Antikroppseluering genom ultraljudsbehandling med hjälp av ultraljudsbehandling med hög genomströmning

Affinitetskromatografi är en kraftfull teknik för proteinrening, som kräver ultraljudsassisterad icke-specifik eluering är en tillförlitlig provberedningsteknik för att erhålla antikroppar från affinitetskromatografi. Den effektiva och reproducerbara elueringen av målantikroppar bundna till affinitetsmatriser förbättras avsevärt genom ultraljudsbehandling. Den höggenomgripande platt-sonikator UIP400MTP är optimalt lämpad för att eluera höga provantal i 96-brunnars, mikrotiter- och multibrunnsplattor och underlättar antikroppsåterhämtning i affinitetskromatografi.

Hur underlättar ultraljudsbehandling eluering?

Med hjälp av ultraljudsintensifierad icke-specifik eluering kan laboratoriearbetare och forskare effektivt återvinna renade antikroppar från affinitetskromatografikolonner. Dessa renade antikroppar körs genom nedströmsapplikationer inom olika områden, såsom immunologi, bioteknik och medicinsk diagnostik.

Eluering är ett provberedningssteg som vanligtvis används för affinitetskromatografi: Affinitetskromatografi utnyttjar de mycket specifika interaktionerna mellan en målmolekyl (t.ex. en antikropp) och en ligand immobiliserad på en kromatografimatris. Detta möjliggör selektiv rening av målmolekylen från en komplex blandning med hjälp av molekylernas specifika bindningsaffinitet, t.ex. antikroppar.
Specifik bindning av antikroppar: Antikroppar renas ofta med affinitetskromatografi, där de selektivt binder till en ligand immobiliserad på kromatografihartset. Detta kan vara ett antigen, ett protein A/G eller någon annan molekyl som interagerar specifikt med antikroppen av intresse.
Eluering: Efter att ha bundit målantikroppen till matrisen innebär nästa steg att eluera (eller tvätta ut) den bundna antikroppen från hartset. Detta elueringssteg innebär vanligtvis att den specifika bindningen mellan antikroppen och liganden störs. Detta steg kan underlättas genom ultraljudsbehandling.
Ultraljudssond UP50H är en laboratoriehomogenisator som ofta används som cellstörare, dispergeringsmedel och emulgeringsmedel i laboratorier.Ultraljudsassisterad icke-specifik eluering: Till skillnad från specifika elueringsmetoder som endast stör interaktionen mellan antikropp och ligand, stör icke-specifika elueringsmetoder alla interaktioner på hartset, inklusive icke-specifika. Detta kan vara fördelaktigt när man hanterar starkt bundna föroreningar som kan störa reningsprocessen. Här kommer ultraljudsbehandling in i bilden! Ultraljudsvågor används för att generera kavitationsbubblor i elueringsbufferten. När dessa bubblor kollapsar nära hartsmatrisen producerar de intensiva lokala skjuvkrafter och mikroströmning. Denna mekaniska störning hjälper till att bryta de ospecifika interaktionerna mellan antikroppen och liganden, vilket underlättar elueringen av den bundna antikroppen från matrisen.

96-brunnsplattor och andra flerbrunnsplattor bearbetas bäst med hjälp av sonikator-UIP400MTP. Detta ultraljudssystem är idealiskt för lys, DNA-fragmentering och celllösningsbearbetning av prover med hög genomströmning.

Ultraljudsbehandling med hög genomströmning UIP400MTP underlättar elueringen av antikroppar och proteiner

Informationsförfrågan




Notera vår Integritetspolicy.


 

Denna handledning förklarar vilken typ av sonicator som är bäst för dina provberedningsuppgifter som lys, cellstörning, proteinisolering, DNA- och RNA-fragmentering i laboratorier, analys och forskning. Välj den perfekta ljudbehandlingstypen för din applikation, provvolym, provnummer och genomströmning. Hielscher Ultrasonics har den perfekta ultraljud homogenisator för dig!

Hur man hittar den perfekta Sonicator för cellstörningar och proteinutvinning i vetenskap och analys

Video miniatyr

 

Fördelarna med ultraljud eluering med hjälp av ultraljudsbehandling

Ultraljud eluering erbjuder flera fördelar, särskilt i samband med proteinreningstekniker såsom affinitetskromatografi.
Till exempel, ultraljudsbehandling utmärker sig alternativa metoder när det gäller proteinintegritet, återhämtning, renhet, mångsidighet och effektivitet. Dessa fördelar gör ultraljud eluering till ett föredraget val för proteinreningsprocesser, särskilt i applikationer där det är viktigt att upprätthålla proteinstruktur och aktivitet. Dessutom utmärker sig ultraljud eluering för sin enkelhet, effektivitet, mångsidighet och kompatibilitet med ett brett spektrum av proteiner och affinitetsmatriser. Genom att tillämpa ultraljudsvågor för att störa protein-matrisinteraktioner erbjuder ultraljudseluering en skonsam och snabb metod för proteinrening, vilket säkerställer höga återvinningshastigheter och bevarar proteinintegriteten för nedströmsapplikationer.

Skonsammare för proteinstrukturen: Eluering med lågt pH innebär användning av sura buffertar för att störa bindningen mellan målproteinet (t.ex. antikroppar) och affinitetsmatrisen. Exponering för lågt pH kan dock denaturera proteiner, vilket kan äventyra deras struktur och biologiska aktivitet. Däremot förlitar sig ultraljud eluering främst på mekanisk störning snarare än kemisk denaturering, vilket gör det skonsammare för proteinstrukturen. Detta är särskilt fördelaktigt vid rening av känsliga proteiner eller antikroppar som är känsliga för pH-förändringar.

  • Minskad risk för aggregering: Eluering med lågt pH kan öka risken för proteinaggregering på grund av proteinveckling och exponering av hydrofoba regioner. Aggregering kan leda till förlust av proteinaktivitet och svårigheter vid nedströmsbearbetning. Ultraljud eluering, som jämförelse, minimerar risken för aggregering genom att använda mekaniska krafter för att störa interaktioner mellan proteinet och affinitetsmatrisen utan att avsevärt förändra proteinets naturliga konformation.
  • Förbättrad återhämtning och renhet: Ultraljud eluering kan uppnå högre återvinningsgrader och renhetsnivåer jämfört med alternativa elueringsmetoder. Den mekaniska störning som ultraljud ger frigör effektivt bundna proteiner från affinitetsmatrisen samtidigt som icke-specifika interaktioner minimeras. Detta resulterar i förbättrad återvinning av målproteinet med minskad kontaminering från icke-specifikt bundna molekyler, vilket bidrar till högre renhet hos den eluerade fraktionen.
  • Bearbetning med högt dataflöde: Hielscher Ultrasonics erbjuder olika sonikatorer för ultraljudsassisterad proteinrening, eluering och biopanorering. Microtiter plate-sonicator UIP400MTP möjliggör massbearbetning av prover i 96-brunnar och andra multibrunnsplattor. VialTweeter är idealisk för problemfri, samtidig ultraljudsbehandling av upp till 10 rör såsom Eppendorf-flaskor under samma förhållanden. CupHorn är en mångsidig sonikator som är idealisk för flera rör, små bägare och andra kärl. Och naturligtvis är de klassiska sond-sond-sonikatorerna med mikrospetsar ett väletablerat labbverktyg för provberedning. Hielscher Ultrasonics produktsortiment har den perfekta ultraljudssonackan för ditt experiment setup och din provstorlek.
  • Mångsidighet och kompatibilitet: Ultraljud eluering är kompatibel med ett brett spektrum av proteiner och affinitetsmatriser, vilket ger mångsidighet i reningsapplikationer. Däremot kan eluering med lågt pH vara olämplig för vissa proteiner som är känsliga för sura förhållanden eller för affinitetsmatriser som är benägna att brytas ned eller läcka ut vid lågt pH. Ultraljudseluering ger ett skonsamt och universellt tillämpligt alternativ som kan skräddarsys för specifika reningsbehov utan att kompromissa med proteinintegritet eller matrisstabilitet.
  • Tid och effektivitet: Ultraljudseluering kräver vanligtvis kortare elueringstider jämfört med andra elueringsmetoder. Den snabba och effektiva frisättningen av bundna proteiner som underlättas av ultraljud minskar bearbetningstiden och ökar den totala reningseffektiviteten, vilket gör det till ett attraktivt alternativ för applikationer med hög genomströmning eller när tidskänsliga resultat krävs.
96-brunns Plate Sonicator UIP400MTP för celllys, DNA-extraktion, DNA-fragmentering, cellsolubilisering och proteinrening.

96-brunnars Plate Sonicator UIP400MTP för ultraljudsbehandling av flerbrunnsplattor, PCR- och ELISA-plattor

 

VialTweeter på ultraljud processorn UP200ST

VialTweeter ultraljudsbehandling för samtidig ultraljudsbehandling av 10 prover, t.ex. för att störa celler och extrahera proteiner

Ultraljudsassisterad biopanorering

Biopanorering är en kritisk teknik vid rening av antikroppar, särskilt när mycket specifika antikroppar för forskning eller medicinsk diagnostik måste erhållas. Biopanorering är en process där antikroppar isoleras från en blandning av antikroppar, det så kallade antikroppsbiblioteket.

Hur fungerar ultraljudsbiopanorering?

Det börjar med ett bibliotek av antikroppar, en blandning av olika antikroppar. Varje antikropp kännetecknas av sin egen unika form och specificitet. För analys och behandling måste specifika antikroppar som känner igen ett visst mål, t.ex. ett virus eller en cancercell, isoleras. Med hjälp av biopanorering kan dessa specifika antikroppar isoleras. Ultraljud hjälper till att underlätta biopanoreringsprocessen, vilket gör antikroppsreningen effektivare.

Från och med ett bibliotek av antikroppar visas antikropparna vanligtvis på ytan av en bakteriofag, jästcell eller annat displaysystem. Detta bibliotek representerar ett brett spektrum av antikroppar.
I det första steget exponeras detta bibliotek för din målmolekyl. Antikropparna som binder till målet fastnar, medan de andra tvättas bort. För att avlägsna de obundna antikropparna tvättas proverna flera gånger med en buffertlösning.

Nu har vi prover som bara innehåller bundna antikroppar. Detta innebär dock att antikropparna fortfarande är fästa vid deras displaysystem. För att frigöra dem måste interaktionen mellan antikropp och ligand brytas. Detta steg kallas eluering. Prover kan elueras med hjälp av en lösning som stör bindningen, t.ex. med hjälp av en specifik elueringsbuffert, en kaotropikum, sänkt pH-värde, applicering av värme etc. Dessa elueringstekniker förstör bindningen av antikroppar och ligander, men kan också försämra själva antikropparna. Det är därför ultraljudsbehandling används som alternativ teknik för att försiktigt ta bort antikropparna från deras mål.

Efter att ha slutfört elueringssteget erhåller vi renade antikroppar, redo att användas inom forskning, diagnostik eller terapi.

Biopanorering är en kraftfull teknik inom antikroppsrening och ultraljudseluering underlättar och intensifierar effektiviteten – vilket resulterar i högrenade, oskadade antikroppar. Ultraljudsbiopanorering gör det möjligt för forskare att isolera mycket specifika antikroppar från komplexa prover, vilket öppnar dörrar till ett brett spektrum av applikationer.

Ultraljudsbehandling för rening av antikroppar

Hielscher sonikatorer är väletablerade verktyg som används i de bästa forskningsanläggningarna över hela världen. Hielscher sonikatorer värderas för sin toppmoderna design och överlägsna prestanda och anses vara oumbärliga laboratorieverktyg inom bioteknik och molekylärbiologi. Hielscher Ultrasonics erbjuder ultraljudstekniker för enstaka prov samt provberedning med hög genomströmning, vilket underlättar effektiv rening av antikroppar och eluering av målbundna molekyler, och möjliggör effektiv biopanorering för att isolera specifika antikroppar med precision och hastighet.
I samband med rening av antikroppar utmärker sig Hielscher sonikatorer för att underlätta tvätt- och elueringsstegen genom att effektivt ta bort obundna antikroppar samtidigt som integriteten hos målbundna komplex bevaras. Deras exakta kontroll och skalbarhet möjliggör skräddarsydda bearbetningsförhållanden, vilket säkerställer optimala reningsresultat över ett brett spektrum av provvolymer och komplexiteter.
Hielscher sonikatorer representerar den tekniska innovationen inom ultraljudsbehandling, som erbjuder oöverträffade möjligheter för antikroppsrening, eluering, och biopanorering. Med sin precision, tillförlitlighet och användarvänlighet erbjuder de olika ultraljudssystemen optimal effektivitet och mångsidighet för biofarmaceutisk forskning, diagnostik och terapi.
Kontakta oss nu för att lära dig mer om Hielscher sonikatorer för antikroppsrening, eluering och biopanorering! Vår erfarna tekniska personal diskuterar gärna din antikroppsrelaterade applikation!

Varför Hielscher Ultrasonics?

  • hög effektivitet
  • Toppmodern teknik
  • Tillförlitlighet & Robusthet
  • Justerbar, exakt processtyrning
  • Batch & Inline
  • för valfri volym
  • intelligent programvara
  • smarta funktioner (t.ex. programmerbar, dataprotokoll, fjärrkontroll)
  • Enkelt och säkert att använda
  • lågt underhåll
  • CIP (clean-in-place)

Design, tillverkning och rådgivning – Kvalitet tillverkad i Tyskland

Hielscher ultrasonicators är kända för sina högsta kvalitets- och designstandarder. Robusthet och enkel användning möjliggör smidig integration av våra ultrasonicators i industrianläggningar. Tuffa förhållanden och krävande miljöer hanteras enkelt av Hielscher ultrasonicators.

Hielscher Ultrasonics är ett ISO-certifierat företag och lägger särskild vikt vid högpresterande ultrasonicators med state-of-the-art teknik och användarvänlighet. Naturligtvis är Hielscher ultrasonicators CE-kompatibla och uppfyller kraven i UL, CSA och RoHs.

Kontakta oss! / Fråga oss!

Be om mer information

Använd formuläret nedan för att begära ytterligare information om ultraljud processorer, applikationer och pris. Vi kommer gärna att diskutera din process med dig och erbjuda dig ett ultraljudssystem som uppfyller dina krav!









Observera att våra Integritetspolicy.


Videon visar ultraljud provberedningssystemet UIP400MTP, vilket möjliggör tillförlitlig provberedning av alla standard multi-brunnsplattor med högintensiv ultraljud. Typiska tillämpningar av UIP400MTP inkluderar celllys, DNA, RNA och kromatinspjuvning samt proteinutvinning.

Ultrasonicator UIP400MTP för multi-well platta ultraljudsbehandling

Video miniatyr

Jämförelse av ultraljudseluering vs traditionella elueringstekniker

  1. Gradient eluering: Vid gradienteluering reduceras bindningsstyrkan mellan målproteinet och affinitetsmatrisen gradvis genom att elueringsbuffertens sammansättning ändras. Detta kan innebära att man ändrar faktorer som pH, saltkoncentration eller koncentrationen av konkurrerande ligander. Gradienteluering möjliggör finjustering av elueringsbetingelser för att selektivt frigöra målproteinet samtidigt som icke-specifik bindning minimeras.
    Fördelar med ultraljudseluering: Ultraljud eluering erbjuder en snabbare och mer enhetlig frisättning av bundna proteiner jämfört med gradienteluering. Medan gradienteluering kräver noggrann optimering och övervakning av elueringsförhållanden, ger ultraljudseluering en enklare och effektivare metod för proteinåtervinning.
  2. Konkurrenskraftig eluering: Vid kompetitiv eluering introduceras en hög koncentration av en konkurrerande ligand i elueringsbufferten för att störa bindningen mellan målproteinet och affinitetsmatrisen. Den konkurrerande liganden konkurrerar med målproteinet om bindningsställen på matrisen, vilket förskjuter proteinet och släpper ut det i eluatet.
    Fördelar med ultraljudseluering: Ultraljudseluering erbjuder ett skonsammare och mer mångsidigt alternativ till konkurrenskraftig eluering. Kompetitiv eluering kan kräva användning av höga koncentrationer av kaotropa ämnen (dvs. ett lösningsmedel som stör vätebindningsnätverket mellan vattenmolekyler och minskar stabiliteten hos proteinernas naturliga tillstånd genom att försvaga den hydrofoba effekten) eller starka kemikalier, vilket kan påverka proteinets stabilitet och aktivitet. Däremot ger ultraljud eluering mekanisk störning utan behov av ytterligare kemiska medel, vilket bevarar proteinets integritet och säkerställer höga återvinningshastigheter.
  3. Temperaturinducerad eluering: Temperaturinducerad eluering innebär att temperaturen på elueringsbufferten ändras för att störa bindningen mellan målproteinet och affinitetsmatrisen. Detta kan uppnås genom att antingen öka eller minska temperaturen, beroende på den specifika protein-matrisinteraktionen.
    Fördelar med ultraljudseluering: Ultraljudseluering erbjuder en snabbare och mer kontrollerad metod för proteineluering jämfört med temperaturinducerade metoder. Medan temperaturinducerad eluering kan kräva exakt kontroll av temperaturgradienter och längre jämviktstider, ger ultraljudseluering omedelbar mekanisk störning, vilket resulterar i kortare elueringstider och förbättrad effektivitet.
  4. Enzymatisk eluering: Enzymatisk eluering använder specifika enzymer som klyver bindningarna mellan målproteinet och affinitetsmatrisen, vilket frigör proteinet i eluatet. Denna metod är särskilt användbar för proteiner som är tätt bundna till matrisen eller för applikationer som kräver exakt kontroll över elueringsförhållandena.
    Fördelar med ultraljudseluering: Ultraljud eluering erbjuder ett icke-enzymatiskt och kemikaliefritt alternativ till enzymatisk eluering. Medan enzymatisk eluering kan kräva optimering av enzymkoncentration, inkubationstid och pH-förhållanden, ger ultraljudseluering en enkel och universellt tillämplig metod för proteinåtervinning utan behov av ytterligare reagenser eller specialutrustning.
Sonicator för provberedning med hög genomströmning! Den UIP400MTP plattan sonikator underlättar lys, proteinextraktion, DNA-fragmentering och cellsolubilisering av biologiska prover i 96-brunnars plattor.

Plate sonicator UIP400MTP för alla 96-brunnars plattor, mikrotiterplattor och multi-brunnsplattor.



Litteratur / Referenser


Högpresterande ultraljud! Hielscher produktsortiment täcker hela spektrumet från den kompakta lab ultrasonicator över bänk-top enheter till fullindustriella ultraljud system.

Hielscher Ultrasonics tillverkar högpresterande ultraljud homogenisatorer från Labb till industriell storlek.


Vi diskuterar gärna din process.

Låt oss komma i kontakt.