Ултразвучна припрема серума богатог тромбоцитима

• Плазма богата тромбоцитима (PRP) је крвна плазма обогаћена тромбоцитима, која се користи за медицинске и естетске третмане.
• Ултразвучна лиза и кондиционирање представљају веома ефикасну методу припреме плазме богате тромбоцитима.
• Hielscher Ultrasonics нуди различите ултразвучне системе који одговарају захтевима обраде крви (нпр. за припрему у чистој соби и изван ње).

Серум богат тромбоцитима

Соникација је поуздана и једноставна метода лизе тромбоцита у аутологном крвном серуму ради ослобађања фактора раста. Фракције добијене из тромбоцита – познате и као аутологни кондиционирани серум (ACS) – користе се за репарацију ткива или естетске третмане. Да би се постигли оптимални резултати, PRP се обогаћује пре убризгавања.
За припрему плазме обогаћене факторима раста ћелија, соникација је веома делотворна и ефикасна метода лизе ћелијских мембрана и ослобађања готово свих фактора раста ћелија из тромбоцита. Ултразвучна лиза и кондиционирање омогућавају употребу чак и крви третиране антикоагулансима.
Кондиционирање PRP соникацијом је практичан и економичан начин добијања концентрованих фактора раста.

Ултразвучна лиза плазме богате тромбоцитима (PRP)

Ефекти ултразвучне лизе

Ултразвучна обрада крвног серума доводи до хомогене лизе тромбоцита ради ослобађања фактора раста садржаних у њима (фактор раста AB (PDGF-AB), фактор раста AA (PDGF-AA), фактор раста BB (PDGF-BB), васкуларни ендотелни фактор раста (VEGF), трансформишући фактор раста β (TGF-β), епидермални фактор раста (EGF), фактор раста сличан инсулину (IGF), фактор раста епителних ћелија ECGF и фактор раста фибробласта (FGF)). Тромбоцити и њихове алфа-грануле разарају се соникацијом, коришћењем појаве акустичне кавитације. Примена ултразвучне кавитације за лизу тромбоцита смањује могући негативан утицај методе поновљеног замрзавања и одмрзавања на активност фактора раста.

Протокол за ултразвучну припрему PRP

Приближно 16mL свеже узетог узорка аутологне крви нежно се преврне 8–10 пута у епрувети како би се крв и антикоагуланси добро измешали. Након тога, узорак се центрифугира при 1800 g током 20 min на собној температури. После центрифугирања, тромбоцити и мононуклеарне ћелије формирају беличаст слој на дну слоја плазме, који је познат као плазма богата тромбоцитима (PRP). Горњи слој је познат као плазма сиромашна тромбоцитима (PPP). Мононуклеарне ћелије могу се уклонити или оставити у узорку. Често се мононуклеарне ћелије остављају у узорку PRP како би се избегли додатни кораци који носе ризик од контаминације.
Напомена: Ултразвучна обрада аутологне PRP мора се спроводити у стерилним условима.
PRP и PPP се раздвајају и сакупљају. У PPP се додаје 1,5mL 10% раствора калцијум-хлорида, док се у PRP додаје 0,5mL 5% етанола. Обе суспензије се нежно мешају и остављају да стоје 5 min на собној температури. На крају се 1mL PPP додаје у суспензију PRP и оставља да стоји док се не формира фибрински угрушак.
Ултразвучна обрада: Пошто формирани тромбоцитни гел служи као резервоар ослобођених фактора раста, фибрински гел мора се разорити како би се ослободили доступни фактори раста. Параметри ултразвучне лизе и ослобађања фактора раста су следећи: Узорак у епрувети обрадите ултразвуком помоћу уређаја UP200Ht или UP200St (200W, 26kHz) са сонотродом S26d2. Да би се избегло прегревање узорка крви, соникација се може спроводити у пулсним циклусима (нпр. 10 секунди укључено, 30 секунди искључено). Узорак треба поставити на лед ради хлађења како би се температура оптимално одржавала у опсегу 2 – 5°C. После соникације, узорак се центрифугира при 16.000 g током 5 min на собној температури. Супернатант се сакупља и може се чувати на -70°C.
Концентрација тромбоцита у фракцији PRP повећана је 1,7 – 4,5 пута применом методе соникације у поређењу са просечним бројем тромбоцита у пуној крви наведеним у литератури.

PRP је комбинована са терапијом матичним ћелијама добијеним из масног ткива (аутологне матичне ћелије ослобођене из масног ткива ултразвуком, помешане са PRP и поново убризгане у ткиво пацијента ради репарације).

Ултразвучна опрема

Hielscher Ultrasonics је стручњак за софистицирану и поуздану ултразвучну технологију. Наши ултразвучни уређаји користе се широм света за лизу, екстракцију и припрему узорака – директним и индиректним поступком. Прибор погодан за аутоклавирање као и прибор за једнократну употребу обезбеђују одсуство контаминације при обради узорака аутологне крви. Већина наших система може се користити за ултразвучну лизу матичних ћелија и PRP, што наше ултразвучне уређаје чини још економичнијим.
У табели испод наведени су наши ултразвучни уређаји погодни за припрему плазме богате тромбоцитима и одговарајуће препоручене запремине узорака. Доступни су и већи ултразвучни хомогенизатори и прилагођени системи.

Контактирајте нас данас! Радо ћемо вам помоћи да пронађете оптималан ултразвучни уређај!