Hielscher ultrazvučna tehnologija

Tekstsis: prekid ćelije & Екстракција

Neuravnoteženost ćelije ili lysis je zajednički deo dnevnog pripreme u Biotek laboratorijama. Cilj lyis-a je da poremeti delove zida ćelije ili kompletnu ćeliju da bi se oslobodili biološka molekula. Takozvani lysate može da se sastoji u npr. plazmu, površinskih askaze, proteine, DNK, RNA itd. Sledeći koraci su frakcija, organova izolacija ili ekstrakcija i čišćenje proteina. Izdvojeni materijal (= lysate) mora biti odvojen i podleže daljim istragama ili aplikacijama, npr. Ultrasonični homogenizeri su uobičajeni alat za uspešnu ćelijsku lyzu. S obzirom da se ultrasonični intenzitet može prilagoditi podešavanjem parametara procesa, optimalni intenzitet soniziranja od veoma mekana do veoma teško može biti postavljen pojedinačno za svaku supstancu i srednji da bi zadovoljila određeni zahtev za podnošenje zahteva.

Struktura ćelije

Ćelije su zaštićene polupropustom plazma-om, koja se sastoji u Fosi-lipid bilule (takođe proteini-lipid, koji se formira od hidrofobskih lipida i fosilnih fosfora sa ugrađenim molekule proteina) i stvara barijeru između Enterijeri za ćelije (cittoplazm) i vancelularnu sredinu. Biljne ćelije i prokarbiotne ćelije su okružene zidom ćelije. Zbog više slojeva debljine ćelijskih zidova celulose, stanice za biljke su teže da se ljuze od životinjskih ćelija. Unutrašnjost ćelije, kao što su organelles, nuklesus, mitohondrion, Stabilizovana je ctoskelet.
Sa ciljem da se izade ćelije, ima za cilj izdvajanje i odvajanje organelola, proteina, DNK, mRNA ili drugih biomolekula.

Soniranost se obično koristi za probnu pripremu ćelijske veze.

Smok. 1: ultrazvučna ekstrakcija iz ćelija: mikroskopski transverski presek (TS) apičnog dela mint (MENTHA PIPERITA) prikazuje mehanizam akcije tokom ultrasoničnog ekstrakcije iz ćelija (uvećanje 2000x) [Resource: Vilkhu et Al. 2011]

Metode

Postoji nekoliko metoda za lysate ćelije, koje se mogu podeliti na mehaničke i hemijske metode, koje uključuju korišćenje deterdženata ili solenata, primenu visokog pritiska, ili korišćenje perijade ili francuskog štampe. Najproblematičniji nedostatak ovih metoda je teška kontrola i korekcija procesnih parametara i time utiče.
Glavne mane uobičajenih metoda lajsis:

Različite tehnike lysis-a

Tabela: konvencionalni metodi ćelijskih tekstova imaju velike nedostatke

Naprotiv, sonacija je veoma efikasna i pouzdana alatka za dezaciju ćelija koja omogućava kompletnu kontrolu nad parametrima sonacija. Time se osigurava visoka nečistoća o oslobađljivosti materijala i čistoti proizvoda. [Balasundaram et Al. 2009] Pogodan je za sve tipove ćelija i lako se primenjuje u maloj i velikoj razmeri. Ultrasonicatori su lako čisti. Ultrasonični homogenator uvek uključuje funkciju čistog na mestu (CIP) i funkcije sterilize (SIP). Sonoton se sastoji u masovnom titnom trubu koja se može obrisati ili ispražnjena u vodi ili solventu (zavisno od radnog medijuma). Održavanje ultrasonicatora je rezultat njihove robusnosti skoro neradne table.

lysis

Lysis je osetljiv proces. U toku je zaštita ćelije od koje se ne može uništiti, međutim nepreaktiviranje, klevetanje i degradacija izdvojene belančevina u nefiziotološkim uslovima (odstupanje od pH vrednosti) mora da se spreči. Zato se u opštem lyszi izvodi u tampon rešenju. Većina poteškoća nastaje zbog nekontrolisanog poremećaja u ćeliji, što je dovelo do oslobađanja od svih intraćelijskog materijala ili/i denatiranja ciljnog proizvoda.

Ultrasonični limfna ćelija se može koristiti za pripremu uzorka u laboratoriji i za proizvodnju velikih Zapremina. Kliknite da biste povećali!

Smok. 1:200 i moćni ultrasonični homogenizer УП200Хт sa digitalnom kontrolom i automatskim snimanjem podataka radi pouzdane i reproduktivljive limfne ćelije.

Ultrasonični Tekstis

Uopšteno, limfom uzoraka u laboratoriji trajaće između 15 i 2 minute. S obzirom da je intenzitet sonnosti veoma lak za prilagođavanje pojačanjem vremena, kao i odabirom prave opreme, moguće je da se u zavisnosti od ćelijske strukture, veoma nežno ili veoma naglo ometa, što zavisi od ćelijskih struktura i namene Lyze ( na primer, ekstrakcija DNK zahteva mekane sonsikaciju, kompletna ekstrakcija bakterija zahteva intenzivniji Ultrazvučni tretman. Temperatura tokom procesa može da se nadgleda integrisanim temperaturnim senzorom i lako se može kontrolisati hladjenje (sladoledi ili ćelije toka sa rashladnim jakni) ili pomoću sonacija u pulsnom režimu. Za vreme trajanja u pulsnom režimu, kratki sonovi u trajanju od 1-15 sekunde traju tokom dužeg povremenih perioda.
Svi procesi koji se pokreću sa ultrazvukom su potpuno prerađivi i nerani podesivi.

Ultrasonični homogenizer Vialvajeter za simultano Pripremanje uzorka do 10 testih cevi. (Kliknite da biste uvećali!)

Ultrasonični uređaj ВиалТвеетер omogućava simultano Pripremanje uzorka do 10 viala pod istim uslovima procesa.

Ultrasonični Homogenizeri

Razne vrste Ултразвучни уређаји Dozvolite da se podudaraju sa uzorkom za pripremu uzorka i da se uveri uteha i udobnost u radu korisnika. Ultrasonicatori u tipu istrage su najčešći uređaji u laboratoriji. Najprikladniji su za pripremu malih i srednjih uzoraka sa jedinicama od 0,1 mL do 1000mL. Različite veličine napajanja i sonotrodes omogućavaju da prilagode ultrasonicator uzorku volumena i letelici za najefektivnije i efikasnije rezultate. Ultrasonični aparat je najbolji izbor kada se moraju pripremiti pojedinačni uzorci.

Ukoliko se više uzoraka mora pripremiti, npr. 8 bočnih rešenja u ćeliji, uređaji kao što su Vialvajer ili ultrasonični cuphorn su najprikladniji homogenizer za lyis. Nekoliko bočica je u isto vreme u istom intenzitetu. Ovo štedi ne samo vreme, već i osigurava isti tretman svih uzoraka, što čini rezultate među uzorcima pouzdanima i uporedno. Uz to, unakrsno Kontaminiranje uz odavanje ultrasonovog sonotona (poznato i kao ultrazvučna istraga, Rog, savjet ili prst) se izbegava. S obzirom na to da se bočice koriste, je vremensko konzumiranje i gubitak uzoraka u odnosu na gubljenje brodova izostavljen.
Za veće volumene, npr. za komercijalnu proizvodnju ekstrakta ćelija, stalni ultrasonični sistemi sa reakcijom u ćeliji toka su najpogodniji. Kontinuiran i cak tok obrađenog materijala osigurava čak i sonaciju. Sve parametre procesa ultrasonve mogu se optimizovati i prilagoditi zahtevima aplikacije i specifičnim materijalom u ćeliji.

Primer procedure za ultrasonični izbacivanje bakterijskih ćelija:

  • Priprema ćelijske suspenzije: ćelijske peleti moraju da budu potpuno suspendovane u tampon rešenju tako što ćete homogenizirati (odaberite rešenje bafera kompatibilno sa sledećom analizom, npr. poseban metod hromatografije). Dodajte lysozymes i/ili druge aditiva, ako je potrebno (oni moraju biti kompatibilni sa odvajanjem/pročišćajnim sredstvima). Mix/Homogenizacija rešenja lagano pod blagim sononizmom dok se ne postigne potpuna suspenzija.
  • Ultrasonični tekstis: Postavite uzorak u kupku za led. Za poremećene ćelije Sonje suspenzija na 60-90 sekundi (koristeći svoj Ultrazvučni režim).
  • Odvajanje: centrifugi lysate (npr. 10 min. na 10.000 x g; u 4degC). Pažljivo odvojite supernatog na ćelijskom Pelet. Supernatant je ukupna lysate ćelija. Nakon filtriranja supernatanta, dobili ste pojašnjeno fluidan rastvornog ćelijskih proteina.

Najčešći zahtevi za ultrasonicatore u biologiji i biotehnologiji su:

  • Priprema za izdvajanje ćelije
  • Poremeжaj od kvasca, bakterije, biljne ćelije, meke & tvrda ćelija tkiva, nukerički materijal
  • Vađenje proteina
  • Priprema i izolacija enzima
  • Proizvodnja antigensa
  • Ekstrakcija DNK i/ili usmerena Fragmentacija
  • priprema za liposome
Visokokvalitetni ultrazvuk električne energije kao što su UIP1000hd koriste se za poremećene ćelije i vađenje u programu ili neprekidnom protoku – doduše. (Kliknite da biste uvećali!)

Ultrasonični benchtop sistemi kao što su УИП1000хд (1kW) može da obradi veće volumene biološkog materijala.

Višestruki zahtevi ultrazvučnih grana iz sektora biotehnologije, bioinženjeringa, mikrobiologije, molekularne biologije, biohemije, imunologije, bakteriologije, virusologije, proteomika, genetike, fiziologije, mobilna biologija, hematologija, i Botone.

Za evaluaciju i optimizaciju prijava klijenata, Hielscher Ultrasonics nudi kompletno opremljenu Ultrazvučna laboratorija za obradu ultrasonija. Molimo vas da nas kontaktirate za više informacija!

Литература / Референце

  • Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): napredak u strategijama izdavanja proizvoda i uticaj na dizajn bioprocesa. Trendovi u biotehnologiji 27/8, 2009. PP. 477-485.
  • Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): ultrasonični oporavak i modifikacija sastojaka hrane. In: Feng/Barbosa-Cánovas/Vaj(2011): ultrazvučne tehnologije za prehrambenu i Bioobradu. Njujork: Springer, 2011. PP. 345-368.

Контактирајте нас / Питајте за више информација

Разговарајте са нама о вашим захтевима за обраду. Ми ћемо препоручити најпогодније параметре подешавања и обраде за свој пројекат.





Molimo vas da zabeležite naše Правила о приватности.