA
• Ultraljud applikationer i MPXV-vaccinproduktion

Ultraljud lys och DNA-fragmentering före polymeraskedjereaktion (PCR)

En monkeypox-virusinfektion detekteras genom nukleinsyraförstärkningstestning (NAAT), med användning av realtid eller konventionell polymeraskedjereaktion (PCR), för detektion av unika sekvenser av viralt DNA. Provet (t.ex. från nasofaryngeal swap eller hudbiopsier) innehåller viruset i celler.
För analys måste viruset frigöras från cellerna och virus-DNA måste fragmenteras för PCR.

Ultraljud Lysis:

Ultraljud cellstörning / lys är en pålitlig och effektiv metod för att isolera virus från cellprover och därmed en föredragen teknik framför kemiska medel, såsom lysozym, proteinas K och olika tvättmedel som alternativt används för att uppnå celllys och frisättning av DNA.
Användningen av sådana kemiska reagenser kräver dock tidskrävande provberedning i flera steg före PCR-analys för att förhindra hämning av PCR-reaktionen. Eftersom PCR-hämmare påverkar effektiviteten av förstärkning kan små variationer av mängden hämmare som inte avlägsnas leda till stora variationer i PCR-produktförstärkningen (Diaco, 1995).
Fördelen med ultraljud för lys är att fullständig störning av cellulära strukturer och frisättning av DNA utan behov av lyserande reagens och tidskrävande provberedning är önskvärda. (jfr Fykse m.fl., 2003)

Ultraljud DNA-fragmentering:

Ultraljud DNA-fragmentering är enkel och pålitlig som producerar DNA-fragment avstämbara i längd (basepairs, bp). Med hjälp av ultraljud kan DNA effektivt fragmenteras till den riktade DNA-längden. Exakt kontroll över ultraljudsparametrar och sofistikerade kylalternativ förhindrar DNA-nedbrytning.
Läs mer om ultraljud DNA-fragmentering!

Ultraljud applikationer i Monkeypox Virus Vaccin

Vacciner som används mot monkeypox-viruset är för närvarande levande virusvacciner. Nyutvecklade vacciner kan använda andra plattformar som DNA-baserade Den innehåller för närvarande en modifierad Vaccinia Ankara-viurs, ett försvagat, icke-replikerande ortokoppsvirus. Den innehåller också Tris (tris-aminometan) och natriumklorid. Vaccinet kan också innehålla små mängder DNA och protein från kycklingembryon fibroblastcellerna, som används för att odla vaccinviruset, bensonas och antibiotikaföreningar såsom gentamicin och ciprofloxacin.

Ultraljudshomogenisering används vid produktion av levande försvagade virusvacciner, DNA-vacciner, multivalenta DNA-cocktails, mRNA-vacciner, rekombinanta proteinvacciner, virusliknande partikelvacciner etc.

Du kan hitta mer djupgående information om ultraljudsapplikationer för förbättrad vaccintillverkning!

Protokoll för ultraljud isolering av Monkeypox Virus

Forskargruppen i Stittelaar (2005) använde ultraljudslys för att frigöra monkeypox-viruset från tillväxtvärdcellkulturen samt från celler som erhållits via halsbyten från infekterade primater.

Monkeypox vaccinberedning:

Monkeypox-virus odlades på specifika patogenfria kycklingembryemfibroblastceller. Efter inkubation i 1 till 2 dagar skördades viruscellssuspensionen genom en omgång frys-upptining och koncentrerades sedan genom centrifugering. Pelleten återsuspenderades och utsattes för flera omgångar av ultraljudshomogenisering.

Monkeypox Virusisolering från vaccinerade makaker:

Prover frys-tinades tre gånger och sonicated i en ultraljud CupHorn. Två utspädningar (1:10 och 1:100) i transportmedium kompletterat med 1% fetalt bovint serum användes för att inokulera Vero-cellmonolager i sexbrunnsplattor. Efter 1 timmes inkubation vid 37 °C avlägsnades inokula och ersattes med odlingsmedium kompletterat med 1 % fetalt bovint serum. Monolagren odlades i 5 dagar vid 37 ° C och färgades med en kristallviolett lösning.
(jfr Stittelaar m.fl., 2005)

Ultrasonicators för virusanalys och vaccinproduktion

Hielscher Ultrasonics breda produktportfölj erbjuder den perfekta ultrasonicator för forskning och analytiska laboratorier samt för industriell vaccintillverkning.
Hielscher Ultrasonics är specialiserat på design, tillverkning och distribution av högpresterande ultrasonicators och sono-bioreaktorer för användning i forsknings- och analyslaboratorier samt för implementering i industriell vaccinproduktion (t.ex. Vacciner, Api).
Ultraljudsbehandling kan appliceras på öppna kärl, stängda kontinuerligt omrörda reaktorer och kontinuerliga genomströmningsreaktorer. Alla delar av ultraljudssystemen, som kommer i kontakt med det flytande mediet, är gjorda av rostfritt stål, titan eller glas. Autoklaverbara delar och sanitetsbeslag säkerställer produktionen under villkor av läkemedelsklass.
Automatisk dataregistrering: Intelligent program vara registrerar parametrarna för ultraljudsbehandling processen automatiskt på den integrerade SD-minneskort. Den exakta styrningen av alla process parametrar säkerställer Reproducerbarhet, standardisering av produktionen, och underlättar uppfyllandet av säkerhetsstandarder för läkemedelsprodukter.
Hielscher Ultrasonics’ ultraljud processorer är mycket tillförlitliga och kan kontrolleras exakt. Alla industriella ultrasonicators kan justeras för att leverera hela intervallet från lägre till mycket höga amplituder. Robustheten hos Hielschers ultraljudssystem möjliggör 24/7 drift under tunga och i krävande miljöer.

Nedanstående tabell ger dig en indikation på hur mycket våra ultraljudsapparater kan hantera: