Ултразвучна припрема серума богатог тромбоцитима
- Плазма богата тромбоцитима (ПРП) је крвна плазма која је обогаћена тромбоцитима, која се користи за медицинске и естетске третмане.
- Ултразвучна лиза и кондиционирање је веома ефикасан метод за припрему плазме богате тромбоцитима.
- Хиелсцхер Ултрасоницс нуди различите ултразвучне системе који одговарају захтевима третмана крви (нпр. за унутрашњу и спољашњу припрему чисте собе).
Серум богат тромбоцитима
Соникација је поуздан и лак метод за лизу тромбоцита у аутологном крвном серуму како би се ослободили фактори раста. Фракције изведене из тромбоцита – такође познат као аутологни кондиционирани серум (АЦС) – користе се за поправку ткива или естетске третмане. За постизање оптималних резултата, ПРП се обогаћује пре убризгавања.
Да би се припремила плазма обогаћена факторима раста ћелија, ултразвук је веома ефикасан и ефикасан метод за лизу ћелијских мембрана и ослобађање скоро комплетних фактора раста ћелија из тромбоцита. Ултразвучном лизом и кондиционирањем може се користити чак и крв против згрушавања.
Кондиционирање ПРП-а путем соникације је згодан и исплатив начин да се добије принос у концентрисаним факторима раста.
Ултразвучни ефекти лизе
Ултразвучни третман крвног серума доводи до хомогене лизе тромбоцита како би се ослободили заробљени фактори раста (фактор раста АБ (ПДГФ-АБ), фактор раста АА (ПДГФ-АА), фактор раста ББ (ПДГФ-ББ), васкуларни ендотелни фактор раста (ВЕГФ), трансформишући фактор раста β (ТГФ-β), епидермални фактор раста (ЕГФ), фактор раста сличан инсулину (ИГФ), фактор раста епителних ћелија ЕЦГФ и фибробластични фактор раста (ФГФ)). Тромбоцити и њихове алфа-грануле се поремете ултразвуком, користећи феномен акустична кавитација. Коришћење ултразвучне кавитације за лизу тромбоцита умањује могући негативни утицај на активност фактора раста поновљене методе замрзавања-одмрзавања.
Протокол за ултразвучну ПРП припрему
Прибл. 16 мЛ свеже сакупљеног узорка аутологне крви се лагано преокреће 8-10 пута у епрувети тако да се крв и антикоагуланси добро измешају. Након тога, узорак је центрифугиран на 1800 г током 20 минута на собној температури. Након центрифугирања, тромбоцити и мононуклеарне ћелије граде беличасти слој на дну слоја плазме, који је познат као плазма богата тромбоцитима (ПРП). Горњи слој је познат као плазма сиромашна тромбоцитима (ППП). Мононуклеарне ћелије се могу уклонити или остати у узорку. Често мононуклеарне ћелије остају у ПРП узорку да би се избегли додатни кораци, који носе ризик од контаминације.
Напомена: Ултразвучни третман аутологног ПРП-а мора се обавити у стерилним условима.
ПРП и ППП се одвајају и сакупљају. У ППП се додаје 1,5 мЛ 10% раствора калцијум хлорида, док се у ПРП додаје 0,5 мЛ 5% етанола. Обе суспензије су лагано промешане и остављене да одстоје 5 минута на собној температури. На крају, 1 мЛ ППП се додаје у ПРП суспензију и остави да стоји док се не формира фибрински угрушак.
Ултразвучни третман: Пошто формирани тромбоцитни гел делује као резервоар за ослобођене факторе раста, фибрински гел мора бити поремећен да би се ослободили доступни фактори раста. Параметри за ултразвучну лизу и ослобађање фактора раста су следећи: Соницате витх ан УП200Хт или УП200Ст (200В, 26кХз) са сонотродом С26д2 узорак у цеви. Да би се избегло прегревање узорка крви, соникација се може изводити у пулсирајућим циклусима (нпр. 10 секунди укључено, 30 секунди искључено). Узорак треба ставити на лед ради хлађења тако да се температура оптимално одржава између 2 – Ночьу 2°Ц. Након соникације, узорак се центрифугира на 16000 г током 5 мин. на собној температури. Супернатант се сакупља и може да се чува на -70°Ц.
Концентрација тромбоцита у ПРП фракцији је обогаћена за 1,7 – 4,5 пута у ултразвучној методи у поређењу са просечним бројем тромбоцита у литератури у пуној крви.
ПРП је комбинован са терапијом матичним ћелијама добијеном од масних наслага (ултразвучно ослобођене аутологне матичне ћелије из масног ткива, помешан са ПРП, и убризган назад у ткиво пацијента ради поправке).
Ултрасониц Екуипмент
Хиелсцхер Ултрасоницс је стручњак за софистицирану и поуздану ултразвучну технологију. Наши ултразвучни уређаји се користе широм света за лизу, екстракцију и припрему узорака – директним и индиректним. Аутоклав добро као за једнократну употребу прибор осигурава а без контаминације третман аутологних узорака крви. Већина наших система се може користити за ултразвучну лизу матичне ћелије и ПРП, што наше ултразвучне уређаје чини економски још ефикаснијим.
Ова табела испод наводи наше ултразвучне уређаје, који су погодни за припрему плазме богате тромбоцитима, и њихову препоручену запремину узорка, респективно. Доступни су и већи ултрасоникатори и прилагођени системи.
Уређај | Снага [В] | Фрек. [кХз] | Тип | Запремина [мЛ] | ||
---|---|---|---|---|---|---|
ВиалТвеетер | 200 | 26 | самостална | 0.5 | – | 1.5 |
УП50Х | 50 | 30 | ручни или стојећи | 0.01 | – | 250 |
УП100Х | 100 | 30 | ручни или стојећи | 0.01 | – | 500 |
УП200Хт | 200 | 26 | ручни или стојећи | 0.1 | – | 1000 |
УП200Ст | 200 | 26 | стандмоунтед | 0.1 | – | 1000 |
УП400Ст | 400 | 24 | стандмоунтед | 5.0 | – | 2000 |
УП200Ст-СоноСтеп | 200 | 26 | самостална | 30 | – | 500 |
ГДмини2 | 200 | 26 | проточна ћелија без контаминације |
Контактирајте нас данас! Биће нам драго да вам помогнемо у проналажењу оптималног ултразвучног уређаја!
Контактирајте нас! / Питајте нас!
Литература/Референце
- Фортунато, ТМ; Белтрами, Цх.; Емануели, Ц.; Де Банк, ПА:; Пула, Г. (2016): Гел лизата тромбоцита и ендотелни прогенитори стимулишу формирање микроваскуларне мреже ин витро: импликације ткивног инжењеринга. Сци. 6. реп. 2016.
- Хамид, МСА; Јусоф, Ашрил; Али, Мохамед Разиф Мохамед (2014): Плазма богата тромбоцитима (ПРП) за акутне повреде мишића: систематски преглед. ПЛОС ОНЕ свеска 9, број 2, 2014.
Чињенице које вреди знати
Плазма богата тромбоцитима
Плазма богата тромбоцитима садржи фактор раста АБ (ПДГФ-АБ), фактор раста изведен из тромбоцита АА (ПДГФ-АА), тромбоцитни фактор раста ББ (ПДГФ-ББ), васкуларни ендотелни фактор раста (ВЕГФ), трансформишући фактор раста β (ТГФ -β), епидермални фактор раста (ЕГФ), фактор раста сличан инсулину (ИГФ), фактор раста епителних ћелија ЕЦГФ и фибробластични фактор раста (ФГФ), који су важни стимуланси за раст и обнављање ћелија.
Аутологни кондиционирани серум (АЦС)
Аутологна кондиционирана плазма (АЦП) је плазма богата тромбоцитима која се екстрахује из аутологне крви која се користи за подршку регенерацији у разним ортопедским стањима и хируршким процедурама. Кондиционирани серум се припрема одвајањем плазме од осталих компоненти крви (као што су еритроцити) и концентровањем. АЦП је плазма богата тромбоцитима (ПРП). ПРП је општи термин за врсту плазме која садржи значајно већу концентрацију тромбоцита у поређењу са пуном крвљу. Екстрахује се из пуне крви. Главне компоненте АЦП укључују тромбоците (тромбоците) и неколико фактора раста који играју важну улогу у процесу зарастања. За разлику од других формулација плазме богате тромбоцитима, АЦП се одликује ниском концентрацијом белих крвних зрнаца као што су неутрофилни гранулоцити који могу бити штетни за процес зарастања када су присутни у високим концентрацијама.
ињекције плазме богате тромбоцитима
Плазма богата тромбоцитима користи се као ињекција у регенеративној медицини као иу козметичким процедурама. Примена ПРП-а обећава значајно убрзање зарастања мишића и опоравак мишића. Осим тога, успешно се користи за лечење упале, артритиса, болова, рана, споро зарастајућих отворених рана и озбиљних опекотина коже. ПРП садржи висок ниво фактора раста, који стимулишу и штите ћелије зарастања да се оштећено ткиво поправи.
За козметичке третмане, ПРП се показао ефикасним да стимулише раст косе, обнављање коже (познато и као вампирски третман).
Фактори раста изазвани тромбоцитима (ПДГФ)
Израз тромбоцитни фактор раста (ПДГФ) односи се на факторе ПДГФ-А, ПДГФ-Б, ПДГФ-Ц и ПДГФ-Д. То је сигнална мрежа од четири лиганда (ПДГФ-А, ПДГФ-Б, ПДГФ-Ц и ПДГФ-Д) и два рецептора, ПДГФР-алфа и ПДГФР-бета.
Фактори раста, или протеини, регулишу раст и деобу ћелија. Као главни митоген који се налази у серуму сисара, који се ослобађа из тромбоцита током формирања угрушка, игра значајну улогу у формирању крвних судова (ангиогенеза), расту крвних судова из већ постојећег ткива крвних судова.